6 colecta muestras mdita puerto rico 2013b pptx

Aspectos prác+cos sobre procedimientos de colecta, empaque, e+quetado, transporte y almacenamiento de muestras de mal de Panamá en bananos

Dr. Miguel A. Dita Rodríguez San Juan Puerto Rico, Octubre, 2013

Diagnós+co de enfermedades en Plantas Obje+vo: reconocer el agente causal priario de una determinada enfermedad hongo, Bacteria, Virus, Nematodo, Fitoplasma, Factores abióDcos En tejidos vegetales enfermos, pueden estar presentes varios microorganismos saprófitos.

Como determinar, entonces, cual es el agente e:ológico de la enfermedad ?

Usualmente en Fitopatología, se emplean los Postulados de Koch.

1-­‐ Associación constante del microorganismo con la enfermedad; 2-­‐ Aislamiento del organismo en cul+vos puros y descripción de sus caracterís+cas; 3-­‐ Inoculación del organismo aislado en un hospedante sano y comparar los síntomas exibidos con los ya observados; 4-­‐ Re-­‐aislamiento del microorganismo en cul+vo puro y compararlo con el ya obtenido anteriormente

Diagnós+co de enfermedades en Plantas Etapas generales :

1. Obtener informaciones generales sobre la planta y la enfermedad 2. Obtener buenas muestras de plantas o partes de plantas enfermas 3. Examinar las plantas y describir los síntomas y señales de la enfermedad 4. Obtener literatura que describa las enfermedades del culDvo 5. IdenDficar la enfermedad. Comparar la descripción hecha por usted con las descritas en la literatura

Diagnós+co de enfermedades en Plantas Material básico para el trabajo de campo

1. Lapicero esferográfico, lápiz o marcador con Dnta indeléble (permanente) 2. Sobres de papel impermeable (papel cristal ou celofan); 3. Azadon, Machete, Cuchill@s; 4. Fichas de campo y block de notas; 5. Lente de aumento (x15 ou x20) -­‐ Lupa; 6. Cámara fotográfica; 7. Prensa y papel para envolver las muetras (periódicos viejos); 8. Bolsas plásDcos; 9. Tijera de poda.

Diagnós+co de enfermedades en Plantas Algunos Procedimientos Importantes 1. Ac+tud durante la visita 2. Obtención de buenas muestras • CanDdad y representaDvidad • Problemas con muestras en estados muy avanzados: saprofitas.

• Problemas bolsa plásDcas: formación de cámara húmeda • Cuidados con el secado : uso de prensa botánica y cambio diario de los papeles hasta que se seque • Evitar la mezcla de suelo con material vegetal (suelo por lo general no sirve parael diagnós+co u+nario de enfermedades de plantas).

© Miguel Dita

Qué muestra tomar?

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© Miguel Dita

Qué muestra tomar?

Local: Peña Blanca, Honduras Variedad: Gros Michel

© Miguel Dita

Qué muestra tomar?

Fotos: Miguel Dita

Sintomas del Mal de Panamá en bananos

Foto: Miguel Dita

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Qué muestra tomar?

A

B

C

Síntomas internos del Mal de Panamá en banano. A. Corte transversal en el cormo

(rizoma)

mostrando descoloración de los tejidos. B. Corte transversal del pseudotallo mostrando necrosis avanzada del tejido vascular. C. Corte longitudinal del pseudotallo mostrando necrosis a lo largo de los haces vasculares. Fotos: M. A. Dita y L. Pérez-Vicente

Fotos: Plutarco Echegoyen

Colecta de muestras para envío a laboratorio

Foto: Miguel Dita

ReDre filamentos (haces vasculares) del pseudotallo de coloración marron (10-­‐15 cm). ReDre el execeso de humedad y coloquelos en un p a p e l / s o b r e / b o l s a debidamente eDquetado,

Fotos: Plutarco Echegoyen

Preparación de muestras para envío a laboratorio

Foto: Plutarco Echegoyen

Envío a laboratorio

A

B

C

D

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F

G

© Miguel Dita

Diagrama representativo del proceso de aislamiento de Fusarium oxysporum f. sp. cubense a partir de muestras de pseudotallo afectados

Pseudotallo de una planta de banano con síntomas típicos del mal de Panamá (Foto: L.P. Vicente)

Fragmentos de haces vasculares del pseudotallo secos

Fragmentos de pseudotallos en placa de Petri con medio de cultivo Komada

Crecimiento micelial de Fusarium oxysporum f. sp. cubense raza 4 tropical (Foc RT4) tropical (5 días después)

Cultivo de Foc RT4 en medio de cultivo agar papa dextrosa

© Miguel Dita

Etapas Colecta de muestras Pseudotallo, peciolo etc.

Lugar , variedad, etc Ficha de campo

Envío de muestras a laboratório con Informaciones sobre la plantación

RT4?

Muestras

Extracción de ADN

RT4?

Procesamiento de muestras Plaqueo en medio de Komada

Aislamiento del hongo Purificación Medio PDA

Medio Komada

?

Foc -PDA

Extracción de ADN

PCR Extracción de ADN

m.dita@cgiar.org