UTMACH| PRÁCTICA DE TOXICOLOGÍA
UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA “Calidad, Pertinencia y Calidez”
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA PRÁCTICA N° BF.5.09- 06 TEMA: SINTOMATOLOGÌA Y DIAGNOSTICO DE LAS INTOXICACIONES. SINDROMES TOXICOS, TOXICOS ORGANICOS TITULO DE LA PRÁCTICA: INDENTIFICACIÒN DE TOXICOS RODENTICIDAS (WARFARINA.) Animal De Experimentación: Rata Wistar Vía De Administración: Via oral
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Volumen Administrado: 186 mg/ kg de warfarina TIEMPOS: Inicio de la práctica:
8:20 am
Toma de muestra 1:
8:25 am
Toma de muestra 2:
9:55 am
Hora de disección:
10:00 am.
Hora finalización de la práctica:
10:15
1. DATOS INFORMATIVOS Docente: Alumnas:
BQF. García González Carlos Alberto MSc. Jiménez Pulla Lidia del Carmen Orellana Jaramillo Ana Marcela Carrera: Bioquímica y Farmacia Curso: Quinto Paralelo: “B” Grupo: 6 Fecha de Elaboración de la Práctica: lunes, 15 de Agosto del 2016 Fecha de Presentación de la Práctica: lunes, 22 de Agosto del 2016 2.- FUNDAMENTO TEÓRICO: La warfarina: es un medicamento anticoagulante oral que se usa para prevenir la formación de trombos y émbolos. Inhibe la producción de factores de coagulación dependientes de la vitamina K y así reduce la capacidad de la sangre de coagular. Su método de acción más lenta hace que generalmente se requiera más de un día para notar su efecto después de la primera dosis.1 Hay algunos riesgos asociados con terapia con warfarina, incluyendo sangrado excesivo, interacciones con otros fármacos, y malformaciones congénitas, así que los pacientes que la toman deben ser vigilados con cuidado por sus médicos.2Se pueden dar altas dosis de vitamina K para contrarrestar los
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“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“. PARACELSO
UTMACH| PRÁCTICA DE TOXICOLOGÍA efectos de la warfarina, aunque a menudo la inhibición completa ocurre solo hasta 12-24 horas después la administración.
Toxicidad aguda. DL50/CL50 oral (ratas): 186 mg/kg; inhalación (ratas): >0,005 mg/Dérmico (ratas): 40 mg/kg; dérmico (conejos): nd. Clasificación: IB. Altamente peligroso (OMS); I. Altamente tóxico (EPA). Acción tóxica y síntomas: síndrome tóxico por cumarínicos. Toxicidad tópica: capacidad irritativa: ocular no es claro; dérmica nd; capacidad alergénica: nd.
3.- OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
Determinar propiedades, sintomatología de tóxicos organicos y su intoxicación por warfarina.
Observar mediante pruebas de coagulación la presencia de warfarina
Realizar la necropsia en el animal de experimentación que haya sido expuesto a una sustancia toxica
4.- MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS,SUSTANCIAS E INSUMOS:
Sustancias:
Materiales de vidrio:
Frascos de vidrio Tubos de ensayo anticoagulante
con
Otros:
Guantes de látex Mascarilla Mandil Gorro Aguja hipodérmica de 10ml Cronometro Estuche de disección Panema Pinzas Cocineta Espátula Gradilla Estetoscopio
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y
Estándares de warfarina
sin
Muestra: Sangre tomada animal para pruebas.
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del las
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Termómetro
5.- PROCEDIMIENTO:
Trabajar con orden, limpieza y sin prisa. Mantener las mesas de trabajo limpias y sin productos, libros, cajas o
accesorios innecesarios para el trabajo que se esté realizando. Llenar ropa adecuada para la realización de la práctica: bata, guantes,
mascarilla, gorro, zapatones. Utilizar la campana extractora de gases siempre que sea necesario.
Desinfectamos el área de trabajo y limpiamos los materiales que se emplean en la práctica.
Administrar el tóxico Warfarina atravès de la ingestión del alimento al animal rata (Wistar)
Observar los cambios físicos que se dan en el animal, después de la ingestión
Realizar extracción de sangre para análisis hematológico, pruebas de hemostasis.
Realizar la disección del animal (rata), observando los cambios que se dan en los órganos de los diferentes aparatos y sistemas
7.- PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN:
LABORATORIO a) Hematológicos: anemia microcítica e hipocrómica, leucocitosis neutrófila, trombocitopenia, velocidad de sedimentación globular (VHS) aumentada. b) Bioquímicos: Hipoproteinemia, hipoalbuminemia, hiperglicemia, hiperbilirrubinemia, azoemia, aumento de la actividad de la alanina aminotransferasa (ALT), fosfatasa alcalina (FA) y gammaglutamiltransferasa (GGT) c) Hemostásicos y de coagulación: Se prolongan los tiempos de protrombina (TP), de tromboplastina parcial activado (TTPA), de trombina (TT), parcial de tromboplastina (TPT), de coagulación activado (ACT); aumento de los productos de degradación del fibrina (PDF), disminución de las concentraciones de los factores II, VII, IX y X, aumento del fibrinógeno y de los valores de la PIVKA (proteína inducida por el
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antagonismo o ausencia de la vitamina K), que es una prueba, específica para este tipo de intoxicación. d) Urinarios: proteinuria, hematuria. 8.- DETECCIÒN DEL TÒXICO: En primer lugar, en el caso de los cebos y de los contenidos gástricos, se realiza un examen visual de la muestra para detectar la presencia de formulados granulados u otro signo de presencia de fitosanitarios. Mediante un método general de extracción, purificación y determinación se pueden identificar la mayoría de los tóxicos, pero en el caso de que existan evidencias de tóxicos concretos, o cuando se han descartado diversas posibilidades, puede ser necesario llevar a cabo métodos analíticos más concretos. Estos protocolos de análisis están basados en métodos publicados por los laboratorios de toxicología que han preparado este texto, y de hecho están basados en gran medida el procedimiento utilizado por la Wildlife Incident Investigation Scheme del Central Science Laboratory de Reino Unido (Brown et al., 2005). Dependiendo de las disponibilidades técnicas de los laboratorios, existen diferentes alternativas a los métodos aquí descritos que pueden ser también aceptables. De forma genérica, y para garantizar la correcta identificación del tóxico, los compuestos orgánicos deben ser analizados mediante detector de masas acoplado a cromatografía de gases o líquidos. Cuando esto no pueda ser llevado a cabo por no disponer de esta técnica analítica se procurará confirmar el resultado, si es posible, mediante dos técnicas analíticas distintas (ej.: colorimetría y cromatografía en capa fina para estricnina) Rodenticidas anticoagulantes: El hígado o el cebo se homogeniza con sulfato sódico anhidro, se extrae con diclorometano u otras mezclas de solventes, se realiza una purificación mediante SPE (puede variar en función del tipo rodenticidas a analizar, indandiona o cumarina) y finalmente se analiza por cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas 9.- OBSERVACIONES: En la realización de ésta práctica si se hubiera administrado nitrato de mercurio di hidratado (toxico) por vía peritoneal al animal en experimentación, se hubiera observado la sintomatología que sería: El signo más consistente es el sangrado. Aparecen derrames en la conjuntiva ocular. Sangrados por la nariz. Hay vómito color café o rojo, y las heces contienen sangre fresca o digerida (melena). Hay sangre en la orina, así como otros signos menos evidentes de sangrado. Conforme continúa la pérdida interna de sangre, se añade fiebre, taquicardia, dificultad respiratoria, signos de asfixia y convulsiones en la fase terminal. 10.-CONCLUSIONES Esta práctica nos ayuda a poder determinar la potencia o la cantidad de tóxico necesario para matar animales de experimentación por vía oral observando su sintomatología después de haberle administrado cierta cantidad de tóxico warfarina.
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11.- RECOMENDACIONES
Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes,
especialmente la mascarilla, para evitar intoxicaciones. Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio. Para que la muerte del animal sea de forma rápida debemos de asegurarnos de la pureza de la sustancia, cloroformo, evitaremos que la muerta sea lenta y dolorosa para el animal.
CUESTIONARIO 1.- CUALES SON LOS PRINCIPALES RODENTICIDAS DE IMPORTANCIA EN LA MEDICINA VETERINARIA Rodenticidas de acción rápida: Son llamados también de una sola dosis, químicos agudos, o convencionales. Estos preparados actúan rápida y drásticamente, desarrollando en ratas y ratones un temor inmediato o recelo contra el veneno, que puede durar mucho tiempo y trasmitirse hasta la siguiente generación. Otros consideran que transcurridos 6 meses, pueden ser utilizados nuevamente en el mismo lugar. Son rodenticidas de acción rápida: fosfuro de zinc; sulfato de talio, fluoroacetato de sodio, escila roja, carbonato de bario, sulfato de estricnina, Alfa -naftil- tiourea, tiosemicarbazida y gases tóxicos Rodenticidas de acción lenta o anticoagulantes: Estos son productos inhibidores de la, coagulación de la sangre que provocan la muerte entre 10 y 15 días, sin "despertar" el sistema de advertencia altamente desarrollado por los roedores, lo que permite que éstos no se puedan defender contra la acción eficaz de esas sustancias al no percibir sus manifestaciones de intoxicación. Esta característica permite la utilización de estos productos cada vez que sean necesarios, alcanzar alta efectividad y con menor riesgo en su aplicación ya que poseen un antídoto específico, que es la vitamina K, Las sustancias anticoagulantes se clasifican en: - Anticoagulantes de primera generación, siendo su mejor exponente la Warfarina, cuyo principio activo es el dicumarol. Es un anticoagulante de dosis multiples, lento y costoso. - Anticoagulantes de segunda generación, entre ellos la bromadiolona difenacouma y la brodifacouma. Todos son productos de dosis única, requiere de reaplicaciones y son peligrosos para otras especies útiles
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2.- QUE SINTOMATOLOGÌA ESPERARIAS EN UN CASO DE INTOXICACIÒN POR WARFARINA EN PERROS Los signos tardan entre 2 y 5 días en comenzar, ya que se tienen que agotar los factores de coagulación y la vitamina K. Puede producir sintomatología sobreaguda con muerte repentina por colapso vascular, o hemorragia cerebral, pericárdica o torácica, sin signos previos. En otros casos (intoxicación subaguda) hay síntomas de un fallo de la coagulación, como son: hemorragias múltiples : petequias o equimosis (pequeños hematomas) en piel y mucosas, melena (mat fecal con sangre), hematuria (orina con sangre), epistaxis (sangrado por nariz de origen pulmonar), hemotórax (colecta de sangre en torax), hematemesis (vómitos con sangre), hemorragia pulmonar, etc. A la inspección el veterinario puede observar las mucosas pálidas o cianóticas (azuladas), pulso rápido y débil, disnea , letargia y como ya dijimos hematomas en diferentes partes del cuerpo.
Glosario: DISNEA: Es una dificultad respiratoria que se suele traducir en falta de aire. Deriva
en una sensación subjetiva de malestar que frecuentemente se origina en una respiración deficiente, englobando sensaciones cualitativas distintas variables en intensidad. LETARGIA: Es un estado de somnolencia prolongada causada por ciertas
enfermedades. Es además síntoma de varias enfermedades nerviosas, infecciosas o tóxicas, caracterizado por un estado de somnolencia profunda y prolongada. es una membrana fibroserosa de 2 capas que envuelve al corazón y a los grandes vasos separándolos de las estructuras vecinas. Forma una especie de bolsa o saco que cubre completamente al corazón y se prolonga hasta las raíces de los grandes vasos. PERICARDICA:
CIANÒTICAS: se refiere a un grupo de muchos defectos cardíacos diferentes
presentes al nacer (congénitos). Estos ocasionan niveles bajos de oxígeno en la sangre. La cianosis se refiere a un color azulado en la piel y las membranas mucosas. BIBLIOGRAFÍA ECURED (2011).warfarina. Índice de Guías Seminarios. [Citado: 17 de Agosto del 2016] Disponible en: http://www.ecured.cu/Intoxicaci %C3%B3n_por_WARFARINA
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UTMACH| PRÁCTICA DE TOXICOLOGÍA VENENO.(2011).GUÍA TÉCNICA DE ACTUACIÓN EN CASOS DE ENVENENAMIENTO DE LOS CENTROS DE RECUPERACIÓN Y LOS LABORATORIOS TOXICOLÓGICOS. (EN LINEA) 17- 08-2016. DISPONIBLE EN: http://www.venenono.org/wp-
content/uploads/2011/12/Guia_Toxicologia.pdf WEBGRAFÍA http://www.hiperactivos.com/warfarina.shtml https://es.wikipedia.org/wiki/Warfarina AUTORIA: BQF. GARCIA GONZÁLEZ CARLOS ALBERTO MSc FIRMAS DE RESPONSABILIDAD: JIMENEZ P. LIDIA DEL CARMEN C.I. 070470220-8
ORELLANA J. ANA M. C.I. …………….
ARTÍCU LO TEMA: Neuropatía hemorrágica tóxica aguda y fallo multiorgánico tras intoxicación por anticoagulantes, disolventes, AINES y antihistamínicos. A propósito de un caso fatal.
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