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3.17.4. Orqu´ıdeas (Catleya trianae
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CAP ´ ITULO 3. SECCI ´ ON DEL EXPLANTE
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Enjuagar tres veces con agua destilada est´eril en la cabina de flujo laminar.
Extraer los embriones y realizar la siembra en condiciones as´epticas.
3.17.4. Orqu´ıdeas (Catleya trianae)
Las semillas de la orqu´ıdea son conocidas com´unmente como semillas de polvo debido a que son muy peque˜nas y contienen poca reserva de alimento. Usualmente no germinan en el medio natural, a menos que sean infectadas por un hongo micorriza que les proporcione los carbohidratos y los nutrientes necesarios para que la planta pueda desarrollarse. En consecuencia, se recurre a las t´ecnicas de cultivo de tejidos vegetales en donde las semillas pueden germinar sin la ayuda de este tipo de microorganismos.
Materiales y m´etodos
Para esta pr´actica se requiere de c´apsulas verdes de orqu´ıdeas. Para la desinfecci´on, hipoclorito de sodio e isodine R .
Preparaci´on del medio de cultivo
Para la preparaci´on del medio de cultivo, se deben tener en cuenta:
1. Pesar las sales del medio Murashige & Skoog (1962) y ponerlas en un vaso de precipitado de 1000 ml.
2. A˜nadir 1 mg/L de AG3.
3. Adicionar 10 ml/L de agua de coco.
4. Agregar 3 mg/L de tiamina.
5. Disolver con agua destilada y completar a volumen de 1L.
6. Ajustar el pH a 5,8.
3.17. RESCATE DE EMBRIONES 103
7. Incorporar 30 g/L de sacarosa.
8. Adicionar 2 g/L de Gelrite Merck R .
9. Calentar y agitar constantemente hasta que hierva para evitar la formaci´on de grumos.
10. Distribuir el medio en los recipientes adecuados y llevar a autoclave a 15 psi, 121◦ C durante 20 minutos.
Desinfecci´on del material
Lavar con agua y jab´on las c´apsulas de orqu´ıdea.
Sumergirlas en soluci´on de isodine al 4 % por 40 minutos.
Transferir las c´apsulas a una soluci´on de hipoclorito de sodio al 3 % por 30 minutos.
Enjuagar tres veces con agua destilada est´eril en la cabina de flujo laminar.
Abrir cuidadosamente las c´apsulas y espolvorear las semillas en los recipientes que contienen el medio de cultivo.
Llevar a incubaci´on en condiciones de luz u oscuridad, temperatura 18◦ C ± 1.
Figura 3.43. Cultivo de embriones de Orqu´ıdea Catleya trianae (Orozco, 1987).
