IDENTIFICACIÓN DE CLONAS CELULARES DEFICITARIAS EN GLICOSIL-FOSFATIDIL- INOSITOL POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN EL DIAGNÓSTICO DE HPN 1
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AUTORES: Vidal A. Judith , Retamozo O. Rosario , Aucca V. Mabel , Tokumura T. Carolina , Quevedo P. Patricia , Dulanto M.Luis , Zaldivar C. Jaime 5, Musayon H, Rodolfo 5. 1. Médico Patólogo en INEN, 2. Médico Patólogo Clínico en INEN, 3. Médico Hematólogo en HCH, 4. MR4 Hematología de HCH, 5. Tecnólogo Médico en INEN.
INTRODUCCIÓN La citometría de flujo es la técnica gold standard en el diagnós co de HPN, siendo necesario demostrar la deficiencia de al menos 2 proteínas ancladas a GPI en al menos dos poblaciones celulares diferentes. Se realizó el estudio para la detección de clonas de HPN en granulocitos neutrófilos y monocitos, usando panel de marcadores que incluían an cuerpos de linaje, marcadores ligados a GPI (CD157, CD16, CD14) junto con proaerolisina marcada con fluoresceína (FLAER).
POBLACION ESTUDIADA Y METODOLOGIA
RESULTADOS
80 solicitudes recibidas para estudio de HPN. Tipo de muestra: Sangre Periférica. Poblaciones estudiadas: Neutrófilos y Monocitos. Marcadores evaluados: CD45, FLAER, CD16, CD157, CD10, CD64, CD14. Alterna vos si no hubo FLAER: CD45, CD16, CD15, CD157, CD33, CD10, CD64, CD14. Controles: Internos (Poblaciones posi vas y nega vas para cada marcador).
29 pacientes presentaron clonas deficitarias de GPI en 2 líneas celulares. Relación sexo: M(17) / F(12) = 1.4 Edad media de diagnós co: 36 años (Rango 4 años – 67 años). Año de diagnós co: 2016 (6 pacientes), 2017 (10 pacientes), hasta junio del pacientes 2018 (13).
%
0.01 % -9%
˃10%
# Pacientes
8
21
% Pacientes
30 %
70 %
%
0.01 % -9%
˃10 %
# Pacientes
7
22
% Pacientes
24%
SMD 14%
76%
APLASIA 38%
CITOPENIAS 38%
APLASIA + ANEMIA HEMOLITICA ANEMIA HEMOLITICA 7% 7%
HPN es una enfermedad poco frecuente que afecta a ambos sexos y puede manifestarse a cualquier edad. En nuestro país no se cuenta con un registro de pacientes. La técnica diagnós ca de referencia es la citometría de flujo, la cual se basa en la detección en sangre periférica de clonas celulares deficitarias de GPI así como de las proteínas que se anclan a esta. Desde el 2016 hasta la fecha, se recibió en el servicio de citometría de flujo – INEN, 80 muestra de pacientes para diagnós co, de las cuales 29 muestras presentaron clonas deficitarias de GPI en población de neutrófilos y monocitos. …………………………………. Las condiciones clínicas más frecuentes asociadas a los 29 pacientes fueron la anemia aplásica y las citopenias. Se tuvieron 2 pacientes adultos con SMD y clonas deficitarias de GPI grandes (mayor a 50%), lo cual discrepa con la literatura ya que en los pacientes con SMD enden a tener menos hemólisis intravascular y un clon de HPN más pequeño debido a que las mutaciones de GPI en estos pacientes surgen en células formadoras de colonias hematopoyé cas en lugar de células madre hematopoyé cas. -------------La citometría de flujo ene alta sensibilidad para la detección porcentual de pequeñas clonas deficitarias de GPI lo cual a su vez, también permite el monitoreo de las clonas celulares, evaluando de esta manera la ac vidad de la enfermedad. ………………………… Se sugiere la u lización de protocolos estandarizados, así como un mejor correlato clínico-laboratorial.
Sutherland R., Keeney M., Illingworth A. Prac cal Guidelines for the High-Sensi vity Detec on and Monitoring of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria Clones by Flow Cytometry. Clin.Cytom. (2012) 82B:195–208. ICCS/ESCCA Consensus Guidelines for the highsensi vity flow cytometric detec on of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria (PNH): Part 2; Assay Op miza on and Reagent Selec on . Cytometry B Clin Cytom. 2018 Jan;94(1):16-22. ICCS / ESCCA Consensus Guidelines for the Clinical U lity of Tes ng for GPI-Anchor Deficient Clones in Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria (PNH) and other Bone Marrow Disorders - Part 1 Cytometry B Clin Cytom. 2018 Jan;94(1):23-48.