UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD BIOQUIMICA Y FARMACIA PRACTICA DE LABORATORIO DE ANALISIS DE MEDICAMENTOS #1 NÚMERO DE PRÁCTICA: BF.9.01-2 NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Evaluación de calidad de formas farmacéuticas líquidas 1. DATOS INFORMATIVOS: Alumno: Luis Cuenca. Carrera: Bioquímica y Farmacia Ciclo/nivel: Noveno Semestre “A” Docente responsable: Bioq. Carlos García MSc. Fecha: 12/06/2019 2. FUNDAMENTACIÓN: El citrato de Piperazina es una materia prima farmacéutica de importación, el cual se utiliza en la preparación del jarabe de Piperazina para su uso como antihelmíntico (Pérez & García, 1998). La piperazina se puede sintetizar mediante la reacción entre etanolamina y amoníaco a alta presión sobre un catalizador en presencia de hidrógeno. Se obtiene una mezcla de etilenaminas —entre ellas piperazina—, además de agua. Las etilenaminas son separadas entre sí por destilación (Pérez & Gardey, 2009). La piperazina también puede obtenerse a partir de dicloruro de etileno, haciendo reaccionar este producto con un exceso de amoníaco a alta presión y a temperatura moderada. La solución resultante de hidrocloruro de etilenamina se neutraliza con sosa cáustica para formar piperazina y otras etilenaminas, que posteriormente se aíslan por destilación. El cloruro de sodio se forma como subproducto (ECURED, 2011).
El citrato de piperazina contiene no menos del 98,0 por ciento y no más del equivalente al 101,0 por ciento de bis(2- hidroxi-propano-1,2,3-tricarboxilato) de tripiperazina, calculado con respecto a la sustancia anhidra. Contiene agua en cantidad variable (española, 2002). 3. OBJETIVOS: 3.1.1
Realizar la evaluación de calidad del Citrato de Piperazina en una forma farmacéutica liquida (jarabe), basándose en ensayos de diferentes
3.1.2
farmacopeas. Comprobar si el fármaco cumple con los parámetros referenciales establecidos en las farmacopeas analizando y comparando los resultados.
4. MATERIALES,EQUIPOS,REACTIVO Y SUSTANCIAS: a) Características organolépticas MATERIALES Tubos de ensayo Gradilla Guantes Mascarilla Gorro Mandil
MEDICAMENTO Citrato de Piperazina (comercial, genérico, elaborado)
b) pH MATERIALES
SUSTANCIA
EQUIPO
MEDICAMENTO
Vaso de
Agua destilada
pH-metro
Jarabe de Piperazina
precipitación. Varilla de vidrio. Probeta. Pipeta. Guantes. Gorro. Mandil.
c) Densidad
MATERIALES
SUSTANCIA
EQUIPO
MEDICAMENTO
Vaso de
Agua destilada
Balanza Analítica
Jarabe de Piperazina
precipitación. Picnómetro. Guantes. Mascarilla. Gorro. Mandil.
d) Solubilidad MATERIALES
SUSTANCIAS
MUESTRA
● ● ● ● ●
● Agua destilada ● Formol ● Alcohol potable
● Jarabe
Vaso de precipitación. 1 Probeta pequeña Pipeta. 9 tubos de ensayo Gradilla
citrato
Piperazina
de
(comercial,
genérico y elaborado por la PPF)
e) Valoración 1 MATERIALES ● Vaso ● ● ● ●
EQUIPOS de ● Baño
precipitación Bureta Soporte Universal Agitador Guantes,
María
SUSTANCIAS
/ MEDICAMEN
REACTIVOS TO ● Ácido Acético ● Jarabe de Glacial. ● Cristal violeta. ● Ácido Perclórico
Piperazina Comercial a
0.1N
mascarilla, gorro y bata. f) Espectrofotometría MATERIALES ● Vaso
de
precipitación
EQUIPOS ● Balanza analítica
SUSTANCIAS ● Agua desionizad
MEDICAMENTO ● Jarabe de citrato
de
● ● ● ● ● ●
● Espectrofotó
Pipetas Balón 50ml Guantes Mascarilla Gorro Mandil
metro
a ● Hidroxido de
piperazina
sodio
2.5N ● Acetona ● Nitroferro cianuro de sodio
g) ORP (POTENCIAL OXIDO-REDUCCIÓN) MATERIALES
EQUIPOS
MUESTRA
Guantes. Mascarilla. Gorro. Zapatones. Vaso de precipitación.
ORP.
Citrato de piperazina(jarabe) Agua destilada. Agua desionizada.
h) GRADOS BRIX-INDICE DCDE REFRACCION-GLUCOSA MATERIALES ● Tubos
de
ensayo (5) ● Gotero ● Varilla de
EQUIPOS ● Refractómetr o
SUSTANCIAS ● Agua
MEDICAMENTO ● Jarabe de
destilada ● Alcohol ●
citrato
de
piperazina
vidrio ● Toallas absorbentes ● Mascarilla ● Gorro ● Mandil i) Análisis Microbiológico MATERIALES ✓ Asa ✓ Caja Petri ✓ Guantes ✓ Mascarilla ✓ Gorro ✓ Mandil
EQUIPOS ✓ Incubador a
SUSTANCIAS ✓ Agar
MEDICAMENTO ✓ Jarabe de
MacConkey
j) Determinación del contenido extraíble del envase
citrato piperazina ✓
de
MATERIALES ✓ Probetas ✓ ✓ ✓ ✓
EQUIPOS de
SUSTANCIAS ✓ Agua
150mL Guantes Mascarilla Gorro Mandil
destilada
MEDICAMENTO ✓ Jarabe de citrato
de
piperazina
k) Determinación de la Viscosidad Farm Argentina Octava edición volumen 1 pag 128 MATERIALES ✓ Guantes ✓ Mascarilla ✓ Gorro ✓ Mandil
EQUIPOS Viscosímetro
SUSTANCIAS ✓ Agua destilada
MEDICAMENTO ✓ Jarabe de citrato
de
piperazina
l) Determinación del punto de Ebullición Farmacopea Española 3 Edición pag 29 MATERIALES
EQUIPOS
✓ 2 Capsula de ✓ ✓ ✓ ✓
porcelana Guantes Mascarilla Gorro Mandil
SUSTANCIAS
✓ Agua destilada
MEDICAMENTO
✓ Jarabe de citrato de piperazina
5. PROCEDIMIENTO a) Características Organolépticas 1. Se tomó los frascos de Jarabe de Piperazina para realizar la caracterización. 2. Se observó la coloración de los medicamentos, su olor, sabor, y su textura. 3. Luego se procedió a realizar la comparación de las diferentes marcas de jarabe de piperazina.
Verificación de color, sabor y textura.
b) pH 1. Agregamos una cierta cantidad de muestra (jarabe de citrato de piperazina), en un vaso de precipitación y luego medimos el pH, con el respectivo pH-metro. 2. Verificar si cumple con los parámetros establecidos c) Densidad Muestra # 1 Piperazina NIF Genérico 1. Pesamos el picnómetro vacío en la balanza. 2. Luego llenamos el picnómetro con agua destilada hasta enrasar y pesar. 3. Procedemos a llenar el picnómetro con la muestra (jarabe del citrato de piperazina) hasta enrasar y pesar. 4. Calcular mediante la densidad mediante la fórmula por el método del picnometria. Muestra # 2 ANKILOTOFIS Citrato de Piperazina 1. Pesamos el picnómetro vacío en la balanza. 2. Luego llenamos el picnómetro con agua destilada hasta enrasar y pesar. 3. Procedemos a llenar el picnómetro con la muestra (jarabe del citrato de piperazina) hasta enrasar y pesar. 4. Calcular mediante la densidad mediante la fórmula por el método del picnometria. Muestra # 3 Citrato de Piperazina PPF 1. Pesamos el picnómetro vacío en la balanza. 2. Luego llenamos el picnómetro con agua destilada hasta enrasar y pesar. 3. Procedemos a llenar el picnómetro con la muestra (jarabe del citrato de piperazina) hasta enrasar y pesar. 4. Calcular mediante la densidad mediante la fórmula por el método del picnometria.
d) Solubilidad 1. Previamente antes de realizar la práctica se debe desinfectar el area donde se la realizara y así mismo tener los materiales limpios y secos que se emplearan en la práctica. 2. Rotular 3 tubos de ensayo con el nombre de las sustancias que se va a realizar el ensayo: agua, alcohol y formol. 3. Colocar aproximadamente 2ml de alcohol, agua y formol respectivamente en los tubos previamente rotulados. 4. Agregar 2ml de muestra en cada solvente correspondiente. 5. Agitar por 5 minutos aproximadamente, observar la solubilidad del fármaco y reportar. e) Valoración 1 y 2 1. Previamente antes de realizar la práctica se debe desinfectar el área donde se la realizara la práctica y así mismo tener los materiales limpios y secos que se emplearán en la práctica. 2. Se procede a colocar 1ml de jarabe de Citrato de Piperazina en un vaso de precipitación. 3. Se pone la muestra en baño María para que se evapore hasta sequedad. 4. Luego colocar 10 ml de ácido acético glacial a la muestra añadiendo 1 gota de cristal violeta. 5. Agitar y titular con solución de ácido perclórico a 0.1N hasta punto final de coloración azul. f) Espectrofotometría 1. Disolver 500 mg de citrato de piperazina en 10ml de agua 2. Agregar 1 ml de hidróxido de sodio 2.5N 3. Agregar 1 ml de acetona 4. Agregar 1 ml de nitroferricianuro de sodio 5. Mezclar y dejar en reposo durante 10 minutos 6. Determinar la absorbancia a 520nm o 600nm usando un blanco 7. Y luego realizar el mismo procedimiento, pero con la muestra g) ORP (potencial oxido-reducción) 1. Conectar el equipo a la energía para poder realizar el test de Oxido-reducción.
2. Calibrar el equipo de potencial Redox, con agua desionizada. 3. Colocar el electrón del ORP en agua desionizada para obtener un valor referente durante unos minutos, para observar la estabilidad. 4. Sumergir el electrón del ORP en agua destilada, para obtener valores estables y así poder, realizar un marco de referencia. 5. Sumergir el electrón del ORP en la primera muestra de Citrato de Piperazina, hasta que nos salga un valor estable, y anotar sus valores. 6. Lavar el electrón primero con agua destilada, luego con agua desionizada para que se neutralice y así poder realizar el procedimiento 5 en cada muestra faltante. 7. Realizar una segunda verificación de los datos dados por el equipo de ORP, para asegurar que los resultados sean correctos. h) GRADOS BRIX-INDICE DCDE REFRACCION-GLUCOSA 1. Haciendo el uso del refractómetro, se procede a efectuar la medición agregando al prisma una pequeña cantidad de jarabe de muestra utilizando una pipeta. 2. Operando el dispositivo se selecciona el método que se desea emplear (grados brix-índice de refracción-glucosa). 3. Luego se procede a tomar las mediciones obtenidas. 4. Después de cada medición se retira la muestra del prisma haciendo uso de algodón y a continuación se limpia con un poco de agua. i) Análisis Microbiológico Aislamiento de E. coli. ✓ Con un asa, hacer un aislamiento a partir de caldo lactosado, a agar MacConkey. Incubar a 35ºC por 24 horas. ✓ Las colonias de coliformes en agar MacConkey son de color rojo ladrillo, eventualmente rodeadas de zonas de bilis precipitada. ✓ Si no hay colonias típicas, la muestra cumple los requisitos en cuanto a ausencia de coliformes. ✓ Si hay colonias típicas, trasplante una de estas colonias a agar eosina-azul de metileno-lactosa, según Levine. Incubar a 35ºC por 24-48 horas. Las colonias de
E. coli en este medio, se caracterizan por dar color negro azulado al trasluz y brillo metálico dorado verdoso a la luz incidente. ✓ Transferir las colonias típicas del agar eosina-azul de metileno-lactosa (agar Levine), a agar nutritivo inclinado y a agar TSI. Incubar a 35ºC por 24 horas. ✓ Los cultivos típicos de E. coli en agar TSI presentan el bisel amarillo, sin oscurecimiento y con formación de gas. ✓ Hacer una coloración de Gram: E. coli es un bacilo Gram negativo no esporulado. ✓ Confirmar la presencia de E. coli por medio de pruebas bioquímicas adicionales como por ejemplo el Test del IMViC, o utilizando sistemas miniaturizados tales como API MicroID. 6.-CUADRO DE RESULTADOS: a) Características Organolépticas
FORMA FARMACEUTICA Jarabe de la Utmach Jarabe Neo fármaco
CARACTERISTICAS ORGANOLEPTICAS COLOR SABOR TEXTURA Amarillo transparente Rosado
Dulce Acido
Acuoso Acuoso
b) pH
Jarabe de la Utmach
pH 5.57
Jarabe NEOFÁRMACO
5.51
Según la Farmacopea Española 2da Edición, los parámetros de pH serian de 5-6, en este caso si cumple con lo establecido en esta farmacopea, ya que el resultado está dentro de los parámetros establecidos.
c) Densidad Nombre PIPERAZINA NF(1) PIPERAZINA UTMACH(2) CALCULOS:
Peso picnómetro vacío 12.5775 g 11.5332 g
Peso picnómetr o con agua 22.9923 g 21.0291 g
Peso picnómetro con jarabe 24.5495 g 23.4899 g
PIPERAZINA NF (1)
resultado
Cumplimiento
1.15 g 1.25 g
SI CUMPLE NO CUMPLE
PIPERAZINA UTMACH (2)
Peso pic jarabe−peso pic vácio Peso pic agua−peso pic vácio
24.5495 g−12.5775 g =¿ 22.9223 g−12.5775 g
23.4899 g−11.5332 g =¿ 210291 g−11.5332 g
11.972 g 10.3448 g
11.9567 g 94959 g
1.15 g /cc
1. 25 g/cc
FARMACOPEA: Mediante la práctica se obtuvieron los valores de densidad de la muestra 1 (piperazina NF) y la muestra 2 (piperazina UTMACH), los cuales al ser comparados con el valor referencial que se tomó de la Farmacopea Española que nos indica que la densidad del jarabe de piperazina es de 1.1, lo cual nos lleva a concluir que la Muestra 1 SI CUMPLE con lo establecido mientras que la Muestra 2 NO CUMPLE con el valor referencial. d) Solubilidad JARABE CITRATO DE PIPERAZINA GENÉRICO NF SOLVENTES
FACILMENTE
SOLUBILIDAD LIGERAMENTE
CASI
INSOLUBLE
SOLUBLE AGUA ALCOHOL FORMOL
X X X
JARABE CITRATO DE PIPERAZINA ELABORADO EN LA PLANTA PILOTO DE FARMACIA SOLVENTES
FACILMENTE
SOLUBILIDAD LIGERAMENTE
CASI
INSOLUBLE
SOLUBLE AGUA ALCOHOL FORMOL
X X X
FARMACOPEA: El citrato de Piperazina del laboratorio NF cumple con el parámetros de calidad de Solubilidad porque según el análisis nos dio soluble en agua, ligeramente soluble en formol e insoluble en alcohol, mientras que el Citrato de Piperazina elaborado en la PPF UTMACH no cumple con los parámetros porque nos dio soluble en todas las sustancias, según la Farmacopea Española 3 Edición el Citrato de Piperazina es soluble en agua e insoluble en éter y alcohol. e) Valoración Cálculos de Valoración
DATOS IMPORTANTES
Consumo práctico: 14 mL HClO4 0.1 N Conc. P.A.: 183.3 mg Consumo Práctico (CP): 14 mL ác. Perclórico Consumo Real (CR): 17 ml HCLO4 % Real CR: 72.84% % Teórico: 99.99 % Referencias: 97% - 103% Porcentaje Real (PR): Equivalente: 1 mL de ác. Perclórico contienen 10.71 mg de citrato de piperazina K: 1.0023 1. Cálculo para preparar 50ml de una solución de HClO4 a 0.1N 100.46 gr HClO4 1000 ml 100.46 gr HClO4 1N 1000 ml X 50 ml X 0.1 N X= 5.023 HClO4 X= 0.5023 ml HClO4 2. Cálculo de p.a. por ml de muestra 1 mL jarabe → 0.183 g p.a. 60 mL jarabe → X X = 11 g p.a.
3. Consumo teórico
1 mL HClO4 → 10.71 mg p.a X → 183.3 mg p.a. X = 17.11 mL HClO4
4. Porcentaje teórico 1 mL HClO4 → 10.71 mg p.a 17.11 mL HClO4 → X X = 183 mg p.a. 5. Consumo Real
60 mL jarabe → 11 g p.a. 1 mL jarabe → X X = 0.183 g p.a. x 1000 = 183.3 mg p.a
183.3 mg p.a. → 100 % 183 mg p.a. → X X = 99.98 %
Consumo real = Consumo práctico (viraje) x K Consumo real = 14 ml HClO4 x 1.0023 = 14.032 mL HClO4 0.1 N
6. Porcentaje Real 1 mL HClO4 → 10.71 mg p.a 14.032 mL HClO4 → X X = 150.28 mg p.a.
183.3 mg p.a. → 100 % 150.28 mg p.a. → X X = 81.98%
FARMACOPEA: Mediante la valoración del Jarabe de piperazina se determinó el porcentaje real de citrato de piperazina que fue 81,98%, el cual no se encuentra dentro de los parámetros de referencia ya establecidos (97% - 101%) en la farmacopea Española 2da Edición, este valor pudo haber sido alterado debido a la cantidad de ácido acético glacial que se utilizó o por el agua q se utilizó para preparar las soluciones. f) Espectrofotometría
Nanómetros
Absorbancias del jarabe de citrato de piperacina
Absorbancias de la materia prima de citrato de piperacina
520nm 600nm
● Jarabe: Jarabe concentración absorbancia
● Materia prima: Materia Prima concentración absorbancia
g) ORP (potencial oxido-reducción) MUESTRAS RESULTADO 1(mV) RESULTADO 2(mV) Piperazina NF 196 185 Piperazina UTMACH 195 184 REFENRENCIAS PARA ESTABILIZAR LOS RESULTADOS AGUA DESIONIZADA 189 187 AGUA DESTILADA 183 182 FARMACOPEA: Entre los fármacos sometidos a evaluación se puede observar que no existe una diferencia considerable en cuanto a los valores obtenidos de ORP que es una prueba que se encarga de medir la capacidad de reducción y oxidación de algún material,
para considerarse un valor verdadero debe mantenerse por algunos minutos sin variación del valor, este tipo de pruebas permite verificar que la forma farmacéutica líquida este completamente desinfectado libre de contaminaciones, por lo cual entre los 2 jarabes analizados no existieron cambios notorios en ambas pruebas realizadas por lo cual son aptos para el consumo. h) Grados Brix- índice de refracción-glucosa
MÉTODOS IDENTIFICACION
JARABE DE PLANTA JARABE PILOTO GENÉRICO Jarabe de piperazina de Jarabe de citrato de la UTMACH piperazina (NF) DE 1.4441 nD 1.4002 nD
INDICE REFRACCIÓN GRADOS BRIX GLUCOSA % INVERTER SUGAR FRUCTOSA
60.96% 62.19 % 62.16% 62.21%
40.17% 40.76% 40.80% 40.85%
Farmacopea: De los resultados obtenidos en la presente practica del laboratorio se utilizó el refractómetro con el fin de determinar índice de refracción, Grados brix, glucosa, % invertir sugar y fructosa; de muestras de dos jarabes de piperazina de cual se pudo identificar que el jarabe de piperazina elaborado en la plata piloto presenta mayores valores en comparación al jarabe genérico. Entiendo los conceptos basándonos en las farmacopeas tales como Farmacopea Europea, Argentina y brasileña. i) Análisis Microbiológicos
Agregar un volumen de una dilución de la muestra equivalente a 1 g o ml de producto a un volumen de Caldo digerido de Caseína - Soja definido por el proceso de validación. Incubar entre 30 y 35° C durante 18 a 24 hs. Finalizado el período de incubación, aislar en Agar Mac Conkey. Incubar las placas entre 30° C y 35° C durante 18 a 72 hs. De observarse desarrollo, confirmar mediante pruebas de identificación. El producto satisface el ensayo si no se observan colonias o si los ensayos de identificación son negativos. (Farmacopea Europea 6.8)
PARAMET ROS
Dilución
Caldo lactosa nutritivo (18h a 35°C-37°C)
Aislamiento en AGAR Maccon-key (24H A 35°C-37°C)
Ausencia o presencia -Gas o turbidez
-Colonias típicas -Colonias no típicas negativo
Ausencia
-
Trasplante Agar EosinaAzul de Metileno (24 -48 h a 35°C37°C) -Colonias negativas Azulados -Colonias cremas -negativo -
Aislamiento en agar nutritivo y agar tsi (24h a 35°C A 37°C) -Conteo de colonias (Recuento total de microorganismos aerobios ufc/gufc/ml 103 ) -
Interpreta ción de resultados
positivo/ne gativo
Negativo
1/10 Dilución 1/100 Dilución 1/1000
Dilución 1/10
Ausencia
-
-
-
Negativo
Ausencia
-
-
-
Negativo
Dilución 1/100
Dilución 1/1000
Farmacopea: Examen Microbiológico De Productos No Estériles: Criterios De Aceptación Para Preparaciones Farmacéuticas Y Sustancias De Uso Farmacéutico. Criterios de Aceptación para la Calidad Microbiológica de Formas Farmacéuticas No Estériles Recuento Total de Microorganismo(s) Vía de Administración Microorganismos Aerobios Específico(s) (ufc/g o ufc/ml) Preparaciones acuosas 102 Ausencia de Escherichia para uso oral coli (1 g o 1 ml) Criterios de aceptación para calidad Microbiológica de sustancias No Estériles para Uso Farmacológico. Recuento Total de Microorganismos Aerobios (ufc/g o ufc/ml) Sustancias para uso 103 farmacéutico La presencia de ciertos microorganismos en preparaciones no estériles puede tener el potencial de reducir y hasta inactivar la actividad terapéutica del producto y de afectar adversamente la salud del paciente. Los fabricantes deben asegurar por tanto una baja biocarga de formas farmacéuticas terminadas mediante la implementación de las guías de Buenas Prácticas de Fabricación vigentes durante la fabricación, el almacenamiento y la distribución de preparaciones farmacéuticas, por lo tanto según los parámetros establecidos en los Criterios de aceptación para calidad Microbiológica de sustancias No Estériles para Uso Farmacológico ambas muestras si cumplen con estos estándares establecidos. (Farmacopea USP Vol. 39, 2015)
l) Determinación del punto de Ebullición Primera Burbuja Rosario de burbujas
Jarabe Comercial 58°C 122°C
Jarabe Elaborado 72°C 118°C
El punto de ebullición para jarabes en general según Vila Jato, es de 105°C con una variación + de 5°C, aunque los 2 presentaron temperaturas que son mayores a eso, el termómetro de mercurio marco 115°C en el comercial mientras que la estufa llego a 122°C, se considera que puede variar por los excipientes o la concentración del p.a. 7.- CONCLUSIONES: Se procedió a la evaluación de calidad del Citrato de Piperazina en una forma farmacéutica liquida (jarabe), basándose en ensayos de diferentes farmacopeas, obteniéndose los siguientes resultados: para las características organolépticas son dulces, para los parámetros de pH serian de 5-6, en este caso si cumple con lo establecido en esta farmacopea. En la densidad la Muestra 1 SI CUMPLE con lo establecido mientras que la Muestra 2 NO CUMPLE con el valor referencial. En la solubilidad podemos ver que es soluble en agua e insoluble en alcohol. La valoración no dio los resultados esperados y finalmente el análisis microbiológico reveló ausencia de enterobacterias, concluyendo podemos decir que en la mayoría de las pruebas, si cumplieron con lo establecido en las farmacopeas.
8.- RECOMENDACIONES: Usar siempre el equipo de protección adecuado para minimizar algún tipo de accidente que ponga en riesgo nuestra salud. Utilizar los equipos de laboratorio con mucho cuidado para evitar que se dañen. Leer la guía práctica antes de realizar la práctica. Al utilizar un material verificar si está limpio. Tener cuidado con las sustancias que sean muy toxicas, trabajar siempre en campana.
Bibliografía
Delgado Salgado, M. S., & Suñiga Arteaga, C. T. (2015). Piperacina. Revista nacional del Insituto De trabajo y desarrollo de la Investigación, 207-212. Farmacopea Española. (2005). Valoración de Ibuprofeno (Vol. 3ra Ed.). Barcelona.
García Gonzales, C. A. (2015). Control de calidad de Medicamentos. Machala, El Oro, Ecuador: Universidad Técnica de Machala.
Vila Jato, J. L. (1997). Tecnología Farmacéutica II: Formas Farmacéuticas. Madrid: Ed. Sítntesis.
Farmacopea USP Vol. 39. (2015). Examen microbiológico de productos: Examen Microbiológico De Productos No Estériles: Criterios De Aceptación Para Preparaciones Farmacéuticas Y Sustancias De Uso Farmacéutico. (Vol. 39).
Luis Cuenca. CI: 0706683380
9.- ANEXOS: