MÉTODO HORIZONTAL PARA EL RECIIENTO SIN REVIVIDE Enterobacteriaceae. TECNICA POR RECLENTO DE COLONIAS en la norma NY V 08-054 (Octubre
1. Definicion: Enterobacteriuceae: Bacterias que fermentan la glucosa y dan una reacción oxidasa negativa cuando el ensayo se realiza segúri el siguiente metodo. 2.
Medios de cuHivo: Agar bilis cristal violeta y glucosa (VRBG). Agar glucuxadii (AG). Agai- iiutritivo (AN).
3. Reactiru: Reactivo para la prueba de la oxidasa. 4.
Siembra: Sembrar en una placa Petri 1 mL de muestra ifquida o 1 mL de dilución madre y vmer unos 15 mL de VRBG ri 45°C - 47°C. Una vez solidificado, cubrir con unos 5 niL del mismo medio. Dejar solidificar en incubar a ?O°C f I°C durante 24 h f 2 h. Repetir la operación con 1 111L de cada una de las sigiiientes diluciories decimales.
5.
Recuento:
En las placas que contengan merios de 150 colonias,contar aquellas con un dihnetro mayor o igual que 0,5 mm,de color rojo violeta y ü veces r r i d ~ ~ d ades una halo de precipitaci6n del misrriri color. Consideraremos estas colonias conlo presuntas Enterobacteria-
ceae. Tomar cincri colonias características de cada placa retenida y sembrarlas por separado en 1.11zcasde AN. Incubar a 30°C f 1°C diirante 24 h I 2 h.
6 . Confirmación bioquimica:
Se realiza cori cada una de les colonias aisladas. La pmeba es positiva si al cabo de 10 sg aparece una culoraci6n violeta.
Pruebu d~f~'rnrentaciún de la glucosa: Sembrar por picadura en tubos de AG a partir de cada una de liii cepa5 oxidasa Ej. incubar a 37°C f 1'C durante 24 h. La pnieba es positiva si en la totalidad del tubo aparece una coloración ain;irilla.
Retener las placas que contengan un móitimo de 130 colonias características y no característicaa al nivel de dos diluciones sucesivas (una placa debe contener un mínimo de 15 colonias características). Calcular el núinero N de Enterobacteriaceae identificadas (oxidasa 8 y glucosa O)mediante la expresiiin:
Calcular el númem N de Enterobacteriaceae identificados presentes en la muesba pre blema, como media ponderada a partir de dos dilucione~sucrsivíis, con I n expi-esión:
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Consultar el PNT - AL - 002 de expresioii de resultados.
MÉTODOHORIZONTAL PARA EL RECUENTO SIN REVIVIFICACI~N
DE Enterobaderiaceae. T ~ C N I C APOR RECUENTO DE COLONIAS
Basado en la norma NF V 08-054 (Octubre 1993)
PNT-AL-009
Muestra liquida 1 p
Dilud6n madre (lW1)
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Verter 15 mL de VRBG m 4FC47"C
Cubrir con iaas 5 mL & VRBG
Incubar a 300C I 1°C durante L4 h I2 h
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Retener las nlncas con memis dc 150 rolonim
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Contar 1PS rolonips de wmntas E n k r o b a c t e r h
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Incubar a 37°C 1-c durante M h i 2 h l
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nfirmació
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incubar a 3YC 1°C durante 24 h 2 2 h
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