INFORME DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA ANALISIS DE SALMONELLA
Presentado por: BLANCA RIVEROS ANDREA GODOY CRIALES IRMA FRANCO DIANA CECILIA MUÑOZ ROA
Ficha: 583801 Instructora: LILIAN
INFORME ANALISIS Salmonella En pollo crudo
ANALISIS DE SALMONELLA EN POLLO CRUDO
MARCO TEORICO
El género Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Son bacilos gram negativos, de 0,7-1,5 x 2-5 µm, anaerobios facultativos, no formadores de esporas, generalmente móviles por flagelos perítricos (excepto S. gallinarum). Fermentan glucosa, maltosa y manitol, pero no fermentan lactosa ni sacarosa. Son generalmente catalasa positiva, oxidasa negativa y reducen nitratos a nitritos. Son viables en diferentes condiciones ambientales, sobreviven a la refrigeración y congelación y mueren por calentamiento (mayor a los 70 °C). El serotipo de Salmonella está determinado por los siguientes tres tipos de antígenos: el antígeno somático (O), el antígeno flagelar (H) y el antígeno de virulencia (Vi). Los antígenos somáticos son lipopolisacáridos componentes de la pared celular y se han identificado 60 antígenos diferentes. Los antígenos flagelares son proteínas localizadas en el flagelo móvil. El antígeno de virulencia es un polisacárido termolábil localizado en la cápsula. .
OBJETIVOS
•Describir la metodología llevada a cabo por el equipo de trabajo para realizar la detección, aislamiento e identificación de Salmonella spp en muestras de alimentos. •Detectar la presencia o usencia de salmonella en el alimento a estudiar.
MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS
• Agua Peptonada 0.1% • Agua desionizada • Autoclave • Balanza • Cajas Petri de vidrio • Cuchillos y Cucharas • Erlenmeyer • Frascos Shott • Gradillas •Homogenizador • Incubadora a una temperatura de 37º C • Mechero de Bunsen • Medio de cultivo ss • Micropipeta y puntas plásticas • Pipetas de .1 ml a 5 ml •Pipeta de 0.1 micra • Pipeteador • Tipo de muestra solida (Pollo Crudo) • Tubos de Ensayo tapa rosca • Vidrio Reloj
PROCEDIMIENTO SALMONELLA En esta Práctica de Laboratorio hicimos análisis de Salmonella utilizando la técnica de preparación de caldo selenito y posterior siembra en superficie en medio de cultivo ss. Objetivo: Determinar presencia de Salmonella una muestra de pollo crudo. Procedimiento: Para iniciar la practica de laboratorio, hicimos el proceso de limpieza y desinfección de áreas, equipos, herramientas e implementos de trabajo. Luego hicimos alistamiento de material para llevarlo a auto clavar Posteriormente seguimos con la preparación de los medios de cultivos, el agua peptonada y la muestra a analizar, teniendo en cuenta que primero debe ser macerada para mejor dilución. Enriquecimiento no selectivo: se coloca la muestra en el agua peptonada en tubo tapa rosca por 24 horas a 37 °c Enriquecimiento selectivo: se toma 1 ml de la muestra y se siembra en el caldo selenito se encuba por 24 horas a 37°c. Aislamiento en medio selectivo: Pasadas las 24 horas se procede a sembrar 100 microlitros en el agar ss ( shigella- salmonella), se incuba a 37°c por 24 horas y se hace lectura.
RESULTADOS
Análisis de Salmonella
Agua Peptona
• 120 ml H20 Desionizada • 4,8 g de Agar ss
•115 ml H20 Desionizada •0,976 g de NaCl •0,115 g de Peptona
Características macroscópicas: •Un color marrón translucido, con bordes enteros, y forma irregular algunos puntiformes, con superficie cremosa. Características microscópicas: •No se lograron ver •No se lograron observar colonias presentes. No se logro evidenciar ningún tipo de salmonella solo Pseudomonas que son bacterias gram negativas, presentes en carnes de pollo refrigerado.
RESULTADOS
NÚMERO DE COLONIAS
MEDIO SELECTIVO Agar Xilosa Lisina
CAJAS 10-1
CAJAS 10-2
CAJAS 10-3
0 Colonias
0 Colonias
0 Colonias
0 Colonias
0 Colonias
0 Colonias
Color antes de la inoculación Claro, color rojo brillante
Características coloniales de Salmonella spp. Rosas o rojas pueden ser transparentes, con o sin
Desoxicolato (XLD)
centro negro. En algunos casos completamente
Agar para Salmonella y
Claro, color rosa
negras Translúcidas en ocasiones opacas. Algunas con
Shigella (SS
centro negro. Las colonias fermentadoras de lactosa
Agar entérico Hektöen
Oscuro, color verde
son rojas Verdes o azul verdes con o sin centro negro. En algunos casos completamente negras
ANALISIS DE RESULTADOS
De acuerdo a los análisis realizados para determinar presencia de salmonella en carne de pollo, se logro establecer que este alimento crudo está libre de salmonella indicándonos que es apto para el consumo humano puesto que es inicuo. Debido al agar utilizado SS, el cual es un medio altamente selectivo, que inhibe el crecimiento de la mayoría de los coliformes y solo permite el crecimiento de salmonella y shigella. Esto nos indica que probablemente existieran otras bacterias pero no hubo presencia por el medio de cultivo utilizado.
MEDIOS
Medios selectivos: SS: Es un medio altamente selectivo, que inhibe el crecimiento de la mayorĂa de los coliformes y permite el crecimiento de salmonella y shigella. La alta concentraciĂłn de sales biliares y citrato de sodio inhibe a todas las bacterias gram positivas y muchas gram negativas incluyendo a los coliformes. AsĂ se ve el crecimiento de salmonella en este agar:
MEDIOS
XLD: (agar de xilosa, lisina, desoxicolato) es un medio moderadamente selectivo y de diferenciación para el aislamiento y la diferenciación de patógenos entéricos gram negativos. (Salmonella y Shigella) a partir de muestras clínicas. Es adecuado en especial para el aislamiento de la especie Shigella. Contiene extracto de levadura como fuente de nutrientes y vitaminas. Utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los microorganismos gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan prácticamente todos los entéricos, excepto Shigella, y esta propiedad hace posible la diferenciación de dicha especie.
Así se ve el crecimiento en este medio:
MEDIOS
HEKTOEN ENTERICO AGAR: Este es un medio ideal para el aislamiento selectivo de Salmonella y Shigella spp., a partir de heces y alimentos. El medio de cultivo contiene sales biliares que inhiben el desarrollo de la flora acompañante, y 2 sistemas indicadores: (i) azul de bromotimol y fucsina ácida como indicadores de la fermentación de carbohidratos, y el citrato de hierro como un indicador de la formación de SH2 a partir del tiosulfato.El desarrollo de Shigella spp. Es adecuado debido a que la inhibición de estos microorganismos por las sales biliares está disminuida por la adición de cantidades relativamente elevadas de peptona y carbohidratos. El medio de cultivo, permite una buena diferenciación de las colonias e inhibe el desarrollo de algunos coliformes y otras bacterias no fermentadoras de lactosa, facilitando así la identificación de Salmonella y Shigella a partir de la muestra Así se ve el crecimiento en este medio:
BIOQUIMICAS
TSI AGAR: Medio universalmente empleado para la diferenciación de entero bacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de acido sulfhídrico. LIA: LISINA HIERRO AGAR: Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente salmonella spp, basado en la decarboxilacion / desanimación de la lisina y en la producción de acido sulfhídrico. SIM MEDIO: Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrogeno en un mismo tubo. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceace. UREA: Medio utilizado para la identificación de microorganismos, en base a la actividad ureasica. Es particular mente útil para diferenciar proteus spp. De otros miembros de la familia enterobacteriaceace. MR – VP MEDIO: Medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer. Es particularmente útil para la clasificación de entero bacterias.
CONCLUSIONES
El alimento estudiado (pollo), estaba libre de salmonella y por lo tanto es apto para el consumo ya que al no poseer esta bacteria es un alimento que es aceptable, ya que como bien se sabe si hubiese tenido salmonella esta es altamente peligrosa para la salud pues es causante de varias enfermedades entre ellas la mรกs conocida: Salmonelosis.
BIBLIOGRAFIA
BIBLIOGRAFÍA: Microbiología de los Alimentos – Guía de Laboratorio Mónica María Simanca 2004 BIOQUÍMICAS http://www.anmat.gov.ar/renaloa/docs/Analisis_microbiologico_de_los_alimentos_Vol_I.pdf http:/ /depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Pagogenosnorm.Salmonella_17364.pdf http://www.alimentacion-sana.org/informaciones/novedades/pollo2.htm http://es.scribd.com/doc/38095267/Agar-Hektoen http://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-cultivo-y-pruebas-bioquimicapresentation?related=1