PARA EL RECUENTO SIN REVMFICACI~N VE Enterobacteriaceae. TECNICA DEL NMP
PNT - AL - 007.1
Basadti en la norma ISO 7402 (Diciembre1993)
1. 1)efinición: En!crriliucturiucrna: Bacterias que fermentan la glucosa y dan una reacción oxidasa negativa cuando e l ensayo se realiza según el siguiente método.
2.
bledios de cultivo: Caldo t:inipotiado con bilib,
verde brillante y glucosa (caldo EE) a doble y simple concen-
trwiiin. Agar bilis cristal violeta y glucosa (VRBG). Agar glucosado ( AG I . Agar nutritivo (AN).
3.
Reactivo: Reüctivo para la prueba de la oxidasa.
4.
Siembra: Enriquecimiento: Sembrar 10 mL de muestra líquida o 10 iiL de dilución madre en tres tubos con 10 mL de caldo EE a doble concentración. Sembrar 1 mL de la inueitra líquida n 1 mL de dilución madre en tres tubos de caldo EE a simple concentración. Repetir esta operación con las siguientes diluciones decimales. incubar a 37°C f 1°C durante 24 h f 2 h. Aislamiento: A i s l a en placas de VRBG a partir de cada tubo. Incubar a 37°C f 1°C durante 24 h 2 h.
+
Selección: Resembrar 5 colonias típicas bien aisladas (de color rojo violeta y a veces rodeadas de una halo de precipitación del mismo color, o mucosas) en placas de AN. Incubar a 37°C f 1°C durante 24 h i 2 h.
5.
Confirmacibn biuquimica: Prueba de h o-ridasa: Se t ~ k con a c.da una de las ccilonias aibladas. La prueba es positiva si al cabo de 10 sg Aparece una color~cibnvioleta. Prueiw (ir {ernzrnrar.idn de la glucosu: Sembrar por picadura en tubos de AG a partir de cada una de la?colonias aisladas oxidasa O. Lnciihnr a 37OC f 1°C durante 24 h f 2 h. La prueba es positiva si en la totalidad del tubo aparece una coloración amarilla.
6. Expresion de resultados Contar el número de tubos positivos para cada dilución. Si al ttienos una de las colonias es oxidasa y glucosa O, considexaremos positivo el tubo a partir de cual se ha realizado el subcultivu. Determinar el número más probable (NMP) con la ayuda de una tabla. Algunas Enterobacteriaceae pueden priivccar una decoloracihn de sus colonid%4 del medio, de manera que si no se encuentran colonias típicas, serlibrar las colonias blanquecinas. Consultar el PNT - AL - 002 de expresión de resultados.
(€661 a ~ q ~ a pZWL ! ~ )OSI m J o u w l m o P m a
L'LO-W-Ud
d m 13a v 3 1 ~ 3-~=al=w=gw p au NQf3V3íáIAM3Iü NIS OAN3íl33113 V l V d TVUOZRiOH O ( I O 4 M