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METODOS DE ANALISIS MICROBIOL~GICOSDE ALIMENTOS
PARA EL RECUENTO SIN R E V I V I F I C A C I ~ N DE Enterohacteriaceae. TECNICA POR RECUENTO DE COLONIA S
PNT - AL - 007.2
Basado en la norma ISO 7402 (Diciembre 1993)
1. Definición: Enbercihacteriaceue: Bacterias que fementan la glucosa y dan una reacción oxidasa negativa, cuando el ensayo se realiza según e1 siguiente inétudo.
2. Medios de cultivo: Agrir bilis cristal violeta y glucosa (VRBG). Agar glucosado (AG). Agar nutritivo (AN).
3. Reactivo: Reactivo para la prueba de la oxidasa. 4.
Siembra: Sembrar por duplicado 1 rnL de la muestra líquida o 1 mL de dilución madre en sendas placa$ Peti-I. Vener urios 15 iiiL de VRBG a 45°C I 1°C. Una vez solidificridu,cubrir con 10-15 mL del mismo medio. DCJNsolidificar e incubar a 37°C f 1°C durante 24 h f 2 h. Repetir esta operación con 1 mL de cada una de las siguientes diluciories decimales.
5.
Recuento: En Las placas que contengan menos de 150 colonias, contar aquellas que tengan un di& nirtro ni~iyoro igual que 0,5 mm, de culur rojo-violeta y a veces rodeadas de iiti lialo de precipitacion o mucosas. Consideraremos estas colonias como presuntas Eriterobactzna-
ceae 9. Tomar cinco colonias caracteristicas de cada placa retenida y sembrarlas por separado en placas de AN. Incubara37"Cf l0Cdurante24 h i 2 1 i .
6. Confirmación bioquimica lo: Prueha de tu oxilkrsu: Se realiza con cada una de las colonias aisladas. La prueba es positiva si al cabo de 10 sg aparece una coloracibn violeta. Prueba de fernzenturidn de la glucosu: Sembrar por picadura en tubos de AG a partir de cada una de las colonias aisladas oxidasa @.
Incubar a 37OC f 1°C durante 24 h f 2 h. La prueba es positiva si en la totalidad del tubo ;ilxuece una coloración amarilla.
'
Si la mitad de la superficie & la placa esd invadida, la determinación se coniidrrarj siii valor. Si la zona invadida fuera iiiferior a la m i t d de la superficie de la placa, se efectúa el recuento dc coloiúas sobre la zona clara y se extnpulii este valor a la ~ u p e ~ ctotal. ie "' Estas oruebas nueden realizarse simultáneamente con la siembra en AN. s c g h cnterio del laboratorio.
7.
Expresiíin de resultados ":
Si al niencis el 80% de las colonias características seleccionadas son ccinfirmadas como Enterobactetiaccae (es decir, oxidasa O y glucosa @), el numero & bacterias presentes cera el encontrado 21151 recuento {ver punto 5). Si no es así. calcularemos el número a partir del porcentaje de colonias oxidasa O y glucosa O sobre el nUmero total de colonias selecciriiiadas. La expresión que nos permite cdciilar el núrnem LVde Enterobacteriaceae por mililitro o por gramo de producto es:
"
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Consultar el PNT - AL 002 & expresi6n de resdtados.
METODO HORIZONTAL PARA EL RECUENTO SIN REVIVIPICACI~N DE Enterobacteriaceac. TÉCNICAPOR RECUENTO DE COLONIAS
PNT - AL - 007.2
Basado en la norma E0 7402 (Diciembre 1993)
Muesm liquida 100 Dilución madre (lP1)
Verter 15 mL de VRBG a 459C f lec
Cabrir cw 10-15 mL & VRBG
Iaeuimra37*Cf l0CdunnteZ4bf 2 h
Contar las wlanips de presuntos Entttohcttriaceae
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Tomsr 5 wlonims canctdaks de cada plnm Y sembrar en AN
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Incubar e 37'C f 1°C d m t e 24 h i 2 h