Almacenamiento de Productos BioCen para Microbiología 41

Agitar nuevamente hasta lograr la máxima homogeneidad de la suspensión. Esta operación es de suma importancia, pues si la concentración del medio en el fondo es elevada, durante su posterior calentamiento pueden tener lugar reacciones de hidrólisis, caramelización y variación de pH, entre otras.

Para preparar los medios líquidos se debe emplear agua a temperatura ambiente o tibia.

Se debe evitar en todo momento la exposición del medio a temperaturas superiores a las necesarias para disolver sus componentes o el calentamiento prolongado o repetido.

Para la preparación de los medios agarizados es necesario calentar la suspensión hasta temperatura de ebullición agitando constantemente para garantizar la distribución homogénea del agar y evitar su carbonización.

Durante la ebullición, garantizar que no se derrame la solución o la espuma que se origina, pues esto puede ocasionar cambios en la composición final del medio dispensado.

Una manera eficiente de evitar estos sucesos, además de lo antes expuesto, consiste en disminuir la intensidad del calentamiento o retirar el matraz de la fuente de calor hasta que disminuya la espuma.

Es necesario prestar una atención especial a la disolución completa del agar en aquellos medios que no requieren una posterior esterilización.

La completa disolución del agar se puede apreciar de forma práctica por la desaparición de sus partículas insolubles al desaparecer la espuma.

Algunos medios de cultivo contienen ingredientes insolubles o poco solubles, incluso en agua hirviente, por lo que el criterio para determinar el momento de finalizar su restitución debe ser, además, la máxima homogeneidad de su distribución en todo el volumen. Estos medios se recomienda restituirlos en recipientes de menor volumen posible.

Los medios de cultivo utilizados en tubos se distribuyen en los mismos después de su completa restitución, excepto los que se distribuyen ya estériles. Previamente, éstos se deben enfriar hasta temperatura de 50 a 60 °C para facilitar su manipulación, agitando nuevamente el recipiente momentos antes de la distribución hasta lograr la homogeneización de los componentes insolubles.

Se debe prestar una atención especial a aquellos medios que contienen bajas concentraciones de agar (Medio Transporte de Stuart, Medio Tioglicolato), evitando que durante el enfriamiento posterior a la esterilización, ocurra una disminución brusca de su temperatura.

BioCen garantiza para sus medios de cultivo un valor del pH adecuado a lo declarado en la etiqueta para cada producto, siempre que para su preparación se cumplan todas las indicaciones generales y específicas que aparecen tanto en este manual como en la etiqueta del producto. Se debe tener en cuenta que el pH indicado en la etiqueta corresponde al del medio esterilizado. No obstante, en determinadas situaciones pueden no existir todas las facilidades y puede requerirse un ajuste de pH en el medio previo a su esterilización.

Con este objetivo, se recomienda ajustar el pH mediante la adición de soluciones 0,1 N ó 1 N de ácido clorhídrico o hidróxido de sodio, para lo cual es recomendable determinar previamente la cantidad a adicionar para ajustar el pH a una muestra exacta y de menos volumen del medio y, a partir de ella, calcular la cantidad necesaria para ajustar todo el volumen del medio. Otra posibilidad consiste en extraer en condiciones asépticas la muestra del medio estéril, realizar la medición del pH, su ajuste y el cálculo, y añadir asépticamente a todo el volumen del medio la solución de ácido o álcalis previamente esterilizada por filtración.

Debe tenerse siempre en cuenta que el valor del pH depende de la temperatura a que éste se determine.

Se recomienda realizar la medición y el ajuste eventual del pH en los medios BioCen por potenciometría con un medidor de pH a temperatura de 25 +_ 0.2 °C.

Para los medios sólidos se recomienda determinar el valor del pH por el método de maceración, consistente en macerar una cantidad (comúnmente 100 mL) del medio solidificado con igual cantidad de agua destilada o desionizada con pH neutro, filtrar el macerado por papel de filtro neutro y determinar el valor del pH.

Algunos medios de cultivo agarizados presentan un pH ácido, incluso inferior a 5. Estos medios corren el riesgo de sufrir una hidrólisis del agar por sobrecalentamiento o por una fusión repetida. Hay que evitar que esto ocurra. Si fuera inevitable, se recomienda adicionar al medio aproximadamente 5 g/L de Agar Bacteriológico BioCen (cód. 4036) antes de su preparación.

Comúnmente la esterilización se realiza a temperatura de 121 °C durante 15 min en autoclaves o por ebullición, si no se indica lo contrario.

Los medios BioCen se esterilizan según las indicaciones que aparecen en la etiqueta.

Es conocido, que la temperatura de 121 °C se alcanza en el medio en dependencia del volumen a esterilizar, entre otros factores (carga del autoclave; forma y tamaño del recipiente, tipo y espesor del vidrio). A continuación se ofrecen las recomendaciones para el establecimiento del tiempo necesario para alcanzar la temperatura de esterilización de los medios en frascos de vidrio, en dependencia del volumen del medio.

A este intervalo de tiempo es necesario añadirle los 15 min recomendados para garantizar la temperatura de 121 °C en el seno del líquido.

Se recomienda el uso de bioindicadores, así como de indicadores químicos.

Se deben tomar algunas precauciones adicionales durante y con posterioridad a la etapa de esterilización, tales como:

- Desalojar correctamente el aire, tanto de la cámara del autoclave, como del recipiente, para lo cual se debe dejar fluir el vapor manteniendo la válvula de purga del autoclave abierta en la fase de calentamiento.

Volumen del medio (mL)

250

500

1000

2000

5000

Tiempo necesario para alcanzar la temperatura de 121 °C (min)

12

18

22

27

37