INFORMES DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA ANALISIS DE Clostridium
Presentado por: BLANCA RIVEROS ANDREA GODOY CRIALES IRMA FRANCO DIANA CECILIA MUÑOZ ROA
Ficha: 583801 Instructora: ALEXANDRA CUCAITA
INFORME ANALISIS Clostriduim En sardinas enlatadas
ANALISIS DE CLOSTRIDIUM EN SARDINAS ENLATADAS
MARCO TEORICO
El costridium son organismos que se observan solos, en parejas o en cadenas cortas. Esta formado por un grupo heterogéneo de bacilos gram positivos de aerobios esporulados, este es un microorganismos que esta ampliamente distribuido en la naturaleza principalmente en el suelo y en el tracto intestinal de muchos animales incluido el hombre. Especificándonos en Clostridium botulinum es un bacilo Gram positivo, anaerobio, formador de esporos, que produce una potente neurotóxica. Los esporos son resistentes al calor y pueden sobrevivir en alimentos incorrectamente procesados, donde germinan (dependiendo de las condiciones) y se multiplican, deteriorando los alimentos o causando ETA. El organismo y sus esporos están distribuidos en la naturaleza. Ello ocurre en suelos cultivados o en bosques, sedimentos en el lecho de ríos, lagos y aguas costeras, tracto intestinal de pescados y mamíferos, branquias y vísceras de cangrejos y otros crustáceos. Se reconocen siete tipos de botulismo (A, B, C, D, E, F y G), con base en la especificidad antigénica de la toxina producida por cada cepa. Los tipos A, B, E y F causan botulismo humano, incluido el botulismo por herida, el botulismo infantil y la intoxicación alimentaria. Los tipos C y D causan la mayoría de los casos de botulismo en animales, siendo los más afectados: aves salvajes y domésticas, pollos, bovinos, equinos y algunas especies de peces. En este caso utilizamos para la elaboración de este informe , se utilizó como ejemplar una lata de sardinas LA SOBERANA, los pescados como la mayoría de los alimentos no se consumen tal como se obtienen de la tierra o de las aguas, sino después de someterlos a una serie de procesos de preparación, industriales o culinarios, que pueden variar su valor nutritivo, tanto del punto de vista cualitativo como cuantitativo, por esta razón se deben realizar los análisis correspondientes para identificar si el alimento se encuentra apto en su totalidad par el consumo humano.
OBJETIVOS
1.Realizar informe de los resultados obtenidos de la muestra analizada 2.Conocer las alteraciones que pueden presentar los alimentos empacados en hojalata que pueden causar da帽o al consumidor 3. Recomendar acciones correctivas para prevenir este tipo de alteraciones en los alimentos 4. Conocer el procedimiento que se debe tener para la identificaci贸n del microorganismo Clostridium 5.Detectar el n煤mero de unidades formadoras de colonias de Clostridium en alimentos enlatados. 6. Determinar un posible pat贸geno en muestra enlatada
MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS
• Agua Peptonada 0.1% • Agua desionizada • Autoclave • Balanza • Cajas Petri de vidrio • Cuchillos y Cucharas • Erlenmeyer • Frascos Shott • Gradillas •Homogenizador • Incubadora a una temperatura de 35º C ± 1° •Jarras de Anaerobiosis • Mechero de Bunsen • Medio de cultivo sps •Sobre de Anaerogen • Micropipeta y puntas plasticas • Pipetas de .1 ml a 5 ml •Pipeta de 0.1 micra • Pipeteador • Tipo de muestra solida (sardinas en salsa de tomate) • Tubos de Ensayo tapa rosca • Vidrio Reloj
Siembra de la muestra Clostridium
Procedimiento: Para iniciar la practica de laboratorio, hicimos el proceso de limpieza y desinfección de áreas, equipos, herramientas e implementos de trabajo. Inicialmente se prepara el agua peptona al 1% aproximadamente 110 ml, 90 ml que se dejaran en frasco schott y 10 ml en dos tubos tapa rosca para proceder después de auto clavar hacer las diluciones 10-2 y 10-3 , se fundirá el medio que después se auto clavara y después de salir del autoclave se mantendrá la temperatura de aproximadamente 47°C y se sirven cajas de 20 ml cada una se deja solidificar, se procede a pesar 10 gramos de la muestra en 90 ml de agua peptona temperada este procedimiento se le llama 1/10, se homogeniza la muestra y se procede a pasar 1 ml de muestra a cada tubo que contiene agua peptona al 1% (10-2 y 10-3 ). El período transcurrido entre la preparación del homogeneizado de la muestra y la siembra no debe superar los 20 minutos. Una vez solidificado asépticamente el medio transfiera 1 micro litro de cada dilución previamente homogeneizada en el centro de la placa por duplicado. Diseminar con rastrillo estéril y dejar que se absorba por unos 5 minutos y finalmente cubrir con aprox. 10 mL de agar sps y dejar solidificar.
PROCEDIMIENTO Clostridium
Preparación de la jarra anaerobiosis 1.Colocar las placas sin invertir dentro de jarras de anaerobiosis. 2. Colocar un sobre de Anaerogen, recién sacado del sobre protector en un costado de la jarra y utilizar según instrucciones del fabricante. 3.Tapar la jarra cuidadosamente, debe quedar hermética.
Incubación: 1 Incubar a 35º C ± 1° C por 24 horas. 2 En caso de no haber desarrollo (presencia de colonias negras) o son muy pequeñas, incubar por 24 horas más en anaerobiosis. 3 Una vez concluido el período de incubación, sacar las jarras de la estufa. 4 Dejar un rato a temperatura ambiente. 5 Comprobar que el indicador de anaerobiosis esté virado de incoloro a rosado. 6 Abrir la jarra y sacar cuidadosamente las placas. 7 Ordenarlas de acuerdo al número de la muestra y a las diluciones realizadas.
RESULTADOS
Análisis de Clostridium
Agua Peptona
• 120 ml H20 Desionizada • gr de Agar sps
•110 ml H20 Desionizada •0,935 g de NaCl •0,115 g de Peptona
Después de pasadas las 48 horas de incubación pudimos notar los siguientes resultados: 10-1: 3 colonias - Color pardo oscuro en el 40% del medio 10-1: 2 Colonias – Color pardo amarillento 70% de l medio 10-2: Color pardo 30 % café oscuro 10-2: Color pardo 80% amarillento 10-3: Nulo 10-3: Manchas color pardo (diminutas)
RESULTADOS
NĂšMERO DE COLONIAS
CAJAS 10-1
CAJAS 10-2
CAJAS 10-3
3 Colonias
Color Pardo 30%
Nulo
2 Colonias
Color Pardo 80%
Manchas Color Pardo
Cajas 10-1
Cajas 10-2
RESULTADOS
Cajas 10-3
Discusión de Resultados
Se toma como referencia la siguiente norma NTC 4437 esterilidad comercial en alimentos,
método para evaluar la
Lectura de resultados En la primera dilución retenida (10-1): 3 colonias en la primera caja y 0 colonias en la segunda. En la segunda dilución retenida (10-2): no presento colonias negras en ninguna caja. En la tercera dilución (10-3) no presenta presencia de microorganismos. Al no encontrarse colonias en ninguna de las 2 diluciones (10-2 y 10-3) podemos decir que la carga no es la suficiente para un crecimiento masivo en el alimento ya que tan solo se presentó crecimiento en la primera dilución y fue en una sola caja (3 colonias de color negro) El resultado se reporta cuando no se tiene presencia de clostridiumcomo sigue: Menos de 1clostridiumsulfito reductor/ml Menos de 1/d clostridium sulfito reductor/g Para poder determinar las características microscópicas de las tres colonias observadas en la primera dilución (10-1) se Debe hacer una tinción de gram, después de confirmar por su morfología se realizaran las bioquímicas correspondientes al microorganismo. Una referencia de la bioquímica Confirmación bioquímica para clostridiumperfringens: Método A: Se seleccionan de tres a cinco colonias características de cada caja de agar sps, guardadas para el recuento y se siembra cada una en caldo tioglicolato o caldo de carne cocida. Se comprueba la pureza del cultivo haciendo frotis y coloración de gram. Se incuba en baño de agua a 46ºc +/- 5 de 3 a 4 horas. o luego se siembran por punción las pruebas bioquímicas. Se incuban a 35ºc de 24 a 48 horas; no es necesario incubar en anaerobiosis.
Conclusión
La Esterilidad comercial a la que fue sometida las sardinas de tomate se le hace un tratado térmicamente. Es el estado que se consigue aplicando calor suficiente, sólo o en combinación con otros tratamientos apropiados, con el objeto de liberar a ese alimento de microorganismos patógenos y de otros microorganismos capaces de reproducirse en él en unas condiciones normales no refrigeradas en las que se mantendrá probablemente el alimento durante su distribución y almacenamiento. Al ver los resultados macroscópicos podemos decir que su esterilidad no fue la apropiada ya que presento 3 colonias típicas del microorganismo, pero tenemos en cuenta que la norma da la opción de un límite establecido por este alimento, además se debe dar la última palabra después de la confirmación final que se hace por medio de las bioquímicas.
RECOMENDACIONES
El programa de control general HACCP aplica también para los productos de pescados enlatados. El único factor especifico para estos productos es la seguridad en las materias primas en cuanto concierne a las toxinas marinas, para prevenir la intoxicación por las toxinas marinas, es muy importante conocer el origen del pescado su especie y las condiciones en que se mantuvo en estado de crudo.
BIBLIOGRAFIA
BIBLIOGRAFÍA: Microbiología de los Alimentos – Guía de Laboratorio Mónica María Simanca 2004