UNIVERSIDAD TECNICA DE MACHALA “Calidad Pertinencia y Calidez” D.L. N° 69-04, DE 14 DE ABRIL DE 1969 PROV. DE EL ORO-REP. DEL ECUADOR
UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUIMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE ANALISIS DE MEDICAMENTOS NÚMERO DE PRÁCTICA: BF.9.01-02
1. DATOS INFORMATIVOS ESTUDIANTES: Marly Katherine Avila Tandazo DOCENTE: Bioq. Carlos Garcia MSc.
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PARALELO: “A”
CURSO: Noveno Semestre CARRERA: Bioquímica y Farmacia
FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: Miércoles 06 de Junio/2018 FECHA DE ENTREGA DE INFORME: Martes 12 de Junio/2018 TÍTULO DE LA PRÁCTICA: EVALUACIÓN DE CALIDAD DE FORMAS FARMACÉUTICAS LÍQUIDAS
MEDICAMENTO LÍQUIDO PIPERAZINA NF Laboratorio: Neofarmaco Principio activo: Citrato de Piperazina Concentración: 60ml Forma farmacéutica: Líquida Lote: 170714
LA CALIDAD NO ES EL RESULTADO DE LA CASUALIDAD SINO QUE ES LA CONSECUENCIA DE UN ESFUERZO PLANIFICADO QUE NACE EN EL DISEÑO DEL PRODUCTO.
PIPERAZINA Laboratorio: Laboratorio de Tecnología Farmacéutica UTMACH Principio activo: Hexahidrato de Piperazina Concentración: 120ml Forma farmacéutica: Líquida Lote: 150520188BJP 2. FUNDAMENTACIÓN: El citrato de Piperazina es una materia prima farmacéutica de importación, el cual se utiliza en la preparación del jarabe de Piperazina para su uso como antihelmíntico. La piperazina se puede sintetizar mediante la reacción entre etanolamina y amoníaco a alta presión sobre un catalizador en presencia de hidrógeno. Se obtiene una mezcla de etilenaminas entre ellas piperazina, además de agua. Las etilenaminas son separadas entre sí por destilación (1). La piperazina también puede obtenerse a partir de dicloruro de etileno, haciendo reaccionar este producto con un exceso de amoníaco a alta presión y a temperatura moderada. La solución resultante de hidrocloruro de etilenamina se neutraliza con sosa cáustica para formar piperazina y otras etilenaminas, que posteriormente se aíslan por destilación. El cloruro de sodio se forma como subproducto (2). El citrato de piperazina contiene no menos del 98,0 por ciento y no más del equivalente al 101,0 por ciento de bis (2- hidroxi-propano-1,2,3-tricarboxilato) de tripiperazina, calculado con respecto a la sustancia anhidra. Contiene agua en cantidad variable (1). 3. OBJETIVOS: OBJETIVO GENERAL:
Realizar la evaluación de calidad del Citrato de Piperazina en una forma farmacéutica liquida (jarabe), basándose en ensayos de diferentes farmacopeas.
Comprobar si el fármaco cumple con los parámetros referenciales establecidos en las farmacopeas analizando y comparando los resultados.
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4. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVO Y SUSTANCIAS: a) Características Organolépticas MATERIALES
MEDICAMENTO
Tubos de ensayo Gradilla Guantes Mascarilla Gorro Mandil
Citrato de Piperazina (genérico, elaborado)
b) pH MATERIALES Vaso de precipitación Varilla de vidrio Probeta Pipeta OTROS Guantes Gorro Mandil
SUSTANCIA Agua destilada
EQUIPOS pH-metro
MEDICAMENTO Jarabe de Piperazina
c) Densidad MATERIALES Vaso de precipitación Picnómetro OTROS Guantes Mascarilla Gorro Mandil
SUSTANCIA Agua destilada
EQUIPOS Balanza Analítica
MEDICAMENTO Jarabe de Piperazina
d) Solubilidad MATERIALES Vaso de precipitación. 1 Probeta pequeña Pipeta. 9 tubos de ensayo Gradilla
SUSTANCIA Agua destilada Formol Alcohol potable
MEDICAMENTO Jarabe citrato de Piperazina (genérico y elaborado por la PPF)
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e) Valoración MATERIALES Vaso de precipitación Bureta Soporte Universal Agitador OTROS Guantes Mascarilla
EQUIPOS Baño María
SUSTANCIAS / REACTIVOS Ácido Acético Glacial. Cristal violeta. Ácido Perclórico a 0.1N
MEDICAMENTO Jarabe de Piperazina Comercial
f) Espectrofotometría MATERIALES Vaso de precipitación Pipetas Balón 50ml OTROS Guantes Mascarilla Mandil
EQUIPOS Balanza analítica Espectrofotómetro
SUSTANCIA Agua desionizada Hidróxido de sodio 2.5N Acetona Nitroferrocianuro de sodio
MEDICAMENTO Jarabe de citrato de piperazina
g) ORP (Potencial Oxido-Reducción) MATERIALES Vaso de precipitación OTROS Guantes Mascarilla Gorro Zapatones Mandil
EQUIPOS ORP
MEDICAMENTO Citrato de Piperazina (Jarabe) Agua destilada Agua desionizada
h) Grados BRIX – Índice de Refracción-Glucosa MATERIALES
EQUIPOS
Tubos de ensayo (5) Refractómetro Gotero Varilla de vidrio Toallas absorbentes OTROS Mascarilla Gorro Mandil
SUSTANCIAS Agua destilada Alcohol
MEDICAMENTO Jarabe de Citrato de Piperazina
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i) Análisis Microbiológico MATERIALES
EQUIPOS
SUSTANCIAS
MEDICAMENTO
Asa Pipeta Balón volumétrico de 250ml Caja Petri Guantes Mascarilla Gorro Mandil
Autoclave Incubadora
Agar MacConkey Agua peptonada Agar eosina-azul de metileno-lactosa
Jarabe de citrato de piperazina genérico. Jarabe de citrato de piperazina de la PPF.
4. INSTRUCCIONES a. Trabajar con orden, limpieza y sin prisa. b. Mantener las mesas de trabajo limpias y sin productos, libros, cajas o accesorios innecesarios para el trabajo que se esté realizando. c. Llevar ropa adecuada para la realización de la práctica: bata, guantes, mascarilla, cofia, zapatones, gafas. d. Utilizar la campana de extracción de gases siempre que sea necesario. 5. PROCEDIMENTO a) CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS
Se tomó los frascos de Jarabe de Piperazina para realizar la caracterización.
Se observó la coloración de los medicamentos, su olor, sabor, y su textura.
Luego se procedió a realizar la comparación de las diferentes marcas de jarabe de Piperazina.
b) pH
Agregamos una cierta cantidad de muestra (jarabe de citrato de piperazina), en un vaso de precipitación y luego medimos el pH, con el respectivo pH-metro.
Verificar si cumple con los parámetros establecidos.
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c) DENSIDAD Muestra # 1 Piperazina NIF Genérico Pesamos el picnómetro vacío en la balanza. Luego llenamos el picnómetro con agua destilada hasta enrasar y pesar. Procedemos a llenar el picnómetro con la muestra (jarabe del Citrato de Piperazina) hasta enrasar y pesar. Calcular mediante la densidad mediante la fórmula por el método del picnometría. Muestra # 2 Citrato de Piperazina PPF Pesamos el picnómetro vacío en la balanza. Luego llenamos el picnómetro con agua destilada hasta enrasar y pesar. Procedemos a llenar el picnómetro con la muestra hasta enrasar y pesar. Calcular mediante la densidad mediante la fórmula por el método del picnometría.
d) SOLUBILIDAD
Previamente antes de realizar la práctica se debe desinfectar el área donde se la realizara y así mismo tener los materiales limpios y secos que se emplearan en la práctica.
Rotular 3 tubos de ensayo con el nombre de las sustancias que se va a realizar el ensayo: agua, alcohol y formol.
Colocar aproximadamente 2ml de alcohol, agua y formol respectivamente en los tubos previamente rotulados.
Agregar 2ml de muestra en cada solvente correspondiente.
Agitar por 5 minutos aproximadamente, observar la solubilidad del fármaco y reportar.
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e) VALORACIÓN
Previamente antes de realizar la práctica se debe desinfectar el área donde se la realizara la práctica y así mismo tener los materiales limpios y secos que se emplearán en la práctica.
Se procede a colocar 1ml de jarabe de Citrato de Piperazina en un vaso de precipitación.
Se pone la muestra en baño María para que se evapore hasta sequedad.
Luego colocar 10 ml de ácido acético glacial a la muestra añadiendo 1 gota de cristal violeta.
Agitar y titular con solución de ácido perclórico a 0.1N hasta punto final de coloración azul.
f) ESPECTROFOTOMETRÍA
Disolver 500 mg de citrato de piperazina en 10ml de agua.
Agregar 1 ml de hidróxido de sodio 2.5N.
Agregar 1 ml de acetona.
Agregar 1 ml de Nitroferricianuro de sodio.
Mezclar y dejar en reposo durante 10 minutos.
Determinar la absorbancia a 520nm o 600nm usando un blanco.
Y luego realizar el mismo procedimiento pero con la muestra.
DISOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO A 2,5N
Pesar 5 g de hidróxido de sodio en un vaso de precipitación.
Agregar 20 ml de agua destilada y mezclar.
Luego pasar la mezcla del hidróxido de sodio a un balón de 50 ml.
Enrazar con agua destilada hasta los 50 ml del balón.
Luego homogenizar.
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g) ORP (Potencial Oxido-Reducción)
Conectar el equipo a la energía para poder realizar el test de Oxidoreducción.
Calibrar el equipo de potencial Redox, con agua desionizada.
Colocar el electrón del ORP en agua desionizada para obtener un valor referente durante unos minutos, para observar la estabilidad.
Sumergir el electrón del ORP en agua destilada, para obtener valores estables y así poder, realizar un marco de referencia.
Sumergir el electrón del ORP en la primera muestra de Citrato de Piperazina, hasta que nos salga un valor estable, y anotar sus valores.
Lavar el electrón primero con agua destilada, luego con agua desionizada para que se neutralice y así poder realizar el procedimiento 5 en cada muestra faltante.
Realizar una segunda verificación de los datos dados por el equipo de ORP, para asegurar que los resultados sean correctos.
h) Grados BRIX – Índice de Refracción-Glucosa
Haciendo el uso del refractómetro, se procede a efectuar la medición agregando al prisma una pequeña cantidad de jarabe de muestra utilizando una pipeta.
Operando el dispositivo se selecciona el método que se desea emplear (grados BRIX-índice de refracción-glucosa).
Luego se procede a tomar las mediciones obtenidas.
Después de cada medición se retira la muestra del prisma haciendo uso de algodón y a continuación se limpia con un poco de agua.
i) ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO Aislamiento de E. coli.
Transferir con una pipeta estéril, 10 mL de la muestra a un balón que contiene 90mL de caldo soya-caseína o agua peptonada. Incubar a 30 35ºC por 24 horas.
Con un asa, hacer un aislamiento a partir del agua peptonada, a agar MacCon-key. Incubar a 37ºC por 24 horas.
Las colonias de coliformes en agar MacConkey son de color rojo ladrillo, eventualmente rodeadas de zonas de bilis precipitada.
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Si no hay colonias típicas, la muestra cumple los requisitos en cuanto a ausencia de coliformes.
Si hay colonias típicas, trasplante una de estas colonias a agar eosinaazul de metileno-lactosa, según Levine. Incubar a 35ºC por 24-48 horas. Las colonias de E. coli en este medio, se caracterizan por dar color negro azulado al trasluz y brillo metálico dorado verdoso a la luz incidente.
Transferir las colonias típicas del agar eosina-azul de metileno-lactosa (agar Levine), a agar nutritivo inclinado y a agar TSI. Incubar a 35ºC por 24 horas.
Los cultivos típicos de E. coli en agar TSI presentan el bisel amarillo, sin oscurecimiento y con formación de gas.
Hacer una coloración de Gram: E. coli es un bacilo Gram (-) no esporulado.
Confirmar la presencia de E. coli por medio de pruebas bioquímicas adicionales como por ejemplo el Test del IMViC, o utilizando sistemas miniaturizados tales como API MicroID.
6. GRÁFICOS a) Características Organolépticas
Jarabe de Citrato de Piperazina (Genérico)
Jarabe de Citrato de Piperazina (Elaborado)
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Determinación de color del Jarabe
Determinación del Sabor y textura del Jarabe
Determinación de olor del Jarabe
b) Ph
Jarabe de Piperazina Elaborado por Laboratorio Neofármaco.
Medición del pH en el equipo pH-metro
Resultado de pH (5.53)
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c) Densidad
Tener todos los materiales listos y limpios
Pesamos el picnómetro vacío
Llenamos con agua destilada el picnómetro
Pesamos el picnómetro con el agua destilada
Tomamos notas de las caracteristicas del jarabe comercial
Pesamos el picnómetro con el jarabe comercial
Llenamos con el jarabe comercial el picnómetro
Tomamos notas de las características del jarabe de planta piloto UTMACH
Llenamos con el jarabe de planta piloto utmach el picnómetro
Pesamos el picnómetro con el jarabe de planta piloto UTMACH
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d) Solubilidad
Agitacion de la muestra con los reactivos (Citrato de Piperazina Laboratorio NF)
Solubilidad en los diferentes sustancias (Agua, Formol, Alcohol)
Agitacion de la muestra con los reactivos (Citrato De Piperazina PPF UTMACH)
Solubilidad en los diferentes sustancias (Agua, Formol, Alcohol)
e) Valoraciรณn
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f) Espectrofotometría
Sustancias y Reactivos
Blanco
Citrato de Pirerazina en Polvo
Jarabe Genérico Piperazina NF
Jarabe PPT Citrato de Pirerazina UTMACH
Blanco
Absorbancias de la materia prima de citrato de piperacina
Absorbancias del jarabe de citrato de piperacina genérico
Absorbancias del jarabe de citrato de piperacina UTMACH
Agua destilada
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g) Grados BRIX – Índice de Refracción-Glucosa
Encendiendo el Refractómetro
Colocar 1ml de la muestra en el prisma
Cerrar el área de muestreo del refractómetro
Lectura del Índice de Refracción
h) Análisis Microbiológico
Incubadora
Medios de cultivos preparados refrigerados
Se coloca los medios de cultivo en la estufa para que se disuelvan por temperatura
Platos petri estériles
Medios de cultivos disueltos
Incubadora con medios dispensados en placas petri
Inoculando medios de cultivos con las muestras
Inoculación con técnica Zig Zag
Medios inoculados listos para la incubación
Observación a simple vista de posible crecimiento bacteriano
Observación con el contador de colonias
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1. CALCULOS a) Densidad DATOS Picnómetro
Vacío
Agua Destilada
Jarabe Genérico
Resultado
17,342gr
27,093 gr
28,678gr
Jarabe de Planta Piloto UTMACH 28,876 gr
Densidad del jarabe de Citrato de Piperazina Genérico
Densidad = 1,162 gr Densidad del jarabe de Citrato de Piperazina de la planta piloto de la UTMACH
Densidad = 1,182 gr b) Valoración
Datos Importantes 1. Concentración del P.A 2. Referencia 3. Equivalencia 4. Viraje 5. Constante K 6. Peso promedio 7. Cantidad de PA a trabajar
11000 mg 98-110 % FE 2da Edición 1 mL HClO4 0.1N equiv 10.71 mg 13 mL HClO4 0.1N 0.9566 11000 mg 200 mg
8. Consumo Teórico
-
9. Porcentaje Teórico
-
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10.Consumo Real
-
11. Porcentaje Real
-
12. Conclusión
-
VALORACIÓN
6. Conclusión: no cumple con los resultados y estándares que contiene la Farmacopea Española 2da edición.
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c) Espectrofotometría DISOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO A 2,5N
Es decir para preparar una solución de hidróxido de sodio a 2,5 N se va a utilizar 5g. DISOLUCION DE NITROFERRICIANURO DE SODIO
2. RESULTADOS OBTENIDOS a) Características Organolépticas
b) pH NOMBRE DE MEDICAMENTO
LABORATORIO
Jarabe Piperazina 60mL
Laboratorio Neofármaco
LOTE
F.V
150520188BJP 05/2020
RESULTADO pH 5.53
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Laboratorio de Jarabe Piperazina 120mL Planta Piloto 170714 07/2021 5.61 UTMACH Ambos jarabes cumplen con el parámetro de pH según la Real Farmacopea Española II Edición que permite un pH de 5,0 – 6,0 como rango normal. c) Densidad RESULTADO Jarabe Genérico
Jarabe de Planta Piloto UTMACH
1,162 gr
1,182 gr
d) Solubilidad Jarabe Citrato de Piperazina (Laboratorio NF) FÁCILMENTE SOLUBLE LIGERAMENTE SOLUBLE X
SOLVENTES Agua Alcohol Formol
INSOLUBLE X
X Jarabe Citrato de Piperazina (PPF UTMACH) X
Agua Alcohol Formol
X X
e) Valoración Medicamento Genérico (PIPERAZINA NF 60 ml) -
Consumo Práctico: 12.4358 mL HClO4 0.1 N
-
Porcentaje Real: 66.59%
f) Espectrofotometría Nanómetro s
Blanc o
600nm
0
Absorbancia s de la materia prima de Citrato de Piperacina -0,270
Absorbancia s del jarabe de Citrato de Piperacina Genérico
Absorbancia s del jarabe de Citrato de Piperacina UTMACH
Agua destilad a
-0,254
-0,165
1,999
g) ORP (Potencial Oxido-Reducción) MUESTRAS
RESULTADO 1 (mV)
RESULTADO 2 (mV)
Jarabe de Citrato de Piperazina NF (Genérico)
131
132
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Jarabe de Citrato de Piperazina PPF UTMACH
221
223
REFERENCIAS PARA ESTABILIZAR LOS RESULTADOS AGUA DESIONIZADA AGUA DESTILADA ALCOHOL
298 335 184
299 338 185
h) Grados BRIX – Índice de Refracción-Glucosa MÉTODOS IDENTIFICACION INDICE DE REFRACCIÓN GRADOS BRIX
JARABE GENERICO Piperazina NF 60ml 1.3997 a 17.50° C
JARABE DE PLANTA PILOTO UTMACH Piperazina 120 ml 1.4089 a 20.00° C
39.74 % a 17.50°C
44.90 % a 20.00 °C
FRUCTOSA
40.37% a 20.00° C
45.82% a 20.00° C
GLUCOSA
40.28 % a 20.00° C
45.84 % a 20.00° C
% INVERT SUGAR
40.32 % a 20.00 °C
45.90 % a 20.00° C
SERUM TOTAL SOLIDS SERUM PROTEINE
38.66 % a 17.50 ° C
45.02 % a 17.50° C
33.51 % a 17.50 °C
39.11 % a 17.50° C
HONEY MOISTURE
0% a 20.00° C
0% a 20.00° C
i)
Análisis Microbiológico TIEMPO DE
JARABE GENÉRICO
JARABE DE LA PPF
Ausencia de colonias de
Ausencia de colonias de
Escherichia coli
Escherichia coli
Ausencia de colonias de
Ausencia de colonias de
Escherichia coli
Escherichia coli
CULTIVO 24 horas
48 horas
3. OBSERVACIONES Se debe de notar que el cambio de coloración a azul debe ser persistente y no desaparecer luego de un momento de agitación. Este viraje nos indica el punto final de titulación, siendo de vital importancia para realizar los cálculos próximos correspondientes.. 4. CONCLUSIONES Mediante esta práctica se pudo realizar el control de calidad a diferentes fórmulas farmacéuticas liquidas, en este caso el Citrato de Piperazina al cual lo
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encontramos en presentación genérica pero se añadió uno hecho en la Planta Piloto de Farmacia y así poder comparar resultados. 5.
RECOMENDACIONES -
Aplicar las normas de bioseguridad en el laboratorio.
-
Realizar la asepsia de la mesa de trabajo y materiales para así evitar contaminación que interfieran en los resultados.
-
Tratar de ser precisos en el momento de medir los volúmenes requeridos ya que de lo contrario tendremos inconvenientes tanto en la práctica como en los resultados.
-
Colocar una hoja papel blanco y así facilitar la observación del cambio de color en el viraje.
-
Realizar la titulación con movimiento circular, agitación continua y gota a gota.
6. CUESTIONARIO 1. ¿Cuáles son las propiedades físico-químicas del Citrato de Piperazina? La piperzina es un polvo blanco amarillento, soluble en agua y glicerina y poco soluble en alcohol y éter. Debe guardarse en recipientes cerrados y protegidos de la luz. Forma sales que son solubles y estables, no higroscópicas, como el clorhidrato, sulfato, tartrato y hexahidrato. 2. Mediante un gráfico escriba los efectos adversos que ocasiona la administración del jarabe de Citrato de Piperazina.
Vómito Calambres
Urticaria
3. Describa el Mecanismo de Acción del Citrato de Piperazina La piperazina actúa sobre la unión mioneural o placa motriz del áscaris produciendo parálisis flácida (parecida a la succinil colina) y expulsión del parásito. Se ha observado inhibición de la enzima fumarato-reductasa. LA CALIDAD NO ES EL RESULTADO DE LA CASUALIDAD SINO QUE ES LA CONSECUENCIA DE UN ESFUERZO PLANIFICADO QUE NACE EN EL DISEÑO DEL PRODUCTO.
7. ANEXOS -
Artículo Científico.
-
Farmacopea de la Valoración de Citrato de Piperazina (Real Farmacopea Española II Edición Págs. 2144-2145).
8. BIBLIOGRAFÍA 1. EcuRed. (s.f.). Piperazina. Recuperado el 9 de Junio de 2018, de https://www.ecured.cu/Piperazina 2. Formulación Nacional de Medicamentos. (s.f.). Piperazina. Recuperado el 9 de Junio 2018, de http://fnmedicamentos.sld.cu/index.php?P=FullRecord&ID=93
………………………………… FIRMA ALUMNA
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