INFORMES DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA ANALISIS DE COLIFORMES NMP TÉCNICA CUALITATIVA
Presentado por: DIANA CECILIA MUÑOZ BLANCA RIVEROS ANDREA GODOY CRIALES IRMA FRANCO
Ficha: 583801 Instructora: ALEXANDRA CUCAITA
INFORME ANALISIS COLIFORMES NMP
TÉCNICA CUANTITATIVA
ANALISIS DE COLIFORMES - TÉCNICA NMP FRUTAS Y HORTALIZAS
MARCO TEORICO
En esta oportunidad desarrollaremos la práctica de laboratorio, en la cual haremos análisis de Coliformes totales y fecales (E.Coli) mediante la técnica (NMP). Para Esta ocasión analizaremos una fruta, en este caso la fresa, la cual se obtuvo de una tienda cercana al Sena Hotel, la cual utilizan para hacer aromáticas. Sabemos que el grupo de bacterias coliformes comprende todos los bacilos Gram – aerobios o anaerobios facultativos, no esporulados encargados de fermentar la lactosa, produciendo gas a 35°C en 48 horas. La técnica NMP es empleada para estimar el número de microorganismos en muestras de alimentos y aguas.
OBJETIVOS
1. Analizar y determinar si hay ausencia o presencia de Coliformes totales en la muestra. 2. Establecer si la muestra analizada es apta para el consumo humano. 3. Determinar cuales podr铆an ser las causas de la contaminaci贸n del alimento. 4. Determinar si el alimento cumple o no con la NTC, establecida para este tipo de alimento. 5. Evaluar la cantidad de microorganismos presentes en la muestra.
MATERIALES UTILIZADOS
• Agua Peptonada 0.1% • Balanza • Cuchillos y Cucharas • Erlenmeyer • Frascos Shock • Gradillas •Homogenizador • Incubadora • Mechero de Bunsen • Medio de Caldo Brilla (Cuantitativo) • Micropipeta • Pipetas • Pipeteador • Probetas • Tubos de Ensayo
METODO Numero Mas Probable (NMP) En esta Práctica de Laboratorio hicimos análisis de coliformes totales y fecales (e.coli) utilizando la técnica cualitativa de Número mas Probable (NMP). Objetivo: Determinar coliformes totales y fecales en una muestra de Fresas. Procedimiento: Para iniciar la practica de laboratorio, hicimos el proceso de limpieza y desinfección de áreas, equipos, herramientas e implementos de trabajo. En este caso preparamos 9 tubos de caldo brilla de 10 ml C/U, para esto utilizamos 9 tubos de ensayo tapa rosca y 9 campanas Durhan. Para iniciar la preparación del caldo tomamos en una probeta 90 ml de agua desionizada, la llevamos a un frasco shock y le agregamos 3,6 g de Caldo Brilla. Tómanos 110 ml de agua desionizada en otra probeta y la llevamos a otro frasco shock y agregamos 0,935 g de Nacl y 0,110 g de peptona. Luego de seleccionar los implementos de laboratorio, y de preparar el caldo brilla y el agua peptona, autoclavamos junto con los tubos de ensayo y las puntas de la micropipeta, para esterilizarlos. Llevamos los 9 tubos de ensayo al autoclave marcados en su parte exterior con un marcador no borrable, indicando la dilución correspondiente, (10-1, 10-2 y 10-3) y dispuestos en una gradilla o batería de tres filas con tres tubos cada fila. Luego nos acercamos al mechero y tomamos el frasco Shokc con el agua peptonada y le agregamos 10 g de la muestra de fresa a analizar, la cual fue macerada previamente; Volvimos a tapar el frasco y agitamos constantemente para que se disuelvan los microorganismo que contienía. Luego tomamos la batería y llenamos cada tubo de ensayo con 1 ml de muestra para obtener la dilución 10-1, de esta tomamos 1 ml, para obtener la dilución 10-2 y finalmente de 10-2 tomamos 1 ml para obtener 10-3. Para finalizar llevamos los tubos de ensayo a incubación a 35º C por 48 horas.
RESULTADOS
Técnica (NMP)
Agua Peptona
• 90 ml H20 Desionizada • 3,6 gr de Agar EMB
•110 ml H20 Desionizada •0,935 g de NaCl •0,110 g de Peptona
Pasadas las 48 horas, se anotaron los tubos que mostraron turbidez y producción de gas, que se observaron por el desplazamiento del medio en el tubo de durham. Si a las 24 horas todos los tubos muestran producción de gas se debe confirmar con la prueba confirmatoria; si, por el contrario, a las 24 horas no se observan estas características, se debe esperar hasta las 48 horas para realizar la lectura. Después de dejar los tubos por 8 días en incubación a 35°C +/-2°C se evidencio presencia de turbidez y gas en las diluciones 10 -1 y 10-2. De los tubos sembrados en el caldo Brilla (prueba presuntiva), se obtuvo los siguientes. resultados para coliformes totales:
RESULTADOS DILUCIONES NÚMERO DE COLONIAS
+
10-1 1
-
-
Tubos 10-1
Tubos 10-2
10-2 + 1
-
-
10-3 0
-
RESULTADOS
Tubos 10-3
Discusión de Resultados
Al analizar el resultado de la muestra , que en este caso fue fresas, se evaluó el procedimiento realizado en cada grupo de diluciones respectivas. el caldo brilla, posee una forma de actuación en la bilis y el verde brillante que inhibe notablemente el crecimiento de la flora indeseable acompañante, (Clostridum degradadores de la lactosa). Aparte que la incubación para Coliformes totales es 35 a 37ºC durante 24 horas. Después de dicho tiempo se realizó lectura y no se observó presencia de microorganismos por esta razón se dejan 48 horas para darles tiempo de desarrollo a las bacterias. Para coliformes fecales su incubación es de 44.5 a 44.5ºC durante 24 horas. En esta incubación evaluaríamos una posible causa de no crecimiento a las 24 hora ya que estos coliformes fecales se desarrollan con una temperatura un poco más alta. Esta puede ser una razón por la cual los coliformes fecales no creciero en 37ºC. Evaluando también las condiciones ambientales del medio deshidratado debe ser 10 a35ºC, esto se evidencio en el momento de la reparación.
Discusión de Resultados
Después de 8 días de permanecen en incubación, obtuvimos mejores reultados como: Tubo 10¯¹: se presentó turbidez y CO2, lo cual nos permite confirmar un resultado positivo para coliformes totales. En el Tubo 10¯²: Se presenció CO2 Hubo ausencia de microorganismo, lo cual comparado co n la NTC 112 cuando es el caso de tener tubos sin crecimientos el límite de detección para el cuadro 4 es <0.03 NMP/g, En el Tubo 10¯³:
Los valores que no se suman ni se restan al resultado solamente son un dato de Calidad.
Conclusión
La muestra presento una concentración de un tiempo de incubación de 8 días por lo cual se puede concluir que el producto es apto para el consumo humano, la norma bajo la cual se rige este tipo de alimentos y que establece los límites permitidos es la norma Invima ensalada de frutas y verduras. Lo anterior refleja que las condiciones higiénicas durante la preparación del producto es determinante para una adecuada calidad sanitaria Los resultados del presente estudio aunque se encontró concentraciones mínimas este tipo de microorganismos se puede resaltar que un deficiente control sanitario y una adecuada limpieza y desinfección puede ser de alto riesgo para los consumidores de contraer alguna enfermedad transmitida por los alimentos (ETAS).
BIBLIO Y CIBERGRAFIA
CIBERGRAFÍA: http://books.google.com.co/books?id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA181&lpg=PA181&d =cual+es+el+signiicado+de+nmp+microbiologia&source=bl&ots=z84kuJb0hB&sig ovNwtJcdewV0hKiaw60CJ0UnOU&hl=es&sa=X&ei=LwRfUoulGoza8AST8YCgDQ&v d=0CDsQ6AEwAw#v=onepage&q=cual%20es%20e%20significado%20de%20nmp 20microbiologia&f=false http://www.anmat.gov.ar/alimentos/Guia_de_interpretacion_resultados_microb ologicos.pdf http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/documentos/Cl seProcariontes/Alejandra/Práctica%204%20%20Medios%2
BIBLIOGRAFÍA: Microbiología de los Alimentos – Guía de Laboratorio Mónica María Simanca 2004 Introducción a la Microbiología Torca – Funke – Case 9na Edición