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CULTIVO IN VITRO
TÉCNICAS DE MICROPROPAGACIÓN
Aplicaciones del cultivo in Vitro En el número anterior vimos como podíamos iniciarnos en el cultivo in Vitro de plantas, a través de la disminución de las condiciones estériles requeridas gracias al uso de agua oxigenada. Una vez iniciados, veremos las diferentes aplicaciones que se le pueden dar a este tipo de cultivo, haciendo hincapié en las distintas técnicas de Bud Spencer micropropagación. Conclusiones sobre el uso de agua oxigenada Los recipientes se pusieron bajo una mezcla de fluorescentes de luz cálida
indicios carenciales de magnesio y una ligera contaminación bacteriana en sólo dos de los tarros, por los que estos fueron desechados. Aunque el crecimiento de los
Tarros en cámara madre. y luz fría, con un régimen de luz de 20 horas al día. Los explantos no necesitan mucha luz ya que la mayor parte de los
explantos haya sido mínimo, el porcentaje de contaminación fue muy bajo, por lo que utilizando un medio más apropiado
de auxinas en relación con la de citoquininas producía la formación de raíces (rizogénesis), al contrario fomentaba la formación de tallo (caulogénesis) y un equilibrio de las mismas daba lugar a la producción de callo, una masa de células sin diferenciar. Además, al retirar o reducir la concentración de auxina de un medio donde se estuviera cultivando callo, daba origen a embriones somáticos (embriogénesis), formados por una pequeña raíz y cotiledones, genéticamente idénticos a la planta de la que proceden. Posteriormente se utilizaron para la obtención de plantas haploides (con un solo juego de cromosomas) a partir de partículas de polen y de plantas transgénicas, bombardeando masas de callo con fracciones de ADN (microbalística) o a través de la aplicación de bacterias modificadas de Agrobacterium tumefaciens, una bacteria capaz de introducir fracciones de su material genético en las células vegetales que infecta. A través del cultivo de suspensiones celulares en medios líquidos se pudieron desarrollar los métodos para el cultivo de protoplastos, células que no poseen pared celular, y con los que se pudieron obtener los primeros híbridos somáticos, producidos por la unión de dos células a través del cultivo in Vitro, lo que permitía incluso hibridar entre sí especies diferentes. También se produjeron las primeras células cíbridas, for-
nes primarias de un organismo como son el crecimiento y la reproducción. En el caso de las plantas estos compuestos pueden dividirse en tres grupos: -Terpenoides, como el THC o los terpenos que forman los aceites esenciales. -Alcaloides, como la cocaína, la morfina, la triptamina o la atropina. -Compuestos fenólicos, como la vainillina, el ácido salicílico o los flavonoides. Debido a la preocupación por la pérdida de biodiversidad a nivel mundial, el cultivo in Vitro también es utilizado para la conservación de recursos fitogenéticos, debido a la capacidad de conservar plantas que no producen semillas o clones selectos en muy poco espacio, y a que se pueden cultivar fácilmente especies que crecen en medios y climas extraños. Además ofrece la posibilidad de conservar material genético prácticamente intacto durante años en condiciones de vida suspendida gracias a la crioconservación, donde el material vegetal es introducido en recipientes herméticos a temperatura ultra baja, alrededor de los -196 ºC, mediante nitrógeno líquido. El cultivo de meristemos, tejidos responsables de crecimiento vegetal, permite la obtención de plantas libres de virus y viroides, ya que su crecimiento activo impide la infección de todas sus células, pudiéndose aislar aquellas que se mantienen sanas.
Los explantos no necesitan mucha luz ya que la mayor parte de los azúcares necesarios para su crecimiento se incluyen en el medio de cultivo en forma de sacarosa azúcares necesarios para su crecimiento se incluyen en el medio de cultivo en forma de sacarosa, por lo que una mínima actividad fotosintética es suficiente y el hecho de que los tarros tengan una tapa opaca no debería preocuparnos.
y añadiéndole agua oxigenada podría ser un método viable para la realización de cultivo in Vitro en el ámbito casero.
madas por el citoplasma de una célula y el núcleo de otra. Otra aplicación que se desarrolló gracias a este sistema fue la producción industrial de metabolitos secundarios, compuestos orgánicos no necesarios para las funcio-
Otro uso muy extendido es el de la germinación de orquídeas. Las semillas de éstas son tan pequeñas que necesitan la simbiosis con un hongo que las provea de nutrientes en los primeros estadios de la germinación. Gracias al cultivo in Vitro se puede simular dicha situación intro-
No se pusieron medios para la estabilización de la temperatura, pero esta se mantuvo entre 22 y 28 ºC, siendo la optima 25 ºC. Tras cuatro semanas en estas condiciones no se observó ningún tipo de contaminación, ni siquiera en el tarro que no había Detalle del crecimiento de la primera hoja. sido esterilizado, aunque por otro lado el crecimiento de los explantos fue prácticamente nulo, en principio debido a que la cantidad de citoquininas producidas Aplicaciones del cultivo in por los mismos al carecer de raíces y la Vitro baja cantidad aportada por la levadura Inicialmente estas técnicas se utilizaron de cerveza era poco más que suficiente. para la realización de estudios fisiológiSeguramente hubiéramos obtenido una cos, observando las diferencias producimayor tasa de crecimiento introduciendo das al utilizar diferentes medios de cultivo alguna citoquinina sintética o induciendo y condiciones climáticas. Gracias a estos experimentos se pudieron determinar los el enraizamiento. distintos efectos que producían distinTras 6 semanas ya se podía ver el creci- tas concentraciones de reguladores del miento de nuevas hojas y se observaron crecimiento; así una alta concentración
Vástagos.
