AVANCE NEWS: PCR-US

AVANCE N°2 Septiembre 2011

AVANCE

N° 2 Septiembre 2011

Publicación de contenido científico editada por GT Laboratorio S.R.L. Necochea 3274 Rosario

PCR-US Inmunoquant

Método ultra sensible para determinar Proteina C - Reactiva Inmunoturbidimetría exaltada por látex

GT Lab ha introducido un método inmuno turbidimétrico con sensibilidad incrementada por partículas de látex que permite la determinación manual o automatizada de la Proteína C-Reactiva (PCR).

La exaltación de la respuesta inducida por partículas de látex permite trabajar con una sensibilidad adecuada para discriminar entre valores bajos de PCR, los que son de interés en procesos ateroscleróticos y vinculados a enfermedad cardíaca, entre otras patologías.

Los reactivos son presentados en forma líquida estables, los que pueden emplearse en analizadores capaces de usar dos reactivos por método o un reactivo único, a elección del laboratorio.

PCR-US Inmunoquant

AVANCE N°2 Septiiembre 2011 INTRODUCCIÓN perfecta discriminación entre valores bajos, donde las La proteína C-reactiva (PCR) es una proteína de la fase variaciones de concentración son marcadores eficientes aguda producida principalmente en el hígado como res- de las referidas patologías. puesta a una infección o agresión al organismo (1).

Recientemente, la PCR medida mediante métodos de- COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS PROVISTOS nominados de alta sensibilidad o ultrasensibles (PCR- R1: buffer tris 20 mmol/l, pH= 8,2.

US) han emergido como marcadores potenciales de R2: partículas de látex recubiertas con anticuerpos antiPCR, pH = 7.3. riesgo enfermedad cardíaca (2).

La Asociación Americana de Cardiología ha propuesto Multicalibrador ASO / PCR / FR: la composición vasu medición como predictor de enfermedad cardiovas- ría entre lotes. La concentración de PCR del Multicalibrador está referenciada al HUMAN C-REACTIVE cular (3).

La PCR-US ha sido identificada como un marcador sen- PROTEIN, 1st International Standard (Code 85/506). sible y más estable en el tiempo para riesgos vasculares que otros marcadores como el colesterol total y la pre- PREPARACION DE LOS REACTIVOS DE TRAsión sanguínea sistólica (4). El mismo trabajo demostró BAJO otros beneficios de esta determinación, como una gran Homogeneice suavemente R2 y mezcle una parte de diestabilidad de su concentración en muestras sometidas a cho reactivo con 4 partes de R1. Las presentaciones disrepetidos procesos de congelamiento-descongelamiento ponibles permiten directamente volcar el contenido de y menor variabilidad intra-individuo que otros marca- un frasco de R2 en uno de R1 sin necesidad de efectuar dores de riesgo tales como el colesterol total y la presión mediciones de los reactivos. arterial.

También el estudio prospectivo de Reykjavik durante CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD 12 años reveló una excelente correlación con otros mar- Kit PCR-US Inmunoquant: Conserve refrigerado (28ºC) sin congelar. La estabilidad alcanza la fecha de vencadores de riesgo (5).

El meta-análisis de estudios prospectivos también arrojó cimiento indicada en la caja. resultados al respecto al asociar PCR-US, fibrinógeno, Reactivo de trabajo: 30 días refrigerado (2-8ºC). albúmina y recuento de leucocitos con enfermedad car- 1. MUESTRA díaca coronaria (6).

Suero fresco.

La PCR-US ha sido identificada, además, como vin- Debe separarse dentro de los 30 minutos de extraída la culada a procesos inflamatorios sistémicos en diversas muestra. afecciones tales como diabetes mellitus (7) y asma (8). Aditivos Este trabajo demostró que un incremento en los niveles No es necesario el agregado de aditivos. de PCR-US puede asociarse con obstrucción del flujo Condiciones de conservación de las muestras de aire e inflamación de las vías respiratorias, sirviendo Refrigerador (2-8ºC): estable 7 días. como marcador subrogante de inflamación en asma.

Congelador (-20ºC): estable 3 meses.

Otro trabajo ha demostrado que, tanto en hombres Sustancias interferentes como en mujeres físicamente saludables, desórdenes de- Las muestras con restos de fibrina deben centrifugarse presivos asociados con elevaciones de PCR-US se vin- antes de ensayar. No emplee muestras groseramente hecularon con isquemias cardíacas fatales y no fatales (9). molisadas o lipémicas. La bilirrubina (20 mg/dl), hemoTambién se ha detectado que niveles de PCR-US corre- globina (10 g/l) y lípidos (10 g/l) y factor reumatoide lacionan con el estrechamiento de arteriolas y ensancha- (75 UI/ml) no interfieren. miento de las vénulas retinales, asociadas con enfermedad cardiovascular (10).

VALORES DE REFERENCIA Toda esta bibliografía demuestra la creciente importan- Hasta 3 mg/l. cia de la determinación de PCR por métodos ultra sen- Cada laboratorio debe establecer los valores normales sibles. correspondientes a la población que atiende.

PRINCIPIO La proteína C reactiva de la muestra reacciona con anticuerpos anti-PCR-US adheridos a partículas de látex del reactivo, provocando una turbidez proporcional a su concentración, la que puede ser cuantificada fotométricamente. El empleo de partículas de látex incrementa la sensibilidad de la reacción haciendo que pueda tener

EVALUACIÓN DE DESEMPEÑO DE PCR-US INMUNOQUANT Estudio de comparación Se efectuaron comparaciones de muestras contra reactivos comerciales de igual fundamento técnico y aprobados por ANMAT. Los resultados obtenidos, expresados 2

PCR-US Inmunoquant

AVANCE en mg/dl, se muestran en la Tabla I y en los Gráficos 1 ensayarse previa dilución con solución fisiológica. El resultado obtenido debe multiplicarse por la dilución y 2. efectuada.

SENSIBILIDAD DEL MÉTODO ESTUDIOS DE PRECISIÓN Se procesaron pooles de muestras de personas caucási- El método permite una resolución de 0.5 mg/l. cas, adultas, sin antecedentes de patologías y sin medicación para el caso del nivel “normal”, y sin otras patolo- ESTABILIDAD DE CALIBRACIÓN DEL gías asociadas. Las muestras se conservaron congeladas a INSTRUMENTO -20ºC durante todo el tiempo entre ensayos. Los resul- La estabilidad de la calibración depende del instrumento, ya que es función de sus características específicas. tados se muestran en las Tablas II y III. Por ejemplo, el Beckman Coulter Cx tiene un sistema Evaluación de desempeño de PCR-US In- de medida basado en dos puntos de lectura. Estos sistemas tienen una estabilidad de calibración de 7 a 10 días. munoquant.

Los analizadores Hitachi, por su parte, toman solamente un punto de lectura al final de la reacción. Esto ESTUDIO DE COMPARACION Se efectuaron comparaciones de muestras contra reacti- les da una estabilidad de calibración de 21 a 28días. vos comerciales de igual fundamento técnico y aprobados por ANMAT. Los resultados obtenidos, expresados ADAPTACIONES A INSTRUMENTOS en mg/dl, se muestran en la Tabla I y en los Gráficos 1 AUTOMÁTICOS Están disponibles adaptaciones para diferentes analiy 2. zadores automatizados. Consulte al departamento de atención al cliente para mayores datos (infoprofesioESTUDIO DE PRESICION Se procesaron pooles de muestras de personas caucási- nal@gtlab.com.ar). cas, adultas, sin antecedentes de patologías y sin medicación para el caso del nivel “normal”, y sin otras patolo- ADAPTACIONES A INSTRUMENTOS gías asociadas. Las muestras se conservaron congeladas a AUTOMÁTICOS -20ºC durante todo el tiempo entre ensayos. Los resul(valores en mg/l) Kit origen PCR-US Kit origen tados se muestran en las Tablas II y III. CONTRA kit americano Inmunoquant N°2 Septiembre 2011

americano

ESTUDIO DE INTERFERENCIAS Se estudió la interferencia de componentes de la muestra que pueden presentar efectos indeseables en métodos de laboratorio, tales como la bilirrubina, los lípidos, el factor reumatoide y la hemólisis.

La bilirrubina (hasta 20 mg/dl), la hemoglobina (hasta 10 g/l), los lípidos (hasta 10 g/l) y el factor reumatoide (hasta 75 UI/ml) no mostraron interferir.

Las buenas prácticas de laboratorio recomiendan que las muestras con restos de fibrina deban centrifugarse antes de ensayar y no emplear muestras groseramente hemolisadas o lipémicas.

Los resultados se muestran el la Tabla IV.

5,2 1,3 4,9 5,0 4,4 2,9 1,0 3,0 4,0 4,0 5,0 5,4 4,9 4,0 2,3 2,4 2,3 4,3 1,3 4,9 2,9

ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS, CALIBRADORES Y CONTROLES La vida útil de los reactivos HbA1c Directo Plus, medida en tiempo real, demostró ser de 18 meses en refrigeración. Del mismo modo, los Calibradores y Controles demostraron una estabilidad de 24 meses refrigerados.

ESTUDIO DE LINEALIDAD La técnica mostró cumplir con la Ley de Lambert Beer hasta 10 mg/l. Muestras con valores mayores deben re 3

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GT Lab

5,1 1,2 5,1 4,8 4,4 3,0 0,9 3,1 4,1 4,2 5,1 5,1 5,0 3,8 2,2 2,3 2,2 4,1 1,3 4,7 2,8

Europeo

5,0 1,2 5,2 4,6 4,4 3,0 0,9 3,1 4,2 4,4 5,2 5,3 4,9 3,9 2,2 2,4 2,2 4,3 1,2 4,7 2,9

Ecuación de regression y= 0,998x+-0,003 Coeficiente de correlación: 0,995

CONTRA kit europeo Ecuación de regresión y= 0,986x+0,042 Coeficiente de correlación: 0,998

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N掳2 Septiiembre 2011

TABLA VI Estudio de interferentes

TABLA II Reproducibilidad intra ensayo (Concentraciones en mg/l) MUESTRA

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 PROMEDIO SD mg/l +C.V.

% +-

1 1,61 1,68 1,62 1,69 1,63 1,64 1,60 1,64 1,69 1,61 1,64 0,033 2,01

2 2,93 2,90 2,92 2,90 2,97 2,91 2,92 2,94 2,96 2,98 2,93 0,029 0,99

Factor reumatoide (FR) Conc FR (mg/l) (UI/ml)

3 4,38 4,34 4,37 4,36 4,39 4,38 4,32 4,35 4,40 4,35

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 PROMEDIO SD mg/dl +C.V.

% +-

1 1,63 1,63 1,62 1,73 1,67 1,66 1,67 1,70 1,77 1,68 1,68 0,047 2,79

2 2,91 2,94 2,96 3,01 3,04 2,92 3,00 3,04 2,91 2,94 2,97 0,05 1,46

PCR ensayo (mg/l)

3,4 3,3 3,2 3,1

3,3 3,4 3,3 3,2 2,6

Conc FR (mg/l) (UI/ml)

PCR te贸rica (mg/l)

PCR ensayo (mg/l)

Suero puro 0 3,4 5,8 8,1 10,0

3,6 3,5 3,5 3,5

3,6 3,5 3,6 3,5 3,6

Suero puro

<10 28 53 76 97 Hemoglobina (Hb)

4,37 0,024 0,56

Bilirrubina (Br)

TABLA III Reproducibilidad intra ensayo (Concentraciones en mg/dl)

MUESTRA

PCR te贸rica (mg/l)

Conc Br (mg/dl)

Suero puro 0 7.50 11.04 17.73 20.89

3 4,47 4,35 4,40 4,34 4,46 4,34 4,34 4,44 4,39 4,36

Conc Br (mg/dl)

PCR ensayo (mg/l)

3,5 3,4 3,3 3,2

3,6 3,5 3,2 3,4 3,1

PCR te贸rica (mg/l)

PCR ensayo (mg/l)

3,5 3,3 3,2 3,2

3,6 3,5 3,2 3,4 3,1

Lipemia Lipemia (g/l)

Suero puro 0 3,3 6,3 8,4 10,4

4,39 0,05 1,20

4 PCR-US Inmunoquant

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N掳2 Septiembre 2011

GRAFICO 1 Comparaci贸n con Reactivo Americano 6,00 5,00 4,00

GT Lab

3,00 2,00 1,00 0,00 0,00

2,00

4,00

6,00

Reactivo Americano

6,00

GRAFICO 2 Comparaci贸n con Reactivo Europeo

5,00 GT Lab

4,00 3,00 2,00 1,00 0,00 0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

Reactivo Europeo

5 PCR-US Inmunoquant

5,00

6,00

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N째2 Septiiembre 2011

GRAFICO 3: Reproducibilidad intra ensayo 5

mg/dl

4 Serie1

3

Serie2

2

Serie3

1 0 1

2

3

4

5

6

7

8

9 10

n

GRAFICO 3: Reproducibilidad intra ensayo 5

mg/dl

4 Serie1

3

Serie2

2

Serie3

1 0 1

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4

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7

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6 PCR-US Inmunoquant

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Referencias Biográficas

1- O’Neal DN, Piers LS, Iser DM, Rowley KG, Jenkins AJ, Best JD, et al. – Atherosclerosis: 201:368 –77;2008 2- Verma S, Szmitko P, Ridker P.- Nature: Clin Pract Cardiovasc Med 2:29 –36; 2005 3- Pearson TA, Mensah GA, Alexander RW, Anderson JL, Cannon RO I, Criqui M, et al. Circulation: 107:499 –511; 2003 4- Shemesh T, Rowley KG, Jenkinns AJ et al. Clin Çhem 55:2, 336341; 2009 5- Rifai N, Tracy RP, Ridker PM. - Clin Chem: 45:2136–41;.1999 6- Danesh J, Collins Rory, Appleby P – JAMA: 279/18: 14771482;1998 7- Tracy RP – Circulation: 97: 2000-2002; 1998 8- Takemura M, Matsumoto H, Niimi A et al. - Eur Respir J.: 27(5):908-12; 2006 9- Surtees PG, Weinwright NWJ, boekhold SM et al – Psychosomatic Medicine 70:850-855; 2008 10- Yim-Lui Cheung C – Amer J. of Epidem 17/2: 206-213; 2009

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