Farmacognosia 1 - Cromatografia em camada delgada ccd

UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ FACULDADE DE FARMÁCIA, ODONTOLOGIA E ENFERMAGEM DEPARTAMENTO DE FARMÁCIA DISCIPLINA: FARMACOGNOSIA I

INTRODUÇÃO A CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)

MESTRANDO: FRANCISCO CIRINEU DAS CHAGAS NETO

FORTALEZA, ABRIL DE 2017.

Sumário Cromatografia CCD Aplicações

Sistema Técnica Vantagens Desvantagens Considerações finais

CROMATOGRAFIA  A cromatografia é um método físico-químico de separação dos componentes de uma mistura.  Separação  Identificação  Quantificação (combinado a outros equipamentos)

Duas fases Estacionária

Móvel

TIPOS DE CROMATOGRAFIA

CCD

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)  A cromatografia em camada delgada (CCD) consiste na separação dos componentes de uma mistura sólido líquido onde a fase móvel (líquida) migra sobre uma camada delgada de adsorvente retido em uma superfície plana (fase estacionária – sólida).  ADSORÇÃO.  Competição.  Proporções da fase móvel.

ADSORÇÃO É importante ressaltar que Absorção é diferente de Adsorção. Na Absorção, uma substancia se infiltra na outra, enquanto que a Adsorção é apenas superficial.

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)

Fase mรณvel Fase estacionรกria

APLICAÇÕES DA CCD Separação

APLICAÇÕES DA CCD Estabelecer a identidade de compostos;

APLICAÇÕES DA CCD Estabelecer a identidade de compostos;  Determinar o número de componentes de uma mistura;

3 componentes

APLICAÇÕES DA CCD  Estabelecer a identidade de compostos;  Determinar o número de componentes de uma mistura;  Determinar o solvente apropriado para uma separação por cromatografia em coluna;

APLICAÇÕES DA CCD  Estabelecer a identidade de compostos;  Determinar o número de componentes de uma mistura;  Determinar o solvente apropriado para uma separação por cromatografia em coluna;  Assegurar a autenticidade de fitoterápicos.

Limoneno Trans-cariofileno

Quercetina

SISTEMA Fase Estacionรกria

FASE ESTACIONÁRIA

FASE ESTACIONÁRIA

FASE NORMAL

Carรกter polar

FASE REVERSA

Carรกter apolar

SISTEMA Fase mรณvel

FASE MÓVEL O Solvente utilizado possui papel fundamental na separação dos componentes.

Competição entre as moléculas da amostra e da fase móvel, pela superfície adsorvente. Natureza química da amostra e a polaridade da FM. Mistura de solventes.

SOLVENTES PARA CROMATOGRAFIA 

Éter de petróleo



Ciclohexano



Tetracloreto de carbono



Benzeno



Cloreto de metileno



Clorofórmio



Éter etílico



Acetato de etila



Piridina



Acetona



Álcool n-propílico



Etanol



Água



Ácido acético

Ordem geral de eluição Aumento da polaridade

SISTEMA Revelador

REVELADORES Pode ser por métodos físicos ou químicos.  Método físico: Compostos UV-ativos, que aparecem como manchas em fundo fluorescente, se a placa for iluminada com lâmpada de luz ultravioleta.  Método químico: Quase todas as classes de substâncias orgânicas (exceto alcanos e haletos alifáticos) reagem com iodo formando complexos. A formação desses complexos é reversível.

REVELADORES (CONT.)  Revelação sob luz ultravioleta (254 nm): indicado para substâncias com cromóforos (sistemas conjugados), pois absorvem radiação UV e tornam-se fluorescentes.  Revelação com vapores de iodo: revelador universal para qualquer substância orgânica. Forma manchas marrons.  Métodos químicos (destrutivo): a solução do revelador é borrifada com ar comprimido. Após aquecimento ocorre a reação da substância com o revelador formando manchas coloridas. Ex. CeSO4 (Universal)  Métodos biológicos: quando há procura por uma substância com atividade biológica. Revelador é uma suspensão de fungos.

REVELADORES Vapor de iodo

UV

TÉCNICA CCD

PROCESSOS PARA A PREPARAÇÃO  Escolha da fase estacionária  Preparação das placas cromatográficas  Ativação das placas cromatográficas  Seleção da fase móvel  Aplicação das amostras  Preparação da cuba cromatográfica  Desenvolvimento do cromatograma  Revelação do cromatograma  Cálculo do fator de retenção Rf.

PREPARAÇÃO DAS PLACAS CROMATOGRÁFICAS

Suspensão do adsorvente

Placa de vidro

Espalhar uniformemente

PLACAS CROMATOGRÁFICAS PRONTAS

$$$

ATIVAÇÃO DAS PLACAS  Deve-se ativar as placas para se retirar substâncias aderidas ao adsorvente.  A ativação é um aquecimento e varia par cada adsorvente.  Sílica, alumina e terra diatomácea: 105°C – 110°C por 30 a 60 min.  Celulose: 105° até no máximo 10 min.

APLICAÇÃO DAS AMOSTRAS  Aplicadas na forma de soluções, em solvente bastante voláteis, que possam ser facilmente eliminados após a aplicação.  Aplicar 1,5 cm a 2,0 cm acima do bordo inferior, evitando que fique mergulhada na FM.

APLICAÇÃO DAS AMOSTRAS Padrões:  Ácido gálico

 Rutina  Cumarina  Amburosídeos...

CUBA CROMATOGRÁFICA

SEPARAÇÃO DE CONSTITUINTES

VÍDEO DEMONSTRATIVO

FATOR DE RETENÇÃO  Análise qualitativa: A análise qualitativa com CCD, consiste na determinação do Rf e sua comparação com Rf de padrões.

Rf = distância percorrida pelo analito distância percorrida pelo solvente

• Quando as condições são especificadas, Rf é constante para um composto e corresponde à uma propriedade física do mesmo, os valores ideais para Rf estão entre 0,4 e 0,6.

FATOR DE RETENÇÃO

FATOR DE RETENÇÃO

VANTAGENS DA CCD  Fácil execução;

 Maior rapidez;  Boa resolução;  Baixo custo;

 Versatilidade;  Útil no estudo fitoquímico na pesquisa de novos fármacos.

DESVANTAGENS DA CCD  Difícil reprodutibilidade: é muito difícil a confecção de duas placas idênticas, com a mesma quantidade de amostra, etc;

 Cuidado na determinação exata do Rf;  Método qualitativo.

OUTROS TIPOS DE CROMATOGRAFIA

CONSIDERAÇÕES FINAIS

OBRIGADO!

Email: cirineuneto@gmail.com