antibiograma

ANTIBIOGRAMA Realizado por: Fecha: Alcance:

Alberto Miguez.

21/02/13 C.M. LAB.

lMedio utilizado: Agar Muller Hinton. l Método de siembra: siembra en césped. l Muestra microbiana tomada de caldo nutritivo con incubación

Realizada por el Dr. Carlos de Paz. l Incubación: 37º 24h.

l Muestras antibióticas: 1. Clorophenicol 30 (2010/10/15) 2. Erythroomycin(filtro rosáceo) 3. Ny statin.(filtro blanco Ny)

TABLA DE ANÁLISIS: DIAGNÓSTICO ANTIBIOTICO

[ µg, U ] Ø (mm)

RESISTENTE INTERMEDIO SENSIBLE

Cloranfenicol

30 µg

30mm

<13

14-17

>17

Erithromicin (ERY)

15 µg

30mm

<13

14-17

>18

Ny statin

100µg

0mm

• En este caso , los datos en la tabla del filtro NY statin, estan en blanco por no localizar los diametros de accion sobre este antibiotico en ninguna tabla en la web. De todas maneras,de cara a la practica, no aportaria mallor infromacion ya que no refleja ningun tipo de reaccion visible ni cuantitativa.

Análisis de resultados: Clorophenicol 30 (2010/10/15):

Podemos observar que el diámetro aproximado del contorno de acción del antibiótico es de aproximadamente 3 cm, lo que llevado a la tabla significa que se trata de un entorno con microorganismos sensibles a las características del antibiótico.

Erythonomycin:

De nuevo podemos observar que el diámetro aproximado del contorno de acción del antibiótico es también aproximadamente 3 cm, lo que nuevamente en la tabla viene a significar que los microorganismos existentes en la placa son sensibles a las características del antibiótico.

Ny statin:

En este caso, el filtro antibi贸tico no ejerce ning煤n tipo de modificaci贸n visible en el crecimiento de los microorganismos, asi pues podemos evaluar la acci贸n como nula sobre la cepa , determinando que esta , es resistente al filtro Ny statin. .

Observaciones sobre la práctica: l debido a la aparición de zonas en la placa, no afectadas por los antibióticos aun así exentas de crecimiento bacteriano, podemos entender bien que, la siembra en césped se ha realizado incorrectamente, ya que se observa que efectivamente se han realizado los movimientos estriados entrecruzados y el frotis circular que cubre la circunferencia interna de la placa, pero aparecen ciertos puntos sin desarrollo microbiano.

También es posible que este defecto en el método, haya surgido por un fallo en la extensión del agar en la placa.

l La placa utilizada no es la adecuada para este tipo de pruebas, aun así, la separación y colocación de los filtros antibióticos no respeta el campo mínimo necesario para asegurar la correcta ejecución del antibiograma. l Debido a los puntos anteriores, las circunferencias halladas en la prueba, sobre la actuación de los antibióticos con respecto a los microorganismos, no son precisas, así pues, realizaremos el análisis de la experiencia facilitando con herramientas de ayuda la obtención de conclusiones desde un punto de vista aproximado.

CUESTIONES:

1- Ante una determinada cepa bacteriana, ¿Qué concentración será mayor, la CMI o la CMB? ¿Por qué?

Para comprender la respuesta partimos por definir breves aspectos sobre la cuestion: CIM: concentracion inhibitoria minima, referida a la concentracion minima de antibiotico a la cual se inhibe el crecimiento bacteriano . Lo que se definde como bacteriostatico, esta prueba es cuantitativa.

CBM: concentracion bactericida minima: es la minima concentracion de antibiotico que se necesita para matar al 99,9% de las bacterias, cumple una funcion Bactericida.

La CIM se usa para medir sensibilidad antibiotica, en cambio la CBM se usa para medir el poder bactericida.

El antibiograma de difusion (metodo kirby- bauer) es un metodo cualitativo.y se realiza para obtener la relacion CBM/CIM que te dirá si el antibiotico tiene poder bactericida(cbm/cim menor o igual a 2) o si es bacteriostatico (cbm/cim mayor a 2) hay ciertas cepas , como las que causan enfermedades como meningitis, endocarditis osteomielitis que no basta con que las bacterias dejen de crecer ,sino que deben ser eliminadas, y esto se consigue con antibioticos BACTERICIDAS. POR EJ: obteniendo estos resultados sobre el proceso: CIM: 4 microgramos/ml CBM: 16 microgramos/ml Determinaremos una CBM/CIM = 4 ;por lo tanto el ANTIBIOTICO SERIA BACTERIOSTATICO.

2- La práctica que hemos realizado es una Técnica de difusión. Principales diferencias con las técnicas de dilución.

Métodos de antibiograma basados en difusión:  Los métodos de difusión se basan en la distribución homogénea del antibiótico sobre los medios sólidos de cultivo. En términos generales los antibióticos se impregnan en discos de papel que se colocan sobre placas de medio de cultivo en las que previamente se ha extendido la bacteria que se considera. Tanto la cantidad de antibiótico como el número de bacterias (inóculo) deben controlarse cuidadosamente. El antibiótico difunde por el agar creando un gradiente de concentración decreciente según se aleja del disco. La bacteria si resulta susceptible no crece en las inmediaciones del disco y forma un halo de inhibición . Dicho halo es más grande cuanto mayor es el grado de sensibilidad de la cepa al antimicrobiano.

 Esta técnica, denominada de disco-difusión es fácil de realizar, barata, aceptada por los organismos de estandarización y abierta en el sentido que permite analizar cualquier microorganismo y cualquier antibiótico. Incluso puede aplicarse directamente sobre muestras clínicas en infecciones graves.  El principal inconveniente es su carácter sólo cualitativo y su limitación en bacterias anaerobias y de crecimiento lento. También presenta problemas con antibióticos molecularmente grandes que difunden poco sobre el agar.

Métodos de antibiograma basados en dilución:  En términos generales consisten en fabricar varios tubos de medio de cultivo con diferentes concentraciones del antibiótico en cuestión e inocularlos con la cepa que se estudia. Pueden utilizarse medios líquidos o sólidos. La CMI corresponde con el tubo de concentración más baja que logre inhibir el 90% del crecimiento bacteriano.  En función del soporte donde se realizan los sistemas de dilución se consideran métodos de macrodilución y métodos de microdilución.  Los métodos de dilución son en muchos casos los de referencia por su mayor exactitud y por su carácter cuantitativo (CMI). Se utilizan para confirmar resultados de difusión y en los estudios de sinergia y antagonismo antibiótico. Son mas caros y más laboriosos. Tienen más facilidad para contaminarse y no son tan abiertos como la difusión en cuanto al número de antibióticos.  Las técnicas de dilución no pueden aplicarse directamente sobre muestras clínicas y en ocasiones la interpretación de resultados es difícil.  La lectura del antibiograma se realiza por turbidez si el medio de cultivo es líquido y por recuento de colonias en medios sólidos. Una vez obtenida la CMI correspondiente a cada antibiótico se interpreta siguiendo los puntos de corte establecidos y la cepa se clasifica como sensible o resistente a efectos clínicos.

3- 驴Que disposici贸n de discos de antibi贸ticos es la mejor? a

b

c

Aunque la distribucion de los filtros de antibiotico no ser铆a la optima para el proceso, tomaremos la imagen b como la mejor de las pruebas realizadas en este ejercicio.

Ya que , para la realizacion correcta deberiamos mantener entre los filtros y entre cada filtro y la circunferencia interna del contorno de la placa,un radio no menor a 25mm , incluso 30mm, teniendo en cuenta el posible halo de actuacion del antibiotico sobre los microorganismos expuestos, consiguiendo asi que la prueba obtenida sea adecuada y permita observar y obtener datos cuantitativos para determinar la funcion y accion del antibiotico con respecto a la cepa.

Asi pues , de las imagenes obtenidas en el ejercicio , en esta , (la b) observamos mejor distribucion de los filtros en la placa manteniendo las premisas anterioresl.