UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA PRÁCTICA B.F 5 09.04
Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc. Alumno: Jonathan Carlos Miñan Rengel Fecha Martes, 28 de Junio del 2016 Grupo: #6 Curso: 5to Año “A”de Bioquímica y Farmacia Paralelo: A Título de la Práctica: INTOXICACIÓN POR ETANOL
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Animal de Experimentación: Rata wistar Vía de Administración: Vía Intraperitoneal TIEMPOS: Inicio de la práctica: 7:30 am Hora de disección: 8:00am Hora Inicio de Destilado: 9:30am Hora de finalización de Destilado: 9:40am Hora finalización de la práctica: 10:30am
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
Observar la reacción que presenta la rata wistar ante la Intoxicación por Metanol. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el etanol. Conocer mediante pruebas de identificación la presencia de etanol.
MATERIALES: Jeringuilla de 10 ml Soporte universal Vaso de 500 ml Agitador Equipo de disección Panema Tabla de disección Aro metálico Gillette Erlenmeyer de 200 ml Refrigerante o equipo de destilación
SUSTANCIAS
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis” (PARACELSO)
KMnO4 H2SO4 H2C2O4 Fushina Cloruro de Ferrico Nitroprusiato de Sodio NaOH HCl K3[Fe(CN)6] KOH Ácido Cromatropico Etanol
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Corcho Lámpara de alcohol Perlas de vidrio Balanza Probeta Balón volumétrico Cinta
PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. 5. 6.
Tener todos los materiales listos en la mesa de trabajo. Administrar 5ml de etanol por vía intraperitoneal. Colocar la rata wistar en la campana. Observar las manifestaciones que se presentan y en qué tiempo hasta su muerte. Con la ayuda de una Gillette procedemos abrir a la rata. Observamos órgano por órgano las repercusiones que provoco el etanol en la rata. 7. Colocamos las vísceras (picadas lo más finas posibles) en el recipiente adecuado (Vaso de precipitación) y trituramos. 8. Una vez ya armado el equipo de destilación los vapores producidos por las vísceras se recogerán en un matraz. 9. Y con esta solución procedemos a realizar las pruebas de caracterización para etanol. REACCIONES: 1. Reacción de Schiff: A una pequeña porción de la muestra, se añade 1ml de permanganato de potasio al 1% después de mezclar se adiciona unas gotas de ácido sulfúrico puro, se deja reposar por tres minutos y agregan algunas gotas de solución saturada de ácido oxálico (hasta que decolore la mezcla); la mezcla adquiere un color madera que se decolora totalmente luego de agregarle nuevamente algunas gotas de ácido sulfúrico puro. Finalmente se le añade 1ml de fushina bisulfatada (Reactivo de Schiff), con lo cual se produce un intenso color violeta en caso de positivo. 2. Reacción de Rimini A 5 ml de destilado se agregan 10 gotas de cloruro de fenilhidracina al 4 %, 4 gotas de solución de nitroprusiato de sodio al 2.5% recién preparado y 1ml de solución de hidróxido de sodio, se produce una coloración azul intensa. 3. Con la Fenilhidracina En un medio fuertemente acidificado con ácido clorhídrico a una pequeña cantidad de muestra se agrega un pedacito de cloruro de fenil hidracina, 2-4 gotas de solución de ferricianuro de potasio al 5 – 10% y algunas gotas de hidróxido de potasio al 12% se obtienen una coloración rojo grosella. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis” (PARACELSO) Página
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4. Reacción de Marquis Se toma 1ml de destilado y se agregan 5ml de ácido sulfúrico concentrado, se agita luego con una solución sulfúrica de morfina (0.2 gr de cloruro de morfina en 10ml de ácido sulfúrico concentrado), se obtiene enseguida o después de algún tiempo un color violeta. 5. Con el Ácido Cromotrópico Con este ácido en un medio fuertemente acidificado con ácido sulfúrico, el formaldehido produce una coloración roja después de calentarla ligeramente. 6. Reacción de Hehner Se mezcla una gota de destilado con algunos mililitros de leche, se estratifica con ácido sulfúrico concentrado al que se le han agregado trazas de cloruro férrico (5 gotas de cloruro férrico en 500ml de ácido sulfúrico); en caso positivo, en la zona de contacto se produce un color violeta o azul violeta.
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GRÁFICOS:
1. Animal de
6. Llevar a destilación.
experimentación Rata 7. Obtener el filtrado para realizar las reacciones correspondientes.
2. Inyectar 10 ml el toxico (etanol)
3. Observar los síntomas de la rata luego de la administración del toxico hasta la muerte
5. Extraer y Triturar las vísceras, colocar 50 perlas de vidrio, para la destilación.
4. Colocar a la rata en la tabla de disección
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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO
REACCIÓN DE SCHIFF: Positivo no característico ANTES
DESPUES
REACCIÓN DE RIMINI: positivo no característico DESPUES
ANTES
CON LA FENILHIDRACINA: positivo no característico ANTES
DESPUES
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REACCIÓN DE MARQUIS:
positivo no característico
ANTES
DESPUES
CON EL ÁCIDO CROMOTRÓPICO: Positivo no característico ANTES
DESPUES
REACCIÓN DE HEHNER: Positivo no característico ANTES
DESPUES
OBSERVACIONES
La hora de administración de la dosis fue a las 7:50 am se le administro 5 ml de la solución preparada por vía parenteral, al momento de la aplicación a la rata wistar presento una actitud temblorosa y desconcertante.
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Pasados 5 minutos presento debilidad, 3 minutos después su sistema nervioso se encontró deprimido, 5 minutos después la debilidad fue aún más visible hasta el punto que se recostó, 20 minutos después de la primera dosis es decir a las 8:55 se le administro 3 ml más de la solución, dadas las circunstancias que no moría y finalmente a las 09:00 murió. Al realizar la disección de la rata wister observamos que los intestinos fueron los más afectados, tenían un color oscuro y la vesícula se encontraba aumentada de tamaño.
CONCLUSIONES
Al culmino de esta práctica las reacciones que presento la rata wister ante la intoxicación por etanol fueron fueron provocadas por el toxico (etanol), así como también hemos identificado la presencia de etanol en la sangre del animal mediante pruebas específicas para el reconocimiento de este compuesto, en la cual este ocasionar el coma o la muerte. Dentro de las 6 reacciones de reconocimiento que existen para Metanol trabajamos las 5 posteriores, obteniendo los siguientes resultados: Reacción de Schiff: Positivo No característico Reacción de Rimini: Positivo No característico Con la Fenilhidracina: Positivo Característico Con el Ácido Cromotrópico: Negativo Reacción de Hehner: Negativo El conjunto de pruebas nos da la pauta como Bioquímicos Farmacéuticos para la comprobación si existió o no una intoxicación por Etanol.
RECOMENDACIONES Correcta aplicación de la dosis y por la vía adecuada de una manera profesional para así evitar inconvenientes posteriores Utilizar el equipo de Bioseguridad necesario para evitar cualquier contacto con los tóxicos que estamos utilizando. Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio. CUESTIONARIO
¿Qué es el etanol? El compuesto químico etanol, conocido como alcohol etílico, es un alcohol que se presenta en condiciones normales depresión y temperatura como un líquido incoloro e inflamable con un punto de ebullición de 78,4 °C. Miscible en agua en cualquier proporción; a la concentración de 95 % en peso se forma una mezcla azeotrópica. Su fórmula química es CH3-CH2-OH (C2H6O o, conservando el OH, C2H5OH), principal producto de
las bebidas
alcohólicascomo
el vino (alrededor
de
un
13 %),
la cerveza (5 %),
los licores (hasta un 50 %) o los aguardientes (hasta un 70 %).
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¿El etanol como combustible? El etanol también se utiliza cada vez más como añadido para oxigenar la gasolina normal, reemplazando al éter metil tert-butílico (MTBE). Este último es responsable de una considerable contaminación del suelo y del agua subterránea. También puede utilizarse como combustible en las celdas de combustible. Como fuente para la producción de etanol en el mundo se utiliza fundamentalmente biomasa. Este etanol es denominado, por su origen, bioetanol. ¿Cómo se produce el etanol? El etanol es un alcohol líquido compuesto de carbono, hidrógeno y oxígeno que resulta de la fermentación de azúcar o de almidón convertido en azúcar, extraídos ambos de la biomasa. También puede producirse a partir de la celulosa contenida principalmente en los desechos agrícolas, urbanos o forestales. Desde la antigüedad se obtenía el etanol por fermentación anaeróbica de una disolución con contenido en azúcares con levadura y posterior destilación Se usa para las bebidas alcohólicas, aunque también puede que sea el combustible del futuro (!) Por ser un carburante renovable, puede que reemplaza a la gasolina GLOSARIO HIPOXIA._ Es un estado del cuerpo donde se caracteriza por la falta de Oxígeno, es muy común en las montañas. INTRAPERITONEAL._ Que está localizado en el interior de la cavidad peritoneal. Se dice de la vía de administración de fármacos por la cual estos son introducidos directamente dentro de la cavidad peritoneal. TÓXICO._ La toxicidad es la capacidad de cualquier sustancia química de producir efectos perjudiciales sobre un ser vivo, al entrar en contacto con él. Tóxico es cualquier sustancia que provoque daño. METANOL._ El compuesto químico metanol, también conocido como alcohol de madera o alcohol metílico es el alcohol más sencillo. A temperatura ambiente se presenta como un líquido ligero, incoloro, inflamable y tóxico que se emplea como anticongelante, disolvente y combustible. Su fórmula química es CH3OH (CH4O) CONVULSIONES._ un síntoma transitorio caracterizado por actividad neuronal en el cerebro que conlleva a hallazgos físicos peculiares como la contracción y distensión repetida y temblorosa de uno o varios músculos de forma brusca y generalmente violenta(Clínica, Galega, & Interna, 2010).
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CARBÓN ACTIVADO._ Carbón activado es un término genérico que describe una familia de adsorbentes carbonáceos altamente cristalinos y una porosidad interna altamente desarrollada.
BIBLIOGRAFIA
Monsalve G., J. F., Medina de Perez, V. I., & Ruiz Colorado, A. A. (2006). Ethanol production of banana shell and cassava starch. Dyna, 150, 21–27. Liebig, Justus (1834) "Ueber die Constitution des Aethers und seiner Verbindungen" (On the constitution of ether and its compounds), Annalen der Pharmacie, 9 : 1–39. From page 18
FIRMA
_________________________ Jonathan Carlos Miñan Rengel
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