High Performance Horses 2008/2009 by TWYDIL

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Suisse/Switzerland, 2008/2009

HIGH PERFORMANCE HORSES SCIENTIFIC NEWS Sponsored by

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EVIDENCE OF A LINK BETWEEN SUBCLINICAL VIRAL INFECTION AND POOR PERFORMANCE. Dr. Guillaume Fortier (DMV, MSci)

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Pavesco AG – TWYDIL® Elisabethenstrasse 54 CH-4010 Basel APRH, Chantilly, France Agence Dollar, Le Faulq, France Sébastien Cox, Liège, Belgique Temps de poses, Ath, Belgique Trevor Jones, Worlington, Angleterre Gilly Wheeler, Angleterre Healy Racing Photographers, Ireland

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SOMMAIRE ❚ LE MOT DU PRESIDENT

❚H ERPESVIRUS ET ATTEINTES SUB-CLINIQUES DU CHEVAL A L’ENTRAINEMENT

❚ E VALUATION IN VITRO ET EX VIVO DES CAPACITES VIRUCIDES ET ANTIVIRALES D’UN BIOFLAVONOÏDE FACE A L’HERPES VIRUS EQUIN DE TYPE 1

❚ AIDAN O’BRIEN: LE MAITRE DE BALLYDOYLE

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❚ EFFETS D’EXTRAITS DE COMPLEMENTS ALIMENTAIRES SUR LA PROLIFERATION CHONDROCYTAIRE, UN TREMPLIN A LA RECONSTRUCTION TISSULAIRE

❚ T WYDIL® DANS LE MONDE

❚ S TABILITE ET QUALITE

❚N OUVELLES PRESENTATIONS

❚ P RECAUTIONS ANTIDOPING SANS EQUIVALENT

❚N OUVEAUX DISTRIBUTEURS

❚ T WYDIL® PRESENT AUX EXPOSITIONS ET CONGRES INTERNATIONAUX

❚ T WYDIL® S’INVESTIT DANS LA RECHERCHE APPLIQUEE AUX CHEVAUX D’ENDURANCE

❚ L ES TROUBLES MUSCULAIRES

❚ I NVESTIGATION DES BESOINS DES CHEVAUX D’AGE OU DEBILITES

❚ L E PROGRAMME ELEVAGE

❚M ISE EN RELATION DES PARAMETRES OBJECTIVANT LA PERFORMANCE SPORTIVE AVEC LES MARQUEURS DU STRESS OXYDANT CHEZ LE TROTTEUR

❚ L A GAMME DE PRODUITS TWYDIL® 50

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LE MOT DU PRESIDENT Dans un contexte international dont chacun mesure la morosité, TWYDIL® a réalisé en 2008 une nouvelle augmentation de 12% de ses ventes dans le monde. Ne dit-on pas qu'en cas de crise, le consommateur, appelé à surveiller ses deniers, privilégie toujours le sérieux et la qualité ? De récentes études universitaires viennent encore de montrer les incroyables disparités qu'il peut y avoir entre les différents aliments complémentaires du marché. Les périodes difficiles sont aussi celles lors desquelles il faut redoubler d'inventivité et de créativité. A ce titre la sortie du TWYDIL® MUCOPROTECT m'apparaît comme l'arrivée du meilleur outil mis à la disposition des professionnels du cheval depuis de nombreuses années. Quoi de plus embarrassant dans une écurie qu'un nez qui coule, des chevaux qui toussent ou des états de fatigue anormaux ? Après 5 ans d'investigations scientifiques au plus haut niveau cette découverte que nous proposons à notre clientèle est une arme dont elle ne disposait pas jusqu'ici. Valère HENRY Président

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HERPÈSVIRUS ET ATTEINTES SUB-CLINIQUES DU CHEVAL À L’ENTRAÎNEMENT Dr. Guillaume Fortier, DMV, MSci. Laboratoire Frank Duncombe, Caen, France Faculté de Médecine Vétérinaire de Liège, Belgique

INTRODUCTION

’origine de la contre performance chez le cheval athlète, toutes disciplines confondues, a fait l’objet de très nombreux travaux depuis plus de 25 ans. Ces travaux se sont principalement focalisés sur l’appareil musculo-squelettique et/ou cardio-respiratoire ou sur la mise en place de marqueurs fins et précoces des désordres hématologiques et biochimiques engendrés par les effets parfois délétères de l’entraînement. Le panel de maladies dites sub-cliniques (sans expression médicale franche lorsque l’on examine le cheval) pouvant être responsable de manque de performance chez le cheval, s’est donc naturellement développé au fur et à mesure des progrès technologiques et des apports de la recherche appliquée à la médecine équine de l’effort. Nombreux sont ces symptômes à ne se manifester que lorsque le cheval est mis en condition d’exercice (par exemple : la toux, le jetage, les saignements, la boiterie…). L’apparition d’outils tels que les tapis roulants à grande vitesse a pu ouvrir des voies d’investigations que seule la proximité des pistes rendait jusqu’alors possible. Par ailleurs, depuis que les tech6

niques d’exploration de l’appareil respiratoire à l’aide de lavages trachéaux ou bronchoalvéolaires existent, on sait que les maladies respiratoires des voies aériennes moyennes ou profondes représentent une des causes principales de contre performance chez les chevaux de compétition. L’appareil respiratoire supérieur est le siège spécifique de virus connus depuis longtemps pour leur aspect contagieux. C’est le cas du virus de la grippe équine (virus

Influenza équin), ou de la rhinopneumonie (Herpèsvirus équin de type 1 ou 4) et de virus moins bien connus comme les rhinovirus (agents des rhumes chez l’homme notamment). Ces maladies infectieuses sont fréquentes chez les chevaux et faciles à diagnostiquer dans la mesure où leur expression clinique est souvent importante, allant parfois jusqu’au syndrome grippal (jetage, hyperthermie, abattement, écoulement oculaire…). L’appareil respiratoire moyen ou

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HERPÈSVIRUS ET MALADIES DES VOIES RESPIRATOIRES

profond est surtout connu et étudié pour améliorer la compréhension d’un syndrome « dévastateur » pour la performance du cheval: l’inflammation des voies respiratoires. De nombreuses conférences, congrès, ouvrages ont déjà été consacrés à ces affections pour tenter de les définir ou, plus récemment, de trouver un consensus sur les méthodes de diagnostic et les progrès restant à réaliser (Couétil et al., 2007). Ces derniers travaux nous ont fait comprendre que le rôle des virus

devait être précisé, notamment pour la trachée et les bronches principales dont l’accès biologique est permis via l’endoscope et le lavage trachéal (LT). Le syndrome d’inflammation trachéale est alors évoqué sans pour autant en connaitre les causes réelles ; allergènes, bactéries, virus… Comme ces voies aériennes sont un véritable « carrefour » anatomique et physiologique, la coexistence de plusieurs facteurs favorisants, pourrait aussi être un mécanisme envisagé.

Le cheval peut être l’hôte de 5 herpèsvirus majeurs dont 4 présentent un « tropisme » plus ou moins marqué pour l’appareil respiratoire (tableau 1). Les Alphaherpèsvirus équins de type 1 et 4 (HVE-1 et HVE-4) sont responsables dans le monde entier d’épisodes plus ou moins sévères de maladies respiratoires ou abortives (HVE-1) ou de pathologies aiguës de l’appareil respiratoire supérieur (HVE-4). Les Gammaherpèsvirus équins de type 2 et 5 (HVE-2 et HVE-5) sont moins bien étudiés et leur pouvoir pathogène parfois discuté; contrairement à leurs homologues pour l’espèce humaine comme le virus de la mononucléose infectieuse (virus d’Epstein Barr) ou le cytomégalovirus Humain (HCMV). La principale caractéristique biologique des herpèsvirus est leur potentiel de latence chez l’animal infecté. De façon similaire au bouton d’herpès labial chez l’homme ou au zona (la plupart du temps réactivation herpétique de la varicelle juvénile), le virus peut rester dans les structures ganglionnaires

Tableau 1 : principaux herpesvirus des équidés (d’après Davison et al., 2009) Hôte naturel

Désignation Sous famille

Lié à

Autre désignation

Cheval Herpesvirus Alphaherpesvirinae / Virus abortif équin équin (HVE-1) HVE-2 Gammaherpesvirinae / HVE-3 Alphaherpesvirinae / Virus de l’Exanthema Coïtal HVE-4 Alphaherpesvirinae / Virus de la Rhinopneumonie équine HVE-5 Gammaherpesvirinae / Ane HVE-6 Alphaherpesvirinae HVE-3 Herpèsvirus Asin de type 1 HVE-7 Gammaherpesvirinae HVE-2 et 5 Herpèsvirus Asin de type 2 HVE-8 Alphaherpesvirinae HVE-1 Herpèsvirus Asin de type 3 AHV-4 Gammaherpesvirinae HVE-2 et 5 Herpèsvirus Asin de type 4 AHV-5 Gammaherpesvirinae HVE-2 et 5 Gazelle et Zèbre HVE-9 Alphaherpesvirinae HVE-1

Référence (exemple) Allen and Bryans, 1986 Studdert et al., 1996 Hartley et al., 1999 Patel and Heldens, 2005 Telford et al., 1995 Browning et al., 1988 Bell et al., 2008 Crabb et al., 1991 Kleiboeker et al., 2002 Kleiboeker et al., 2002 Borchers et al. 2005 Borchers et al. 2006

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Figure 1 : Cellules épithéliales ciliées normales (flèches pleines) sur un lavage trachéal d’un cheval Pur-sang de 3 ans (grossissement x 1000 , coloration de May Grunwald Giemsa). On distingue la ciliature relié au corps de la cellule par une zone légèrement plus réfringente (flèche pointillée)

locales et être réactivé à la faveur de stress divers. Le cheval ne déroge pas à cette règle virologique et dès lors qu’une majorité de chevaux seront infectés dès l’élevage par un ou plusieurs de ces virus (HVE-1 à 5), ils pourront sous diverses formes cliniques être victimes de réactivation à divers moments de leur vie. Comme l’athlète humain, le cheval est soumis à divers stress liés au transport, à l’exercice, à la compétition et à la gestion du repos. Les influences de ces stress commencent à être étudiées chez l’homme ou chez le cheval. Il semblait donc intéressant de s’attacher à étudier la présence de ces virus dans l’appareil respiratoire moyen ou profond du cheval plus leur rôle éventuel et ce à l’aide de « marqueurs » directs comme la mise en évidence de leur génome par amplification génique (PCR) ou indirects (anomalies cellulaires des liquides de lavages respiratoires).

HERPÈSVIRUS ET PRÉLÈVEMENTS RESPIRATOIRES

Les questions telles que « comment prélever ?» ou « que préle8

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ver ?» sont de véritables difficultés en pratique courante pour le vétérinaire clinicien. Elles sont liées à l’interaction parfois difficile à cerner des techniques de laboratoire et de la physiopathologie de ces herpèsviroses auxquelles s’ajoutent les connaissances encore partielles sur ces maladies (forme neurologique de la Rhinopneumonie, variabilité antigénique des souches « sauvages », mécanismes de réactivation, sensibilité des méthodes…). Les développements depuis 15 ans de très nombreuses méthodes de biologie moléculaire comme la PCR (polymerase chain reaction) permettent désormais de détecter ces virus, même lorsque la charge virale est assez faible. Ceci peut se produire dans trois cas principaux : - Le vétérinaire est face à un cheval qui est malade depuis quelques jours et il est donc en phase décroissante de quantité de virus détectables. - Le cheval est vacciné vis-à-vis de ce virus et sa charge virale est donc moindre et passagère. - Le cheval est en tout début d’évolution de la maladie et il n’est pas en phase virale aigue (chevaux les plus contagieux). Face à la diversité de cette famille de virus chez le cheval, et à leur implication dans diverses maladies équines, des méthodes de détection d’une région concernée par un gène commun à tous les herpèsvirus de Mammifères ont pu être développées (Leon et al., 2008). Ces méthodes sont très utiles en pratique quotidienne dans les laboratoires spécialisés car elles apportent aux praticiens une réponse rapide quant à la présence d’un des herpèsvirus (1,2,4 ou 5) avant d’en faire un « typage » plus précis qui permettra d’affiner les méthodes de luttes mais

surtout de prévention à l’élevage ou a l’entraînement (Diallo et al., 2008). Par ailleurs, les principales études de corrélation entre herpèsvirus et maladies respiratoires des jeunes chevaux à l’entraînement ont, la plupart du temps, utilisé des outils de diagnostic de type sérologique (Wood et al., 2005a; Wood et al., 2005b). Mais Murray et collaborateurs (1998), montrent pour leur part, que les jeunes chevaux en réactivation ne présentent pas obligatoirement de séroconversion avec les méthodes de séroneutralisation virale. Ceci limite aussi l’intérêt des sérologies, même couplées à 15 jours d’intervalle, lors d’épisodes contagieux sur le terrain. Il faut donc rester prudent quant au diagnostic de maladie virale par simples tests sérologiques, surtout lorsque les signes cliniques sont restés frustres. C’est pour l’ensemble de ces raisons qu’un certain nombre de travaux ont débuté à l’aide de mise en évidence directe de virus ou de leur matériel génétique dans les liquides d’exploration respiratoire chez des chevaux présentant ou non des signes cliniques (Sutton et al., 1998; Fortier et al., 2009). En résumé, le prélèvement naso-pharyngé demeure le standard idéal pour toute situation contagieuse, avec une clinique franche de syndrome grippal. Il est aisé, rapide et devra être conservé et acheminé au froid vers des laboratoires spécialisés. Dès lors que la clinique est moins évidente et/ou que la possibilité de faire un lavage des voies respiratoires doit être envisagée, la cytologie du liquide accompagnée d’une recherche par PCR d’herpès-virus peut s’avérer très intéressante. Le tableau 2 reprend les résultats obtenus par l’étude systématique

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de liquides respiratoires de plus de 700 chevaux en comparant un groupe de chevaux sains à une population contre performante. Il montre que, contrairement aux liquides bronchoalvéolaires, les lavages trachéaux des chevaux contre performants présentaient 3 fois plus de virus HVE-2 que les chevaux sains. Ce virus est par ailleurs celui qui est le plus mis en évidence chez les chevaux du groupe pathologique, devant HVE-4 qui est l’herpèsvirus le plus souvent retrouvé lors d’épisodes contagieux et cliniques dans les effectifs de chevaux adultes. Ces détections d’HVE-2 peuventelles être associées à un profil cytologique particulier ?

MALADIES VIRALES ET INFLAMMATION DES VOIES RESPIRATOIRES

Les premiers sites de réplication dits « initiaux » chez ces virus sont les cellules épithéliales du naso-pharynx. C’est cette phase qui provoque l’écoulement nasal, les adénites locales, les pharyngites parfois associées et la

fièvre constatée. Lors des phases ultérieures (seconde phase virale expliquant parfois les fièvres et symptômes qui reviennent après une courte amélioration ou « V » Grippal) les signes cliniques sont moins évidents ainsi que les liquides respiratoires d’exploration, les seuls à montrer des anomalies suspectes. En effet, les cellules cibles de ces virus dans la trachée sont les cellules épithéliales ciliées qui se présentent chez le cheval en bonne santé comme le montre la figure 1. Il est donc normal d’en trouver sous cette forme en nombre limité dans un lavage trachéal. Dès lors que la trachée est le siège d’une activité virale, ces cellules vont prendre une autre morphologie comme indiqué sur la figure 2. Ces déformations ont pu être démontrées expérimentalement (Sutton et al., 1998) pour la grippe ou la rhinopneumonie (HVE-4 et HVE-1) ou sur des prélèvements de terrain lors d’examen systématique pour contre performance ou intolérance à l’effort (Fortier et al., 2009). La présence de ces anomalies lors

d’autres pathologies (bactérienne, inflammatoires….) n’est pas encore totalement élucidée et il convient donc d’être prudent quant à l’utilisation de ces seuls critères cytologiques à des fins diagnostiques. La recherche de virus doit donc toujours être effectuée en même temps que l’analyse cytologique du liquide qui demeure le « gold standard » pour ce genre d’examens. Les lésions tissulaires engendrées par la réplication de ces virus lors des phases cliniques ou subcliniques de la maladie pourraient aussi être la cause de l’inflammation secondaire et de la durée de cette dernière chez les chevaux présentant des maladies inflammatoires des voies respiratoires (MIVR) moyennes ou profondes (Moore et al., 1996). En 1992, Willoughby et collaborateurs montrent que le « taux de clearance de la trachée » (Tracheal clearance rate) est modifié lors d’infection grippale et à moindre titre lors d’infection par l’HVE de type 1. Selon les auteurs, ces résultats résultent d’une altération de la muqueuse respiratoire

Tableau 2 : détection d’herpèsvirus dans les liquides respiratoires de deux groupes de chevaux sains et pathologiques d’après Fortier et al.(2009)

Lavages trachéaux (LT)

Lavages bronchoalvéolaires (LBA)

HVE-1 HVE-2 HVE-4 HVE-5

CTL (n=37) 0 [0%] 4 [11%] 1 [3%] 0 [0%]

CTL (n=25) 0 [0%] 9 [36%] 1 [4%] 0 [0%]

PAT (n=259) 4 [2%] b 85 [33%] 17 [7%] 8 [3%]

Valeur de p > 0.05 0.006 * > 0.05 > 0.05

PAT (n=387) 4 [1%] 82 [21%] 16 [4%] 16 [4%]

Valeur de p > 0.05 > 0.05 > 0.05 > 0.05

CTL ; groupe contrôle – PAT ; groupe pathologique – n= nombre de prélèvements Valeur de P : statistiquement significatif si < à 0.05

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Figure 2 : Image de type « ciliocytophthorie » sur un lavage broncho-alvéolaire (grossissement 1000, coloration de MGG). La flèche montre une cellule épithéliale ayant perdu sa ciliature et présentant un cytoplasme et un noyau avec inclusion. Un autre cytoplasme (flèche pointillée) et déformé (arrondi) avec un noyau d’aspect normal présentant une inclusion.

superficielle et d’une réponse inflammatoire secondaire exagérée. Cette réponse inflammatoire suivant une infection virale respiratoire avec le virus HVE de type 1 est étudiée de façon plus approfondie par Kydd et collaborateurs en 1996 qui montrent un afflux significatif de cellules polynucléaires neutrophiles (PNN) ainsi que des profils cellulaires dans les LBA confortant les descriptions similaires (Moore et al., 1996) sur des chevaux atteints de MIVR. Cet afflux de PNN est décrit aussi par Sutton et collaborateurs (1997) mais avec une infection à virus grippal (Virus Influenza équin). Ces auteurs décrivent des modifications des profils inflammatoires des LBA sur une plus longue période que celles rencontrées avec le virus HVE de type 1 (jusqu’à 21 jours post challenge). Sachant que ces MIVR sont souvent suspectées chez les jeunes chevaux mais que leurs manifestations cliniques sont souvent frustres, le mode de recherche des virus respiratoires par le biais d’écouvillons naso-pharyngés ne peut concerner qu’une minorité de cas exprimant donc clairement une maladie des voies respiratoires supérieures. Au laboratoire, nous travaillons depuis plusieurs années sur la dé10

finition de profils cytologiques fiables et représentatifs de phénomènes d’invasion viraux de l’appareil respiratoire chez les chevaux de courses contre-performants, en les rapprochant de résultats de PCR systématiquement pratiquées sur ces échantillons confiés dans le cadre d’examens de routine ou de protocole de recherche. Les résultats obtenus sur un nombre significatif de liquides semblent aller dans le sens de ce que certains travaux étrangers pouvaient laisser entendre (Whitwell et Greet, 1984; Couetil et al., 2007;). Les pathologies virales sub-cliniques (qui sont principalement des herpèsviroses) pourraient être à l’origine de certaines maladies inflammatoires de l’appareil respiratoire moyen ou profond et de contre-performances sportives constatées. La reproduction expérimentale de ces pathologies liées au virus EHV-2 devrait permettre d’apporter quelques réponses à ce propos.

CONCLUSIONS

L’espèce équine est une des espèces les plus exposées aux virus de la famille des Herpesviridae. Ne serait-ce qu’en termes économiques, les deux virus HVE1 et HVE4 ont une importance considérable pour l’élevage et ce, tant par le nombre de foyers déclenchés

dans les élevages que par les maladies ou complications qu’ils induisent sous leur expression la plus fréquente, la forme sub-clinique. Ce sévère constat n’est pas encore démontré pour HVE2 ou HVE-5, mais il est probable que ces virus jouent eux aussi un rôle assez néfaste chez le cheval, même si ceci reste à prouver par des études plus systématiques et expérimentales. Le recours aux écouvillons nasopharyngés, même si il reste simple et efficace pour les maladies à expression clinique avérée, demeure un peu la seule face « émergée » de l’iceberg en matière d’exploration des affections respiratoires sub-cliniques que seules les endoscopies et lavages rendent accessible. Les formes sub-cliniques engendrées par ces virus sont, le plus souvent, le fait de la latence et des phénomènes de réactivation - excrétion virale, caractéristique de ces virus et de leur biologie. La biologie moléculaire et les connaissances améliorées en immunologie équine, ont pu faire considérablement progresser les chercheurs et les industriels ces dix dernières années. S’il est peu probable que des thérapeutiques antivirales spécifiques voient le jour rapidement en raison notamment du coût induit et des effets irréguliers dans les essais pratiqués, il semble raisonnable de penser que les vaccins et les protocoles d’immunisation chez les chevaux seront assez vite améliorés dans cette espèce (présentation de l’antigène et voie d’administration). La biologie moléculaire et les progrès accomplis depuis les premières méthodes d’ampli-

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fication génique pour dépister ces virus, ont permis d’affiner le diagnostic de terrain de ces maladies, d’améliorer la rapidité d’intervention du vétérinaire dans les haras ou centres d’entraînements, mais aussi de mieux comprendre par la voie génomique, la virulence, le tropisme tissulaire et la variabilité des souches auxquelles les chevaux sont confrontés au cours de leur vie ou de leur carrière. Ces connaissances rejoignent et complètent celles du monde industriel des vaccins pour lequel l’efficacité vaccinale vis à vis des herpèsvirus, demeure un défi scientifique et technique remarquable. La part des deux gammaherpèsvirus du cheval les moins étudiés pour le moment, dans le monde économique du cheval reste à préciser, mais l’immunomodulation « silencieuse » induite par ces familles de virus chez les Mammifères pourrait ouvrir de nouvelles voies intéressantes. Si le syndrome d’inflammation trachéale a comme étiologie possible un ou des virus, ces derniers pourraient bien y jouer un rôle non négligeable❚

REFERENCES

Davison, A.J., Eberle, R., Ehlers, B., Hayward, G.S., McGeoch, D.J., Minson, A.C., Pellett, P.E., Roizman, B., Studdert, M.J., Thiry, E., 2009. The order Herpesvirales. Arch.Virol., 154, 171-177.

Leon, A., Fortier, G., Fortier, C., Freymuth, F., Tapprest, J., Leclercq, R., Pronost, S., 2008. Detection of equine herpesviruses in aborted foetuses by consensus PCR. Vet.Microbiol., 126, 20-29. Moore, B.R., Krakowka, S., Cummins, J.M., Robertson, J.T., 1996. Changes in airway inflammatory cell populations in standardbred racehorses after interferon-alpha administration. Vet. Immunol.Immunopathol., 49, 347-358.

Diallo, I.S., Hewitson, G.R., de, J.A., Kelly, M.A., Wright, D.J., Corney, B.G., Rodwell, B.J., 2008. Equine herpesvirus

Murray, M.J., del, P.F., Jeffrey, S.C., Davis, M.S., Furr, M.O., Dubovi, E.J., Mayo, J.A., 1998. Neonatal equine herpesvirus

infections in yearlings in South-East Queensland. Arch.Virol., 153, 1643-1649.

type 1 infection on a thoroughbred breeding farm. J.Vet.Intern.Med., 12, 36-41.

Fortier, G., Van, E.E., Fortier, C., Richard, E., Pottier, D., Pronost, S., Miszczak, F., Thiry, E., Lekeux, P., 2009. Herpesviruses in respiratory liquids of horses: Putative implication in airway inflammation and association with cytological features. Vet Microbiol.. Kydd, J.H., Hannant, D., Mumford, J.A., 1996. Residence and recruitment of leucocytes to the equine lung after EHV-1 infection. Vet.Immunol.Immunopathol., 52, 15-26.

Sutton, G.A., Viel, L., Carman, P.S., Boag, B.L., 1998. Pathogenesis and clinical signs of equine herpesvirus-1 in experimentally infected ponies in vivo. Can.J.Vet.Res., 62, 49-55.

Couétil, L.L., Hoffman, A.M., Hodgson, J., Buechner-Maxwell, V., Viel, L., Wood, J.L., Lavoie, J.P., 2007. Inflammatory airway disease of horses. J.Vet.Intern. Med., 21, 356-361.

Willoughby, R., Ecker, G., McKee, S., Riddolls, L., Vernaillen, C., Dubovi, E., Lein, D., Mahony, J.B., Chernesky, M., Nagy, E., ., 1992. The effects of equine rhinovirus, influenza virus and herpesvirus infection on tracheal clearance rate in horses. Can.J.Vet.Res., 56, 115-121. Wood, J.L., Newton, J.R., Chanter, N., Mumford, J.A., 2005a. Association between respiratory disease and bacterial and viral infections in British racehorses. J.Clin.Microbiol., 43, 120-126. Wood, J.L., Newton, J.R., Chanter, N., Mumford, J.A., 2005b. Inflammatory airway disease, nasal discharge and respiratory infections in young British racehorses. Equine Vet.J., 37, 236-242.w

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EVALUATION IN VITRO ET EX VIVO DES CAPACITÉS VIRUCIDES ET ANTIVIRALES D’UN BIOFLAVONOÏDE FACE À L’HERPES VIRUS ÉQUIN DE TYPE 1 Alexandra Scipioni, Tatiana Art, Lorène Dams, Brieuc de Moffarts, Pierre Lekeux et Etienne Thiry

Ce texte est la vulgarisation d’une étude scientifique qui a été partiellement présentée lors du congrès Hippos 2008. (Scipioni et al, 2008)

’étude a été placée sous l’autorité du professeur Etienne Thiry (service de virologie de la faculté de médecine vétérinaire de Liège) et conduite en association avec le Docteur Tatiana Art (service de physiologie de la faculté de médecine vétérinaire de Liège). Elle avait pour but l’évaluation des capacités virucides et antivirales d’un bioflavonoïde. Cette étude a été partiellement financée par TWYDIL®. Cette étude a permis de démontrer : In vitro : une activité virucide importante du bioflavonoïde et une certaine activité de celui-ci sur les processus de multiplication virale, qui reste à confirmer. Ex vivo : suite à une administration per os de ce bioflavonoïde, certains liquides biologiques ont montré une activité virucide significative.

INTRODUCTION

Les relations entre pathologies virales, inflammation et performance sont de plus en plus étudiées tant chez le sportif humain que chez le cheval. Il faut rappeler que chez ce dernier, les affections du système

respiratoire sont la deuxième cause de pauvres performances sportives. Parmi ces affections, les infections virales prennent une part non négligeable (elles ont été en partie développées dans l’article qui précède : page : 4-9), nous allons revoir très succinctement les implications liées à l’herpès virus équin de type 1 (EHV-1). L’EHV-1 (famille des Herpesviridae) est un pathogène majeur du cheval. Présent à l’état endémique dans le monde, il est responsable d’avortements et

de myéloencéphalopathies tandis que l’ EHV-4 est responsable de la rhinopneumonie. Malgré l’existance de vaccins contre l’EHV-1 (et la protection croisée qu’ils confèrent face à l’EHV-4), le cheval n’est pas totalement protégé contre ces infections. Il y a de nombreuses années, des molécules antivirales ont été développées pour traiter les infections liées aux herpès virus humain. Leur efficacité contre l’EHV-1 avait été testée et bien que les résultats in vitro aient été encourageants, les résultats 13

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Rappelons peut-être à ce stade que les affections virales du cheval, qu’elles soient cliniques ou subcliniques, engendrent des pertes économiques très importantes qui peuvent même être catastrophiques pour l’économie d’un pays tout entier (AQUIS report 2009).

PRÉSENTATION DE L’ÉTUDE :

L’étude s’est déroulée en deux phases, une première in vitro et une deuxième ex vivo.

1. Etude in vitro

L’activité antivirale du composé contenant des flavonoïdes. Son effet (virucide et sur la multiplication virale) face à l’EHV-1 a été évalué sur lignée de cellules RK13 par mesure de la réduction du titre viral. Ce travail s’est déroulé en plusieurs étapes : - La mise en suspension du composé en testant différents solvants ; - La mesure de la cytotoxicité des solvants et du composé solubilisé sur culture de cellules RK13 ; - L’évaluation de l’effet virucide des composés : Le principe est de mesurer l’effet virucide éventuel des suspensions de flavonoïdes sur l’EHV-1 en culture de cellules RK13. Pour 14

Figure 1 : culture cellulaire (RK13) infectée par l’EHV-1 en dose décroissante de gauche à droite (plaque de dénombrement par la méthode DICC50.)

cela, l’échantillon est ajouté à la suspension virale avant d’infecter le tapis cellulaire. Différents temps de contact (allant de 10 secondes à 30 minutes) ont été testés. Le titre viral est mesuré après 3 jours d’incubation par la méthode de la dose infectieuse en culture de cellules responsables de 50% de lyse des supports cellulaires (DICC50). L’évaluation de l’action du composé, sur la multiplication du virus :

La deuxième phase de l’étude s’est intéressée à montrer un effet éventuel du flavonoïde circulant dans le plasma et/ou le lavage bronchoalvéolaire (BAL) après administration orale de l’extrait de complément alimentaire, pendant 7 jours, à 6 chevaux hébergés en conditions standardisées. Afin d’éviter des interférences entre l’effet du complément et la présence potentielle d’anticorps contre l’EHV-1 (les chevaux pourraient en effet être déjà immunisés contre ce virus et ce à des degrés variables), le virus utilisé pour cette phase était le virus de la maladie d’Aujeszky ( suid herpès virus 1 ; SuHV-1), appartenant à la même famille que l’EHV-1. Toutes les expériences réalisées avec l’EHV-1 ont été validées avec le SuHV-1. Ceci permet de ne tenir compte que des effets du flavonoïde et non des anticorps potentiellement en présence.

L’objectif est de mesurer l’effet du composé sur la multiplication de l’EHV-1 en culture de cellules RK13. Différentes concentrations du composé ont été mises en contact avec les cellules au moment de l’infection virale. Deux jours plus tard, on recherche sur les boîtes de culture l’apparition des effets cytopathogènes caractéristiques de ces virus (syncytium et plages de lyse).

Des prélèvements de sang et des lavages broncho-alvéolaires ont été réalisés à trois moments (J- 1, J0 et J+7) et leur effet virucide a été testé. Ces prélèvements se sont déroulés comme suit : - J-1 : sang et BAL prélevés comme contrôle - J0 : sang prélevé (4 heures après la première administration) - J+7 : sang et BAL prélevés (4 heures après la dernière administration)

2. Etude ex vivo

L’objectif était de voir si, suite à

DICC50

in vivo furent malheureusement décevants. Suite à ces constatations, la recherche de molécules capables d’aider, prévenir ou lutter contre les infections virales du cheval fût de plus en plus intense. Différents extraits de plantes riches en flavonoïde ont montré une certaine activité face à des virus humains (HIV, herpès virus, …).

08-09

Figure 2 : Réduction du titre viral après mise en contact « in vitro » du bioflavonoïde avec l’EHV-1.

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08-09 Dilution 10x du bioflavo-noïde

Dilution 1000x du bioflavo-noïde

une absorption orale, le flavonoïde était présent dans le sang et/ou dans le BAL et s’il s’y retrouvait à une concentration suffisante pour obtenir un effet virucide ex vivo. Le mode opératoire est en tout point similaire aux tests in vitro, en y incluant les contrôles d’usage.

Figure 3 : observation après 24 heures des effets cytophatogènes induits en culture de cellules par l’EHV-1 pré-incubé avec ou sans bioflavonoïde. MOI : multiplicity of infection, représente le nombre de particules virales par cellule

Figure 5 : Réduction du titre viral après mise en contact des liquides plasmatiques ex vivo avec l’EHV-1 DICC50

Dilution 100x du bioflavo-noïde

DICC50

Figure 4 : Réduction du titre viral après mise en contact des liquides de lavage broncho-alvéolaire ex vivo avec l’EHV-1

MOI 0,01

RESULTATS DE L’ÉTUDE 1. Etude in vitro

Après vérification, les conditions expérimentales se sont avérées adéquates. La figure 1 représente une plaque de dénombrement du EHV-1 sur cellules RK13 après inoculation par le virus EHV-1. Les zones bleues indiquent que les cellules sont présentes et les zones blanches que les cellules ont été lysées. L’effet virucide du composé sur l’EHV-1 s’est avéré significatif. Seules dix secondes de contact à une concentration de 0.125 µg/ml ont suffi à réduire le titre viral de presque 100 %. La figure 2 illustre ces résultats. Les résultats obtenus laissent penser qu’un effet du composé sur la multiplication virale serait possible. La figure 3 indique l’absence de réaction cytopathogène de l’EHV-1 sur les cellules RK13 en culture lorsque le bioflavonoïde est inclus dans le milieu de culture. Toutefois, l’effet virucide pourrait interférer avec un effet sur la multiplication virale. Ces résultats indiquent clairement un effet virucide et laissent penser qu’un effet sur la multiplication virale du bioflavonoïde existe. Ce dernier effet devra faire l’objet

d’études complémentaires afin d’en caractériser le mécanisme d’action éventuel.

2. Etude ex vivo

Rappelons-nous que l’activité virucide du sang et du BAL a été testée par les mêmes méthodes que développées précédemment mais en utilisant le virus de la maladie d’Aujeszky (SuHV-1) en remplacement de l’EHV-1. Les résultats des dénombrements ont été comparés avec ceux des contrôles. Ils sont repris dans les figures 4 et 5. Avec le plasma aucun effet virucide significatif n’a pu être montré à J0 (soit 4h après la première administration orale du bioflavonoïde). Par contre a J+7 une réduction significative du titre viral a été observée aussi bien avec le plasma qu’avec le lavage broncho-alvéolaire. Dans cette phase de l’étude, l’utilisation du SuHV-1 nous protège d’un biais qui serait dû à la présence d’anticorps contre l’EHV-1.Mais une autre source d’erreur possible est la présence du virus EHV-1 lui-

même ! Si tel était le cas, le virus pourrait lyser les cellules RK13 en contact et induire un résultat faux-positif. Pour éliminer ce risque, les échantillons de sang et de BAL ont été préalablement mis en contact avec les cellules RK13 sans ajouter le virus SuHV-1. Aucun effet cytopathogène n’a été observé, ce qui atteste que les animaux n’étaient pas en phase d’excrétion virale. Les chercheurs ont par ailleurs essayé de mesurer la concentration du flavonoïde dans les liquides physiologiques et de façon assez surprenante, la concentration n’a pas changé de façon significative au cours de l’expérience❚ Suite à une administration orale du composant, l’activité virucide des liquides biologiques face à l’EHV-1 a été observée. L’ensemble des résultats nous permet de penser que l’activité virucide observée est due à la présence dans le sang de métabolites du bioflavonoïde (ceux-ci n’ayant toutefois pas été recherchés au cours de l’étude)

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CONCLUSIONS GÉNÉRALES Cette étude a permis de démontrer : In vitro : que le bioflavonoïde possède une activité virucide et qu’il aurait un effet sur les processus de multiplication virale. Ex vivo : que suite à l’administration orale du bioflavonoïde, certains liquides biologiques ont présenté une activité virucide significative.

QUESTIONS AU PROFESSEUR ETIENNE THIRY HPH: Ces résultats sont-ils surprenants ? Est-il fréquent de trouver ce type d’activité ? Prof. E. Thiry : Le niveau de virucidie observé in vitro est très important. D’autres études ont montré ce type d’activité envers des virus, mais il est vrai que, jusqu’à présent, ce type d’effet avait été étudié pour des bactéries et non des virus. Ces résultats prometteurs permettent d’envisager un effet chez le cheval infecté par l’EHV-1. HPH: Une activité antivirale a été mise en évidence mais quel est, à votre avis, le mode d’action de la molécule ? Prof. E. Thiry: Il est prématuré de préciser le mode d’action antiviral de la molécule, car certains résultats doivent être confirmés. Concernant l’effet virucide, l’inactivation des virus est probablement due à un effet des flavonoïdes sur l’enveloppe externe des virus. HPH: Ce type de dérivés pourrait-il être actif face à d’autres virus tel que, par exemple, le virus influenza ou face à des virus d’autres espèces animales? Prof. E. Thiry: Si l’action se situe au niveau de l’enveloppe virale, il se pourrait alors que le bioflavonoïde ait un effet sur d’autres virus enveloppés, comme les virus influenza. Des études particulières sont cependant nécessaires pour confirmer cette hypothèse. HPH: Quelles perspectives ce type de recherche peut-il ouvrir ? Prof. E. Thiry: La vaccination est la seule voie de prévention des maladies virales chez le cheval à l’heure actuelle. Elle pourrait donc être utilement complétée par l’utilisation de substances à effet virucide, voire antiviral, qui offrent la perspective de traiter les chevaux, principalement de manière préventive avant qu’ils ne soient placés dans des environnements à risque d’infection. 16

BIBLIOGRAPHIE Song J.M. and Seong B.L. Tea Catechins as a potential alternative anti-infectious agent. 2007. Expert Rev. Anti Infect. Ther., 5; 497-506. Whalley J. M., Robertson G. R., Scott N. A., Hudson G. L., Bell C. W. and Woodworth, L. M. Identification and nucleotide sequenceof a gene in equine herpesvirus 1 analogous to the herpes simplexvirus gene encoding the major envelope glycoprotein B. 1989. J. Gen. Virol. 70; 383–394. Scipioni A., Dams L., de Moffart B., Thiry E.,: In vitro susceptibility of equine herpesvirus type 1 to two feed additives containing flavonoids. In proceedings: Hippos congress, Liège, Belgium, 2008 (poster communication). de la Fentes R., Awan A.R. and Field H.J. The acyclic nucleoside analogue penciclovir is a potent inhibitor of equine herpesvirus type 1 (EHV-1) in tissue culture and in murine model. 1992. Antiv. Res., 18; 78-89. Barrandeguy M., Vissani A., Ortiz C., Becerra L., Miño S., Pereda A., Oriol J., Thiry E. Experimental reactivation of equid herpesvirus 3 following corticosteroid treatment. Equine Vet. J., 2008, 40, doi: 10.2746/042516408X333399. Fortier G., Pronost S., Miszczak F., Fortier C., Léon A., Richard E., Van Erck E., Thiry E., Lekeux P. Identification of equid herpesvirus 5 in respiratory liquids: a retrospective study of 785 samples taken in 2006-2007. Vet. J., 2008, doi:10.1016/j. tvjl.2008.07.004.

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AIDAN O’BRIEN: LE MAÎTRE DE BALLYDOYLE Michael FORTUNE

DE L’ELEVE DE BONNE VOLONTE AU GENIE RARE

e dimanche, 28 juin 2009, Aidan O’Brien a salué le retour de Fame And Glory à la tribune traditionnelle des gagnants et ce, après la course qui a conduit ce fils de Montjeu à la gloire lors du Derby Irlandais du Dubai Duty Free. Fame And Glory a remporté une victoire aisée en laissant derrière lui son compagnon d’écurie Golden Sword, faisant par là briller davantage le génie extraordinaire de l’homme qui a repris la succession de feu Vincent O’Brien à Ballydoyle. Ce que ne dit pas ce simple résultat du Derby Irlandais de 2009 c’est que c’était le septième vainqueur de l’Irish Derby entraîné par Aidan O’Brien, l’homme au charme juvénile qui, assez incroyablement, n’était qu’à quatre mois de son quarantième anniversaire. Vincent O’Brien, l’homme qui a fondé et mené Ballydoyle à son statut durable de centre leader mondial de l’entraînement, a entraîné six gagnants du Derby Irlandais au cours d’une carrière incroyable. Mais voilà que son successeur – sans aucun lien de parenté avec lui, même si portant le même nom de famille – a déjà dépassé ces prouesses à un âge où la plupart des jeunes gens en seraient encore à penser à embrasser une carrière d’entraîneur. 18

AIDAN O’BRIEN – LES DEBUTS Il y a toujours eu quelque chose de spécial au sujet d’Aidan O’Brien qui a grandi entouré de la dynamique sportive à Killegney dans le comté de Wexford. Pendant sa jeunesse, le sujet de conversation principal dans ce milieu tournait autour du hurling, mais son père Denis, un fermier de profession, avait un intérêt prononcé pour les chevaux et avait gagné plusieurs compétitions de cross à cheval quand il était jeune. Ainsi, Aidan a grandi entouré de chevaux et, après avoir quitté l’école un peu tôt, il a essayé divers boulots avant d’avoir la chance de joindre l’entraîneur P.J. Finn sur le Curragh. En l’espace de quelques mois, l’écurie a fermé ses portes et Aidan, assez chanceux, a trouvé du travail chez l’entraîneur renommé Jim Bolger, également originaire de Wexford. Ce fut le début de quelque chose de tout à fait extraordinaire et, sous la tutelle de Bolger, le jeune O’Brien a fait ses premières armes pour entamer une carrière légendaire qui allait l’accompagner dans la fleur de l’âge. Il devint rapidement le jockey amateur de l’écurie et l’assistant de l’un des principaux entraîneurs d’Irlande. Jim Bolger croit au travail acharné et toute personne travaillant à ses côtés était obligée de partager la même philosophie. En Aidan O’Brien, il avait un élève de bonne volonté. L’élève a appris très vite. Il a remporté sa première victoire de

course quand Galacto Boy a gagné à Punchestown en janvier 1989 et il est devenu le Jockey Champion Amateur pendant la saison 1993/94. A cette époque, il était déjà marié à Anne-Marie Crowley, la fille du célèbre entraîneur de Piltown Joe Crowley, elle-même en tête des jockeys amateurs. Une nouvelle dynastie était en voie de naître ! Anne Marie est entrée dans les annales quand elle est devenue le premier entraîneur N.H. féminin en Irlande en 1992-93 et a alors remis les reines des écuries de Carriganog à son mari.

FAME AND GLORY

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AIDAN O’BRIEN exprime toute sa satisfaction après la première victoire de son fils JOSEPH avec JOHANN ZOFFANY lors du «KILMACUD HANDICAP» à Leopardstown le 28 mai 2009. ne se contentait pas juste d’entraîner le vainqueur mais avait également le second et le troisième à son compte. Déjà il provoquait de grands remous dans les courses de plat et comptait à son actif quatre des cinq premiers des Tattersalls Breeders’ Stakes du Curragh, y compris le vainqueur et le second. Ce jour-là au Curragh, il totalisait quatre gagnants.

AIDAN O’BRIEN LE NOUVEL ENTRAINEUR Le monde des courses de chevaux n’était pas préparé à ce qui allait suivre. Le 7 juin 1993, Aidan O’Brien remporte sa première victoire d’entraîneur lorsque Wandering Star a gagné à Tralee et qu’il a continué sur un doublé ce jourlà grâce à Tryarra. Il a terminé sa première saison comme Entraîneur N.H. Champion à la succession de son épouse et a établi un nouveau record de Gains. Il est également devenu le premier entraîneur à avoir remporté un palmarès de 100 victoires pendant sa première saison. L’année suivante, il a conservé son titre et établi un nouveau record de 176 victoires.

AIDAN O’BRIEN MAITRE DE BALLYDOYLE

Il était évident qu’il y avait un génie parmi nous et John Magnier et ses associés de l’opération Ballydoyle / Coolmore n’ont pas mis Le 18 juin 2008, un événement historique quand AIDAN O’BRIEN reçoit des mains de la reine Elisabeth le «TROPHEE DES ENTRAINEURS» après sa 4e victoire consécutive de la «Gold Cup» avec YEATS à Royal Ascot.

longtemps à s’intéresser à ce jeune homme encore dans la vigueur de sa vingtaine. Selon toute apparence, le transfert d’Aidan O’Brien n’était qu’une progression naturelle. C’était une opportunité formidable vu sa jeunesse et il l’a saisie à deux mains. Lors de ces premières années, il a combiné sauts d’obstacles et courses de plat, et c’est à cette période qu’il a remporté, avec le merveilleux Istabraq, le championnat de haies avec trois victoires à Cheltenham – et très certainement, il aurait pu remporter quatre victoires de suite sans l’apparition de la fièvre aphteuse en 2001. Mais il devenait déjà inévitablement trop grand pour le jeu des courses d’obstacles – exactement comme son grand prédécesseur Vincent O’Brien – et la domination du monde des courses de plat devenait l’objectif de son équipe hautement ambitieuse. Le cheval qui l’a placé au tableau d’honneur dans le plat était Desert King, le vainqueur des National Stakes avant de remporter les 2.000 Guinées Irlandaises et le doublé du Derby Irlandais en 1997. Cette année là il a aussi remporté le doublé des Guinées Irlandaises et les

En 1995, il allait entrer dans le mythe. C’était l’année qui allait distinguer Aidan O’Brien de tous ses rivaux lorsqu’il a réussi de manière tout à fait stupéfiante à remporter au moins une victoire par jour pendant 23 journées consécutives au cours de l’été et à accumuler 20 victoires en une semaine d’anthologie. Tout entraîneur de sauts d’obstacles rêve de gagner la fameuse Galway Plate mais O’Brien 19

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1.000 Guinées avec Classic Park. Quand Urubande a remporté la course de haies Sun Alliance à Cheltenham en 1996, le jeune O’Brien était mis à l’écart de la tribune du gagnant par les officiels qui ne l’ont tout simplement pas reconnu. Sûrement, personne ne s’attendait à ce que quelqu’un d’aussi jeune puisse être l’entraîneur gagnant du Cheltenham ! Cependant, à l’approche de l’année 1998, le monde entier a su qui il était lorsque non seulement Istabraq a remporté le titre de Champion des Haies à Cheltenham, mais aussi qu’O’Brien a osé prendre la tête des entraîneurs de plat en gagnant les 2.000 Guinées avec King of Kings et les Oaks avec Shahtoush ainsi que beaucoup d’autres prix célèbres. A partir de là, la liste des succès Une photo de famille exceptionnelle réunissant Aidan, Anne-Marie et leurs trois autres enfants posant ici avec le fils aîné Joseph et son cheval JOHANN ZOFFANY après sa toute première victoire à LEOPARDSTOWN.

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est devenue un sujet de légendes. Pendant deux ans, O’Brien a entraîné les vainqueurs de 23 courses de Groupe 1 dans le monde entier ; en Irlande, il a entraîné six vainqueurs des 2.000 Guinées, 5 vainqueurs des Champion Stakes, 7 vainqueurs du Derby, 7 vainqueurs des National Stakes, 9 vainqueurs des Phoenix Stakes etc. etc. Au Royaume-Uni, il a gagné cinq fois les 2.000 Guinées, trois fois la Coronation Cup, deux fois le Derby, quatre fois l’Eclipse, trois fois le King George V1 & Queen Elizabeth Stakes, trois fois le Middle Park, trois fois les Oaks, six fois le St James’ Palace Stakes, et trois fois le St Leger. Mais la liste ne s’arrête pas là… En France, il a gagné trois fois les 2.000 Guinées, trois fois le Criterium de Saint Cloud, sept fois le Prix Jean-Luc Lagardère, trois fois le Prix Morny et une fois le Prix de l’Arc…. En Amérique, il a joui de trois succès à la Breeders’ Cup tout en remportant également l’Arlington Million, les Secretariat Stakes et le Shadwel Turf Mile…. En Italie, il a remporté deux fois le Gran Criterium et le Grand Premio del Jockey Club … Au Canada, il a gagné le Canadian International. Nous

pourrions continuer la liste presque indéfiniment – quel palmarès pour un homme qui n’a cependant pas encore soufflé ses 40 bougies !

AIDAN O’BRIEN, L’HOMME

Mais malgré tout cela, O’Brien reste le même homme modeste et effacé qu’il était lorsqu’il a mis les pieds pour la première fois dans le monde de l’entraînement dans les années 90. Ecoutez-le tout simplement après n’importe quelle grande victoire de course; l’entendrez-vous jamais accepter les applaudissements à son propre compte ? Pas le moins du monde. A chaque occasion, sa réponse a toujours été à peu près ceci : « Cette victoire va à tous les gars des écuries qui ont investi tellement de temps pour garder ce cheval en forme ; ils ont fait un travail fantastique ». C’est toujours les gars et les filles de la cour qui sont mis en valeur pour les mentions spéciales et il s’applique méticuleusement à reconnaître publiquement le mérite de leur travail. Il a également un grand sens de la famille. L’une des images les plus courantes d’Aidan O’Brien les jours de grandes courses est celle où on le voit le téléphone portable à l’oreille juste après l’exploit glorieux de l’un de ses chevaux en Groupe 1. Invariablement, vous comprendrez qu’à l’autre bout du téléphone son interlocuteur est soit son épouse soit sa maman en train de partager le dernier triomphe avec lui. Aidan O’Brien est un homme calme et modeste – que vous le rencontriez dans des circonstances ordinaires ou immédiatement après un succès éclatant de Groupe 1. Déjà à ses débuts lorsqu’il venait juste de commencer à se faire un nom, il était très timide et était loin d’être l’interlo-

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cuteur de rêve d’un intervieweur ! J’ai fait réellement la connaissance d’Aidan en 1994, à la suite de son succès de premier Groupe grâce à Dancing Sunset au Royal Whip du Curragh. Mon rôle était de l’interviewer pour le programme de sport du samedi de la radio RTE et cette interview allait devenir la toute première d’une série de plusieurs centaines que nous avons réalisée tout au long de ces années. Mais je n’oublierai jamais cette première interview. Nous l’avons commencée au niveau du premier poteau de la tribune du gagnant et à chacune des questions que je posais, Aidan faisait un pas en arrière et je devais le suivre. A la fin des 2 minutes d’interview, nous avions parcouru la moitié de cette longue piste de parade du Curragh ! C’était comme une extraction de dents, étant donné que c’était une expérience nouvelle pour le jeune entraîneur et que ses réponses étaient monosyllabiques ! Mais en un an, il a appris très vite: ses réponses étant de plus en plus fluides à chacune de nos rencon-

tres, il ne marchait plus que quelques mètres à reculons. Voici plusieurs années qu’il est pour nous comme une pierre précieuse: « le rêve de tout intervieweur. » Il a toujours été serviable et courtois, aucune demande ne le dérange sauf si celle-ci va à l’encontre du bien-être de ses chevaux après la course.

C’était le 28 mai 2009. En l’espace de quelques semaines, il a porté son palmarès à 4 victoires pour 24 montes. De plus ce qui est rare pour quelqu’un d’aussi jeune, c’est d’avoir déjà l’expérience nécessaire pour monter Byzantine, un cheval non placé, dans le Derby Irlandais du Dubai Duty Free.

Son rôle de boss de Ballydoyle est de travailler la qualité des pur-sang les mieux choisis dans le monde et d’en faire des pères et mères des champions de demain. Dans ce sens, son palmarès est vraiment phénoménal – et ne cesse de se confirmer.

Anne-Marie reconnaît qu’elle était très excitée le soir où Joseph a effectué sa première course victorieuse. « Nos enfants ont grandi entourés de chevaux et tous les quatre aspirent à devenir jockey.» Joseph a acquis une certaine expérience en travaillant sous les ordres de Jim Bolger. De plus, grâce à son background de cavalier de concours, il a été sélectionné dans l’équipe d’Irlande des moins de 16 ans lors des Championnats Européens en Suisse.

LA FAMILLE O’BRIEN

A priori, cela doit être unique en son genre pour deux entraîneurs champions de devenir des conjoints et il était probablement inévitable que leurs enfants allaient hériter de leurs talents. Anne Marie a dominé la course parmi les Jockeys Féminins pendant qu’Aidan était le Champion Amateur et ils ont ainsi remporté le National Hunt Trainers’ Championship plusieurs années de suite. Pour Aidan, c’était le début d’une série de victoires en tant que champion en courses d’obstacles et, plus tard, en courses de plat. C’est tout naturellement que leurs quatre enfants ont hérité du virus de la course équestre. Le fils aîné Joseph s’est déjà profilé comme un apprenti très talentueux. A peine âgé de seize ans et taillé comme un jockey de plat, il a immédiatement laissé une excellente impression lorsqu’il a remporté le handicap de Leopardstown avec Johann Zoffany. C’est avec brio qu’il a monté ce cheval de 3 ans entrainé par son père, en lui dictant le rythme pour terminer victorieusement.

La suivante parmi les enfants, Sarah, 14 ans, également active dans les activités équestres, participera au Show RDS de cet été avant d’être candidate pour le Junior Certificate en 2010. Ensuite, il y a Anna, 13 ans, qui est aussi une passionnée dans le domaine hippique et qui, comme Sarah, fait des sorties à cheval à Ballydoyle quand elle ne participe pas aux compétitions. Le benjamin de la famille est Donncha, 11 ans ; actuellement, il est passionné par les poneys mais il a une grande envie de suivre l’exemple de Joseph. Le sport en général a toujours joué un rôle déterminant dans la vie des jeunes O’Brien ; c’est ainsi que les deux filles jouent au basketball et que Donncha a aussi joué au football et au hurling. On se doute qu’une nouvelle dynastie vient de s’établir dans la course équestre irlandaise❚ 21

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EFFETS D’EXTRAITS DE COMPLÉMENTS ALIMENTAIRES SUR LA PROLIFÉRATION CHONDROCYTAIRE, UN TREMPLIN À LA RECONSTRUCTION TISSULAIRE Marie Daix1, Brieuc de Moffarts², Samuel Schulsse1, Nathalie Kirschvink1 (1 Physiologie animale, Département de Médecine Vétérinaire, Université de Namur, Namur, Belgique) (2 Pavesco AG-TWYDIL®, Suisse)

INTRODUCTION

es pathologies ostéo-articulaires représentent une cause majeure de boiterie dans l’espèce équine. C’est aussi la première cause de diminution des performances. Ces maladies se caractérisent par l’apparition de lésions du cartilage articulaire. Les lésions peuvent toucher les chondrocytes: unique type cellulaire dans le cartilage, ou la matrice extracellulaire. Cette matrice extracellulaire est une structure de soutien produite par les chondrocytes qui confère au cartilage ses propriétés de résistance et d’élasticité permettant d’amortir les chocs causés par la locomotion. Le processus pathologique aboutissant aux lésions cartilagineuses est complexe (figure 1). En effet, plusieurs facteurs sont impliqués dans cette destruction cartilagineuse. Les plus importants semblent être le stress oxydant, le stress enzymatique et les médiateurs inflammatoires, ces facteurs s’amplifient mutuellement pour aboutir à des lésions du cartilage. 22

Le stress oxydant se définit comme une accumulation excessive de radicaux libres suite au métabolisme de l’oxygène. La production de radicaux libres dépasse alors les capacités de défense de l’organisme ce qui peut léser les cellules du cartilage [1] et induire notamment un vieillissement cellulaire pouvant être le point de départ de l’ostéoarthrose [2] . Il apparaît également

que les FRO sont impliquées dans le déclenchement de la cascade menant à la réaction inflammatoire et au stress enzymatique [1]. En effet, la réaction inflammatoire joue un rôle d’amplificateur et la cascade s’emballe aboutissant à une activité accrue des protéinases (notamment métalloprotéinases de matrice) qui dégradent la

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matrice extracellulaire entourant les chondrocytes [3], il s’agit d’un phénomène appelé « stress enzymatique ». Le résultat de cette cascade d’événements est un cartilage fragilisé au niveau cellulaire et au niveau de la matrice extracellulaire, compromettant ses fonctions principales: mobilité et amortissement. Le traitement habituel des troubles articulaires repose sur l’administration d’anti-inflammatoires stéroïdiens ou non-stéroïdiens qui permettent de « couper » cette réaction en chaîne. Ces molécules sont difficilement utilisables dans un contexte de compétition car elles sont considérées comme dopantes, et de surcroît, elles peuvent induire des effets secondaires non négligeables. Un autre aspect important est la reconstruction cartilagineuse après l’épisode pathologique. La matrice extracellulaire cartilagineuse, produite par les chondrocytes doit se reformer aux endroits lésés ce qui peut prendre du temps, en particulier si les chondrocytes ont subi des dommages cellulaires. Ceci s’applique d’ailleurs à la plupart des tissus, la réparation ou remodelage tissulaire est d’une importance primordiale pour que l’organe en question puisse assurer sa fonction. En effet, chaque tissu se trouve quotidiennement agressé, lésé, et les cellules le composant doivent faire face à différents facteurs de fragilité. Tout ceci induirait une diminution de l’efficacité fonctionnelle du tissu concerné si le remodelage tissulaire n’existait pas. Cette réparation permet en effet de « remettre à neuf » le tissu et de conserver un équilibre entre dégradation et reconstruction tissulaire. En condition pathologique, la réaction inflammatoire, le stress oxydant et bien souvent le

stress enzymatique perturbent cet équilibre ce qui peut mener à une dégradation tissulaire excessive.

OBJECTIFS ET PRÉSENTATION DE L’ÉTUDE

Le but de cette étude était d’investiguer l’effet d’extraits de compléments alimentaires sur la prolifération de chondrocytes équins in vitro. Du cartilage articulaire a été prélevé sur des membres de chevaux provenant d’un abattoir. Les articulations du boulet ont été ouvertes et le cartilage a été prélevé au

scalpel, ensuite découpé en tous petits morceaux et soumis à une digestion enzymatique permettant d’isoler les chondrocytes. Les chondrocytes ont été cultivés pendant 7 jours en plaques 12 puits avec un milieu de culture additionné ou non (contrôle) d’extraits de compléments alimentaires à base de glucosamine sulfate de chondroïtine (G/CS), hydroxyapatite (Hx) ou encore d’un complexe minéral (CM) à base de carbonate, phosphate et gluconate de calcium et de sels marins. La prolifération chondrocytaire a été évaluée par un comp23

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tage cellulaire au bleu trypan tous les 2 jours. Chaque puit a été cultivé et mesuré en quadruple.

RÉSULTATS OBTENUS

Les résultats de comptage cellulaire montrent que l’extrait de complément Hx a un effet stimulateur sur la prolifération chondrocytaire au 3e et 5e jour de la culture (figure 2). L’extrait G/CS quant à lui montre un effet stimulateur au 3e jour. Au 7e jour de culture, on n’observe plus de différence entre les cultures avec extraits de compléments et les cultures contrôles. Ces résultats très intéressants soulignent l’effet possible des nutraceutiques testés sur la réparation tissulaire via une stimulation de la prolifération cellulaire.

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D’autres résultats d’une précédente étude portant sur des cultures de chondrocytes provenant de chevaux préalablement complémentés par voie orale, montrent que le complément G/CS induit une diminution des F2-Isoprostanes (marqueurs du stress oxydant) dans le surnageant de chondrocytes et ce, même après une stimulation avec de l’interleukine1-β pendant 6 ou 24h, ce qui mime un phénomène inflammatoire dans l’articulation (figure 3). Il semble donc que le complément administré par voie orale aux chevaux confère aux chondrocytes une certaine protection contre le stress oxydant. De plus, in vivo, un effet modulateur du complément G/CS sur le stress enzymatique avait été observé après 6 semaines d’administration orale de ce complément [5]. En effet une diminution de l’activité MMP9 (métalloprotéase matricielle de type 9 ; figure 4), enzyme impliquée dans la dégradation du cartilage, avait été observée ainsi qu’une tendance à l’augmentation de l’activité MMP2 (métalloprotéase matricielle de type 2), enzyme apparemment plus impliquée dans la réparation cartilagineuse que dans la destruction de ce tissu [4]. Cet effet sur la MMP2 a également été observé dans une étude in vitro ultérieure où des chondrocytes provenant de chevaux précédemment complémentés par voie orale ont été cultivés et soumis à de l’interleukine-1-β comme stimulant inflammatoire (figure 5).

nutraceutiques au niveau du tissu tendineux. En effet, les pathologies tendineuses sont très fréquentes et souvent la cause de boiterie importante et d’arrêt prolongé de l’entraînement. Dans les pathologies tendineuses, on constate que c’est la réparation tissulaire qui cause le plus de problèmes. En effet, un tendon contient peu de cellules par rapport à la matrice extracellulaire présente alors que ce sont ces cellules qui sont la source des constituants de la matrice extracellulaire composant la majeure partie du tissu tendineux. Souvent la cicatrisation tendineuse est très longue et le tendon ne récupère jamais totalement ses propriétés initiales [6]. Il apparaît donc intéressant d’investiguer l’effet des nutraceutiques testés sur la proli-

fération des tendinocytes. Si l’effet stimulateur observé au niveau des chondrocytes se confirme également au niveau des tendinocytes, cela pourrait présenter un grand intérêt dans le cadre de la régénération tendineuse.

CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES

Le nutraceutique testé ici tend à montrer à la fois un effet modulateur sur le stress enzymatique et sur le stress oxydant. De surcroît, l’effet chondro-prolifératif observé pourrait attester d’une stimulation du métabolisme probablement bénéfique à la réparation tissulaire. Ces effets sont également observés en cas de stimulation inflammatoire suggérant un éventuel effet préventif.

Au vu de l’ensemble de ces résultats, il semble que le complément G/CS soit capable de moduler le stress oxydant et enzymatique et de stimuler la prolifération des chondrocytes. Cette approche pourrait donc aider à deux niveaux dans le cadre des pathologies articulaires : diminuer la destruction cartilagineuse et stimuler sa reconstruction. Il serait très intéressant d’étudier également l’effet de ces 25

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Ces molécules semblent donc très prometteuses dans le traitement et la prévention des pathologies articulaires mais il serait également très intéressant d’étudier leurs effets au niveau tendineux compte tenu du fait que dans les pathologies tendineuses, la réparation tissulaire est la clef de la guérison du cheval❚

RÉFÉRENCES 1. VALKO, M., LEIBFRITZ, D., MONCOL, J., CRONIN, M. T., MAZUR, M., and TELSER, J. (2007) Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int. J Biochem. Cell Biol. 39, 44-84. 2. YUDOH, K., NGUYEN, T., NAKAMURA, H., HONGO-MASUKO, K., KATO, T., and NISHIOKA, K. (2005) Potential involvement of oxidative stress in cartilage senescence and development

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of osteoarthritis: oxidative stress induces chondrocyte telomere instability and downregulation of chondrocyte function. Arthritis Res. Ther. 7, R380-R391. 3. NAGASE, H., VISSE, R., and MURPHY, G. (2006) Structure and function of matrix metalloproteinases and TIMPs. Cardiovasc. Res. 69, 562-573. 4. GEPSTEIN, A, SHAPIRO, S, ARBEL, G, LAHAT, N, and LIVNE, E. (2002) Expression of matrix metalloproteinases in articular cartilage of temporomandibular and knee joints of mice during growth, maturation, and aging. Arthritis & Rheumatism 46, 3240-3250. 5. DAIX , M., BASTIN, JF. and KIRSCHVINK, N., Evaluation of an oral supplement enriched with glucosamine and chondroïtine sulphate on the joint enzyma-

tic balance in young horses.( 2006/2007) HPH High Performance Horses, 4-8. 6. RICHARDSON, L.E., DUDHIA, J., CLEGG, P.D. and SMITH R. (2007). Stem cells in veterinary medicine - attempts at regenerating equine tendon after injury. Trends in Biotechnology, 25, 409-416.

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Il stimule le métabolisme des ostéoblastes qui forment les os, influence le métabolisme des chondrocytes qui forment les cartilages et des fibroblastes qui interviennent au niveau des tendons, des ligaments et du tissu synovial. •C haque lot officiellement certifié par LCH (après contrôles sur produit fini, urine et sang) peut être utilisé sans risque jusqu’au jour de la compétition • Teneur garantie jusqu’à la date d’expiration

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Le Dr de Moffarts visitant l’équipe d’endurance AL-Shaqab à Doha (Qatar)

Notre distributeur en Corée du Sud et des vétérinaires équins du Haras National. Le Dr Stan Cosgrove, gérant du Haras de Moyglare (Irlande) en compagnie du Dr de Moffarts

DANS LE MONDE

Madame Bénédicte Maemoto, agent TWYDIL® au Japon en compagnie de Mr Sakiyama.

Valère Henry, Président TWYDIL®, et notre importateur en Grèce. Nos importateurs en Arabie Saoudite : Sheik Zaky et Mr Mustafa Hamza de la Société Al-Ghalia.

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STABILITÉ ET QUALITÉ Dr Brieuc de Moffarts (Directeur Recherches et Développement TWYDIL®)

es recherches effectuées par TWYDIL® pour optimaliser ses formules seraient vaines et sans intérêt si l’on n’était pas capable d’assurer une stabilité optimale des composants jusqu’à la date de péremption pour chacun des produits. Pour y parvenir, TWYDIL® choisit avec attention ses ingrédients, le type d’emballage et de stockage mais surveille également le procédé de fabrication et renforce en permanence ses contrôles.

1. Choix des matières premières

Par « choix des matières premières » on entend la sélection des vitamines et oligo-éléments mais aussi des différents extraits de plantes ou encore des probiotiques et autres additifs qui entrent dans la composition des produits de la gamme.

Le premier critère de choix est la standardisation de la concentration en principes actifs et l’absence de contamination. Le second critère est la qualité intrinsèque du produit garantissant sa pérennité. Prenons deux exemples : - L’acide ascorbique plus connu sous le nom de vitamine C. Trois types de vitamine C sont utilisés dans la gamme : une forme adéquate à son maintien en sachet (TWYDIL® VIGORADE, TWYDIL® PROTECT PLUS,…) ; une forme plus stable enrobée, permettant sa pelletisation (TWYDIL® COURSE, TWYDIL® BEBACK,…) et une autre forme capable de rester stable en milieu aqueux (TWYDIL® ELECTROLYTES seringue). Dans les trois cas le résultat du contrôle de la teneur en vitamine C confirme la forme intrinsèque de la molécule utilisée. - L’extrait standardisé d’Eleutheroccocus senticosus maxim. un constituant essentiel du TWYDIL® HIPPACAN+C. Son utilisation nécessite des précautions particulières comme par exemple le contrôle de l’absence de contamination naturelle dans les lots d’extraits achetés. Ce contrôle est réalisé par le LCH qui délivre alors une certification de l’absence de contaminants tels que caféine, théophylline, morphine, atropine,… Par ailleurs, cet extrait de plante peut être plus ou moins concentré en principes actifs en fonction du type de sol, niveau d’ensoleillement et condition pluviométrique qui ont accompagné sa croissance. Il est donc capital pour TWYDIL® de pouvoir standardiser les concentrations du composant en prin-

cipes actifs afin de toujours obtenir un produit homogène. Les mêmes contrôles seront réalisés pour l’ensemble des extraits de plantes utilisés dans la gamme.

2. Technicité de la production

La technique de production du complément alimentaire (qu’il soit liquide, en poudre ou en granulés) ne peut pas induire la destruction des principes actifs. Des variations de température, de pression ou d’humidité sont néfastes pour les vitamines tandis que pour certains types d’acides gras (tels que les omegas 3) il convient d’éviter les phénomènes d’oxydation.

Détermination et dosage chromatographique des eleuthérosides

- Le TWYDIL®COURSE est extrêmement concentré en vitamines, oligo-éléments, magnésium et acides aminés. Sa production en granulés doit être minutieusement contrôlée : la présence d’une sonde thermique in situ permet de réguler la vitesse de production et de rester sous le seuil de 62°C.

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Remplissage des sachets

L’adjonction d’eau est à proscrire car elle détruit certaines vitamines. - Le TWYDIL® OMEGADIL est fortement enrichi en acide gras de type oméga-3. Au-delà de 5% d’oméga-3 dans un produit, des phénomènes d’oxydation rapide apparaissent, le rendant inefficace voir même néfaste. C’est pour cette raison que la production du TWYDIL® OMEGADIL a lieu complètement à l’abri de l’air (sous azote ou sous vide) depuis le raffinage des acides gras jusqu’au conditionnement.

3. L’emballage adéquat

Le choix du conditionnement doit se faire de façon judicieuse ! D’une part, il doit assurer la stabilité du produit fini et d’autre part, il doit en faciliter l’administration. Ces deux critères peuvent être contradictoires (coût, facilité, solidité, …). L’exemple des seringues buccales est intéressant. D’un côté la seringue d’électrolytes dont le seul objectif est de faciliter l’administration du produit, d’un autre côté le TWYDIL® STOMACARE dont l’administration par seringue buccale est indispensable à son efficacité maximale.

L’utilisation de sachets scellés en polyester aluminium contenant une dose individuelle s’est imposée pour une grande partie de la gamme TWYDIL® en vue de garantir les teneurs en principes actifs afin d’offrir des délais de péremption très longs. Ainsi le TWYDIL® ARTRIDIL a fait l’objet d’une étude des services de chimie analytique de l’ULg où il a été comparé à d’autres chondroprotecteurs. Il a été mis en évidence que les autres chondroprotecteurs testés lors de cette étude ne satisfaisaient pas à leur déclaration. Parmi les causes possibles avancées par l’université, on retrouve la présentation du produit fini en vrac, ce qui ne garantirait pas la stabilité de la glucosamine et des autres sucres complexes. Le cas du TWYDIL® OMEGADIL est encore plus intéressant ! Comme vous le savez déjà, il est manufacturé sous azote afin d’empêcher l’oxydation des acides gras. L’emballage doit également protéger ce produit de l’oxygène et pour ce faire il possède une paroi spéciale composée de différents films protecteurs empêchant la diffusion de l’oxygène. Pour compléter cela, le bouchon qui délivre la dose journalière est conçu pour empêcher l’entrée d’air durant la distribution du produit. Remarquons que lors du congrès de « free radical biology and medecine » (FRBM) de 2004, des chercheurs ont démontré que le risque d’artériosclérose ou d’inflammation (tendinite, arthrose) était plus important chez l’homme lors d’ingestion d’acides gras oxydés.

4. Le stockage

Les produits TWYDIL® sont stockés dans un vaste entrepôt situé

250

Chromatographie standardisé du TWYDIL® ATRIDIL acheté en officine

200

1. 2. 3. 4. 5. 6.

150

1 100

Chondroïtine (RT = 3,15 min.) Excipient (RT = 3,40 min.) Saccharose Imp. Gluco Glucosamine Imp. Chondro

Intensité (mV) 50

5 4

0 0

Temps de rétention (min)

Chromatographie standardisé d’un chondroprotecteur, acheté en officine, présentant sur l’étiquette les mêmes spécifications que le TWYDIL® ARTRIDIL

250

3 200

150

100

Intensité (mV) 50

0 0

Temps de rétention (min)

comparaison de la perméabilité à l’oxygène des films EVOH, utilisé pour l’emballage du TWYDIL® OMEGADIL, et PETMET

à une vingtaine de kilomètres de Bâle. Cet entrepôt répond aux normes strictes des autorités suisses. Les produits sont surveillés constamment d’un point de vue physique mais aussi sur le plan de la température et de l’humidité. De plus, et pour palier à toute conta31

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mination secondaire des emballages, le règlement d’ordre intérieur de TWYDIL® interdit l’introduction dans l’entrepôt de café, thé, ou même chocolat.

5. Le contrôle qualité

Le contrôle qualité est composé de deux parties : le contrôle antidoping et l’analyse de conformité à l’étiquette des éléments constitutifs de chaque produit. Il s’opère après la production et sur un échantillon représentatif du lot. La certification antidoping reste l’atout clef de TWYDIL® pour ses clients à travers le monde. Chaque lot est testé à trois reprises par le LCH :

Responsable du stockage et des entrepôts: Christophe Muller

- Sur le produit fini : le LCH recherche les contaminants naturels. - Sur l’urine d’un cheval ayant reçu un surdosage de produit: le LCH réalise un « screening complet » identique à celui subi par le cheval gagnant du prix d’Amérique ou de l’Arc de Triomphe.

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- Sur le sang d’un cheval ayant reçu un surdosage de produit: le LCH réalise à nouveau un « screening complet ». Tous les certificats sont disponibles sur www.twydil.com en tapant le numéro de lot du produit. Les produits TWYDIL® peuvent donc être utilisés sans risque jusqu’au jour de la compétition* Photo représentant une

L’analyse des éléments constitu- culture de probiotique utilisée dans les productions tifs est primordiale afin de garantir TWYDIL® une qualité constante des produits TWYDIL®. Les additifs les plus sensibles sont testés pour chaque lot et un à deux éléments moins labiles sont testés au hasard pour vérifier les productions. Les analyses sont effectuées par des laboratoires indépendants certifiés et agrées par la CE ou par le service officiel de contrôle Suisse. TWYDIL® a également voulu tester la conservation de ses produits en conditions Image en microscopie extrêmes d’humidité et de tempéoptique de ces levures rature (voir HPH 06/07). Une très grande stabilité des éléments actifs a pu être constatée. Pour chaque principe actif, lors de la fabrication, nous appliquons un surdosage afin de toujours générer un résultat d’analyse du pro% d’élimination des éleutérosides via le rein chez 6 chevaux ayant reçu un surdosage de TWYDIL®HIPPACAN+C (%) 100 80 60 40 20

duit fini satisfaisant tout en tenant compte du coefficient de variation lié à l’imprécision de la technique d’analyse.

6. Conclusion

Avant d’être mis sur le marché, un produit TWYDIL® doit avoir satisfait aux nombreuses analyses qu’il a subies (à l’état de matières premières ou après la production). Il aura également obtenu une certi-content fication antidoping et un contrôle qualité lui permettant d’être efficace et stable jusqu’à la date d’expiration❚

GUARANTEED

0 2

Heure après administration (h)

Cinétique d’élimination des éleuthérosides

* à l’exception du TWYDIL®HIPPACAN+C, du TWYDIL®MUCOPROTECT et du TWYDIL®ARTRIDIL avec harpagophytum pour lesquels un délai d’attente de 48h doit être observé avant toute compétition. Cette garantie ne peut suppléer les règles en vigueur dans le pays d’utilisation.

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NOUVELLES PRESENTATIONS En plus de sa présentation en seaux de 3 kg, le TWYDIL® GROWING est maintenant également disponible en 10 kg.

ELECTROLYTES+C est à présent disponible en boîtes de 10 sachets et en cartons de 100 sachets.

Le TWYDIL® ARTRIDIL est vendu - hors Suisse avec Harpagophytum (Délai d’attente 48 heures) et sans Harpagophytum (sans délai d’attente)

DECES La direction de TWYDIL® a été terriblement éprouvée en apprenant le décès de Monsieur Jim Warnhoff survenu le 12 mars 2009. Depuis de nombreuse années, Monsieur Warnhoff assurait la gestion de PAVESCO USA ainsi que le suivit galénique de la gamme. Ce biochimiste remarquable était humainement respecté de tous. Nous adressons à sa famille et plus particulièrement à ses enfants nos plus sincères condoléances.

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PRECAUTIONS ANTIDOPING SANS EQUIVALENT LES PRODUITS TWYDIL® PEUVENT ETRE UTILISES SANS RISQUE JUSQU’AU JOUR DE LA COMPETITION*. PRECAUTIONS PRISES POUR CHAQUE LOT DE PRODUCTION :

COLLECTE D’UN ECHANTILLON REPRESENTATIF

Durant le processus de fabrication, des prélèvements sont effectués à chaque stade de la production, puis sont mélangés selon une méthode précise, pour obtenir un échantillon aussi représentatif que possible de l’ensemble du lot.

RECHERCHE DE CONTAMINANTS DANS L’ECHANTILLON REPRESENTATIF

LCH s’assure que le lot ne contient aucun des contaminants naturels (morphine, atropine, bufoténine, caféine, théophylline, théobromine, scopolamine, méthylbufoténine, diméthyltriptamine) qui requièrent une vigilance maximale car ils peuvent provenir de pollutions alimentaires.

UN CHEVAL RECOIT UN SURDOSAGE DU PRODUIT FINI

Dans un laboratoire agréé, un cheval reçoit ensuite pendant minimum 3 jours, selon un protocole expérimental très précis et spécifique à chaque produit, 2 à 5 fois la dose normalement recommandée du produit fini. L’urine et le sang de ce cheval sont ensuite prélevés et expédiés chez LCH selon des normes rigoureuses.

LCH ANALYSE L’URINE D’UN CHEVAL

LCH soumet l’échantillon d’urine à un screening complet c’est-à-dire à une recherche de toutes les substances prohibées (soit plusieurs milliers de substances) telles que stimulants, analgésiques, narcotiques, stéroïdes anabolisants, bêta-bloquants et diurétiques.

LCH ANALYSE LE SANG DU CHEVAL

LCH soumet l’échantillon de sang à un screening complet c’est-à-dire à une recherche de toutes les substances prohibées (soit plusieurs milliers de substances) telles que stimulants, analgésiques, narcotiques, stéroïdes anabolisants, bêta-bloquants et diurétiques.

LCH ETABLIT UN TRIPLE CERTIFICAT ANTIDOPING

Disponible sur www.twydil.com en tapant le numéro de lot.

ECHANTILLONS SCELLES

Un double de l’échantillon d’urine est conservé réfrigéré par le Laboratoire, un an de plus que la date de validité du produit tandis qu’un échantillon scellé du produit fini est conservé en Suisse durant la même période. Toute cette procédure est mise en œuvre pour chaque lot de production.

* à l’exception du TWYDIL® HIPPACAN+C, TWYDIL® MUCOPROTECT et du TWYDIL® ARTRIDIL avec Harpagophytum pour lesquels un délai d’attente de 48 heures doit être observé avant toute compétition. 34

content

en cont ido

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GARANTIZADO

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MARION FRANCOIS Depuis le début de l’année 2009, Marion FRANCOIS, jeune déléguée vétérinaire de 25 ans a rejoint notre équipe. Marion sillonne les routes de France pour apporter dans toutes les disciplines de sports équestres’ après les informations scientifiques relatives à la gamme TWYDIL® auprès des vétérinaires, pharmaciens, entraîneurs, éleveurs mais aussi des centrales de distribution dans toutes les disciplines de sports équestres. Depuis son plus jeune âge, notre agent TWYDIL® France côtoie le monde du cheval. En effet, Marion a enseigné l’équitation pendant 1 an et pendant ses temps libres, elle monte ou attèle des trotteurs à l’entrainement et soigne de jeunes poulains en croissance. De plus, le monde du CSO ne lui est pas inconnu puisqu’elle a tourné en concours et assiste régulièrement aux épreuves de jeunes chevaux. Sur le plan professionnel, avant de nous rejoindre, notre déléguée médicale diplômée a promu certaines spécialités médicamenteuses du laboratoire Pfizer, santé familiale auprès de médecins généralistes du Nord de la France. Marion a donc suivi une formation scientifique poussée en anatomie, physiologie, pathologie et réglementation du médicament.

CLAUDIA

Le 1er avril 2009, Claudia Lucchese a pris, au poste de distribution TWYDIL® en Allemagne, la succession de M. Günter Meyer qui a assumé cette fonction pendant plus de 25 ans.

Désormais, son rôle est de délivrer une information scientifique de qualité, relative à notre gamme de produits auprès des différents acteurs du sport équestre. Marion rend visite: - aux vétérinaires et pharmaciens puisque les produits TWYDIL® sont exclusivement disponibles en cliniques ou officines. - aux entraîneurs ou éleveurs car ces acteurs de terrain sont directement concernés et créent la demande. - aux centrales de distribution qui stockent et approvisionnent les cliniques ou pharmacies afin de réduire au minimum le délai d’attente du client. Marion se fera un plaisir de vous conseiller ou de vous renseigner sur la totalité de nos produits.

Claudia a obtenu son diplôme d’assistante de gestion industrielle en 1990 et a ensuite travaillé pendant 7 ans comme responsable export et agent de relations publiques à l’étranger. Son amour pour les chiens et les chevaux l’a par la suite amenée à entrer dans le secteur de l’industrie pharmaceutique à son retour en Allemagne où elle a travaillé au département des ventes d’un important grossiste de produits pharmaceutiques vétérinaires. Plusieurs années durant, Claudia Lucchese a possédé un cheval et a été une cavalière passionnée. En privé, elle élève des teckels auxquels elle consacre son temps libre.

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TWYDIL® VIGORADE

Avec sa nouvelle formule enrichie de bromelain et de prébiotiques, le TWYDIL® VIGORADE qui contient également 10 vitamines, 7 oligo-éléments et une levure, Saccharomyces cerevisiae, riche en chrome, constitue une préparation idéale avant toute compétition. A raison d’un sachet par jour pendant minimum 10 jours avant la compétition, le TWYDIL® VIGORADE favorise naturellement la détoxification musculaire induite par l’effort, donne plus d’énergie et met rapidement le cheval en condition. •C haque lot officiellement certifié par LCH (après contrôles sur produit fini, urine et sang) pouvant être utilisé sans risque jusqu’au jour de la compétition • Teneur garantie jusqu’à la date d’expiration

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TWYDIL® VIGORADE,

LA PREPARATION AUX GRANDS RENDEZ-VOUS ! Enfin, les prébiotiques permettent de rééquilibrer la flore intestinale tandis qu’une levure enrichie en chrome (Saccharomyces cerevisiae) est un microorganisme vivant exerçant un effet bénéfique sur la digestion et la santé. En résumé, la nouvelle formule du TWYDIL® VIGORADE contribue, à la veille d’une compétition, à placer le cheval dans le meilleur état possible, en Bromelain toute sécurité. Courbe théorique d'élimination des déchets cellulaires produits par l'effort ou un trauma après supplementation en bromelain

INDICATIONS

Préparer un cheval à un objectif ou à une compétition précise.

100 90 80 70

COMPOSITION

10 vitamines, 7 oligo-éléments, bromelain et Saccharomyces cerevisiae, une levure enrichie en chrome et prébiotiques.

MODE D’ACTION PRÉBIOTIQUES Diminue le Ph FERMENTATION ACIDE LACTIQUE

Augmente les bactéries bénéfiques Diminue les bactéries potentiellement pathogènes

Les vitamines A, E, la biotine et l’acide folique sont les 4 vitamines clés indispensables pendant les 10 jours qui précèdent la compétition pour garantir l’expression des potentialités maximales. Très peu de chevaux sont suffisamment fournis en chacune de ces vitamines clés ce qui constitue un facteur limitant pour réaliser des performances de pointe.

Le TWYDIL® VIGORADE contient également du sélénium qui renforce l’action de la vitamine E, de la vitamine B12 qui participe et régule le métabolisme du fer et de la thiamine qui aide la cellule à se débarrasser des métabolites toxiques. Pour des raisons d’interactions entre éléments, la formule contient aussi les vitamines D3, K, B2, B6, niacine, C ainsi que du fer. De récentes études ont montré que les toxines induites par l’effort sont plus rapidement éliminées par l’apport d’un extrait d’ananas (bromelain), désormais inclu dans le TWYDIL® VIGORADE.

Bromelain placebo

50 40 30 20 10 0

temps

MODE D’EMPLOI

1 sachet par jour à mélanger à la nourriture les 10 derniers jours avant la compétition.

PRESENTATION Boîte de 10 sachets de 50 g. Carton de100 sachets de 50 g.

CERTIFICAT ANTIDOPING

CHAQUE LOT OFFICIELLEMENT CERTIFIE PAR LCH (APRES CONTROLES SUR PRODUIT FINI, URINE ET SANG) POUVANT ETRE UTILISE SANS RISQUE JUSQU’AU JOUR DE LA COMPETITION. Certificats officiels disponibles sur www.twydil.com en tapant le numéro de lot figurant sur le sachet.

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TWYDIL® PRÉSENT AUX EXPOSITIONS

AL FARES (DUBAI) 2008 ▼

AVEF 2008, Reims (France) ▼ Séminaire pour les vétérinaires des différentes équipes aux Jeux Olympiques à Hong Kong en 2008

10e Congrès de medicine et de chirurgie equine, 2007 Genève (Suisse) ▼ Equitana 2008, Melbourne (Australia) ▼

ET CONGRÈS INTERNATIONAUX

▲ Conférence scientifique équine, Berne (Suisse) Avril 2009

Réunion d’information des vétérinaires équins, Chantilly (France) 2008

Vincennes, France, 2009▼

▲ Présence de TWYDIL® à l’Equitana (Clinique vétérinaire équine Hoochmoor) Essen, (Allemagne) 2009

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TWYDIL® S’INVESTIT DANS LA RECHERCHE APPLIQUÉE AUX CHEVAUX D’ENDURANCE

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LES TROUBLES MUSCULAIRES Dr Brieuc de Moffarts Directeur Recherche et Développement de TWYDIL®, Suisse

aviez-vous que 3 à 12 % des chevaux (selon leur discipline et leur utilisation) vont développer des troubles musculaires durant leur carrière ? Ceux-ci, encore appelés myopathies, sont le plus souvent liés à l’effort. Leurs symptômes sur le terrain sont raideur et transpiration excessive avec un cheval qui rechigne à avancer et ne passe pas son dos. Les causes de ces symptômes sont multiples et peuvent être classées comme suit:

- Le surentraînement ou l’effort intense non préparé - Le coup de chaleur - Les inadéquations alimentaires - Les inadéquations électrolytiques - Les facteurs génétiques (accumulation du glycogène ou dérèglement du métabolisme calcique intracellulaire) Hormis ces différentes causes, qui peuvent par ailleurs se cumuler, il est à noter qu’un cheval boiteux ou très contracté va présenter la pathologie plus précocement. 41

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Outre le diagnostique clinique, le suivi des myopathies nécessite la recherche de marqueurs de souffrance musculaire dans le sang. Ce sont généralement des enzymes telles que les CPK (créatine phosphokinase), l’AST (aspartate transaminase) et le LDH (lactate déshydrogénase). Celles-ci sont présentes dans le muscle et nécessaires à son fonctionnement mais lors de lésions du tissu, elles vont être libérées des cellules et se retrouver dans le sang. Leur dosage après l’effort donnera une image plus ou moins précise de l’ampleur de la dégénérescence musculaire. En cas de myopathie récurrente difficilement contrôlable un diagnostique par biopsie peut être réalisé. La figure ci-contre indique l’évolution de la concentration sanguine des enzymes musculaires après un effort ayant induit une myopathie modérée. La prévention des myopathies passe par une gestion irréprochable de l’échauffement et du travail du cheval mais aussi par une bonne gestion des boiteries et la sélection génétique. Néanmoins, toutes ces mesures ne seront efficaces que sur fond d’alimentation équilibrée ! Un cheval doit recevoir quotidiennement, en plus de l’ensemble des vitamines et des oligoéléments de base, au minimum 1000 mg de vitamine E, 3.5 mg de sélénium et 30g d’électrolytes. Lors de myopathies récurrentes on favorisera les aliments riches en fibres et en matière grasse mais pauvres en céréales. Le tableau suivant reprend les besoins nutritionnels des chevaux souffrant de ce type de myopathie❚ 42

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Besoins journaliers d’un pur-sang à l’entraînement souffrant de troubles musculaires VITAMINES LIPOSOLUBLES VITAMINES HYDROSOLUBLES Vitamine A UI 60000 Thiamine mg 84 Vitamine D3 UI 6000 Riboflavine mg 35 Vitamine E UI 7000 Pyridoxine mg 30 Vitamine K mg 10 B12 mg 1.5 Niacine mg 100 + Béta carotène mg 300 Acide pantothénique mg 45 Biotine H mg 1.5 Acide folique mg 145 OLIGO-ÉLÉMENTS Choline mg 800 Acide ascorbique mg 10000 Cuivre mg 187 Fer mg 600 Manganèse mg 300 MACRO-ÉLÉMENTS Zinc mg 770 Cobalt mg 3.75 Sel (NaCl) g 30 à 50 Iode mg 5 Magnésium g 12 Sélénium mg 5 Potassium g 55

Le TWYDIL® PROTECT PLUS, en supplément du TWYDIL® COURSE, s’impose depuis de nombreuses années comme un complément alimentaire capable de contrôler aussi bien le stress oxydant que certains facteurs de risques liés aux défaillances du système musculaire. Le TWYDIL® ELECTROLYTES peut être avantageusement combiné au TWYDIL® PROTECT PLUS dont il favorisera encore les effets protecteurs grâce à son action bénéfique sur l’équilibre hydro-ionique.

Évolution des enzymes musculaires après un épisode de myopathie modéré chez un cheval à l’entraînement (UI/L) 3500 3000 2500 2000

CPK AST

1500

LDH

1000 500 0 1

Heures après effort

BIBLIOGRAPHIE : Valberg AAEP, 2006 de Moffarts et al., tVJ, 2005 McKenzie et al., J.Vet.Int.Med., 2003 Harris et al., ICEEP, 1991

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INVESTIGATION DES BESOINS DES CHEVAUX D’AGE OU DEBILITES Dr Brieuc de Moffarts (DMV, Ms, PhD) Directeur recherches et développement TWYDIL®

NOUVEAUTE : LE TWYDIL® BEBACK

ien que les besoins des chevaux en soins intensifs, agés ou tout simplement débilités, ne soient pas entièrement connus, des tendances générales peuvent être dégagées quant à leur nutrition de base. Notons quand même que les spécialistes s’accordent à dire qu’un cheval d’âge en bonne santé, travaillant légèrement, rencon-

tre les besoins du cheval adulte alors que le cheval d’âge en perte d’état, déficient sur le plan dentaire, devra recevoir une alimentation adaptée. De façon générale, une attention particulière doit être portée aux chevaux en perte d’état, que celle-ci soit liée à une pathologie primaire (colique, diarrhée, confinement suite à un trauma) ou tout simplement à l’âge (souvent lors de la mise en retraite).

1. Un apport énergétique optimal basé sur un suivi du score corporel

Les facteurs générant un amaigrissement du cheval sont liés à l’inversion de la balance anabolique (prise de masse) vs catabolique (perte de masse), une augmentation des demandes et une baisse de l’ingestion. Les facteurs nous concernant ici sont la vieillesse, l’arrêt de l’entraînement et l’immobilisme, la perte progressive de la fonction dentaire, les troubles d’absorption, la mala43

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Figure 1 3

EVALUATION DU SCORE CORPOREL (ADAPTÉ DE CARROLL, C.L., ET HUNTINGTON, P.J., BODY CONDITION SCORING AND WEIGHT ESTIMATION OF HORSES) die ou encore le parasitisme. Afin d’aider le cheval, il faut lui apporter de l’énergie en lui offrant une nourriture riche en matière grasse (paradoxalement facilement digestible par les équidés). L’avantage est que la matière grasse, fortement concentrée en énergie, ne nécessite pas de mastication. La matière grasse doit être supplémentée progressivement ; certains chevaux très âgés peuvent ingérer plusieurs centaines de ml d’huile par jour. Il est généralement conseillé d’utiliser un mélange d’huile végétale (maïs, lin, colza,…). Les céréales ne sont pas à négliger, leur traitement pouvant aider à la digestion (floconnage, écrasement, …). 44

Le suivi du score corporel, à défaut de pesée régulière, aide à objectiver ces variations d’états (voir figure 1). Un score 2.5 à 3 sera optimal pour ce type de chevaux.

2. Un apport diversifié en fibres de qualité

Pour la plupart des chevaux l’accès à une herbe de qualité est une des meilleures solutions, néanmoins pour des chevaux ne sachant mastiquer correctement, l’utilisation de pulpes de betterave humidifiées sera nécessaire pour combler les manques en cellulose. Les chevaux ayant présentés des troubles

intestinaux peuvent recevoir également des fibres de type mucilage apportées par des mash (graine de lin cuite ou son). De plus ils pourront tirer profit d’une supplémentation en prébiotique et en probiotique (figure 2) stabilisant la flore du tube digestif et réensemençant celle-ci.

3. Un taux de protéines adapté et des acides aminés de qualité

Les chevaux fortement débilités, en perte d’état corporel rapide, vont puiser dans leur réserve protéique (les muscles) ; ce phénomène peut amener le cheval à devenir cachectique. Dans ces cas-là,

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il faut pouvoir amener le taux de protéines à 14-15% dans la ration. Par ailleurs, les chevaux d’âge perdant des muscles par immobilisme peuvent recevoir une nourriture enrichie en acides aminés de qualité qui vont, s’ils sont associés à un travail même léger, permettre de maintenir la musculature en état (voir HPH 02/03).

4. Des vitamines et minéraux afin de maintenir les fonctions organiques

Comme pour toutes les catégories de chevaux, rappelons qu’une ration doit contenir les 14 vitamines, les 7 oligo-éléments, le magnésium. Sans oublier le suivi du rapport calcium phosphore (1.8 à 2 /1) qui est d’autant plus important chez le cheval d’âge recevant du son (car très riche en phosphore). Les chevaux présentant des selles molles ou un déficit dentaire plus ou moins important verront leurs besoins en électrolytes augmenter, d’une part du fait de la perte d’eau et d’électrolytes par les selles et d’autre part par la mauvaise fermentation des fibres. Ces der-

nières, rappelons-le, servent de régulateur des équilibres hydro-ioniques. Veuillez prévoir une dose de 20 à 30g d’électrolytes par jour pour couvrir les besoins. Le TWYDIL® BEBACK est un nouveau complément alimentaire adapté aux besoins des chevaux d’âge et débilités, leur apportant l’ensemble des vitamines, oligo-éléments, magnésium, acides aminés et pro et pré-biotiques nécessaires à leur bien-être, convalescence et récupération❚

BIBLIOGRAPHIE Carroll CL, Huntington PJ: Body Condition Scoring and Weight Estimation of Horses. Equine Veterinary Journal. 1988, 20, 41 - 45. Ralston SL: Clinical nutrition of adult horses. Vet Clin North Am Equine Pract. 1990, 6, 339-54. Siciliano PD: Nutrition and feeding of the geriatric horse. Vet Clin North Am Equine Pract. 2002, 18, 491-508. Dunkel BM, Wilkins PA: Nutrition and the critically ill horse. Vet Clin North Am Equine Pract. 2004, 20, 107-26.

PRÉBIOTIQUES Diminue le Ph FERMENTATION ACIDE LACTIQUE

Augmente les bactéries bénéfiques

Julliand V: Impact of nutrition on microflora of the gastro-intestinal tract in horses. ENUCO, 2005, 85-103.

Figure 2

Diminue les bactéries potentiellement pathogènes

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MISE EN RELATION DES PARAMÈTRES OBJECTIVANT LA PERFORMANCE SPORTIVE AVEC LES MARQUEURS DU STRESS OXYDANT CHEZ LE TROTTEUR Le présent article relate une partie de l’étude présentée par le Dr Emmanuelle Van Erck lors du congrès du VCRS 2008. L’université de Liège et l’université de Namur ont bénéficié du soutien du laboratoire TWYDIL®PROBIOX pour la réalisation de cette étude.

QUESTIONS POSEES

Le bilan stress oxydant d’un cheval de course peut-il être mis en relation avec des paramètres objectivant sa performance ? Les chevaux affectés par des troubles métaboliques d’origine musculaire présentent-ils des paramètres du stress oxydant modifiés? Pour tenter de répondre à ces questions, les chercheurs ont collecté des échantillons sanguins sur plus de 100 trotteurs à l’entraînement avant et après un test d’effort standardisé.

ETAT DES CONNAISSANCES AVANT L’ETUDE

Comme cela a été plusieurs fois relaté dans ce magazine (voir HPH 2002/2003 ; HPH 2004/2005, HPH 2006/2007), il est désormais établi que l’exercice intensif induit un stress oxydant chez le cheval de compétition (pour revue : Kirschvink et al., 2008). Bien qu’il ait été démontré qu’une carence en antioxydants conduise

irrévocablement à une baisse de performance et à des dysfonctionnements du système immunitaire et/ou inflammatoire, la relation entre les facteurs oxydants et les paramètres de performance chez le cheval n’a été étudiée qu’au cours des différentes phases de l’entraînement (de Moffarts et. al, 2004) (voir figures page suivante) Différentes études sur les chevaux indiquent qu’une complémentation alimentaire adaptée suivant leurs âge, discipline et même parfois sexe est efficace et bénéfique à l’équilibre pro oxydant-antioxydant (HPH 2002/2003 et HPH 2004/2005).

En ce qui concerne la mesure des paramètres objectivant la performance sportive chez le cheval, et bien que cela ne soit pas facilement réalisable en pratique, trois variables doivent être analysées : 1. L’évolution de la consommation en oxygène qui mesure combien d’oxygène un cheval va utiliser par kg (ml d’oxygène par Kg). Cette consommation évolue de manière linéaire pour atteindre un plateau à la consommation maximale (voir la figure ci-contre). Il faut savoir qu’à l’inverse de l’homme qui peut courir un 100m quasiment en apnée (sans consommation d’oxy47

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gène pendant le sprint), un cheval pour parcourir ses 1600m va couvrir 80% de ses besoins énergétiques en consommant de l’oxygène. Le paramètre clef à mesurer est la vitesse à laquelle le cheval atteint son plateau de consommation d’oxygène (VO2max). Bien que des études récentes montrent qu’une mesure de terrain de ce paramètre est envisageable, à l’heure actuelle seule la mesure lors de test d’effort standardisé sur tapis roulant est fiable. 2. L’évolution de la fréquence cardiaque nous renseigne sur le niveau d’effort du cheval, à l’image du compte-tour de la voiture qui nous informe du régime-moteur. L’évolution de ce paramètre est linéaire pour atteindre un plateau à fréquence cardiaque maximale (voir figure). Il existe trois façons différentes d’objectiver la performance grâce à la fréquence cardiaque : la mesure de la V180 (vitesse à laquelle le cheval court lorsqu’il atteint 180 de fréquence cardiaque), de la V200 (vitesse à laquelle le cheval court lorsqu’il atteint 200 de fréquence cardiaque) et de la Vfcmax (vitesse du cheval lorsque sa fréquence cardiaque arrive au plateau). Ces paramètres peuvent être utilisés de façon fiable sur le terrain. 3. L’évolution de la concentration sanguine en acide lactique qui est liée au métabolisme anaérobie. En effet, lors d’un effort intense un cheval a besoin de beaucoup d’énergie qu’il obtient rapidement sans consommation d’oxygène. Ce phénomène provoque l’accumulation d’acide lactique dans la cellule musculaire puis dans le sang. L’évolution de cette concentration est exponentielle (voir figure). Le paramètre clef étant la vitesse à laquelle le cheval court lorsque sa concentration sanguine d’acide lactique atteint 4mmol/L (Vla4). 48

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Cette vitesse peut varier en fonction de la race ou de l’entraînement. Ce paramètre peut être utilisé de façon fiable sur le terrain.

ETUDE SUR 100 TROTTEURS

L’étude a pour but d’étudier un grand nombre de paramètres sanguins du stress oxydant et de les mettre en relation avec les paramètres objectivant les performances. Tout a été réalisé dans des conditions standardisées sur la même piste de trot (hippodrome de Wallonie) et au sein d’un même laboratoire (TWYDIL®-PROBIOX®).

A . Présentation

Cette étude repose sur le prélèvement d’échantillons sanguins chez plus de 100 chevaux provenant de différents entraîneurs. Ces trotteurs sont tous en activité et entraînés, ils ont été présentés pour un bilan sportif. Il convient de noter que ces chevaux ne sont pas nécessairement sous un programme de complémentation alimentaire TWYDIL®. Les marqueurs du stress oxydant (c’est-à-dire les capacités antioxydantes hydrophiles ACW et lipophiles ACL, les peroxydes lipidiques POOL et la glutathion peroxydase GPx), les paramètres de performances (V200 et Vla4) et les marqueurs de la souffrance musculaire (CPK et LDH) ont été investigués de la même façon pour tous les chevaux à savoir au repos, durant le test d’effort standardisé et après celui-ci.

B. Résultats 1. performance versus stress oxydant La comparaison des paramètres a confirmé, comme cela avait déjà été montré dans le HPH 06/07, la corrélation entre l’ACL et les POOL. Mais d’une manière plus

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surprenante des corrélations significatives ont été mises en évidence entre la Vla4 et les POOL ainsi qu’entre la V200 et l’ACL (voir figure). Autrement dit, on remarque sans qu’il n’y ait de relation de causalité directe, que la population de chevaux étudiés présentant les plus mauvaises performances sportives possédait des valeurs de POOL plus élevées et des réserves en antioxydants (ACL) moins grandes.

troubles musculaires possédaient intrinsèquement des POOL plus élevés et une activité de la GPx moins importante (fig ). Ces résultats confirment qu’un cheval souffrant de trouble musculaire présente un stress oxydant plus important qu’un autre cheval.

De façon intéressante, on peut se poser la question en quoi la relation entre les POOL et la Vla4 est significative, sachant que la Vla4 reflète une capacité cellulaire à utiliser l’énergie et qu’à l’inverse la relation est significative entre l’ACL et la V200 marqueur du niveau d’utilisation du cheval ? Bien qu’il soit prématuré de tirer des conclusions à ce stade, il serait intéressant de mener d’autres expériences dans cette direction. Ces résultats indiquent que les paramètres du stress oxydant et de la performance sportive sont liés entre eux mais à des niveaux différents, cela nous renseigne sur l’état physiologique du cheval. 2. trouble musculaire versus stress oxydant Certains chevaux présentés aux tests avaient au départ des valeurs normales de marqueur de souffrance musculaire (CPK et LDH au repos) mais elles étaient significativement supérieures aux valeurs présentées par le reste des chevaux. Ces chevaux ont été significativement moins performants que les autres lors des tests standardisés et leurs marqueurs de souffrance musculaire ont plus augmenté lors du test d’effort que chez les autres équidés. Les résultats ont également indiqué que ces chevaux souffrant de

CONCLUSIONS GENERALES

Cette étude a permis de montrer : qu’une relation existe bien entre les facteurs objectivant la performance sportive et certains marqueurs du stress oxydant. Que les chevaux atteints de raideurs musculaires étaient moins performants et que leur profil oxydant était modifié❚ 49

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RÉFÉRENCES: de Moffarts B., Kirschvink N., Art T., Pincemail J., Michaux C., Cayeux K., Defraigne J-O., Lekeux P.Impact of training and exercise intensity on blood antioxidant markers in healthy standardbred Horses. ECEP 1 (3) 2004 211-220. Kirschvink N., de Moffarts B., Lekeux P. The oxidant/antioxidant equilibrium in horses. tVJ 177 (2008) 178–191. Van Erck E., de Moffarts B., Lekeux P., Kirschvink N. : Performance parameters but not oxidant-antioxidant equilibrium markers are modified in Standardbred horses with lower airway disease. In proceedings: 26th Annual Veterinary Comparative Respiratory Society Symposium, 2008, Oklahoma City, USA.

QUESTIONS AU DR BRIEUC DE MOFFARTS Directeur Recherche et Développement de TWYDIL® HPH : Nous entendons de plus en plus parler du stress oxydant ; est-ce quelque chose de nouveau pour TWYDIL® ? BdM : Bien que cette notion soit assez récente pour le grand public, le client TWYDIL® bénéficie depuis plus de 10ans déjà des évolutions constantes (dernières découvertes ) en la matière. En effet, vous n’êtes pas sans savoir que nos collaborations avec de nombreux laboratoires de recherche ont permis à TWYDIL® d’améliorer constamment la formule du TWYDIL® PROTECT PLUS. Ceci a conduit à d’excellents résultats tant scientifiques que de terrain lors de la gestion de problèmes musculaires similaires à ceux mentionnés dans l’article ci-dessus. HPH : Certains concurrents de TWYDIL® se targuent de réinventer la nutrition et la complémentation alimentaire équine en prenant pour preuve l’évolution des marqueurs sanguins du stress oxydant. Qu’en pensez-vous? BdM : Il faut garder à l’esprit que le stress oxydant n’est qu’une partie du problème. Notre politique chez TWYDIL® est d’être au premier plan de la recherche scientifique dans différents domaines incluant le stress oxydant mais aussi le stress enzymatique, inflammatoire, etc. C’est ce qui nous permet de faire évoluer petit à petit la complémentation TWYDIL® d’un point de vue pratique.

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