Antibiograma

ANTIBIOGRAMA (Técnica de Difusión en Agar o de Kirby-Bauer) Nombre y Apellidos: Vanessa Novás Velo Fecha: 26-2-2013

Ciclo: LACC1

Cultivo (nº de Cepa y Nombre): nº3009 / Mycobacterium Phlei

Antibiótico Tetracycline Streptohycin Ampicillin Erythomycin Amoxycillin Chloramphenicol

[µg, U] 30 µg 10µg 10µg 15µg 20µg 30µg

Ø (mm) 25mm 23mm 26mm 22mm

Diagnóstico R I R I R I R I R I R I

S S S S S S

Cuestiones: 1- Ante una determinada cepa bacteriana, ¿Qué concentración será mayor, la CMI o la CMB? ¿Por qué?

La concentración será mayor la CMB porque para eliminar la concentración de bacterias que ya han crecido es necesaria una mayor concentración de inhibidores para impedir su crecimiento.

2- La práctica que hemos realizado es una Técnica de difusión. Principales diferencias con las técnicas de dilución.

Los métodos de difusión se basan en la distribución homogénea del antibiótico sobre los medios sólidos de cultivo. En términos generales los antibióticos se impregnan en discos de papel que se colocan sobre placas de medio de cultivo en las que previamente se ha extendido la bacteria que se considera. Tanto la cantidad de antibiótico como el número de bacterias (inóculo) deben controlarse cuidadosamente.

El antibiótico difunde por el agar creando un gradiente de concentración decreciente según se aleja del disco. La bacteria si resulta susceptible no crece en las inmediaciones del disco y forma un halo de inhibición. Dicho halo es más grande cuanto mayor es el grado de sensibilidad de la cepa al antimicrobiano.

Esta técnica, denominada de disco-difusión es fácil de realizar, barata, aceptada por los organismos de estandarización y abierta en el sentido que permite analizar cualquier microorganismo y cualquier antibiótico. Incluso puede aplicarse directamente sobre muestras clínicas en infecciones graves como la meningitis.

El principal inconveniente es su carácter sólo cualitativo y su limitación en bacterias anaerobias y de crecimiento lento. También presenta problemas con antibióticos molecularmente grandes que difunden poco sobre el agar.

Son los métodos clásicos de antibiograma. En términos generales consisten en fabricar varios tubos de medio de cultivo con diferentes concentraciones del antibiótico en cuestión e inocularlos con la cepa que se estudia. Pueden utilizarse medios líquidos o sólidos. La CMI corresponde con el tubo de concentración más baja que logre inhibir el 90% del crecimiento bacteriano.

En función del soporte donde se realizan los sistemas de dilución se consideran métodos de macrodilución con tubos independientes y métodos de microdilución que usan placas integradas con múltiples pocillos en cada uno de los cuales se coloca una concentración diferente de antibiótico. Los sistemas automatizados de antibiograma se basan en métodos de microdilución.

Los métodos de dilución son en muchos casos los de referencia por su mayor exactitud y por su carácter cuantitativo (CMI). Se utilizan para confirmar resultados de difusión y en los estudios de sinergia y antagonismo antibiótico. Son más caros y más laboriosos.

Tienen más facilidad para contaminarse y no son tan abiertos como la difusión en cuanto al número de antibióticos. Las técnicas de dilución no pueden aplicarse directamente sobre muestras clínicas y en ocasiones la interpretación de resultados es difícil.

La lectura del antibiograma se realiza por turbidez si el medio de cultivo es líquido y por recuento de colonias en medios sólidos. Una vez obtenida la CMI correspondiente a cada antibiótico se interpreta siguiendo los puntos de corte establecidos y la cepa se clasifica como sensible o resistente a efectos clínicos.

3- ¿Qué disposición de discos de antibióticos es la mejor?

La mejor disposición de los discos antibióticos son los de la placa A porque entre ellos hay un mayor espacio y también entre los laterales de la placa, con esto, es casi imposible que los halos de inhibición se solapen, si esto ocurriese, sería más complicada la determinación del diámetro de los halos de inhibición.