Recogida, preparación y conservación de muestras del aparato genital 1. Muestras del aparato genital femenino: Tinción de Papanicolau: Es una técnica para estudio citológico, utiliza tres colorantes, los colorantes son hematosilina Harris, responsable de que los núcleos aparezcan negruzcos, Orange G6, EA (mezcla de eosina, verde- azul, pardo Bismarck). Los núcleos se van a teñir de azul violeta por consecuencia de la hematosilina, los citoplasmas se tiñen con el Orange y el EA. En esta tinción no hay superposición de colores, permite una división clara del núcleo y del citoplasma. Estudio vaginal: Para obtener la muestra necesitamos que la mujer este en posición ginecológica, es necesario la introducción de un especulo vaginal, es recomendable no utilizar ningún lubricante porque se puede alterar la muestra. Se recoge de la zona de la vagina donde haya más exudado, y si no se observa bien se recoge del fondo de saco de la vagina. Se recomienda además hacer una doble toma porque una se destina al estudio microscópico y otra para el estudio microbiológico. Es necesario que la muestra llegue lo antes posible al laboratorio. Se recoge con un hisopo, sino hay medio transporte la muestra debe llegar antes de seis horas al laboratorio. Habría que hacer una recomendación al paciente, no debe utilizar antisépticos, ni pomadas en los días previos a la toma. En condiciones normales en la vejiga existe una flora bacteriana, hay estreptococos, staphyolococos o el bacilo de Döberlein, que es el principal responsable del mantenimiento del pH vaginal, además hay gérmenes saprofitos. El pH se caracteriza porque es muy ácido 4,5- 5 porque el bacilo de
Döberlein es capaz de transformar el glucógeno que está en células epiteliales vaginales en ácido láctico. Durante el período fértil la secreción vaginal es blanca o lechosa pero no tiene mal olor ni causa irritación, procede de la descamación de células vaginales y la cantidad depende del momento del ciclo. La secreción normal mantiene a la vejiga limpia y húmeda, cuando hay una infección vaginal hay un aumento de secreción y a eso se le llama leucorrea, y además el aspecto puede ser mucopurulento, se produce una sensación de ardor o picor y la mucosa vaginal se presenta enrojecida. Las causas más frecuentes de infección pueden ser causas de malnutrición, alteraciones hormonales (embarazo, menopausia…), el uso de anticonceptivos, el estrés, el uso prolongado de DIU, uso de ropa interior muy ajustada y de licra… La infección vaginal más frecuente es la producida por un hongo, cándida albicans, la enfermedad es una candidiasis, los síntomas serían leucorrea blanco- amarillenta, enrojecimiento vaginal y picor. Otras infecciones posibles menor frecuentes son producidas por bacterias, la leucorrea sería blanco- grisácea, aparecería un olor fétido. Podría haber otras infecciones producidas por parásitos, la más frecuente es la trichomona vaginalis que produce trichomoniesis, es un parásito que se transmite por vía sexual, provoca una secreción purulenta oscura, con gas (burbujas), mal olor, suele comenzar después de la menstruación con picor. Exudado endocervical: Necesitamos que haya una posición ginecológica, introducción de especulo, se necesita limpiar la zona de exocervis. Para la zona de muestras se comprime con las palas del especulo la zona del cervis y se introduce una torunda a través del canal endocervical haciendo un movimiento rotatorio. Se deben recoger dos muestras, una para citología y microbiología. En casos especiales se investiga la existencia de un germen llamado mycoplasma o clamidea, para eso hay que introducir una tercera torunda con un medio especial. El examen citológico se utiliza para valorar la morfología de las células,
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para hacer un diagnóstico precoz del cáncer de útero. No son frecuentes las infecciones endocervicales. Endometrio: La recogida de muestra se debe hacer con precaución para que no haya contaminación con células del cuello del útero o de la vagina, incluso se puede llegar a producir una endometritis porque la flora de la vagina puede llegar a pasar al endometrio. Aquí no se puede utilizar torundas, entonces se hace por aspirado con un catéter y a veces cuando se pretende estudiar citológicamente entonces se utiliza el legrado (raspado). Si se sospecha de una infección del endometrio es recomendable hacer
un cultivo, pero también es recomendable hacer un hemocultivo, porque en un 30% puede dar positivo, paso de los gérmenes del endometrio a la sangre. Trompas y ovarios: La muestra es extraída de la zona de la trompa de Falopio utilizando técnicas de laparotomía y laparoscopia, una de las finalidades de la
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recogida de estas muestras es para hacer estudios de infertilidad y una causa frecuente de eso es que exista una obstrucción de las trompas, por ejemplo una tuberculosis tubárica. Úlceras genitales: Úlceras genitales, son frecuentes en la patología venérea, para extraer la muestra hay que hacer una limpieza particular, en los alrededores de la úlcera se limpia con povidona yodada, la lesión se limpia con suero salino, la toma se hace con una torunda, pero cuando la lesión es muy supurativa (drena mucho) se puede hacer con una pipeta Pasteur. Exudado uretral: Son indicativas de infecciones de la uretra, uretritis, suele aparecer por ETS, para la recogida se debe hacer a primera hora de la mañana antes de la primera micción porque la orina puede arrastrar exudado. Si es posible entre la micción y la tona de muestras no deben pasar más de 2 horas. Si el exudado es poco se recoge con unas torundas uretrales más finas, con movimientos circulares a través de la uretra. Se recoge una muestra para citología y otra para microbiología. Si se sospecha el tipo de gérmenes tipo Clamidea hay que recoger una tercera muestra que va en un tipo de transporte especial. Estas muestras han de ir lo antes posible al laboratorio, si no pueden ir directamente se conserva a temperatura ambiente. 2. Muestras del aparato genital masculino: Exudados uretrales: La recogida es más fácil en la mujer. Puede hacerse un escurrido de la uretra y puede haber 2 casos: que haya mucho exudado, entonces se recoge directamente con una torunda, si hay poco exudado entonces hay que exprimir la uretra, comprimirla para llevar el exudado al meato urinario y poder así recoger la muestra. Si con esto llega entonces se introduce una torunda por la uretra unos 2 cm. La recogida se hace siempre en el
laboratorio, si lo que se investiga es si hay clamidea entonces la torunda tiene que introducirse más, unos 5 cm. 2.2 Muestras para afecciones prostáticas: Interesa hacer esta prueba cuando hay una prostatitis: preparamos 4 frascos estériles rotulados. En el frasco 1 ponemos la primera orina, en el frasco 2 se recoge la micción pre-masaje que se le va a aplicar a la próstata, en el frasco 3 se recoge una orina después de un masaje prostático, en el frasco 4 se recoge una orina un tiempo después de haberle hecho el masaje. Técnica: Higiene en el prepucio, glande. Le indicamos al paciente que orina unos 10 ml. en el primer frasco, luego que vuelva a orinar unos 10 ml. en el segundo frasco y que pare; a continuación se realiza un masaje prostático y entonces se recoge la orina. Como consecuencia del masaje aplicado se suele producir una secreción prostática, si es así esa secreción se recoge. Si no es así exprimimos la uretra para que haya secreción y que orine en el frasco 3, después de realizar el masaje le mandamos al paciente orinar en el frasco 4, 10 ml. Estas muestras deben ser estudiadas en un período de 1 hora, de no ser así debe refrigerarse a 4ºC. Con estos 4 frascos se realizan cultivos independientes. Si el número de bacterias en el frasco 1 es mayor que en el 2 entonces son bacterias de tipo uretral, si el número de bacterias del frasco 3 y en el 4 es por lo menos 10 veces mayor, entonces el origen es prostática, y si es más grande pero menos de 10 veces el origen es dudoso. 2.3 Estudios del líquido seminal: La muestra e semen solo valdrá cogida por masturbación. Hay que atenerse a unas normas para la recogida: desde que se obtiene la
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muestra hasta su análisis no debe pasar más de 1 hora, si no debe conservarse a una temperatura menor a 37ºC. Para obtener la muestra se recomienda un mínimo de 3 días de abstinencia sexual. La muestra debe proceder de 1 sola eyaculación. Para la recogida se usa frascos estériles de boca ancha. 2.3.1 Examen microscópico: Características: • Volumen, lo obtenido en una eyaculación de la actividad sexual de una persona, después de 3 días de abstinencia se puede obtener entre 2,5- 5 ml. Cuando la eyaculación está muy aumentada en volumen (10 ml.) o cuando está muy disminuida (1 ml.) o también en factores de la actividad de las glándulas de eyaculación. • Color, en condiciones normales el semen es blanquecino o pálido, puede variar a un tono amarillento pero puede ser debido a la presencia de pus. Puede ser rojizo por la presencia de sangre el cual será siempre patológico. La sangre que sale con el semen suele ser de origen prostático. • pH, en condiciones normales el semen tiene un pH básico de 7,3-7,8, también se considera normal 7-8,1. Cuando disminuye de 7 tenemos un pH ácido el cual indica patología crónica de la próstata o de la vesícula; un aumento de más de 8 (pH alcalino) indica proceso inflamatorio agudo o de la próstata o de una zona llamada epidídimo. • Tiempo de licuación, el semen es un fluido denso, más o menos viscoso con la particularidad de que coagula inmediatamente tras la eyaculación. Pero al cabo de poco tiempo puede volver a licuarse tanto in vivo como in Vitro. Si el semen que se está estudiando no coagula indica que debe haber una afectación de la próstata o de las vesículas seminales.
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Si tarda en coagularse más de 4 min. Entonces es causa de infertilidad. • Viscosidad, cuando esta disminuye de lugar a ausencia de coagulación, esto suele ocurrir cuando existe ausencia de espermatozoides. Para esto el semen normal cuando se recoge con una varilla cae gota a gota. Si no es así, existe una alteración. Si es muy viscoso la gota tarda mucho en caer y no vale tampoco. Lo normal es que caiga gota a gota. 2.3.2 Examen macroscópico: • Examen directo: Se realiza un observado en fresco de una gota de líquido seminal entre un porta y un cubre y podemos observar la presencia o ausencia de espermatozoides (células espermáticas). También debemos fijarnos en la movilidad de estos, de que no haya células alteradas. En casos patológicos podemos ver la presencia de leucocitos (pus). Incluso la presencia de cristales. • El estudio de motilidad(movimiento): los espermatozoides tienen que tener una buena movilidad para realizar su función. Realizamos una preparación húmeda, para ello cogemos un pota y lo precalentamos a 37ºC, en él después depositamos 1 gota de semen y lo tapamos con un cubre. Cubrimos los bordes con vaselina para impedir que se seque. Observamos al microscopio con 40X. Contamos entonces 200 espermatozoides y de esos, como mínimo, se calcula el % de espermas que se mueven visiblemente. Se considera normal entre 60-90 %. Cuando es menor del 50% se dice que existe una astenospermia. El caso es que a las 2h. de realizar esta operación se vuelve a mirar y deberá tener unos resultados parecidos a los primeros. Cuando no hay movilidad se dice que hay una necrospermia. 2.3.2 Test de vitalidad o test de Willians Pollack:
Consiste en el estudio de necroespermia, ocurre que los espermatozoides que murieron cambian la permeabilidad de la membrana. Este cambio podemos detectarla con eosina de la siguiente manera: la cabeza de los espermatozoides muertos se tiñen de rosa, los vivos no lo permiten entonces se evalúa el número de espermatozoides muertos. La técnica usa dos colorantes: eosina y nigrosina (se usa para teñir el fondo de la preparación). El test de vitalidad es la inversa del número de espermatozoides teñidos: cuanto más alto sea el porcentaje, más alta es la infertilidad. Se pueden usar para el recuento de espermatozoides métodos automáticos o manuales. En condiciones normales el número de espermatozoides/ml. es de entre 50.000.000-120.000.000 normoespermia. En función del número de espermatozoides entre 120.000.000-400.000.000 hiperespermia, entre 30.000.000-50.000.000 hipoespermia. Si hay entre 1.000.000-30.000.000 oligoespermia, cuando no hay espermatozoides se llama azospermia. No hay espermatozoides maduros pero hay células que lo podrían dar espermatozoides. En la aspermia no existen ni espermatozoides ni células que den lugar a espermatozoides. 2.3.3 Fórmula espermática: Esto está basado en la forma de los espermatozoides: 0% de espermatozoides normales y anormales y dentro de estos últimos tenemos que señalar la normalidad que pesentan. En condiciones normales el % de espermatozoides anormales no deben ser mayor del 30% es mayor del 40% es un semen hipofercundante, es decir, pocas posibilidades de fertilidad. En condiciones normales no deben aparecer más de 2 leucocitos, por campo. Si hay más de 2 tenemos una leucoespermia, si hay muchos hay una pioespermia. Los glóbulos rojos siempre son patológicos. En un espermograma normal las lateraciones en la cabeza del espermatozoide deben ser inferiores al 18% (de 100
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espermatozoides 18 pueden tener alteraciones en la cabeza); alteraciones en el cuello menores al 5%, alteraciones en la cola inferiores al 5% alteracionesmixtas como mucho el 2%. 2.3.4 Examen bioquímico: Pruebas bioquímicas importantes: Marcadores prostáticos, uno de estos marcadores es el PSA el cual tiene importancia porque da una pista sobre el funcionamiento de la próstata; ácido nítrico, cuando aumenta ese líquido seminal indica que aumenta la actividad prostática el cual podría indicar que la próstata es muy activa, si disminuye indica : fosfatasa ácida, cuando aumenta indica aumento de la actividad prostática, si disminuye indica cáncer de próstata o proceso inflamatorio; fructosa, las vesículas seminales convierten en su interior la glucosa a fructosa por la influencia de la testosterona. Un aumento de fructosa en el semen no importa pero un descenso sí, esto indica una falta de estimulación de las vesículas seminales y esto puede ocurrir porque no hay una estimulación fuerte de testosterona.
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