Предварительное исследование серологического анализа для тяжелого острого респираторного синдрома коронавируса 2 (SARS-CoV-2) у 238 госпитализированных пациентов Петренко Ю.Н., менеджер по продукту, ТОВ «УКР ДИАГНОСТИКА».
Уважаемые коллеги! Новая коронавирусная инфекция внесла существенный вклад в рост смертности населения в некоторых странах, при этом количество случаев инфицирования растет экспоненциально по всему миру. Глобальное распространение идет быстро, и в настоящее время 146 стран сообщили как минимум об одном случае. В это непростое время внимание всего международного медицинского сообщества направлено на борьбу с новой инфекцией COVID-19. Одной из ключевых проблем, связанных с инфекцией COVID-19, является очень большой поток пациентов, поступающих в медицинские центры и больницы. Эти пациенты находятся на разных стадиях заболевания. В данном коротком обзоре приводится кореляция между результатами ПЦР и тестирования быстрыми тестами на антитела IgM и IgG. Китайские ученые одного из Центральных военных госпиталей Народной Освободительной Армии Китая, (Ухань, Хубэй) и Главной Лаборатории Инфекционных Болезней и Иммунитета Института Биофизики Академии Наук Китая, (Пекин) делятся полученными результатами и своим бесценным опытом как грамотно использовать определенный тип тестирования для пациентов, которые находятся на разных стадиях заболевания. Изначально всем пациентам выполнялся и ПЦР анализ и серологический анализ. Но, ПЦР тестирование демонстрировало высокий уровень ложных отрицательных результатов. Причины: разная чувствительность наборов, неудачно проведенный отбор проб, ошибки в методике выполнения и т. д. Как результат появилось большое количество пациентов с подозрением на коронавирус, у которых ПЦР результаты были отрицательными. Им не был подтвержден диагноз, отказано в лечении в стационаре. Это потенциально способствовало распространению SARSCoV-2 и привело к быстрому прогрессированию заболевания у этих подозреваемых пациентов. 238 госпитализированным пациентам проводился анализ на антитела. Материал – сыворотка крови. Пациенты, которые тестировались, были на разных стадиях заболевания. Уровень обнаруживаемых антител был очень низким (38 %) в первые пять дней после начального появления симптомов, а затем быстро увеличивался по мере прогрессирования заболевания. Через 10 дней положительные показатели антител повысились до 90%. Положительные тесты на ПЦР (вирусную РНК) были близко 66% в первые 11 дней после первоначального появления симптомов. Затем быстро снижались до 45%. У половины подозреваемых пациентов с симптомами в течение 6-10 дней, обнаруживались антитела IgG и IgM. Итог: Тест ПЦР важен для подтверждения вирусной инфекции до 11-го дня после начального появления симптомов. Комбинация ПЦР и серологического анализа
может значительно улучшить диагностическую эффективность. После этого диагноз вирусной инфекции должен в основном зависеть от серологического анализа. На основании дня, когда был взят тестовый образец, все пациенты были разделены на разные стадии заболевания. Полученная динамика положительных показателей ПЦР и антител подтвердила рациональность определения стадии заболевания. Наш анализ идентифицировал 11-й день после начального появления симптомов как ключевой момент времени в процессе болезни, когда большинство зараженных пациентов производят антивирусные антитела. Синтез антител в организме стимулируется белками S и N вируса 2019-nCoV. У инфицированного человека антитела против вируса обычно появляются через 7 -14 дней после инфицирования. Первыми синтезируются антитела IgM, позднее появляются IgG. Экпресс-тесты позволяют выявить IgG и IgM в цельной крови, сыворотке или плазме человека начиная с 7-14 суток. Поэтому, образцы крови у одного и того же пациента следует отбирать с промежутком от 14 до 21 дня (интерквартильный размах от 17 до 24 дней, максимальная длительность 37 дней). Табл. 2 Демонстрация результатов различных обнаружений в образцах в разное время с момента появления пациентов
Рисунок 2. Динамика положительного показателя вирусной РНК и антитела у пациентов на разных стадиях заболевания. Курсы болезни были разделены на пять фаз: 0-5, 6-10, 11-12, 13-15 дней и более 16 дней после первоначального появления симптомов.
Экспресс тесты на антитела предназначены для использования в месте оказания медицинской помощи. Эти тесты могут обеспечить быстрый качественный эпидемиологический поиск случаев заражения среди особ, которые попадают под критерии подозрительных. Если существует обоснованное подозрение на инфицирование COVID-19 следует обязательно провести подстверждающий тест с помощью ПЦР анализа. В случае, если результаты первичного тестирования на антитела с помощью быстрых тестов являются негативными, у пациентов с подозрением должны быть повторно отобраны образцы из разных участков дыхательных путей (из носа, мокрота, эндотрахеальный аспират, кровь, моча и т.д.) на антигены для того, чтобы контролировать либо наявность либо носительство вируса SARS-CoV-2 (СТАНДАРТИ МЕДИЧНОЇ ДОПОМОГИ «COVID-19» от МОЗ Украины 2020 год). И далее снова с обязательным последующим тестированием с помощью ПЦР. Необходимо подчеркнуть, что у экспресс тестов есть «порог позитивной оценки». Если концентрация антител в образце крови или концентрация антигена в испытуемом образце ниже этого порога, то тест будет отрицательным. На ранней стадии инфекции результат теста может быть отрицательным, так как антитела к 2019-nCoV имеют низкий уровень и еще не интерпретируется в образце. Из-за ограничений метода выявления отрицательный результат теста не может исключать возможность заражения. Результаты тестов отражают только текущее состояние образца. Диагноз должен быть всесторонне оценен в сочетании с клиническими симптомами и уточняющими лабораторными тестами (ПЦР).
Литературные источники: 1. 2.
3. 4.
5.
Huang C, Wang Y, Li X, et al. Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan, China. Lancet 2020; 395: 497-506. A preliminary study on serological 1 assay for severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) in 238 admitted hospital patients, Lei Liu1*, Wanbing Liu1*, Yaqiong Zheng1, Xiaojing Jiang2, Guomei Kou1, Jinya Ding3, Qiongshu Wang4, Qianchuan Huang3, Yinjuan Ding1, Wenxu Ni1, Wanlei Wu1, Shi Tang1, Li Tan4, Zhenhong Hu2, Weitian Xu2, Yong Zhang2, Bo Zhang2, Zhongzhi Tang2, Xinhua Zhang2, Honghua Li2, Zhiguo Rao2, Hui Jiang2, Xingfeng Ren2, Shengdian Wang5#, Shangen Zheng1#. СТАНДАРТИ МЕДИЧНОЇ ДОПОМОГИ «COVID-19», Київ, 2020, Наказ МОЗ України. МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ НОВОГО КОРОНАВИРУСА SARS-CoV-2, ВЫЗЫВАЮЩЕГО ОПАСНОЕ ИНФЕКЦИОННОЕ ЗАБОЛЕВАНИЕ COVID-19, Киев, 2020, Мельник А.А., к.б.н. Impact of non-pharmaceutical interventions (NPIs) to reduce COVID-19 mortality and healthcare demand, Imperial College COVID-19 Response Team, Neil M Ferguson, Daniel Laydon, Gemma Nedjati-Gilani, Natsuko Imai, Kylie Ainslie, Marc Baguelin, Sangeeta Bhatia, Adhiratha Boonyasiri, Zulma Cucunubá, Gina Cuomo-Dannenburg, Amy Dighe, Ilaria Dorigatti, Han Fu, Katy Gaythorpe, Will Green, Arran Hamlet, Wes Hinsley, Lucy C Okell, Sabine van Elsland, Hayley Thompson, Robert Verity, Erik Volz, Haowei Wang, Yuanrong Wang, Patrick GT Walker, Caroline Walters, Peter Winskill, Charles Whittaker, Christl A Donnelly, Steven Riley, Azra C Ghani.