Calidad de los Productos BioCen para Microbiología 43

- Mantener los cierres de los recipientes desenrroscados a media vuelta durante la esterilización para garantizar el flujo de aire y apretarlos firmemente una vez concluido el proceso.

- No retirar los recipientes del autoclave hasta que la temperatura no haya descendido lo suficiente (70 - 80 °C) como para evitar un cambio significativo de la presión de vapor interna que provoque la brusca ebullición del contenido. Esta operación debe realizarse lo más rápido posible.

- Alcanzada la temperatura de 70 - 80 °C, sacar y enfriar rápidamente el recipiente con el medio para evitar la exposición prolongada del mismo a temperaturas elevadas. Los recipientes con el medio agarizado se enfrían hasta temperatura de 45 - 55 °C antes de su distribución. Esta operación se puede realizar bañando la superficie externa del recipiente con agua corriente a temperatura ambiente.

Algunos medios requieren, una vez estériles, de la adición de suplementos. En estos casos es recomendable realizar la manipulación en condiciones asépticas para evitar la contaminación del medio.

Los suplementos termolábiles se deben adicionar al medio ya enfriado hasta temperatura no mayor de 50 °C. Los suplementos estériles se deben enfriar hasta temperatura ambiente antes de incorporarlos al medio.

Por el contrario, se debe elevar la temperatura de los suplementos que hayan sido conservados en frío, pues los líquidos fríos pueden causar, entre otros efectos, la gelificación del agar.

La sangre utilizada como suplemento debe ser estéril, desfibrinada, lo más fresca posible, sin la adición de preservativos. De conservarla, ésta deberá mantenerse a temperatura de 2 a 8 °C y posteriormente se deberá llevar hasta temperatura ambiente antes de adicionarla a la base fundida cuya temperatura no deberá exceder los 40 - 45 °C.

Si el volumen del suplemento líquido es considerable, éste debe ser restado del volumen de agua en que se restituye el medio, y de esta forma no se afecta ni la consistencia, ni la concentración del medio.

Los medios deben ser distribuidos en las placas de Petri a temperatura de 45 a 55 °C, realizando previamente movimientos circulares con el recipiente para garantizar la distribución uniforme. Con la ayuda de un mechero Bunsen pueden ser eliminadas las burbujas que aparezcan sobre la superficie del medio, pasando la llama no luminosa rápidamente por la misma.

Antes de inocular el microorganismo, se puede colocar las placas con el medio invertidas y apoyadas sobre su tapa en una estufa de secado a temperatura de 30 a 40 °C por un mínimo de 20 a 30 min para estufas sin circulación forzada de aire y de 10 a 15 min para las que la poseen para secar la superficie húmeda del medio.

La distribución de los medios agarizados estériles, en tubos de cultivo para lograr superficies inclinadas, se realiza a temperatura de 45 a 55 °C en condiciones asépticas. Los tubos se colocan en posición inclinada formando el medio un fondo y una pendiente de dimensiones homogéneas, de aproximadamente 3 cm de longitud.

Posibles defectos en los medios, provocados por una manipulación incorrecta

DEFECTO POSIBLE CAUSA

Apelmazamiento del producto deshidratado El envase no fue cerrado correctamente después de su uso El envase permaneció abierto por largo rato El envase fue manipulado en un local con una excesiva humedad ambiental El producto empleado sobrepasó la fecha de vencimiento

El valor del pH no No fue empleada agua desionizada o destilada coincide con el indicado El agua desionizada o destilada empleada no fue obtenida recientemente, o su pH no era el adecuado El medio fue sobrecalentado durante su preparación Fue empleado un recipiente de vidrio alcalino El recipiente empleado estaba contaminado o sucio El envase no fue cerrado correctamente después de su uso El pH no fue determinado correctamente El producto empleado sobrepasó su fecha de vencimiento El medio deshidratado adquirió humedad El medio no fue uniformemente distribuido antes de su esterilización

Aparición de turbiedad o El medio no se calentó lo suficiente precipitados El medio se calentó en exceso No fue empleada agua desionizada, destilada No fue empleada agua recién purificada El medio no fue agitado lo suficiente durante la preparación El recipiente empleado estaba sucio El valor del pH no fue ajustado correctamente El medio preparado perdió agua por evaporación El medio utilizado adquirió humedad No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada

El color del medio no El medio fue sobrecalentado durante su preparación coincide con el indicado El valor del pH no fue ajustado correctamente (en el caso que el medio contenga indicadores) El recipiente empleado estaba sucio Los azúcares contenidos en el medio se caramelizaron

No fue empleada la cantidad del medio recomendada