LABORATORIO DE TOXICOLOGIA UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA “Calidad Pertinencia y Calidez” UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGIA DOCENTE: BQF. CARLOS ALBERTO GARCIA GONZALES MSC. ESTUDIANTE: GUERRERO CUERO JAIRO STEVEN PARALELO: “A”
CURSO: QUINTO AÑO
FECHA DE REALIZACION DE LA PRACTICA: Martes, 12 de Julio del 2016 FECHA DE PRESENTACION DE LA PRÁCTICA: Martes, 19 de Julio del 2016
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10 PRACTICA Nº BF.5.09-05 TITULO DE LA PRÁCTICA:
INTOXICACION POR CLOROFORMO
ANIMAL DE EXPERIMENTACION: Rata wistar. VIA DE ADMINISTRACION: Vía Parenteral. VOLUMEN ADMINISTRADO: 10 ml de Solución de Cloroformo TIEMPOS: Inicio de la práctica: 8:15 am Hora de disección: 9:00 am Hora inicio de destilado: 9:30 am Hora de finalización de destilado: 9:55 am Hora finalización de la práctica: 10:30 am OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:
Presenciar la acción toxicológica del cloroformo mediante la observación de la sintomatología que presenta el animal de experimentación (rata wistar.).
“Todo es veneno, nada es veneno, todo depende de la dosis.” (Paracelso)
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Identificar la presencia del cloroformo en las vísceras de la rata wistar, mediante reacciones químicas cualitativas
FUNDAMENTO TEÓRICO: El cloroformo es el triclorometano (CHCl3). Inicialmente se empleó como agente anestésico, pero poco después se abandonó este uso por s gran toxicidad hepática y renal.es un líquido incoloro y no inflamable, de olor y sabor dulzón, extremadamente volátil y muy liposoluble. El material de la investigación se somete a destilación con arrastre de vapor en medio acido tartárico, y en el destilado se realiza las reacciones de identificación. En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras tantas de alcohol de 95ª que contiene un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se observa que esta arde con un llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata. INSTRUCCIONES: 1. Trabajar con orden, limpieza y sin prisa. 2. Mantener las mesas de trabajo limpias y sin productos, libros, cajas o accesorios innecesarios para el trabajo que se esté realizando. 3. Llenar ropa adecuada para la realización de la práctica: bata, guantes, mascarilla, gorro, zapatones. 4. Utilizar la campana extractora de gases siempre que sea necesario. MATERIALES:
Soporte de Hierro Pinza Vasos de precipitación (250 ml) Pipetas Matraz Erlenmeyer (250 ml) Tubos de ensayo Probeta (50 ml) Perlas de vidrio Agitador Embudo
SUSTANCIAS:
Alcohol 95% Nitrato de plata Potasa alcohólica 1:10 Percloruro de hierro Beta-naftol Piridina Clorhidrato de piperacina Yodo Reactivo de Benedict
“Todo es veneno, nada es veneno, todo depende de la dosis.” (Paracelso)
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Balón de destilación Mechero de alcohol Tabla de diseccion Agitador Espátula Gradilla
OTROS
Mandil Guantes Mascarilla Gorro Estuche de disección Aguja hipodérmica (10 ml) Cronómetro Panema Fosforo Cocineta Piola Aro de hierro Funda plastica
EQUIPOS: ● ● ● ● ●
Balanza Analítica Equipo de destilación Baño María Campana
MUESTRA
Destilado de vísceras de rata wistar.
Balanza Analítica. ACTIVIDADES A REALIZAR: 1. Limpiar el mesón de trabajo y tener listo los materiales a utilizarse. 2. Preparar y medir 10 ml de una solución de cloroformo. 3. Agarrar al animal de experimentación (rata wistar) por sus patas y mediante una aguja hipodérmica administrar 10 mL de la solución de cloroformo. 4. Colocar al animal de experimentación (rata wistar) en la panema y observar los efectos de la intoxicación. 5. Luego del deceso, prodecer con la diseccion del al animal de experimentación y recolectar sus fluidos y vísceras, picarlas lo más finas posibles en un vaso de precipitación. 6. Verter las vísceras en un balón de destilación, luego agregar 50 ml de ácido tartárico al 4% y perlas de vidrio. 7. Destilar y recoger el destilado en NaOH 0.1 N. 8. Con aproximadamente 15 mL del destilado recogido (muestra) realizar las reacciones de reconocimientos en medios biológicos.
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Reacción de dunas.- al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio. CHCl3 + 4 KOH ClK + HCO2K + H 2 O
Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frio o un precipitado en caliente. A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoniaco diluido. 2. Reacción de Lustgarten.- al calentar la muestra con unos miligramos de beta naftol y una solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul. Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo as o menos oscuro; con resorsinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo. 3. Reacción de fujiwara.-En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de lejía de sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo; se agitan, podemos por unos instantes en baño de María y se deja en reposo; se convierte en una materia coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina . 4. Reacción de roseboom.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina ; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el alcaloide. 5. Reacción de Benedict.- si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de Benedict, y de acuerdo a la concentración del toxico puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo. GRAFICOS: PREPARACION DE LA MUESTRA
1. Pesar y diluir 10g de Nitrato de plomo.
2. Inyección del toxico (Nitrato de plomo) por vía intraperitoneal.
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3. Colocar el cobayo en el panema.
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4. Disección del cobayo
5. Colocar las vísceras (picadas lo más finas posibles) en un balon de destilacion.
6. Destilar y recoger el destilado en NaOH 0.1 N.
REACCIONES DE INDETIFICACION: Reacción de dunas:
ANTES: TRASLUCIDO
Reacción de Lustgarten:
DESPUES: COLOR ROJO (POSITIVO)
Reacción de fujiwara:
ANTES: TRASLUCIDO
DESPUES: COLOR AZUL INTENSO (POSITIVO)
ANTES: TRASLUCIDO
Reacción de roseboom:
DESPUES: COLOR ROSA A ROJO INTENSO (POSITIVO)
ANTES: TRASLUCIDO
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DESPUES: COLOR NARANJA A ROJO LADRILLO (POSITIVO)
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LABORATORIO DE TOXICOLOGIA Reacción de Benedict:
ANTES: TRASLUCIDO
DESPUES: GAMA DE COLORES (+)
AMARILLOVERDOSO
AMARILLO
NARANJA
OBSERVACIONES: No se pudo realizar la práctica experimentalmente, pero mediante presentaciones virtuales se tuvo una idea de la misma. Mediante la investigación se evidencio lo siguiente: Se le administró al cobayo 10 ml de solución de cloroformo, al colocar en el panema al animal de experimentación “Wistar” se observó a los 5 minutos manifestaciones como: depresión del SNC, perdida de la actividad motora, lagrimeo, convulsiones y a los 7 minutos presento hipoxia y finalmente a los 28 minutos se produjo su muerte. CONCLUSIONES: ●
Se observó la toxicidad del cloroformo en el animal de experimentación (rata “Wistar”), por medio de sus manifestaciones ante la exposición con este tóxico, siendo las convulsiones e hipoxia las manifestaciones más recurrentes y luego el deceso o muerte. ● También se evidenció la presencia del cloroformo mediante reacciones químicas cualitativas, en el destilado obtenido de la materia biológica del animal de experimentación rata “Wistar”. RECOMENDACIONES:
Utilizar guante, gorro, zapatones y fundamentalmente mascarilla como medida de bioseguridad.
Aplicar las normas de Bioseguridad en el Laboratorio de toxicología.
Preparar los reactivos a la concentración adecuada, para evitar errores en la práctica o agonía en el caso de la solución de cloroformo aplicada a la rata “Wistar”.
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Asegurarse que el equipo esté correctamente sellado, ya que de esta forma logramos impedir el escape de los vapores en el proceso de la destilación, evitando así una intoxicación.
CUESTIONARIO: 1.
2.
Realice una breve descripción del cloroformo? El cloroformo es un líquido incoloro con olor dulce característico, muy volátil. Se obtiene por medio de una cloración cuidadosamente controlada de metano, por tratamiento de acetona con polvos blanqueadores (CaOCl2) y ácido sulfúrico. Cuáles son los niveles de toxicidad del cloroformo?
El cloroformo es un depresor del sistema nervioso central y produce efectos tóxicos sobre el hígado y los riñones. IDLH: 1000 ppm LD50 ( en ratas): 1 g/Kg. LDLo (oral en humanos): 140 mg/Kg LCLo ( inhalado en humanos): 25000 ppm/5 min LC50 (inhalado en ratas): 47.7 mg/m3 /4 h Niveles de irritación a piel de conejos: 10 mg/24 h, suave; 500 mg/ 24 h, suave. Niveles de irritación a ojos de conejos: 148 mg; 20 mg/24 h, moderada. 3.
Cuál es la acción toxica del cloroformo según la vía de entrada en el organismo?
Inhalación: Los signos de intoxicación aguda con vapores de cloroformo, en general, son: depresión respiratoria, neumonitis química, edema pulmonar, acidosis metabólica, depresión del sistema nervioso central, dolor de cabeza, fatiga, adormecimiento y pérdida del equilibrio. Contacto con ojos: Ocasiona conjuntivitis, e, incluso, quemaduras dolorosas, ya sea en forma de vapor o líquido. Contacto con la piel: No hay una absorción significativa a través de la piel. Ingestión: Provoca náusea, vómito, salivación, anorexia, irritación gastrointestinal y daño a hígado y riñones GLOSARIO: EDEMA PULMONAR: Es acumulación anormal de líquido en los pulmones que lleva a que se presente dificultad para respirar una. ACIDOSIS METABÓLICA: Acidosis metabólica es una afección en la cual hay demasiado ácido en los líquidos corporales. IRRITACIÓN CORNEAL. Enrojecimiento que se produce por irritación de los vasos sanguíneos de la conjuntiva ocular.
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LABORATORIO DE TOXICOLOGIA IDLH: Immediately dangerous to life or health (peligro inmediato para la vida o la salud) TOXICOCINÉTICA: La Toxicocinética estudia el proceso que sufre un tóxico desde el ingreso a un organismo hasta su eliminación. WEBGRAFIA:
Massie BM. Heart failure: pathophysiology and diagnosis. In: Goldman L, Schafer AI, eds. Goldman's Cecil Medicine. 24th ed. Philadelphia, PA: Saunders Elsevier; 2011:chap 58.
D. Dugdale C., CLINICADAM, Acidosis Metabolica, (en línea), 15 de noviembre de 2009. Revisado el: 17 de Julio del 2016. Disponible en: https://www.clinicadam.com/salud/5/000335.html Curtis, H & Barnes, N.S. (2000). Biología (6a Ed.). Buenos Aires: Editorial Medica Panamericana
REGION DE MURCIA, Servicio de Sanidad Ambiental, RIESGO QUÍMICO ACCIDENTES GRAVES-CLOROFORMO, (en línea), Julio 2008. Revisado el: 17 de Julio del 2016. Disponible en: https://www.murciasalud.es/recursos/ficheros/137913-CLOROFORMO.pdf
C.A. Sánchez S., A. Chacón P., Intoxicaciones por hidrocarburos, cloroformo, (en línea),2010. Revisado el: 17 de Julio del 2016. Disponible en: http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/cd68/CASanchez.pdf
Machala, 19 de Julio del 2016
FIRMA DE RESPONSABILIDAD JAIRO STEVEN GUERRERO CUERO CI: 0705851368
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