UNIVERSIDAD TECNICA DE MACHALA UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUIMICAS Y DE LA SALUD ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA /10 Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc. Alumno: Zurita Morán Valeria Catalina Curso: 5to Año Paralelo: A Fecha de Elaboración de la Práctica: martes 21 de junio del 2016 Fecha de Presentación de la Práctica: martes 28 de Junio del 2016 GRUPO: 3 PRACTICA B.F.5.09-03 TÍTULO DE LA PRÁCTICA: INTOXICACIÓN POR ALCOHOL METÍLICO
ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN: rata wistar VÍA DE ADMINISTRACIÓN: Vía intraperitonial VOLUMEN ADMINISTRADO: 10mL TIEMPOS Inicio de la práctica: 07: 50 am Hora de administración del toxico a la rata wistar: 07:52 am Deceso del animal: 08:05 am (13minutos) Inicio de la destilación: 08:09 am Finalización de la destilación: 09:00 am Final de la práctica: 10:30 am OBJETIVOS Observar los síntomas dela rata wistar al administrarle alcohol metílico. Reconer el alcohol metílico en el organismo de la rata wistar, mediante reacciones de reconocimiento. SÍNTOMAS: La rata presento convulsiones. MATERIALES *Jeringuillas: 10cm y 5cm *Panema *Tabla de disección *Cinta * Equipo de disección *Gorro * Soporte Universal * Guantes *Mascarillas *Mandil * Zapatones *Tapones Materiales de vidrio
EQUIPOS *Balanza analítica
SUSTANCIAS *Cloruro de fenilhidracina al 4% *Nitroprusiato de sodio al 2.5% *Hidróxido de sodio *Ácido clorhídrico *Cloruro de fenilhidracina
TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS
*Vaso de precipitación *Equipo de destilación *Balón aforado *Tubos de ensayo
*Pipetas *Agitador *Probeta * Erlemmeyer
*Ferricianuro de potasio *Hidróxido de potasio al 12% * Ácido sulfúrico *Ácido cromotrópico *Leche *Cloruro férrico
PROCEDIMIENTO Limpiar y desinfectar el área de trabajo. Preparar el alcohol metílico que se va a administrar. Medir 10mL de alcohol metílico y administrar por vía intraperitonial a la rata wistar y colocarlo en panema. observar los síntomas de la rata wistar hasta su muerte. Colocarla en la tabla de disecciones. Se resura la parte abdominal del animal en experimentación donde se va a realizar la discección. Con la ayuda de un bisturí, abrimos y sacamos sus víceras en un vaso de precipitación. Picar las víseras lo más pequeño posible. Añadir 25 mL de ácido Tartárico Se coloca en un balón aforado la mezcla, llevar a destilar. El residuo de la destilación se obtiene por arrastre de vapor. Realizar las reacciones. Reacciones: 1. Reacción de Schiff.- Produce color violeta. 2. Reacción de Rimini.- Origina color azul intenso. 3. Con la fenilhidracina.-Da color rojo grosella. 4. Reacción de Marquis.- Se obtiene color violeta. 5. Con el ácido cromotrópico.- Da color rojo. 6. Reacción de Hehner.- Se produce color violeta o color rojo violeta.
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GRÁFICOS
1.Rata wistar
4. Colocar la rata en la panema
2. Alcohol metílico
3. Administración del alcohol metílico
5. Disección de la rata wistar
6. Picar sus víceras
7. Destilación. Posteriormente realizar las reacciones de reconocimiento.
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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO Reconocimiento en medios Biológicos. Reacción
Resultado
De schiff
Negativa
Rimini
Negativo
Fenilhidraci na
Positivo. No característic o
De Marquis
Gráfico ANTES
Gráfico DESPUÉS
Positivo. No característic o
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Con ácido cromotrópic o
Positivo No característic o
De Henner
Positivo. No característic o
OBSERVACIONES Algunas reacciones positivas no presentan la coloración respectivo, sin embargo se concideran positivas por el cambio de coloración. Las reacciones que se ralizan son colorométricas, es decir, que tienen cambio de coloración. CONCLUSIONES Se determinó mediante reacciones cualitativas el alcohol metílico presente en el organismo de la rata wistar. RECOMENDACIONES Tritura lo más posible las víseras de la rata wistar para facilitar la destilación. Utilizar toda la instrumentación de bioseguridad. Utilizar las cantidades exactas de reactivos para una buena determinación del alcohol metílico.
CUESTIONARIO 1. Explique el mecanismo de toxicidad y la farmacocinética de metanol MECANISMO DE TOXICIDAD: El metanol es metabolizado en el hígado, en la mitocondria del hepatocito, por la alcoholdeshidrogenasa a formaldehído y subsecuentemente por la aldehídodeshidrogenasa a ácido fórmico. La acidosis sistémica es causada por el ácido fórmico y por el ácido láctico que se genera por el estado de deterioro generalizado del paciente; mientras que la ceguera es causada principalmente por el formato. TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS
Tanto el etanol como el metanol compiten por la enzima alcohol-deshidrogenasa, aunque esta enzima prefiere metabolizar el etanol (afinidad 20 veces mayor); por ello el tratamiento para la intoxicación por metanol se basa en el uso de alcohol etílico. FARMACOCINÉTICA: El metanol es absorbido y rápidamente distribuido por el agua del cuerpo. No se une a proteínas. Es metabolizado lentamente por la alcohol-deshidrogenasa. La vida media oscila entre 2 y 24 horas. Apenas cerca del 3% es excretado sin cambios por el riñón y menos del 10% a través del pulmón. 2. Dosis letal del Metanol La dosis letal del metanol está estimada en 30-240 mL (20-150 gramos). La dosis tóxica mínima es aproximadamente de 100 mg/kg. Se pueden encontrar niveles elevados de metanol en sangre luego de exposición dérmica extensa o por inhalación. Una concentración sérica de 40 mg% es morta
3. ¿Cuáles son los síntomas si se produce una intoxicación por alcohol
metílico? En las primeras horas (período de latencia): Después de la ingestión, los pacientes intoxicados con metanol pueden presentar cefalea precoz (generalmente de tipo pulsante), gastritis, embriaguez, náuseas, vómito, poco diferenciables de la intoxicación etílica. La acidosis no se presenta usualmente, porque el metabolismo de las sustancias tóxicas no ocurre tan rápidamente. Se puede encontrar elevación de la brecha aniónica (anion-gap). El periodo de latencia puede ser mayor cuando el etanol es ingerido concurrentemente con el metanol. Después del período de latencia: Por encima de 30 horas, se presenta acidosis metabólica severa, desórdenes visuales, ceguera, convulsiones, coma, y puede ocurrir la muerte. Los pacientes describen alteraciones visuales, como visión borrosa, fosfenos, escotomas, colores alrededor de los objetos y otros. En el examen del fondo de ojo se puede evidenciar hiperemia
del disco óptico o papiledema. La midriasis precoz y no reactiva es un signo de mal pronóstico y significa pérdida irreparable de la función visual. 4. ¿Cúal es el metabolismo del alcohol metílico?
El etanol es un pequeño dos de alcohol de carbono que, debido a su pequeño tamaño y el grupo hidroxilo alcohólico es soluble tanto en entornos acuosos y lípidos. Esto permite etanol para pasar libremente a partir de fluidos corporales en las células. Puesto que la circulación portal de la tripa pasa primero a través del hígado, el grueso de alcohol ingerido se metaboliza en el hígado. El proceso de oxidación de etanol implica al menos tres vías enzimáticas distintas. La vía más significativo, responsables de la mayor metabolismo de etanol, se la iniciada por la alcohol deshidrogenasa, ADH. La ADH es un NAD+ enzima que requiere expresa en altas concentraciones en los hepatocitos. Las células animales (principalmente los hepatocitos) contienen ADH citosólica que se oxida el etanol para acetaldehído. El acetaldehído luego entra en la mitocondria donde se oxida a acetato por uno de varios aldehído deshidrogenasas (ALDH). Un ALDH citosólica existe pero es responsable de sólo una cantidad menor de oxidación acetaldehído. La segunda vía importante para el metabolismo del etanol es el etanol microsomal oxidante sistema (siglas en Inglés: MEOS) que implica la CYP2E1 enzimático del citocromo P450 y requiere NADPH en vez de NAD+ En cuanto a la ADH. La tercera vía implica una vía no-oxidativa catalizada por ácido graso de éster etílico (siglas en Inglés: FAEE) sintasa. Esto da como resultado última vía en la formación de etilo de ácido graso ésteres y tiene lugar principalmente en el hígado y el páncreas, los cuales son altamente susceptibles a los efectos tóxicos del alcohol. GLOSARIO
Período de latencia: latencia es una palabra que se emplea para describir un asunto u objeto que se encuentra en estado latente. Este adjetivo, por su parte, sirve para describir el estado de algo que se encuentra oculto, no está a la vista o que, en apariencia, no está activo.
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La idea de latencia está presente en el campo de la biología para nombrar el tiempo que pasa a partir de lanzado un estímulo y la aparición de una respuesta frente a él. El concepto se usa en especial para hacer foco en el periodo que abarca desde contraída una enfermedad y la manifestación de las primeras señales o síntomas.
Alcohol deshidrogenasa: enzima que participa en el metabolismo del alcohol. cataliza la oxidación de alcoholes y la oxidación de aldehídos.
Midriasis: es la dilatación pupilar del ojo, producida por la contracción de los músculos
radiales del iris. La midriasis es una reacción normal a la penumbra u oscuridad para permitir mayor entrada de luz. En ese caso es bilateral y reactiva. Esta reacción (y su contraria) requiere la integridad de un circuito que comprende: la retina, el nervio óptico y centro de la visión.
Metabolismo: El metabolismo es el conjunto de procesos y transformaciones químicas a través de las cuales se renuevan las diversas sustancias del organismo. Se activa después de la digestión, y se basa en la reabsorción y la transformación de las sustancias alimenticias.
AUTORÍA Bioq. Farmacéutico Carlos García Msc.
FIRMA DE RESPONSABILIDAD
WEBGRAFÍA
Metanol Institute. Aspectos básicos del metanol. [Internet]. [Citado el 20 de junio del 2015]. Disponible en: http://www.methanol.org/Methanol-Basics.aspx?lang=es-ES Textos científicos. Metanol [Online]. Agosto 2005. [Citado el 20 de junio de 2015]. Disponible en: http://www.textoscientificos.com/quimica/metanol GUTIÉRREZ, Myriam. Intoxicación por metanol. Capítulo XII [Internet]. Toxicología. Facultad de Medicina. Universidad Nacional de Colombia. [Citado el 20 de junio de 2015]. Disponible en http://www.bio-nica.info/Biblioteca/Gutierrez-Intoxicacion-Metanol.pdf
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