Unidad IX
M. en C. Yadira Siu Rodas
OBJETIVO Describir los mĂŠtodos empleados para medir el crecimiento
microbiano
y
distinguir
como
el
ambiente influye sobre el crecimiento de los microorganismos.
¿Qué es Crecimiento? Aumento ordenado de todos los componentes de un organismo y no solamente de alguno de ellos. En organismos unicelulares… crecimiento es el incremento en el número de células.
驴C贸mo crecen los microorganismos?
Crecimiento de poblaciones N = N0 x 2n N = número final células/mL N0 = número inicial células/mL Generación (n): número de divisiones celulares que ocurren en un determinado tiempo.
Crecimiento de poblaciones
Velocidad de crecimiento: cambio en el número de células o masa celular por unidad de tiempo.
vc = n t Tiempo de generación (g) : tiempo requerido para duplicar el número de células de una población.
g=t/n
Crecimiento de un microorganismo en batch
Latencia: adaptación al nuevo ambiente
Exponencial: velocidad máxima de crecimiento bajo condiciones particulares, tiempo de generación mínimo
Estacionaria: sin crecimiento neto
nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad
acumulación de desechos, inhibición del crecimiento
Muerte: vm > vc vc = velocidad de división celular vm = velocidad de muerte celular
Evaluaci贸n del crecimiento 1- Determinaci贸n del n煤mero de microorganismos
MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO Recuento de totales por cámara de Petroff-Hausser (Células)(25 cuadrados)(50)(103)
– Método rápido – No distingue células vivas y muertas – Baja sensibilidad: límite de detección alto (106cél/mL)
MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO Contaje de viables
- células viables - tiempo y condiciones de incubación - límite de detección 1-10 ufc/mL
MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO Método indirecto- Recuento en placa
- células viables -tiempo y condiciones de incubación -Diluciones - límite de detección 1-10 ufc/mL
MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO Diluciones – NMP
Evaluaci贸n del crecimiento 2- Determinaci贸n de la masa celular
3- Determinaci贸n de la actividad celular
Turbidimetría
– método rápido – no distingue células vivas y muertas – baja sensibilidad
Cultivo continuo (Quimiostato)
Uno de los factores ambientales mas importantes en el crecimiento y la supervivencia de los microorganismos.
aaww
Ambiente Ambiente
Bacterias Bacterias
Hongos Hongos
1.00 agua de mar, sangre mayoría Gram- no halófilas verdura, fruta, carne
0.95 pan
mayoría de bacilos Gram+
basidiomycetes
0.90 jamón
mayoría de cocos Bacillus Staphylococcus
Fusarium, Mucor Rhizopus Saccharomyces rouxii
0.85 salames 0.80 conservas 0.75 lagos salados
pescado salado
0.70 cereales, dulces 0.60 chocolate, miel
leche desidratada
0.55- alteración del ADN
Penicillum Halobacterium Actinospora
Aspergillus Aspergillus Saccharomyces rouxii Xeromyces bisporus
•• Muy Muy beneficiosa: beneficiosa: en en la la fotosíntesis fotosíntesis •• Daño: Daño: pigmentos pigmentos fotosensibilizadores fotosensibilizadores (clorofila, (clorofila, citocromos), citocromos), transfieren transfieren energía energía al al OO22(O (O22 activado) activado) muy muy reactivo reactivo yy letal. letal.
••
Longitud Longitud de de onda onda corta, corta, entre entre 10 10 yy 400nm 400nm yy alta alta
energía. energía. ••UV UV 260nm 260nm es es la la más más nociva nociva por por ser ser el el máximo máximo de de absorción absorción del del ADN. ADN. ••Modo Modo de de acción acción principal: principal: provoca provoca dímeros dímeros de de timina timina yy se se inhibe inhibe la la replicación replicación del del ADN. ADN. ••Las Las lámparas lámparas UV UV son son muy muy usadas usadas en en cámaras cámaras de de flujo flujo laminar laminar (filtración). (filtración).