Hình 2.6: Kỹ thuật trải đĩa

Chọn lọc các khuẩn lạc đơn sau khi phân lập sơ bộ, đem tăng sinh trên môi trường lỏng để gia tăng số lượng giống vi sinh vật đồng nhất về đặc điểm và hình thái do chúng bắt nguồn từ một tế bào hay một cụm tế bào ban đầu. Sau đó, vi khuẩn được làm thuần tiếp bằng cách cấy ria nhiều lần trên môi trường đặc [1]. b. Cách tiến hành

Bước 1: Tăng sinh trên môi trường lỏng - Lần tăng sinh đầu tiên cho vào ống nghiệm 5ml môi trường lỏng N92M2. Dùng que cấy vòng vô trùng, lấy từng khuẩn lạc đặc trưng chuyển vào ống nghiệm chứa môi trường lỏng tương ứng. Viết nhãn và ghi chú các loại ống nghiệm. Nuôi trong bình hút chân không ở 300C, trong 48h. - Các lần tăng sinh tiếp theo, cho vào từng ống eppendorf 1ml môi trường N92M2 lỏng. Dùng que cấy vô trùng, lấy từng khuẩn lạc đặc trưng chuyển vào ống eppendorf. Viết nhãn và ghi chú các loại ống giống eppendorf, rồi đem ủ ở 300C trong bình hút chân không, nuôi trong 48h.

Bước 2: Cấy ria trên môi trường N92M2 đặc. - Đốt đèn cồn, thao tác phải nhanh tay trong buồng cấy vô trùng. - Để đĩa petri có chứa thạch dinh dưỡng lên bàn. - Nung đỏ đầu que cấy vòng, làm nguội trong không khí khoảng 15s. Cho vòng que cấy chấm vào khuẩn lạc vi sinh vật đã được chọn lọc trên đĩa thạch dinh dưỡng. - Tay trái hé mở nắp hộp thạch. Đặt đầu que cấy vào 1 góc hộp thạch, chấm nhẹ để loại bớt tế bào một lần nữa. Từ điểm này đẩy nhẹ đầu que cấy lướt nhanh trên bề mặt thạch theo đường zích zắc hay theo các kiểu khác [5]. - Xoay đĩa và tiếp tục vạch các đường zích zắc sao cho không trùng lên nhau trên khoảng trống còn lại, nhằm tạo điều kiện cho các khuẩn lạc mọc rời nhau ra. Đậy nắp hộp. Khử trùng que cấy trước khi cắm vào giá. - Ủ ở 300C trong bình hút chân không trong 48h.