amilasaycatalasa

Ensayos Biotecnologicos Verónica López Rafales

Alberto Míguez Figueiras

EBT P3AB “ENZIMAS”

EBT P3AB “ENZIMAS”

Desnaturalización de la amilasa

Previamente : Prepararemos una disolucion de almid贸n , ya que la enzima amilasa cataliza esta sustancia descomponiendola en amilosa.

Ajustando la cantidad de Agua

Diluimos el producto comercial

Removemos hasta lograr La disolucion homogenea del Producto comercial.

Podemos calentar levemente Para facilitar la disoluci贸n.

A帽adimos agua hasta Conseguir la concentraci贸n Adecuada.

Dejamos reposar la disolución. ➲

Comenzaremos con la preparaciĂłn de la practica de desnaturalizacion de la amilasa, para ello prepararemos los materiales necesarios, y tendremos en cuenta varios datos sobre estas enczimas.

Utilizaremos dos entornos diferenciados y veremos el comportamiento catalizacion de las enzimas.

Prepararemos los materiales necesarios para realizar La prĂ ctica.

-2 tubos de ensayo y sus tapones.

-una gradilla.

-mechero de alcohol.

-pinzas de madera.

-Pipetas pasteur.

Los reactivos: En este caso se encuentran previamente preparados.

Agua destilada Lugol

HCL 1N

Utilidad de los reactivos: ➲

➲

El agua destilada y la disolucion de HCL -1N las utilizaremos como parte del entorno o disolucion en las que observaremos el comportamiento de las enzimas amilasa interactuando o no , con la disolucion de almidon.

El lugol, lo utilizaremos sobre las muestras y observaremos si reacciona mostrando un cambio de coloracion azulada.

La amilasa es una enzima Que se encuentra en la Saliva.

De ahi mismo tomaremos Dos muestras.

Podemos conocer el ph Aproximado de nuestras Muestras con un indicador.

A単adimos agua destilada

A単adimos unas gotas del reactivo HCL 1N

Como entorno de una De las muestras y...

En la otra muestra.

Que ha ocurrido? ➲

Al aĂąadir a las muestras con amilasa agua y HCL hemos alterado el entorno en el que se encuentra la enzima , de manera que se ha modificado su ph.

Esta enzima, en un entorno adecuado ,es catalizadora del almidon.

Observamos lo que ocurre en las dos disoluciones.

Homogeneizamos

Y continuamos; diferenciando en todo momento Las dos preparaciones.

A帽adimos la disoluci贸n De almid贸n.

Y homogeneizamos las Dos muestras.

A simple vista por el momento No se observa reacci贸n.

Ha ocurrido algo? ➲

➲

Por lo que sabemos las muestras contienen ya , amilasa, dos entornos diferenciados por el ph y una disolucion de almidón.

Sabemos que esta ultima disolución que hemos añadido interactuará con la amilasa , con lo que si esta enzima logra catalizar el almidón , este desaparecera en un tiempo aproximado de 10 minutos ...

Transcurrido un tiempo prudencial.

Utilizaremos el Lugol Este nos determinar谩 si en las Muestras existe o no almid贸n.

Podemos ver que En la muestra de H20 no reacciona

Sin embargo en la Otra muestra el Lugol reacciona Con un tono azul.

Que significa esto? ➲

La muestra de H20 no contiene almidón , lo que significa que la amilasa en esa disolucion a ph neutro continua catalizando sustancias.

➲

Sin embargo el ph ácido de la disolucion del HCL desnaturaliza la amilasa y en la muestra el almidón sigue intacto.

Para comprobar si efectivamente se trata de una interacción fisica reversible utilizaremos metodos fisicos , concretamente la T.

➲

Elevaremos la temperatura sobre la disoluc铆贸n

Observaremos Si ofrece algun cambio.

Pierde el tono azul

Lentamente

Retomando Cierta transparencia.

Enfriamos

Bien en un baso de agua O bajo el chorro del grifo.

Observamos

Del tono Transparente

Lentamente Al enfriar

Denuevo coloracion Azulada Aunque no tan Concentrada.

Fin de la parte prรกctica.

โ ฒ

Con los datos visuales y prรกcticos , ademas de los conocimientos teoricos que conocemos,determinaremos los acontecimientos observados en la prรกctica.

EBT P3AB “ENZIMAS”

Desnaturalizacion de la catalasa por calor.

La patata

contiene catalasa

Comprobaremos como el calor Afecta a esta enzima

Y para ello trocearemos Varias muestras de la misma Patata.

Procuraremos Preparar Muestras de pequeño Tamaño

Y seleccionaremos un nº De pruebas a llevar a cabo Incrementando la T de coccion De manera controlada.

Y con un termometro Mediremos las temperaturas Alcanzadas en coccion para cada Muestra Usaremos una placa Calefactora para Elevar la temperatura De las diferentes muestras De patata previamente Numeradas.

Podremos calentar varias Muestras a la vez Siempre y cuando Llevemos un control De la temperatura.

Cuando alcancemos La temperatura estipulada Para cada muestra La retiraremos del foco De calor.

Por que hacemos esto? ➲

➲ ➲

La catalasa se encuentra en los organismos vivos y entre otras cosas , es catalizadora del H2O2.

La temperatura optima para esta enzima ronda los 37Âş.

Manteniendo un incremento de la temperatura seriado y controlado , podremos determinar en que temperatura se desnaturaliza la enzima.

Cada muestra posee Su temperatura determinada

Procederemos a comprobar El estado de la enzima

Una vez retirada del Foco de calor.

Una vez lograda, aislaremos Y ...

Con la ayuda de una espatula Tomaremos una peque単a partede la muestra Y la prepararemos para reaccionar Con H2O2

Podemos prepararla En un vaso de precipitados De peque単o tama単o

O en un tubo de ensayo.

Este ultimo ofrece mayor Capacidad para cubrir Con el producto La muestr.

Una vez determinado el Recipiente,tomaremos el H2O2

Y cubriremos una a una Las muestras enumeradas Observando si producen O no , reaccion.

>

<

reaccion

temperatura

>

<

reaccion

temperatura

>

<

reaccion

temperatura

observaciones ➲

Podemos observar que a mayor temperatura la reaccion enzimatica en contacto con el H2O2 es menor, ya que esta enzima transforma el agua oxigenada en H2 y en O2 lo que genera burbujas y algo de espuma.

➲

Las medidas de incremento de T son : 20º<30º<40<50<60<70<100

Observamos que a partir de los 60º , estos incluidos, La reaccion se detiene, e incluso en la muestra Elevada a 50º la catalizacion es muy leve 20º 30º 40 º50º 60º 70º 100º.

Práctica finalizada. ➲

Sabias que la catalasa en los seres vivos ayuda a el procesamiento de patogenos.

➲

Sabias que tambien se utiliza en determinadas industrias como en la textil para eliminar los tratamientos de H2O2, e incluso en menor medida como metodo de esterilizacion en lentes de contacto.

➲

Y que los vegetales poseen menor numero de enzimas de catalasa.