PRﾃ，TICA 1.
PLASMÓLISIS
OBSERVACIÓN DE LOS FENÓMENOS OSMÓTICOS EN EPIDERMIS DE CEBOLLA
PLASMÓLISIS
PRÁCTICA 1. OBSERVACIÓN DE LOS FENÓMENOS OSMÓTICOS EN EPIDERMIS DE CEBOLLA
1.¿A qué se debe la gran extensión de la
coloración de la célula tras la tinción con rojo neutro? El colorante Rojo Neutro es un colorante vital (tiñe sin alterar la célula). Es muy permeable a la membrana celular. Ello permite que la atraviese y se acumule en el interior de la gran vacuola vegetal. Por lo tanto lo que se observa al mirar por el microscopio la preparación de epidermis de cebolla teñida es el interior de ésta con su vacuola totalmente hinchada y teñida de Rojo Neutro. La célula vegetal adulta encierra una voluminosa vacuola separada del medio que la rodea por una membrana llamada tonoplasto.
PRÁCTICA 1. OBSERVACIÓN DE LOS FENÓMENOS OSMÓTICOS EN EPIDERMIS DE CEBOLLA 2.¿Qué papel desempeñan las diferentes concentraciones
de las disoluciones de tampón fosfato y de cloruro sódico sobre la del jugo vacuolar?. La disolución con el tampón fosfato actúa como un medio hipotónico respecto al interior de la célula que sería hipertónico. En consecuencia, la disolución coloreada pasa al interior de la célula por ósmosis y esta produce la turgescencia (se hincha) pero no revienta ya que la pared celular se lo impide. En cambio, cuando le ponemos el cloruro sódico, el medio se vuelve hipertónico respecto al interior celular. La consecuencia es que la célula pierde agua por ósmosis, observándose como la membrana celular se separa de la pared y aparece arrugada originándose la plasmólisis celular.
PRÁCTICA 1. OBSERVACIÓN DE LOS FENÓMENOS OSMÓTICOS EN EPIDERMIS DE CEBOLLA 3.¿A qué atribuye los cambios que se observa en la
vacuola en cada caso? La membrana de la vacuola, se comporta como membrana semipermeable con respecto a numerosas sustancias disueltas, como el cloruro sódico o la sacarosa. Los cambios observados en la vacuola se debe a los fenómenos de turgencia y plasmólisis consecuencia de la ósmosis. El agua se desplaza desde la disolución más diluida hipotónica a la más concentrada hipertónica. Fenómeno de turgescencia: se hincha cuando le entra la disolución del tampón fosfato. Fenómeno de plasmólisis: se arruga por la salida de agua de la vacuola cuando usamos la disolución de cloruro sódico
PRﾃ，TICA 2.
OBSERVACIÓN Y/O TINCIÓN DE LOS GRANOS DE ALMIDÓN DE LA PATATA CON LUGOL 1. Conocer la forma de los granos de almidón
obtenidos a partir de este material vegetal. Los granos de almidón de la patata son redondeados u ovalados y aparecen teñidos de azul-violeta porque contienen almidón que reacciona con el lugol (reactivo de yodo-yoduro potásico) dando esta coloración típica. No es una reacción química sino la unión del yodo con las cadenas de amilosa del almidón. Esta unión es reversible y depende de la temperatura.
OBSERVACIÓN Y/O TINCIÓN DE LOS GRANOS DE ALMIDÓN DE LA PATATA CON LUGOL 2. Relacionar el
tamaño de los granos y el número de capas que se observan en ellos.
En el interior del
amiloplasto el almidón se va disponiendo en capas concéntricas. Cuantas más capas contenga más grande será el amiloplasto.
OBSERVACIÓN Y/O TINCIÓN DE LOS GRANOS DE ALMIDÓN DE LA PATATA CON LUGOL 3. Conocer la posibilidad de
utilizar el reactivo yodo-yoduro potásico (1%) para detectar la presencia de almidón en un medio. Podemos usar el lugol (o en su caso el Betadine que empleamos cuando nos hacemos una herida) para comprobar si un alimento que no debe llevar almidón lo lleva. Es el caso de algunos fiambres (jamón cocido) que pueden llevar en su composición almidón de patata. En ese caso, el etiquetado del producto debería indicarlo porque si no sería un fraude.
OBSERVACIÓN Y/O TINCIÓN DE LOS GRANOS DE ALMIDÓN DE LA PATATA CON LUGOL 4. Fundamento de la reacción de color y de los cambios con la
temperatura. El Lugol es una disolución acuosa de yodo y yoduro potásico que sirve para averiguar, si en una disolución de azúcares no reductores existe el polisacárido almidón (prueba Lugol positiva). El almidón es un polisacárido mezcla de amilosa y amilopectina. Cuando el almidón se pone en contacto con unas gotas de Lugol toma un color azul-violeta característico ( la amilosa se tiñe de azul oscuro a negro y la amilopectina entre naranja y amarillo) Se trata de una reacción no química, en la que se forma un compuesto de inclusión del yodo en el interior de las hélices de la amilosa. Esta inclusión es reversible y está condicionada por la temperatura. Así al calentar suavemente, sin que llegue a hervir la suspensión acuosa de almidón a la que se le ha añadido unas gotas de lugol, pierde el color, posteriormente si enfriamos el tubo de ensayo con agua del grifo observaremos transcurridos de 2-3 minutos el color azul)
PRﾃ，TICA 3
DETERMINACIÓN DEL PODER REDUCTOR DE AZÚCARES 1. Establecer a qué se deben las diferencias observadas entre los
cuatro carbohidratos analizados. Glucosa y fructosa dan positiva la reacción de Fehling, mientras que sacarosa y almidón no dan positiva la reacción. El reactivo de Fehling es utilizado con el fin de poner de manifiesto la capacidad reductora de un azúcar. Consiste en una mezcla de dos reactivos. El Fehling A (sulfato cúprico) de color azul, y el Fehling B (tartrato sódico-potásico) incoloro. Tras la reacción con el glúcido reductor, se forma óxido de cobre (I) que tras ser calentado de un precipitado de color rojo. De este modo, el cambio de color indica que se ha producido una reacción de tipo redox y que por tanto, el gúcido presente es reductor. La glucosa y la fructosa tienen libre el grupo hidroxilo (OH) del carbono anomérico. En cambio, en el caso de la sacarosa y el almidón no lo tienen libre ya que lo han “empleado” en establecer el enlace Oglucosídico. Los dos primeros transforman el Cu++ (color azul) del CuSO4 en Cu+ (color rojo ladrillo).
DETERMINACIÓN DEL PODER REDUCTOR DE AZÚCARES 2.Analizar e interpretar los
resultados obtenidos tras la hidrólisis de la sacarosa Al hidrolizar el disacárido
sacarosa libera glucosa y fructosa dos monosacáridos reductores, por lo que la reacción posterior a la hidrólisis es positiva (rojo) de la prueba con los líquidos de Fehling.
PRﾃ，TICA 4.
EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE ADN. 1. ¿Para qué se utiliza el
detergente y el NaCl en la extracción? El detergente y la sal ambos componentes del tampón de extracción se emplean para romper las paredes celulares, la membrana celular y la membrana nuclear con objeto de liberar el ADN que se encuentra en el interior del núcleo celular.
EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE ADN. 2. ¿Qué componente
aporta el zumo de piña o de papaya y cuál es su utilidad? Contiene una enzima llama papaína que destruye las proteínas para que no interfieran en la prueba.
EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE ADN.
3. ¿Por qué se incorpora finalmente el etanol muy
frío al medio?. El ADN es soluble en el agua pero no en alcohol. Se pone alcohol para que el ADN precipite en medio de los dos líquidos y podamos verlo concentrado.
PRﾃ，TICA 5.
CULTIVO DE LEVADURAS. ESTUDIO DE LA RESPIRACIÓN 1. ¿Cuál es la función
del tubo 1?. El tubo 1 se utiliza como control. Al no llevar azúcar las levaduras no respiran, no se reproducen y no varía el volumen de aire.
CULTIVO DE LEVADURAS. ESTUDIO DE LA RESPIRACIÓN 2. ¿Por qué se añade
glucosa a los tubos 2, 3, 4 y 5? Se pone glucosa en los tubos 2, 3, 4 y 5 para que las levaduras respiren usando el azúcar como fuente de energía y desprendan CO2.
CULTIVO DE LEVADURAS. ESTUDIO DE LA RESPIRACIÓN 3. Diferencias observadas en
los tubos 3, 4 y 5 (inhibición parcial o total dependiendo de la concentración del inhibidor)? El volumen de aire en cada tubo (3, 4 y 5) habrá variado. El tubo 3 tendrá más volumen de aire porque la concentración de inhibidor (NaF) es baja (0,01 M), luego vendrá el tubo 4 y por último será el tubo 5 ya que lleva la mayor concentración de inhibidor (0,1 M).
CULTIVO DE LEVADURAS. ESTUDIO DE LA RESPIRACIÓN Recuerda que las levaduras Saccharomyces cerevisiae son
organismos facultativos, que en ausencia de oxígeno producen dióxido de carbono y etanol a partir de piruvato. El piruvato según las condiciones se transforma en presencia de oxígeno a través del ciclo de Krebs y cadena de transporte de electrones en la mitocondrias, hasta dar CO2 y H2O como productos finales. En ausencia de oxígeno, el piruvato en otros compuestos reducidos, para regenerar el NAD+ para continuar la glucólisis, a través de la fermentación. Durante la glucolisis, en el paso de 2-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato, está catalizado por la enzima enolasa que necesita iones Mg2+ como cofactor. Al añadir el inhibidor F- , el Mg2+ se compleja formando Mgf2 con lo cual inhibe la glucólisis y no hay respiración.