Tecnicas de Laboratorio nº407

Nº 407 - DICIEMBRE 2015

SUMARIO

hazte fan

698

novedades

704

catálogos

Catálogos y documentación

708

biocombustibles

Biocombustibles y sus precursores: un reto para los analizadores elementales comunes Dra. Angela Gröbel, Analytik Jena AG.

712

encuentros

Amplio respaldo sectorial en la primera reunión del comité organizador de iWater Barcelona

714

piensos

Control de autenticidad y trazabilidad de piensos (y II) Técnicas inmunológicas y genéticas Nicolette Pegels, Teresa García, Rosario Martín, Isabel González.

725

cambio climático

El Laboratorio de Ingeniería Marítima de la UPC ensaya soluciones para combatir el cambio climático

728

encuentros

Simposio ‘Tratamiento precoz que impacta a largo plazo’, en la LXVII Reunión Anual de la SEN

730

I+D

I Reunión Multidisciplinar de Tumores de Cabeza y Cuello en Extremadura

“La Editorial a los efectos previstos en el artículo 32.1 párrafo segundo del vigente TRLPI, se opone expresamente a que cualquiera de las páginas de esta obra o partes de ella sean utilizadas para la realización de resúmenes de prensa.

Cualquier forma de reproducción, distribución, comunicación pública o transformación de esta obra solo puede ser realizada con la autorización de sus titulares, salvo excepción prevista por la ley. Diríjase a CEDRO (Centro Español de Derechos Reprográficos) si necesita fotocopiar o escanear algún fragmento de esta obra (www.conlicencia.com; 91 702 19 70 / 93 272 04 47)”.

Revista disponible también para:

732

noticias

743

guía del comprador

técnicas de LABORATORIO

696

Nº 407 DICIEMBRE 2015

novedades

Novedades

IZASA

Molinos de cuchillas Fritsch En los molinos de cuchillas Fritsch es posible desmontar, en pocos segundos y sin herramientas, todas las piezas de molienda para su limpieza de forma rápida, sencilla y eficiente.

Son equipos óptimos para triturar materiales fibrosos y duros, materiales de plástico, mezclas de materiales heterogéneos y para análisis RoHS. Ideales para la reducción de tamaño de materiales blandos a semiduros, duro-elásticos y fibrosos, así como para las mezclas heterogéneas, estos molinos son imprescindibles para los sectores ambiental, de plásticos, agricultura, forestal, textil, materiales de construcción, química, productos alimenticios así como para la preparación de muestras analíticas y para análisis RoHS, como por ejemplo cristales LCD y teclados para teléfonos móviles, circuitos integrados, placas de circuitos impresos, etc.

A la hora de trabajar con un molino a cuchillas, la velocidad y la sencillez con las que es posible limpiarlo a diario en el laboratorio son criterios especialmente importantes. Por esta razón, al desarrollar el nuevo Pulverisette 19 de Fritsch, no se han escatimado esfuerzos para que su limpieza sea sencilla y rápida.

Mientras que con otros molinos se pierde el tiempo soltando tornillos, el molino de cuchillas de Fritsch se limpia en segundos, gracias a que la cámara de molienda se puede abrir fácilmente, lo que permite extraer tanto el rotor como el tamiz con un solo movimiento de la mano. Solo en los molinos de cuchillas Fritsch es posible abrir la puerta y toda la parte superior de la carcasa. La puerta puede incluso desmontarse del todo. Y eso no es todo: el rotor de los molinos de cuchillas Fritsch puede desmontarse fácilmente sin herramientas y puede girarse a mano cuando el molino está abierto, lo que facilita una limpieza rápida entre diferentes procesos de molienda.

El resultado: una cámara de molienda completamente abierta con un espacio muerto minimizado para una rápida y sencilla

técnicas de LABORATORIO

limpieza, así como para una protección fiable frente a contaminación cruzada.

El separador ciclónico de Fritsch ofrece grandes posibilidades.

En combinación con el Pulverisette 19, el equipo patentado de aspiración de muestras Fritsch, con separador ciclónico, proporciona un sencillo llenado, un rápido flujo y una buena refrigeración gracias a su potente función de aspiración por depresión. También evita de forma efectiva que el material molido salga volando durante el llenado y ofrece muchas posibilidades, de otra manera inalcanzables, a la hora de procesar mezclas heterogéneas de elementos, como combustibles secundarios para la industria del cemento.

Fritsch ofrece 6 modelos diferentes de molinos a cuchillas con una amplia gama de accesorios, un tamaño máximo de muestra de 70x70 mm - 120x85 mm, un rendimiento máx. de 50 a 85 l/h, una granulometría final de 0,2 -20 mm, una velocidad del rotor de 300-3.400 rpm y también una versión 316L resistente a la corrosión. www.izasascientific.com (Véase anuncio en la sección Guía del Comprador.)

698

Nº 407 DICIEMBRE 2015

novedades SARTORIUS STEDIM BIOTECH

Sistema biorreactor ambr® 15 para fermentación a escala micro Sartorius Stedim Biotech (SSB), proveedor internacional para la industria biofarmacéutica, presentó el 3 de noviembre el sistema ambr® 15 para fermentación, un sistema microbiorreactor automatizado diseñado para mejorar la detección de la cepa microbiana, con funciones avanzadas de apoyo en cultivos microbianos por lotes alimentados.

El nuevo sistema, basado en la tecnología de referencia del microbiorreactor ambr 15, ha sido diseñado para cumplir los requerimientos de la fermentación microbiana. Consta de 24 microbiorreactores agitados single-use (cada uno con un volumen de trabajo de 8-12 ml) integrado en una estación de trabajo fácil de usar y automatizada. El sistema ofrece un procesamiento paralelo y un control a distancia de 24 microbiorreactores, proporcionando a los científicos de fermentación resultados consistentes y eficientes desde una plataforma de detección en fase inicial mejorada.

El ambr 15 para fermentación ha sido diseñado para proporcionar altas tasas de transferencia de oxígeno, pH rápido y adiciones de alimentación y es ideal para evaluar los efectos de diferentes cepas con cultivos microbianos. El ambr 15 para fermentación mide el pH y OD cada 12 s y se bombean líneas de líquido para adición de base y de alimentación en cada microbiorreactor, posibilitando el control del pH ajustado y un suministro de alimentación semicontinuo. Además, el volumen de trabajo de 10 ml permite múltiples muestreos durante el proceso de fermentación para evaluar el crecimiento del cultivo y la producción de proteína, proporcionando así una comprensión más detallada del proceso.

El recipiente del microbiorreactor single-use contiene un impulsor adecuado para fermentación y proporciona una mejora de la capacidad comparada con los sistemas de cultivo por agitación. El intervalo de pH de 6-8 es ideal para aplicaciones biofarmacéuticas con E. coli y cultivos con requerimientos similares.

Los recipientes del ambr 15 son single-use y se suministran estériles, lo que elimina el tiempo de limpieza y esterilización, disminuyendo en muchas horas los tiempos de respuesta entre ejecuciones.

El Dr. Barney Zoro, Product Manager de ambr en SSB, explicó: “Los científicos han estado tratando de modelar la fermentación microbiana y la detección de cepas microbianas usando placas de agitación y matraces, pero estos dispositivos son modelos pobres en fase inicial ya que no son capaces de conseguir densidades de células representativas, y no permiten el

técnicas de LABORATORIO

Nuevo sistema microbiorreactor ambr® 15 para fermentación diseñado para mejorar las aplicaciones de visualización de cepas microbianas.

seguimiento y el control de pH y OD. Teniendo en cuenta estos aspectos, hemos desarrollado ambr 15 para fermentación que tiene un sistema de muestra de datos consistente, repetible y una selección predictiva de cepas. Esto demuestra que el sistema es una excelente herramienta para mejorar aplicaciones de detección y estamos seguros de que los científicos de fermentación reducirán significativamente tiempo y recursos al realizar estudios de selección de cepas microbianas mejorados usando el sistema ambr 15 para fermentación.”

El ambr 15 para fermentación es la última incorporación a la gama de productos ambr, que también incluye los sistemas ambr 15 para cultivo celular y ambr 250. Los sistemas ambr se utilizan ampliamente para el desarrollo de líneas celulares y la optimización de procesos en laboratorios biofarmacéuticos, biotecnológicos y académicos y están probadas para proporcionar un modelo fiable y una escalabilidad consistente para una gama de procesos aguas arriba. www.sartorius.com

699

Nº 407 DICIEMBRE 2015

novedades ORTOALRESA

Próximo lanzamiento de la nueva serie 22 Siguiendo su objetivo de incluir nuevos desarrollos e innovaciones en sus gamas de centrífugas, Ortoalresa tiene previsto lanzar en 2016 una nueva línea: la Serie 22. Esta nueva serie cuenta con tres líneas de centrífugas: Consul 22, Digtor 22 y Magnus 22, tanto en sus versiones ventiladas como refrigeradas.

Entre las novedades que presentan estas centrífugas cabe destacar: • Nueva pantalla TFT táctil a color. Además de tener mayor tamaño y resolución, cuenta con un mayor número de memorias, opción de trabajar con nuevos programas como el linked program o start delay, múltiples mensajes que permiten que el usuario esté informado del proceso en todo momento, empleo de iconos que facilitan su usabilidad, etc.

• Nuevo sistema de detección de desequilibrio (ULS), este sistema muestra en pantalla el vaso que está produciendo desequilibrio en el rotor.

• Sistema de control de aceleración y frenada progresivo (PCBS) que permite al usuario mantener la integridad de las diferentes capas de la muestra tras el centrifugado, gracias a sus 175 rampas de frenado/aceleración.

• Dos nuevos rotores que aumentan la capacidad de la series Digtor 22 y Magnus 22 de 4 tubos de 250 ml a 6 tubos de

250 ml, y la capacidad máxima de ambas series de 4 tubos de 750 ml a 4 tubos de 1.000 ml.

La Serie 22 de centrífugas, englobadas dentro de la línea para aplicaciones generales, tendrán aplicación en numerosos campos como biotecnología, control de calidad en alimentación/ bebidas, laboratorios, hospitales, industria, petroleoquímica, I+D, etc. www.ortoalresa.com

BERGHOF

Determinación del agua sin sustancias químicas Para garantizar la elevada calidad de la materia prima y de los productos finales, la determinación del contenido de agua es un criterio decisivo en un gran número de sectores industriales.

El Berghof easyH2O one es un método alternativo a la valoración convencional según Karl Fischer y permite omitir los reactivos tóxicos o especiales.

EasyH2O combina la evaporación térmica de agua con un sensor de agua selectivo y electroquímico, creando así un nuevo procedimiento innovador para la determinación de agua. El resultado no se adultera, como en las técnicas gravimétricas de medición de humedad, a causa de las sustancias que evaporan en la muestra junto al agua. Es por ello que da resultados reproducibles y precisos y permite la comprobación separada de agua libre superficial y capilar, así como agua ligada.

El agua se evapora de la muestra dentro de un horno programable y se conduce en un flujo de gas portador hacia el sensor.

El sensor coulométrico absorbe el agua en una capa de pentóxido de fósforo (P2O5) y lo electroliza al instante. La cantidad de carga necesaria es proporcional a la cantidad de agua y se determina. El sensor se regenera por lo tanto en forma autónoma y se encuentra siempre en orden de servicio.

técnicas de LABORATORIO

El mando es sumamente sencillo. No se necesitan químicos especiales ni tóxicos para que el sistema funcione. El usuario se beneficia de los gastos reducidos de operación y eliminación, y de la entrada reducida de valores en blanco a través de químicos.

(Nota preparada por la Dra. Kerstin Dreblow, Head of Application Lab and Marketing de Berghof.) www.berghof.com www.inycom.es (Véase anuncio en la sección Guía del Comprador.)

700

Nº 407 DICIEMBRE 2015

novedades RETSCH

Línea X-Large de grandes trituradoras y molinos Retsch GmbH, especialista en la producción de equipos de laboratorio para homogeneización de muestras y análisis por tamizado, ha ampliado su catálogo de productos con una línea completa de instrumentos para aplicaciones que impliquen grandes tamaños iniciales y elevadas producciones. El nuevo programa se integrará en la actual línea de productos con la denominación “X-Large” y la complementará en muchas áreas. Ahora Retsch podrá ofrecer, por ejemplo, una gama de trituradoras de mandíbulas para tamaños desde 40 mm a 350x170 mm. Los nuevos modelos XL de molinos de bolas, molinos vibratorios de discos y divisores de muestras, tienen una capacidad de producción sustancialmente más elevada que los modelos a escala de laboratorio. La nueva gama también incluye varios equipos para la determinación de los “Bond Grinding Indices”.

Esta ampliación del programa dará a Retsch acceso a mercados como los de carbón, acero y minería, que hasta ahora solo podía atender con instrumentos de laboratorio para pequeños volúmenes de muestra. Retsch, que celebra su 100 aniversario este año, es ahora el único proveedor global capaz de ofrecer desde un molino de bolas para nanomolienda hasta una trituradora de mandíbulas con una capacidad de producción de 3.500 kg/hora, cubriendo por consiguiente todo el campo de reducción de tamaños.

Retsch provee soluciones de preparación de muestras para análisis y en caracterización de sólidos. Con una base de 100 años de experiencia Retsch desarrolla equipos innovadores para reducción de tamaño y tamizado, que se caracterizan por sus excelentes prestaciones, facilidad de manejo, seguridad y durabilidad.

www.retsch.com

LEE

Electroválvula 2/2, serie HDI La serie HDI de electroválvulas de Lee Company se caracteriza por: • dos vías normalmente cerradas • para gases y líquidos no agresivos • montables en el distribuidor. www.leeimh.com

técnicas de LABORATORIO

701

Nº 407 DICIEMBRE 2015

novedades SOCOREX

Reagent reservoirs Smart laboratory work starts with reliable precision instruments and well adapted consumables. Socorex has something to offer in this field: • V-shape reagent reservoir, 75 ml - With embossed graduations and rounded corners for easy pouring - Made of autoclavable polypropylene • V-shape reagent reservoir with lid, 125 ml - Hinged lid closure, stackable for storage - Made of autoclavable polypropylene

• 8/12 channel reservoirs, 48 ml (total capacity) - Each channel with rounded bottom and perfect bench stability - Made of polystyrene - Two version available: a) non-sterile in bulk or b) sterilized by X-ray radiation, single wrapped.

Ask your local distributor for free samples. www.socorex.com

LEE

Orificios calibrados de precisión Lee propone una gama de orificios calibrados de precisión que destacan por: • disponibles de acero inoxidable o latón • para inserción en plástico o metal • con o sin rejilla protectora • 100% controlados y probados • caudal calibrado a ±5% www.leeimh.com

METROHM

Tiamo 2.5 released - the world’s leading titration software becomes even more powerful Metrohm has launched tiamo 2.5, the latest version of the world’s leading titration software. New features make tiamo even more convenient to use and increase the software’s capabilities. tiamo 2.5 is compatible with Windows 10 and comes with the following new features (overview): • With tiamo 2.5, the 888 Titrando enables users to perform also Karl Fischer titrations.

• Metrohm Optrode: With tiamo 2.5 users of Metrohm’s photometric sensor may now set the wavelength as a dedicated parameter in the software with a single mouse click.

técnicas de LABORATORIO

• With tiamo 2.5 users can leave the electrode to be used unspecified when setting up a method. Instead, tiamo 2.5 asks the user which electrode to use after the method has been started. This results in greater flexibility for the user to select an appropriate electrode, especially when using validated methods.

• A new template in the report generator enables users to create a report of all sample data very conveniently. www.metrohm.com

702

Nº 407 DICIEMBRE 2015

catálogos

Catálogos y documentación

GFL

Gama de agitadores GFL ofrece un catálogo de 20 páginas dedicado a su serie de agitadores, que proporcionan, según convenga, un movimiento suave, un mezclado vigoroso o un agitado intenso a partir de varias trayectorias: orbital, de vaivén, oscilante-orbital, con vibración, etc. En total, este documento presenta 15 variedades de agitadores, con cinco tipos de movimiento. Todos tienen la marca CE y ostentan el sello TÜV alemán relativo a la seguridad (GS). www.gfl.de (Véase anuncio en la sección Guía del Comprador.)

RETSCH

Actualización de la web Retsch ha renovado su web con un nuevo y fresco diseño. www.retsch.com presenta ahora: • un diseño claro y moderno • una navegación por menú mejorada • una estructura amigable para el usuario • una diseño adecuado para dispositivos móviles.

La web de Retsch no solo proporciona información detallada del producto, sino que es una base de datos de aplicaciones y contiene una amplia selección de notas, guías y artículos técnicos. www.retsch.com

técnicas de LABORATORIO

704

Nº 407 DICIEMBRE 2015

catálogos

INTEGRA

Técnicas de pipeteo para mejorar los ensayos de diluciones en serie Integra ha publicado un nuevo informe que explica cómo el cumplir con buenas prácticas de pipeteo ayuda a obtener mejores resultados en los ensayos que involucran diluciones en serie.

La preparación de ensayos de diluciones en serie reproducibles, especialmente en placas de 384 pocillos, constituye un desafío ya que requiere muchas acciones de pipeteo muy dependientes de la técnica y experiencia del operador. Sin embargo, cumplir con buenas prácticas de pipeteo ayuda enormemente a mejorar la reproducibilidad y la exactitud.

En este informe el autor se centra en una selección de buenas técnicas de pipeteo, que si se conservan ofrecen la mejor oportunidad de aumentar y mantener la reproducibilidad de sus diluciones en serie. El mezclado es un componente clave en los protocolos de dilución. Se describen diferentes parámetros de mezclado para ayudarle a lograr muestras homogéneas.

Sin embargo, si su objetivo es agilizar los procesos de diluciones en serie, y al mismo tiempo asegurar una máxima reproducibilidad, entonces, un sistema de pipeteo automatizado es muy beneficioso. El autor presenta la Viaflo Assist, un producto diseñado para esta tarea.

Para obtener una copia de este informe se puede visitar http:// www.integra-biosciences.com/sites/pdf/liquid_handling/ Reproducibility_Serial_Dilutions_V01.pdf Integra, empresa certificada según la norma ISO 9001, es uno de los más importantes proveedores de instrumentos de laboratorio de alta calidad para el manejo de líquidos, preparación de medios, esterilización y cultivos celulares. Como compañía

crea soluciones innovadoras que satisfacen las necesidades de los clientes en los campos de investigación, diagnóstico y control de calidad dentro de los mercados de ciencias de la vida y la industria médica.

En la actualidad, los innovadores instrumentos de laboratorio Integra son ampliamente usados en todo el mundo.

Más de 90 socios distribuidores ofrecen una red mundial de ventas que proporciona a los clientes un servicio eficaz y competente. Todos ellos tienen el apoyo de un equipo de especialistas con gran experiencia y motivación desde las oficinas centrales de la empresa en Zizers (Suiza) y Hudson (NH, EE.UU.).

www.integra-biosciences.com

catálogos

SARTORIUS STEDIM BIOOUTSOURCE

Vídeo sobre ensayos de ADCC Sartorius Stedim Biotech (SSB) BioOutsource anunció el 17 de noviembre que un nuevo vídeo ya disponible on line explica cómo superar los problemas asociados con el uso de ensayos de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC). La breve cinta describe los factores que afectan al uso de ensayos de ADCC y analiza qué considerar al determinar la comparabilidad y el diseño de fármacos biosimilares.

En cinco minutos los expertos en desarrollo de bioensayos, los Dres. Catriona Thomson y Daniel Galbraith, describen los retos del uso de ensayos ADCC y explican cuándo utilizar los diferentes tipos de ensayos para evaluar biosimilares.

Thomson enumera cuatro razones clave sobre por qué la actividad de ADCC es la mayor barrera para lograr la aprobación de biosimilares y, con datos reales de ensayos de ADCC, muestra el aspecto de un biosimilar que tiene baja comparabilidad con la molécula innovadora.

Galbraith revela luego brevemente la evidencia científica detrás de los ensayos de ADCC y describe con datos reales cómo los diferentes tipos de células efectoras pueden afectar drásticamente a la relevancia y la sensibilidad biológica. Esto proporciona a los científicos una instantánea rápida sobre qué formato de ensayo de ADCC es el más relevante para la etapa actual del desarrollo de su biosimilar.

El vídeo ofrece a los investigadores un recurso excelente, que pueden ver en su smartphone, tablet o PC, sobre factores a considerar cuando se usan ensayos de ADCC para una comparación precisa de biosimilares con moléculas innovadoras (acceso al vídeo: http://ow.ly/UvNBj).

El Dr. Galbraith, director Científico de BioOutsource dijo: “Tener un biosimilar y una molécula innovadora con diferente actividad de ADCC puede dar lugar a cambios costosos en el proceso de fabricación y a retrasos en la aprobación regulatoria. Por tanto, es esencial comprender en las primeras etapas del desarrollo los tipos de ensayos de ADCC disponibles

para demostrar la comparabilidad.”

Añadió: “Estamos encantados de publicar este nuevo vídeo ya que explica de manera sencilla algunos de los factores técnicos complicados que afectan a cómo se llevará a cabo el ensayo de ADCC. Los científicos que vean el vídeo tendrán una mejor comprensión de los ensayos de ADCC y esto ayudará a dirigirlos en las metodologías para el desarrollo de biosimilares con huella, similares a la molécula innovadora.”

SSB provee equipamientos y servicios de vanguardia para los procesos de desarrollo, de aseguramiento de la calidad y de producción de la industria biofarmacéutica. Compañías biofarmacéuticas de todo el mundo utilizan sus soluciones integradas de fermentación, cultivo de células, filtración, purificación, gestión de fluidos y tecnologías de laboratorio para desarrollar y producir fármacos de forma segura, puntual y económica. SSB se centra en tecnologías de un solo uso y servicios de valor añadido para satisfacer las necesidades tecnológicas en rápida evolución de la industria a la que atiende. Profundamente arraigada en la comunidad científica y estrechamente vinculada a sus clientes y socios tecnológicos, la empresa está comprometida con su lema “turning science into solu-

técnicas de LABORATORIO

706

Nº 407 DICIEMBRE 2015

tions” (“transformamos avances científicos en soluciones”).

SSB tiene su sede en Aubagne (Francia) y cotiza en la Eurolist de Euronext Paris.

Está presente en todo el mundo a través de una red global de empresas comerciales, y sus centros de I+D y de producción propios en Europa, Norteamérica y Asia.

Su principal centro de producción y de I+D está en Alemania. Da empleo a unas 3.700 personas. En 2014, sus ingresos por ventas fueron de 683,5 millones de EUR. Ahora parte del Grupo Sartorius Stedim Biotech, BioOutsource proporciona servicios de prueba por contrato para la industria biofarmacéutica. Su oferta principal incluye una amplia gama de servicios para apoyar las pruebas de productos biológicos, vacunas y biosimilares durante todo su desarrollo. Cuenta con una combinación sin precedentes de conocimiento técnico, normativo y comercial que le permite sobresalir como el aliado para pruebas cada vez más preferido de la industria.

La firma es consciente de la importancia de sus servicios para apoyar los requerimientos de prueba críticos de los clientes y por ello se esfuerza continuamente para ofrecer un servicio de clase mundial a escala global. www.biooutsource.com

catálogos

SCHARLAB

Presentada la segunda edición del Catálogo General Esta versión del Catálogo General de Scharlab es la evolución natural de la primera, de la que han desaparecido algunos artículos y en la que se muestran otros nuevos. Algunos de los nuevos productos marca Scharlau que pueden consultarse en las 1.329 páginas de este documento son: • la nueva gama de detergentes Deterlabo® • los patrones para IC-ICP-AA ISO 17025 • los ácidos y reactivos ultrapuros Ultratrace® para análisis de trazas inorgánicas • el nuevo agar Microinstant® cromogénico para Coliformes • la nueva mezcla de patrones de pesticidas • los minirreactores para laboratorio • las nuevas puntas de pipeta con filtro.

Se incluyen también las últimas novedades de los fabricantes de fungibles y de instrumentación. Aparecen nuevas marcas en este catálogo como los autoclaves HMC, los baños termostáticos Polyscience o las muflas Thermconcept.

Un catálogo impreso no resulta una herramienta dinámica, por lo que Scharlab recomienda la consulta a su recién inaugurada web, www.scharlab.com, que permite ampliar informaciones como los precios actualizados y la disponibilidad de los productos en cada momento. Si además se dispone de acceso privado,

se puede acceder a toda una serie de ventajas personalizadas.

Scharlab quiere agradecer desde aquí el esfuerzo realizado por colaboradores, proveedores y algunos de sus usuarios, quienes han recomendado mejoras sobre la primera edición y que se han tratado de implementar.

Para solicitar un ejemplar de este nuevo catálogo se puede contactar con el equipo comercial de Scharlab por teléfono (902 20 18 98) o e-mail (consultas@scharlab.com). www.scharlab.com (Véase anuncio en la sección Guía del Comprador.)

biocombustibles

Biocombustibles y sus precursores: un reto para los analizadores elementales comunes

Dra. Angela Gröbel, directora de Productos, Dra. Ekaterina Biehlig, química de aplicación Analytik Jena AG.

E

n tiempos de continuo crecimiento de los precios de los recursos derivados del petróleo, cada vez más escasos, las estrategias alternativas para producir combustibles líquidos van ganando importancia.

Puesto que los combustibles fósiles evolucionaron tras la transformación de distintos materiales orgánicos sometidos a alta presión y temperatura en entornos libres de oxígeno, los científicos decidieron usar este hecho como punto de partida. Mientras que las tecnologías basadas en la fermentación de almidón y azúcar, así como la transesterificación o hidrocraqueo de combustible vegetal o animal (primera generación de biocombustibles) aún no logran satisfacer las enormes necesidades de los combustibles de alto rendimiento, otros planteamientos, basados en la conversión de residuos y biomasa rica en celulosa, parecen resultar más prometedores (segunda generación de biocombustibles).

El uso de materiales biogénicos para la producción de combustible precisa supervisión debido al alto contenido de hidrocarburos de nitrógeno, azufre y cloro, que son perjudiciales por naturaleza. Esta exigencia no solo responde al cumplimiento de los límites legales establecidos, sino que también está destinada a evitar repercusiones negativas en el proceso de producción y en el ambiente. Como consecuencia de esto, es ineludible que las materias primas, los productos intermedios y los finales deban examinarse exhaustivamente.

Cuanto más diversos son los orígenes de este tipo de matrices, más diferente es el comportamiento de digestión.

Garantizar la combustión cuantitativa de todos los componentes de muestra es la condición previa para efectuar un análisis elemental correcto. Tiempo atrás, esto suponía un auténtico y laborioso desafío que requería operadores experimentados que desarrollaran un

©2015 Analytik Jena AG

técnicas de LABORATORIO

708

Nº 407 DICIEMBRE 2015

programa específico de lanzaderas para cada matriz de muestra. Y aun así, muy a menudo, precisaban intervenciones de mantenimiento y mediciones continuas.

La innovadora tecnología de sensor de llama hace que todo esto resulte innecesario. Para cada matriz, se genera el programa de digestión más conveniente de forma completamente automática y se aplica a fin de obtener resultados fiables lo más rápidamente posible.

No todo es bioetanol Durante más de un siglo, la humanidad se ha ocupado de desarrollar alternativas económicas a los combustibles líquidos minerales. La primera fase consistió en aplicar materiales que fueran distintos a los combustibles clásicos, pero que compartieran propiedades comparables.

biocombustibles

Figura 1. Sistema de análisis multi EA® 5000 con tecnología de sensor de llama.

Los aceites vegetales refinados sin tratar se comportaban como el diésel, pero para utilizarlos había que adaptarlos al motor. El biodiésel (FAME, es decir, ésteres metílicos de los ácidos grasos) se obtiene por transesterificación, diésel ecológico por hidrocraqueo de aceites vegetales o grasas animales. Sus propiedades equivalen a las del combustible diésel común, lo que lo hace muy adecuado como componente combinado.

El bioetanol es un producto derivado de la fermentación del azúcar o de plantas ricas en celulosa. Se utiliza tanto como aditivo para gasolina hasta en un 85% o pura, como para vehículos especiales FFV, es decir de uso flexible de combustible. Actualmente no es posible conseguir la demanda suficiente para cubrir esta primera generación de biocombustibles debido a la limitación de recursos para obtener materias primas.

Aparte de esto, existen otras tentativas, que tratan de convertir la biomasa sólida rica en celulosa directamente por fermentación, pirólisis o utilizando

catalizadores especiales en aceite de biocrudo (BCO), una mezcla de hidrocarbonos líquidos, que están resultando prometedores. El BCO es muy similar al aceite crudo mineral, lo que permite su procesamiento en refinerías comunes.

Los combustibles resultantes pueden utilizarse en automóviles normales sin que exista riesgo de daños. Las materias primas que se precisan están disponibles en cualquier lugar. Estas dos ventajas hacen que los biocombustibles de segunda generación sean muy atractivos.

Sin embargo, independientemente de la materia prima de que provenga el biocombustible, siempre es necesario controlar la presencia de contaminantes no deseados. Los compuestos que contienen azufre, nitrógeno y cloro pueden ocasionar envenenamiento catalítico, rápida corrosión de extracción, transporte o almacenamiento de equipos y combustibles de baja calidad. Los procesos de producción se supervisan y controlan analizando las materias primas, los productos intermedios y los finales. Cuanto más diverso es el comportamiento de

técnicas de LABORATORIO

709

Nº 407 DICIEMBRE 2015

estas matrices, más diferentes son los contenidos del elemento. Oscilan entre unos ppb y el porcentaje en masa.

En control de calidad cada minuto cuenta. Por esta razón, un analizador elemental que obtiene resultados de confianza rápidamente, independientemente de la concentración y de las propiedades de la matriz, resulta esencial.

En consecuencia, la técnica de análisis utilizada no solo debe proporcionar un rango de trabajo linear, amplio y sin necesidad de ajustes, sino que debe permitir también una optimización completamente automática del proceso de combustión a fin de conseguir una digestión segura y completa.

Tecnología del sensor de llama Sin una digestión óptima, la calidad de los resultados puede variar considerablemente en función de la configuración de método y la cantidad de muestras in-

biocombustibles troducidas. Este efecto se debe a la complejidad y composición de las matrices.

Los sistemas de análisis elementales convencionales precisan conocer previamente y con exactitud el comportamiento de digestión de cada una de las muestras para permitir un desarrollo laborioso del método empírico. Un ligero cambio de la composición de muestra respecto a la cantidad de muestra introducida afectará considerablemente a la integridad del proceso de combustión. Esto da lugar a una dispersión de rango más amplio y resultados de análisis a menudo demasiado bajos y poco fiables.

Por el contrario, el multi EA® 5000 permite al operador ejecutar muestras de forma inmediata, sin necesidad de conocer previamente su composición, puntos de ebullición, etc. La calidad de los resultados obtenidos es independiente de las propiedades de las matrices. El secreto reside en esta innovadora tecnología de sensor de llama, que garantiza que la optimización del proceso sea completamente automática. Por tanto, ahorra un valioso tiempo de funcionamiento y permite un mayor número de muestras analizadas.

La combustión cuantitativa deja de ser un sueño La función del sensor de llama crea las condiciones de digestión ideales para

cualquier matriz de muestras orgánica.

Un solo método es suficiente, ya se trate de sólidos y o líquidos, para analizar el espectro completo de matrices de muestra, independientemente de su viscosidad, volatilidad y combustibilidad.

El contenido de nitrógeno, azufre y cloro de los distintos biocombustibles y precursores se analiza a través de un analizador elemental del modelo multi EA® 5000. Gracias a la moderna HiPerSens detection, este analizador combina un rango de trabajo amplio y linear inalcanzable hasta la fecha, con una sensibilidad y solidez únicas.

Los análisis se han efectuado en modo de funcionamiento horizontal. Las muestras se dosifican automáticamente en lanzaderas por medio de un transmisor de muestras Multi Matrix. La transferencia al horno se efectúa con ayuda de un alimentador de lanzaderas automático. Las muestras se digieren en un proceso bifásico sin catalizador a 1.050 °C. Asimismo, la tecnología del sensor de llama garantiza una transferencia optimizada de matrices sin problemas y la combustión de los distintos materiales.

En la primera fase se produce la evaporación de compuestos volátiles de muestras en el flujo de gas inerte seguida por la combustión de productos gaseosos formados en un entorno rico en oxígeno. En la segunda fase, los

componentes no volátiles restantes se oxidan cuantitativamente en oxígeno puro. Asimismo, el sensor de llama garantiza una evaporación uniforme de la cantidad de la muestra exacta, que puede oxidarse completamente a través de las moléculas de O2 disponibles. Con este propósito se supervisa la llama de combustión formada. Los valores de llama registrados se utilizan para calcular un programa de digestión óptimo para cada matriz, incluidos un número apropiado de puntos de espera, tiempos de espera minimizados y velocidad maximizada. Esto sirve para ajustar el proceso de forma completamente automática a los requisitos específicos de cada componente. De este modo, no solo se optimiza la calidad del análisis, sino también su duración.

Los productos de reacción gaseosa secos se transfirieron a los sistemas de detección pertinentes: para el azufre, fluorescencia UV; para el nitrógeno, quimioluminiscencia. La determinación de cloro se llevó a cabo por medio de titulación columbimétrica.

Medición de biocombustibles y precursores seleccionados Con el fin de determinar el azufre, nitrógeno y cloro, se calibró el analizador con los kits estándares certificados sobre

Tabla 1: Resultados del análisis elemental.

Núm. de muestras

TS ± RSD

TN ± RSD

TCl ± RSD

1 BCO (plantas de cultivo)

0,40% wt ± 0,42%

0,41% wt ± 0,62%

23,4 ppm ± 3,32%

2 Aceite de maíz

20,3 ppm ± 1,92%

54,2 ppm ± 0,18%

8,82 ppm ± 1,10%

3 BCO* (madera)

0,22% wt ± 3,15%

0,21% wt ± 0,65%

38,4 ppm ± 0,88%

4 Aceite de resina crudo

0,36% wt ± 0,61%

99,91 ppm ± 2,89%

8,36 ppm ± 0,97%

5 B. a líq.** diésel (madera)

5,33 ppm ± 1,57%

0,38 ppm ± 2,57%

< 0,10 ppm

6 Diésel (aceite de resina)

6,60 ppm ± 1,64%

0,12 ppm ± 8,60%

< 0,10 ppm

7 Biodiésel (aceite de maíz)

0,87 ppm ± 2,83%

2,00 mg/kg ± 2,30%

< 0,10 ppm

8 Bioetanol (celulosa)

0,73 ppm ± 1,83%

0,06 ppm ± 11,2%

0,56 ppm ± 11,2%

*BCO = aceite de biocrudo, **B. a líq. = biomasa a líquido

técnicas de LABORATORIO

710

Nº 407 DICIEMBRE 2015

biocombustibles la base de isooctanos. Con el modo multielementos se determinaron todos los parámetros en un solo ciclo de análisis.

Las muestras examinadas son un espectro representativo del campo de producción de biocombustibles. Debido a la combustión optimizada de matrices, suele ser conveniente una determinación en tres etapas.

Las muestras 1-4 son materias primas y materiales de proceso muy viscosos y contaminados. Las muestras 5-8, biocombustibles, son líquidos volátiles de baja viscosidad. Como productos finales, su contenido está a nivel de trazas de forma natural. Las Figuras 2a - 2c muestran las curvas de medición del aceite de resina crudo (CTO).

Figura 2a.

Los resultados de análisis demuestran que la técnica aplicada proporciona un excelente grado de precisión, independientemente de las propiedades de las matrices.

Matrices nuevas, nuevo desafío El control de calidad procura constantemente lograr la máxima eficacia con el menor esfuerzo posible. En el caso de materiales biogénicos, esto exige analizadores elementales que puedan asegurar la digestión adecuada de todos los componentes de muestras. Tiempo atrás, esto suponía un auténtico y laborioso desafío que requería operadores experimentados que desarrollaran para cada matriz de muestra un programa específico de lanzaderas. Y aun así, muy a menudo, precisaban intervenciones de mantenimiento y mediciones continuas.

Figura 2b.

Ahora la tecnología de sensor de llama hace que todo esto sea innecesario. Para cada matriz se genera el programa de digestión más conveniente de forma totalmente automática.

Figura 2c.

www.analytik-jena.com

Figuras 2a-2c Curvas de análisis elemental para CTO.

técnicas de LABORATORIO

711

Nº 407 DICIEMBRE 2015

encuentros

Amplio respaldo sectorial en la primera reunión del comité organizador de iWater Barcelona

iWater Barcelona, Salón Internacional del Ciclo Integral del Agua, se celebrará del 15 al 17 de noviembre de 2016 en el recinto Gran Via de Fira de Barcelona.

Coincidirá con Smart City Expo World Congress, la cita de referencia sobre ciudades inteligentes. El encuentro incluirá un congreso donde se tratarán los retos más relevantes de la industria del agua.

L

as principales asociaciones españolas del sector del agua se han sumado al comité organizador del nuevo salón iWater Barcelona, cuya primera reunión se celebró la tercera semana de noviembre en el recinto Gran Via de Fira de Barcelona. Allí se presentaron los ejes de la cita, que combinará negocio, inversión, emprendimiento, innovación y tecnología con cuestiones estratégicas para el crecimiento de toda la cadena de valor del agua. Asimismo, el salón promoverá los espacios de networking y transferencia de conocimiento y la proyección internacional de las empresas.

técnicas de LABORATORIO

En el comité organizador de iWater Barcelona –al frente del cual está el presidente ejecutivo de Agbar, Ángel Simón–, están representadas una veintena de asociaciones, empresas, instituciones y entidades. El conocimiento y experiencia del mercado que aportan los diferentes miembros del comité servirá para diseñar, desde el propio sector, un salón de referencia internacional para el mercado del sur de Europa que responda eficazmente a las necesidades planteadas por los diferentes agentes que operan en la industria del agua.

712

Nº 407 DICIEMBRE 2015

encuentros En este sentido, iWater Barcelona 2016 reunirá las últimas innovaciones y tecnologías –especialmente las enfocadas a solucionar el estrés hídrico–, y dará visibilidad a proyectos de inversión, tendencias y nuevos modelos de negocio en el sector. En su zona de exposición se podrán encontrar soluciones para la extracción, tratamiento, distribución, almacenado, reciclado, reutilización, riego, gestión y consumo agrícola, industrial o doméstico de agua, entre otros usos.

Asimismo, se abrirá un ‘Open Market-Place’ para promover el contacto y la transferencia de conocimiento entre empresas y centros tecnológicos y mostrar las principales novedades y habrá speaker’s corners dentro del área comercial con presentaciones y conferencias.

Paralelamente, iWater Barcelona 2016 recogerá los desafíos y prioridades de industria del agua en un congreso, con un enfoque muy práctico, en el que participarán los mejores expertos y que incluirá múltiples actividades de networking. Las diferentes sesiones aportarán ideas, mejoras aplicables y una visión estratégica sectorial para abordar estos retos de futuro, teniendo en cuenta el marco regulatorio y la sostenibilidad.

Entre sus objetivos, el nuevo salón ha incluido la internacionalización con el fin de facilitar a las empresas españolas la apertura a mercados exteriores especialmente de Latinoamérica, el Mediterráneo y Oriente Medio. Para ello, iWater Barcelona facilitará la visita de compradores, delegaciones y agentes internacionales de países de interés para las firmas expositoras, aprovechando también las sinergias de la celebración en las mismas fechas y recinto de Smart City Expo World Congress, la cita de referencia internacional sobre ciudades inteligentes.

El comité organizador de iWater Barcelona 2016 –abierto aún a nuevas incorporaciones de entidades que quieran colaborar en el proyecto–, cuenta con representantes de la Asociación Española de Empresas de Tratamiento y Control de Aguas (AquaEspaña) y de su homóloga europea Aqua Europa; Asociación Española de Abastecimientos de Agua y Saneamiento (AEAS); Asociación Española de Empresas Gestoras de Servicios de Agua Urbanas (AGA); Asociación Española de Empresas de Tecnologías del Agua (ASAGUA), Asociación Española de Exportadores de Equipos para la Manipulación de Fluidos (Fluidex); Asociación Española de Empresas de Ingeniería, Consultoría y Servicios Tecnológicos (Tecniberia); Asociación Ibérica de Tecnología Sin Zanja (IbSTT); Plataforma Tecnológica Española del Agua (PTEA); y Water Supply and Sanitation Technology Platform (WssTP).

También forman parte del comité representantes del Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente (MAGRAMA), el Ministerio de Economía y Competitividad (MINECO), el Instituto Español de Comercio Exterior (ICEX) y la Generalitat de Catalunya, así como empresas como Grupo Agbar, FCC Aqualia, Ebara o Fluidra, entre otras. www.iwaterbarcelona.com

piensos

Control de autenticidad y trazabilidad de piensos (y II) Técnicas inmunológicas y genéticas

Nicolette Pegels*, Teresa García, Rosario Martín, Isabel González.

Departamento de Nutrición, Bromatología y Tecnología de los Alimentos Facultad de Veterinaria, Universidad Complutense de Madrid (Madrid, España)

Resumen

E

n el ámbito de la lucha contra las Encefalopatías Espongiformes Transmisibles (EETs), la prohibición de la Unión Europea (UE) de alimentar a rumiantes y otros animales de abasto con proteínas animales ha potenciado el desarrollo de diversas técnicas analíticas que permitan la correcta identificación de todos los componentes presentes en los piensos. A continuación se describen las principales técnicas aplicadas actualmente a la identificación del origen de las materias primas e ingredientes empleados en la formulación de los piensos.

3. Técnicas inmunológicas Las técnicas inmunológicas son procedimientos analíticos basados en la reacción específica entre un antígeno y su correspondiente anticuerpo. La aplicación cada vez más generalizada de estas técnicas para la detección en los alimentos de constituyentes naturales, microorganismos, toxinas, etc., se debe a las grandes ventajas que presentan frente a los métodos convencionales: reducción del tiempo y coste del análisis, disminución de la cantidad de muestra necesaria, utilización de instrumental poco complejo, posibilidad de semiautomatización y adaptación

a kits miniaturizados. Además, su adecuada sensibilidad y especificidad las hacen especialmente útiles para el análisis rutinario de los alimentos y piensos (Asensio y col., 2008).

Las técnicas inmunoenzimáticas, caracterizadas por el empleo de marcadores enzimáticos para la detección de las interacciones antígeno-anticuerpo, constituyen en la actualidad los métodos inmunológicos más extendidos en el análisis de alimentos y piensos. En estas técnicas, uno de los elementos de la reacción (antígeno o anticuerpo) se fija a un soporte sólido, generalmente placas de poliestireno, polivinilo, polipropileno o nylon, que permiten su adsorción pasiva y la eliminación de los compuestos libres mediante lavado. Otros formatos emplean como fase sólida membranas, generalmente de nitrocelulosa, a las que se unen las proteínas mediante enlaces hidrofóbicos.

Una vez inmovilizados los antígenos o los anticuerpos al soporte en cuestión, la interacción antígeno-anticuerpo se detecta mediante la reacción colorimétrica producida por la acción de una enzima (conjugada al antígeno o al anticuerpo) al degradar el sustrato correspondiente.

Existen diversas variantes de las técnicas inmunoenzimáticas, que se clasifican atendiendo al componente de la reacción que se fija en primer lugar, la fase sólida utilizada y si se emplean o no concentraciones limitantes de antígeno y anticuerpo. Concretamen-

*Autora de contacto (npegels@vet.ucm.es La primera parte de este artículo se publicó en el nº 406 de Técnicas de Laboratorio, págs. 653-661.

técnicas de LABORATORIO

714

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos te, el ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA, EnzymeLinked Immunosorbent Assay) y el inmunoensayo de flujo lateral (LFIA, Lateral-Flow Immunoassay) son los formatos más utilizados en el campo de la identificación de especies animales en piensos.

Chen y col. (2002 y 2004) obtuvieron anticuerpos monoclonales frente a la proteína muscular termoestable troponina I, que permitieron la detección, mediante técnicas de ELISA indirecto y ELISA sandwich, de hasta un 1% de harinas de carne, entre el 0,3-2% de harinas de mamíferos y rumiantes y entre 0,05-5% de harinas de carne de vaca y oveja en muestras tratadas a 132 °C y 2 bar de presión durante 2 horas. Asimismo, Liu y col. (2006) detectaron la presencia de músculo esquelético de cerdo en diferentes tipos de piensos, utilizando una técnica de ELISA sandwich con anticuerpos monoclonales obtenidos también frente a la proteína termoestable troponina I. El límite de detección alcanzado fue del 0,05% para las harinas de cerdo en piensos de soja, y del 1% para las harinas de carne y huesos comerciales que contenían cerdo en cantidades desconocidas. De forma similar, Kim y col. (2004a, b y 2005) utilizaron anticuerpos monoclonales frente a una proteína termoestable del tejido muscular liso de vaca, en este caso la proteína h-caldesmon, para la detección de harina de carne y huesos mediante ELISA. Los resultados obtenidos demostraron la capacidad de la técnica para detectar hasta un 0,05% de harina de carne y huesos de vaca en piensos, así como para diferenciar entre las harinas de vaca y las procedentes de otras especies animales (cerdo y pollo) y vegetales (soja, cebada, maíz y arroz).

Las técnicas inmunoenzimáticas constituyen métodos analíticos sencillos y eficaces, cuyos reactivos se pueden comercializar en forma de kits miniaturizados que permiten su adaptación a pruebas de campo de fácil ejecución e interpretación. Por ello son cada vez más numerosos los laboratorios y empresas biotecnológicas que diseñan y comercializan kits basados en estas técnicas, como alternativa a otros métodos más caros y laboriosos.

Margry y col. (2005) llevaron a cabo un estudio comparativo para evaluar el potencial de tres kits inmunoenzimáticos comerciales en la detección e identificación de diferentes subproductos animales: MELISA-TEK™ (ELISA Technologies Inc., Gainesville, Florida, USA); Agri-Screen® (Neogen Corporation, Lansing, Michigan, USA); y FeedChek™ (Strategic Diagnostics Inc., Newark, Delaware, USA). En este estudio se analizaron más de 35 muestras de subproductos de vaca, oveja, cerdo y aves tratados a 133, 137, 141, 145 y 159 °C, así como 15 muestras de piensos compuestos que contenían entre un 0,1-10% de harinas de huesos de vaca y aves tratadas a temperaturas de 133 a 145 °C. Los resultados demostraron la capacidad del ensayo de ELISA para detectar hasta un 0,5% de harinas de rumiantes, cerdo y aves, incluso en las muestras tratadas a 145 °C. De los tres kits comerciales ensayados, el FeedChek™ fue el que proporcionó mejores resultados en la detección de las harinas.

Fumière y col. (2009b) evaluaron la aplicabilidad del kit comercial MELISA-TEK™ (ELISA Technologies Inc., Gainesville, Florida, USA)

técnicas de LABORATORIO

para la detección de proteínas de origen rumiante en piensos.

Para ello, analizaron 24 muestras de proteínas procesadas de origen no rumiante, así como 12 mezclas que contenían entre un 1-5% de harina rumiante en proteína animal. Los resultados de este estudio demostraron la capacidad del kit MELISA-TEK™ para detectar hasta un 1% de harinas de origen rumiante sometidas a un tratamiento térmico de 133 °C en las muestras de pienso analizadas, si bien con este kit se obtuvo un elevado porcentaje de falsos positivos. Posteriormente, Fumière y col. (2010a) desarrollaron otro estudio en colaboración con seis laboratorios para evaluar la reproducibilidad del kit comercial MELISA-TEK™ en la detección de proteína rumiante, registrando variaciones significativas en función del laboratorio implicado en el análisis.

En los últimos años han sido numerosos los estudios llevados a cabo para evaluar la especificidad y sensibilidad de los diferentes kits inmunoenzimáticos comerciales para la detección de proteínas animales en piensos. Los más empleados han sido los ensayos de ELISA, como el MELISA-TEK™ (ELISA Technologies Inc., Gainesville, Florida, USA) (Margry y col., 2005; Myers y col., 2007; Fumière y col., 2008, 2009b, 2010a; Bremer y col., 2013), y los inmunoensayos de flujo lateral como el Reveal® for Ruminant in Feed (Neogen Corporation, Lansing, Michigan, USA) (Myers y col., 2005; Fumière y col., 2008), FeedChek™ (Strategic Diagnostics Inc., Newark, Delaware, USA) (Kwiatek y col., 2005; Margry y col., 2005; Myers y col., 2005), y AgriScreen® (Neogen Corporation, Lansing, Michigan, USA) (Bellorini y col., 2005; Margry y col., 2005). Estas técnicas, basadas en el análisis de proteínas termoestables específicas de tejido, ofrecen la ventaja de permitir la detección específica del material animal prohibido y su diferenciación de ingredientes autorizados de origen animal. La aplicabilidad de estos kits ha sido evaluada por varios organismos oficiales de Europa y EE.UU., como el Laboratorio de Referencia de la UE para las Proteínas Animales en los piensos (EURL-AP, Bélgica), el Institute for Reference Materials and Measurements (IRMM, Bélgica), y el US Food and Drug Administration (FDA, USA). No obstante el límite de detección que presentaron, superior al 0,1%, limita la aplicabilidad de las técnicas inmunoenzimáticas para el control oficial de los componentes animales en piensos (Ballin y col., 2009; Fumière y col., 2009a; Kreuz y col., 2012).

Karanam (2011) desarrolló un nuevo método de extracción proteica para mejorar la sensibilidad del kit comercial Reveal® for Ruminant in Feed (Neogen Corporation, Lansing, Michigan, USA) en el análisis de piensos animales. El método consistió en una sedimentación previa del hueso de la muestra, seguida de una digestión con EDTA, facilitando así la liberación de la fracción proteica que está unida por enlaces covalentes a la estructura mineral del hueso. Este ensayo permitió mejorar el límite de detección de la técnica de un 2 a un 0,1% de harinas de carne y huesos de vaca en piensos.

Kreuz y col. (2012) desarrollaron una técnica de ELISA sandwich con anticuerpos policlonales frente a la osteocalcina bovina, em-

715

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos pleando un método de extracción mediante EDTA. Este ensayo permitió la detección de hasta un 0,1% de harinas de carne y huesos bovinas sometidas a tratamientos térmicos de hasta 145 °C en piensos vegetales, así como la correcta diferenciación entre harinas de vaca y harinas de pescado y de pollo. Sin embargo, los anticuerpos reconocían también las harinas de huesos procedentes de cerdo, limitando la especificidad global del ensayo.

4. Técnicas genéticas Las técnicas genéticas se basan en el reconocimiento específico de fragmentos de ácidos nucleicos presentes en los seres vivos.

La molécula de ADN, cuando se compara con los marcadores proteicos, ofrece una serie de ventajas tales como el mayor grado de variabilidad genética examinado, la pequeña cantidad de muestra requerida para el análisis y la posibilidad de analizar muestras sometidas a tratamientos térmicos intensos debido a la elevada estabilidad del ADN durante dichos procesos (Pereira y col., 2008).

Las técnicas genéticas basadas en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) son, con diferencia, las más utilizadas en el ámbito de la autentificación de especies animales en alimentos y piensos. La reacción de PCR permite obtener millones de copias de una secuencia específica de ADN mediante una simple reacción enzimática. Debido a su sencillez, especificidad y sensibilidad, los ensayos de PCR basados en el diseño de oligonucleótidos específicos para la amplificación selectiva de fragmentos de ADN constituyen actualmente la aproximación más extendida para la identificación del origen de las materias primas que integran los piensos.

4.1. PCR convencional La técnica de PCR convencional o PCR clásica está basada en la amplificación selectiva de fragmentos de ADN a partir de diferentes organismos, y la posterior detección de la amplificación al final de la reacción mediante migración electroforética del producto de PCR. En el ámbito del análisis de los alimentos, esta técnica se utiliza ampliamente para la autentificación de productos de origen animal como leche y productos lácteos (Mayer, 2005; Bai y col., 2009), pescado (Asensio y col., 2009; Catanese y col., 2010), y carne y productos cárnicos (Rodríguez y col., 2004a, b; Rojas y col., 2010a, b; Hou y col., 2015).

En los últimos años, a raíz de la crisis alimentaria derivada de la Encefalopatía Espongiforme Bovina (EEB) y la consecuente prohibición de las harinas cárnicas en la alimentación de los animales de abasto, la aplicación de la técnica de PCR se ha extendido de manera creciente al análisis de piensos.

La Tabla 1 resume los principales trabajos publicados sobre el empleo de la técnica de PCR convencional a la detección de componentes de origen animal en los piensos. La primera aplicación de esta técnica corresponde a Tartaglia y col. (1998). En este trabajo

técnicas de LABORATORIO

se diseñaron cebadores específicos de vaca en el gen que codifica la subunidad 8 de la ATPasa y la región amino-terminal de la subunidad 6 de la ATPasa. Los resultados obtenidos al emplear los cebadores en la técnica de PCR mostraron la capacidad del ensayo para detectar hasta un 0,125% de harinas de vaca, incluso en muestras tratadas a 133 °C durante 33 minutos.

Desde la publicación del estudio de Tartaglia y col. (1998), han sido numerosos los autores que han empleado sus cebadores específicos para detectar ADN bovino en harinas y piensos destinados a la alimentación animal (Wang y col., 2000; Colgan y col., 2001; Krcmár y Rencová, 2001; Lahiff y col., 2001; Myers y col., 2001, 2006; Cheng y col., 2003; Natonek y col., 2004; Natonek-Wisniewska, 2008; Weiner y Kwiatek, 2008).

Además, la aplicación de la técnica de PCR se ha extendido a la detección e identificación de otras especies animales de interés en piensos. Por ejemplo, Colgan y col. (2001) utilizaron los cebadores específicos de vaca de Tartaglia y col. (1998) y diseñaron tres parejas de cebadores específicos de oveja, cerdo y pollo en el gen que codifica la subunidad 8 de la ATPasa, para detectar la presencia de estas especies en muestras comerciales de harinas de carne y huesos. El límite de detección del ensayo fue del 0,3% para las muestras que contenían ADN de oveja y vaca y del 1% para las que contenían cerdo. De forma similar, Lahiff y col. (2001) diseñaron cebadores específicos de oveja, cerdo y pollo, y los emplearon junto con los cebadores específicos de vaca diseñados por Tartaglia y col. (1998) para detectar mediante PCR la presencia de estas especies en harinas animales tratadas a 133 °C durante 20 minutos.

4.2. PCR en tiempo real Actualmente, los ensayos de PCR clásicos que se desarrollan en varios pasos, desde la amplificación del material genético al análisis de los productos resultantes, están evolucionando hacia procedimientos más rápidos y automatizados en un solo tubo, entre los que destaca la técnica de PCR en tiempo real (Higuchi y col., 1993). Esta metodología se basa en la utilización de equipos con un sistema de detección espectrofluorimétrica, que permiten el análisis continuo de la amplificación del ADN y, por tanto, la identificación en tiempo real del producto de amplificación generado. A diferencia de la técnica de PCR convencional, en los sistemas de PCR en tiempo real, un programa informático va registrando el incremento de fluorescencia, que es proporcional al aumento de ADN en cada ciclo, y esta información se refleja gráficamente en rectas de cinética de la reacción o rectas de amplificación. Para cada muestra, el programa informático calcula el número de ciclo en el que el lector empieza a detectar un incremento de fluorescencia significativo con respecto a la señal base. El ciclo en el que empieza a detectar el aumento de fluorescencia se denomina ciclo umbral (Ct, Cycle threshold) o punto de corte (Cp, Crossing point), y es inversamente proporcional a la concentración inicial de ADN diana presente en la muestra. Así, cuanto mayor sea el número inicial de copias del ácido nucleico diana, antes se

716

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos detectará un incremento en la fluorescencia como consecuencia del acúmulo de productos de PCR. Una de las principales ventajas de esta metodología es que proporciona un resultado numérico en tiempo real que permite la cuantificación de las especies de interés y el tratamiento estadístico de los datos obtenidos (Wilhelm y Pingoud, 2003). Además, el tiempo de análisis se reduce al no requerir procesado post-amplificación, y se minimizan las posibilidades de contaminación con ADN exógeno al realizarse todo el proceso en el mismo tubo (Brodmann y Moor, 2003; Zhang y col., 2007; Martín, 2011).

En los últimos años se han descrito diversos sistemas para el seguimiento en tiempo real de la amplificación por PCR, que se pueden clasificar en dos grandes grupos: sistemas no específicos y sistemas específicos de secuencia del ADN diana. Los sistemas no específicos detectan la presencia o ausencia de amplicones, pero no proporcionan información sobre la identidad de los productos generados. Por su parte, los sistemas específicos hibridan específicamente en la secuencia del ADN diana. La Figura 1 muestra una clasificación más exhaustiva de los sistemas de detección de fluorescencia empleados en los ensayos de PCR en tiempo real. Estos se pueden agrupar en: A) sistemas no específicos que emplean intercaladores fluorescentes de la doble cadena de ADN (A.1), o del ADN monocatenario (A.2), liberados íntegros durante la fase de extensión; y B) sistemas específicos que emplean compuestos que emiten fluorescencia por la hidrólisis de la sonda (B.1), o por la creación de distancia física entre el fluoróforo y su aceptor (quencher), durante la fase de extensión (B.2) (Ruijter y col., 2014).

De acuerdo a la bibliografía disponible, las sondas de hidrólisis TaqMan® se encuentran entre las químicas de detección de fluorescencia más generalizadas en las técnicas de PCR en tiempo real (López-Andreo y col., 2005; Laube y col., 2007; Jonker y col., 2008). A diferencia de otros agentes fluorescentes, las sondas TaqMan® (Holland y col., 1991) son oligonucleótidos marcados con fluorocromos en los dos extremos, que son capaces de hibridar en regiones internas y específicas de la secuencia del ADN diana, evitando falsos positivos si se generan productos de PCR inespecíficos o dímeros de cebadores.

El fluorocromo situado en el extremo 5´ se llama donador (reporter) y el del extremo 3´ recibe el nombre de aceptor (quencher). Cuando la sonda (que se incluye en la reacción de PCR conjuntamente con los cebadores) está íntegra, la proximidad del donador y del aceptor provoca un fenómeno denominado FRET (transferencia de energía de resonancia de Förster o transferencia de energía de resonancia fluorescente), que se traduce en la anulación de la fluorescencia de la sonda. En el curso de la reacción de PCR, la sonda se une a su secuencia diana cuando se encuentra presente en la reacción. Durante la extensión de la cadena de ADN, la actividad 5´ exonucleasa de la enzima Taq polimerasa provoca la liberación del donador del extremo 5´ de la sonda, que al separarse del aceptor comienza a emitir fluorescencia. La acumulación de los productos de PCR se detecta monitorizando el aumento de fluo-

técnicas de LABORATORIO

rescencia por la liberación del donador (Gaˇspari cˇ y col., 2010; Ruijter y col., 2014). Los ensayos de PCR con sondas TaqMan® permiten combinar en una reacción sondas marcadas con diferentes fluoróforos para detectar distintos ADN diana en la misma muestra. Esta variante de la amplificación en tiempo real se conoce como PCR múltiple, donde se emplean dos o más sistemas de cebadores-sonda en un único tubo con el fin de amplificar y detectar simultáneamente diferentes dianas (Ali y col., 2014).

En la actualidad, existen en el mercado distintos equipos de PCR en tiempo real, todos ellos compuestos por un termociclador que contiene un lector de fluorescencia. Los más utilizados son los fabricados por Applied Biosystems (Foster City, California, USA) y Roche Diagnostics (Mannheim, Alemania).

Las principales diferencias entre ellos están relacionadas con la rapidez y el número de muestras que se pueden procesar a la vez. El número de canales de lectura que presentan los equipos también es importante a la hora de detectar la emisión de distintos fluorocromos simultáneamente. De esa forma, se pueden identificar diferentes tipos de ADN diana en la misma reacción (PCR múltiple), incorporando controles internos para detectar la presencia de inhibidores. Los equipos de PCR en tiempo real disponibles actualmente en el mercado presentan, como máximo, seis canales de lectura permitiendo una detección limitada de marcadores genéticos en un mismo ensayo.

En el ámbito de la industria alimentaria, las aplicaciones de la técnica de PCR en tiempo real se circunscriben a las siguientes áreas: a) detección y cuantificación de organismos modificados genéticamente (OMGs) (Huber y col., 2013), b) detección y enumeración de microorganismos (Postollec y col., 2011) y c) autentificación de alimentos y piensos (Ballin, 2010 Ali y col., 2012, 2014).

La Tabla 2 incluye algunos de los principales trabajos sobre la aplicación de los ensayos de PCR en tiempo real para la detección y cuantificación de componentes de origen animal en piensos. La mayoría de estos trabajos detectan la presencia en piensos de harinas de especies rumiantes, y en menor medida, harinas de otros mamíferos, aves y especies de pescado.

Por ejemplo, Fumière y col. (2006) diseñaron dos parejas de cebadores y dos sondas TaqMan® en una región de 68 pb comprendida entre los genes mitocondriales ARNtLys y la subunidad 8 de la ATPasa, para detectar harinas de carne y huesos de vaca y de cerdo en harinas de pescado y piensos compuestos. Para evaluar la influencia de los tratamientos térmicos en la aplicabilidad del ensayo, las harinas de carne y huesos de vaca y cerdo se sometieron a 125, 130, 135, 138 y 141 °C durante 20 minutos. Los resultados obtenidos mostraron la capacidad de la técnica para detectar la presencia de las especies diana incluso en las muestras tratadas a 141 °C. Este ensayo fue evaluado en dos estudios comparativos, uno de ellos llevado a cabo en 2004 por la Dirección General de Sanidad y Protección de

717

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos los Consumidores de la UE (DG SANCO, Bélgica) (Gizzi y col., 2004) y el otro desarrollado por tres centros de investigación italianos en 2005: el Centro di Referenza per le Encefalopatie Animali (Turín, Italia), el Istituto Zooprofilattico Sperimentale di Piemonte, Liguria e Valle d’Aosta (Turín, Italia) y el Centro di Referenza per la Sorveglianza e il Controllo degli Alimenti per gli Animali (Brescia, Italia). En el estudio desarrollado por SANCO se analizaron 24 muestras de pienso para vaca que contenían un 5% de harinas de pescado o de aves, así como un 0,1 o 0,5% de harinas de vaca y cerdo tratadas a 127 o 134 °C durante 20 minutos. La técnica consiguió detectar y diferenciar entre las harinas de vaca y cerdo, y las harinas de pescado y aves en un 95% de las muestras analizadas. Los resultados del estudio comparativo realizado por los centros italianos fueron similares a los obtenidos por Gizzi y col. (2004), demostrando la conveniencia del empleo de la técnica de PCR en tiempo real para la detección de hasta un 0,1% de harinas animales sometidas a las condiciones de procesado requeridas por la Unión Europea para procesar los subproductos animales.

Prado y col. (2007) llevaron a cabo un estudio interlaboratorial que evaluaba la capacidad de cuatro protocolos de PCR en tiempo real para detectar e identificar la presencia de harinas de vaca y otros rumiantes en piensos. Los protocolos fueron desarrollados por tres laboratorios expertos de la Unión Europea: el Walloon Agricultural Research Centre (CRA-W, Bélgica), el Netherlands Organisation for Applied Scientific Research (TNO, Países Bajos) y la Veterinary Laboratories Agency (VLA, Inglaterra), los cuales analizaron 15 muestras de piensos para vaca, cerdo y pollo que contenían distintos porcentajes (0, 0,1 y 0,5%) de harinas de carne y huesos de vaca tratadas a 133 °C y 3 bar de presión durante 20 minutos, así como un 5% de harinas de plumas, pescado o carne y huesos de cerdo. Los resultados obtenidos demostraron la capacidad de los cuatro protocolos para detectar hasta un 0,1% de harinas de carne y huesos de vaca, incluso en las muestras que contenían un 5% de harinas de pescado y plumas. Sin embargo, se obtuvieron algunos falsos positivos, concretamente en las muestras de piensos para cerdo que no contenían harinas de carne y huesos (controles negativos), analizados con los sistemas desarrollados por los laboratorios CRA-W y TNO. La presencia de cantidades residuales de grasa animal en los piensos para cerdo podría explicar estos resultados. Por ello, en este estudio también se evaluó la capacidad de los ensayos para detectar grasa de vaca en piensos. Los sistemas desarrollados por los laboratorios CRA-W y TNO permitieron detectar hasta un 4% de grasa de vaca en las muestras analizadas, mientras que con el sistema de PCR diseñado por el VLA se obtuvieron resultados negativos.

Prado y col. (2009) evaluaron la posibilidad de realizar la transferencia del ensayo de PCR en tiempo real desarrollado por el laboratorio Walloon Agricultural Research Centre (CRA-W, Bélgica) a otro laboratorio experto de la Unión Europea, el Institute for Reference Materials and Measurements (IRMM, Bélgica) para detectar la presencia de harinas de vaca en pien-

técnicas de LABORATORIO

sos. Así, ambos laboratorios aplicaron la técnica al análisis de muestras de piensos para rumiantes que contenían 0, 0,05, 0,1 y 0,25% de harinas de carne y huesos de vaca sometidas a un tratamiento de 134 °C durante 20 minutos. Los resultados obtenidos mostraron que, si bien los diferentes métodos de extracción de ADN utilizados por los laboratorios influían en la sensibilidad de la técnica, fue posible la detección de hasta un 0,1% de harinas animales en los piensos analizados. Estos resultados reflejarían la conveniencia de la técnica de PCR en tiempo real para el control rutinario de los piensos, independientemente del laboratorio donde se realice el análisis.

Myers y col. (2010) estudiaron la influencia de los distintos métodos de extracción de ADN sobre la capacidad de una técnica de PCR en tiempo real para detectar harinas animales en piensos. Estos investigadores evaluaron ocho kits comerciales: DNA forensic (Invitek, Berlín, Alemania), ChargeSwitch® gDNA Rendered Meat Purification (Invitrogen Corp., Carlsbad, California, USA), Nucleon™ HT for Hard Tissue (Amersham BioScience, Piscataway, New Jersey, USA), Promega Wizard® MiniPrep (Promega Corp., Madison, Wisconsin, USA), Roche High Pure PCR Template Preparation (Roche Applied Science, Indianapolis, Indiana, USA), QIAamp® DNA Mini, DNeasy Tissue y QIAamp® DNA Stool Mini (Qiagen, Valencia, California, USA). Para ello, extrajeron el ADN a partir de: a) harinas de carne y huesos de vaca y cerdo tratadas de 125 a 131 °C durante 30 minutos, o a 133 °C durante 20 minutos, b) harinas de oveja y c) piensos para vacas lecheras que contenían 0,1% de harinas bovinas.

A pesar de que los resultados obtenidos fueron satisfactorios, los valores registrados tras las amplificaciones mostraron que la clase de muestra analizada, así como el tipo de kit empleado, influían en la calidad y cantidad del ADN extraído.

Benedetto y col. (2011) llevaron a cabo una técnica de PCR en tiempo real para la detección y cuantificación de harinas de pescado en piensos, utilizando sondas TaqMan® MGB (Minor Groove Binder) y una pareja de cebadores que amplificaba fragmentos de pequeño tamaño (121-124 pb) en el gen mitocondrial 12S ARNr de pescados. El análisis de mezclas binarias que contenían distintos porcentajes (0,08-10%) de harinas de pescado indicó la capacidad del ensayo para detectar hasta el porcentaje más bajo, y hasta 0,2 pg de ADN diana. No obstante, los resultados también pusieron de manifiesto que la aplicación de esta técnica para la cuantificación de especies en piensos se encuentra limitada debido a la variabilidad asociada al número de mitocondrias existentes en cada tejido a analizar.

Prado y col. (2012) desarrollaron una técnica de PCR en tiempo real en el gen nuclear de la rodopsina, para detectar y cuantificar harinas de pescado en piensos. A pesar de que el empleo de genes nucleares de copia única supera el inconveniente del diferente número de copias de los marcadores mitocondriales

718

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos en función del tejido, la variabilidad observada en los resultados no permitió una cuantificación precisa de las harinas de pescado. No obstante, el método de PCR desarrollado permitió la detección de ADN procedente de las 22 especies de pescados incluidas en los análisis. En otro trabajo, Prado y col. (2013) diseñaron una pareja de cebadores y una sonda TaqMan® en el gen nuclear que codifica la parvalbúmina, para detectar dos especies de pescados, caballa y jurel, de uso común en harinas de pescado destinadas a la alimentación animal. Los resultados obtenidos demostraron la capacidad del método para detectar y diferenciar el ADN de ambas especies.

Von Holst y col. (2012) evaluaron la influencia del tratamiento térmico en la capacidad de una técnica de PCR en tiempo real para detectar y cuantificar harinas animales en piensos. Para ello analizaron harinas de carne y huesos de dos especies (vaca y cerdo) esterilizadas a 130, 135, 138 y 141 °C. El análisis de las muestras demostró que, a medida que aumentaba la intensidad del tratamiento térmico, se observaba una disminución en el número de copias de ADN detectadas, siendo ésta más acusada en el intervalo de temperaturas de 135 a 138 °C. Ekins y col. (2012) diseñaron un ensayo de PCR dúplex en tiempo real con sondas TaqMan® para la detección de harinas de carne y huesos de vaca, oveja y cabra tratadas a diferentes temperaturas, empleando una pareja de cebadores específicos de rumiantes en el gen citocromo oxidasa I y otra pareja como control endógeno. El método desarrollado permitió la detección de hasta un 0,1% de harinas de vaca, oveja y cabra en todas las muestras analizadas en menos de una hora y media.

Debido a la demostrada utilidad de la técnica de PCR en tiempo real para el de control de la autenticidad de piensos, en el transcurso de 2012, el EURL-AP (Bélgica) validó un nuevo método de detección de componentes de origen rumiante basado en esta metodología y desarrollado por la Netherlands Organisation for Applied Scientific Research (TNO, Países Bajos) (Fumière y col., 2012a). Un estudio posterior, organizado por el EURL-AP y desarrollado conjuntamente con los laboratorios nacionales de referencia de los estados miembros, demostró la aplicabilidad de la metodología de PCR en tiempo real para el control rutinario de los piensos en la Unión (Fumière y col., 2012b). La técnica emplea una pareja de cebadores comunes al grupo de los rumiantes que delimitan un fragmento específico de un gen nuclear multicopia de estas especies, y una sonda TaqMan® interna a la región delimitada por la pareja de cebadores específicos. Estos estudios concluyen que la utilización de este nuevo método de PCR en tiempo real, solo o en combinación con el examen microscópico, según proceda, constituye una herramienta útil de detección de material rumiante para garantizar el cumplimiento de las normas de la UE, facilitar la trazabilidad de los productos comercializados y evitar prácticas fraudulentas en la elaboración de piensos. Por lo tanto, y como ya se ha señalado, de conformidad con las disposiciones establecidas en el nuevo Reglamento UE 51/2013

técnicas de LABORATORIO

(DOUE de 23 de enero de 2013), la determinación de los componentes de origen animal con fines de control oficial de los piensos se realizará por microscopia óptica y/o por la técnica de PCR en tiempo real. El método oficial de PCR, desarrollado por la TNO (Países Bajos) y validado por el EURL-AP (Bélgica) (Fumière y col., 2012a), constituye un importante avance en la identificación de proteínas animales en piensos, y una herramienta muy útil para reforzar la trazabilidad y autenticidad de los productos. Según las disposiciones del Reglamento UE 51/2013, para llevar a cabo el análisis por PCR de un pienso se submuestrarán 50 g de la muestra cuidadosamente molida, de los que se prepararán dos porciones para análisis de al menos 100 mg cada una. La extracción del ADN amplificable se realizará en cada porción para análisis, en paralelo con dos controles de extracción (blanco y positivo), empleando el kit comercial Wizard® Magnetic DNA Purification System for Food (Promega, Madison, WI, USA) de conformidad con los PNT establecidos por el EURL-AP y publicados en su sitio web (http:// eurl.craw.eu/). A continuación, la amplificación genética se llevará a cabo utilizando: (1) soluciones de mezclas de reacción que no contengan reactivos que pudieran falsear los resultados debido a la presencia de ADN de origen animal, y (2) cebadores y sondas con secuencias de oligonucleótidos validadas por el EURL-AP que, al igual que los procedimientos de extracción de ADN, están detalladas en los PNT y publicados en su sitio web.

Finalmente, la expresión de los resultados se notificará como presencia o ausencia de ADN de la especie animal o grupo de especies animales diana, y se basará en la integración de los resultados de las dos porciones para análisis. Hasta la fecha, las secuencias disponibles en la web (http://eurl.craw.eu/) consisten en una pareja de cebadores específicos y comunes al grupo de los rumiantes diseñados en un gen nuclear multicopia de estas especies, y una sonda interna a la región delimitada por la pareja de cebadores específicos. En un estudio comparativo organizado en 2013 por el EURLP AP, y en el que participaban 27 laboratorios nacionales de referencia, se evaluó la aplicabilidad del nuevo método oficial de PCR en tiempo real para la detección de proteína de origen rumiante en piensos. La técnica se aplicó al análisis de cinco muestras ciegas, dos de las cuales eran piensos sin adulterar destinados a la alimentación de pescados, otras dos contenían 0,1% de proteína animal procesada de vaca tratada a 137 °C, y la muestra restante era un pienso que contenía de manera aleatoria proteína animal procesada de vaca, oveja o cerdo. Los resultados obtenidos mostraron una excelente reproducibilidad, en términos de sensibilidad y especificidad, que indican la adecuada implementación del método oficial de PCR en tiempo real por parte de los laboratorios participantes (Fumière y col., 2013). Un estudio posterior, publicado por Fumière y col. (2014) y desarrollado por 27 laboratorios nacionales de referencia, evaluó el método oficial de PCR en tiempo real para la detección de proteína rumiante en piensos de acuicultura. La técnica se aplicó al análisis

719

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos de seis muestras ciegas, cinco de las cuales contenían hasta 0,1% de proteína animal procesada de vaca tratada a 137 °C, y la muestra restante contenía 0,1% de proteína de oveja tratada a 133 °C. Los resultados obtenidos por la mayoría de los laboratorios participantes (19 de los 27) concordaron con la composición de las muestras.

A pesar de las ventajas que ofrecen los microarrays de ADN en términos de rapidez y sencillez, su utilización en el control rutinario para la identificación de especies animales en piensos se encuentra todavía limitada debido su elevado coste y a la laboriosidad del diseño del chip.

4.4. Técnicas de secuenciación masiva en paralelo Pirosecuenciación

4.3. Microarrays de ADN Un microarray o chip de ADN consiste en una red muy precisa de alta densidad compuesta de moléculas de ácidos nucleicos de una sola cadena, denominados sondas, unidas covalentemente a la superficie de un pequeño soporte sólido. La utilidad de este formato deriva de la propiedad que tienen las sondas para hibridar, con una elevada especificidad, a una secuencia complementaria. Por ello los microarrays de ADN se pueden emplear para “interrogar” mezclas complejas de miles de ácidos nucleicos, permitiendo localizar una secuencia homóloga denominada diana en una muestra problema (Justé y col., 2008).

Chisholm y col. (2008) utilizaron el sistema FoodExpert ID® desarrollado por bioMerieux (Marcy-l’Etoile, Francia), para detectar e identificar hasta 32 especies animales (mamíferos, aves y pescado) en alimentos y piensos. FoodExpert ID® está constituido por un chip de ADN que contiene aproximadamente unas 80.000 sondas complementarias a secuencias específicas del gen citocromo b de vertebrados. Para utilizar este sistema, el ADN de las muestras se amplifica y posteriormente se transcribe en ARN, se marca con compuestos fluorescentes y se hibrida con el chip. Las secuencias complementarias a las sondas del chip se unen a este, y son detectadas mediante un lector de fluorescencia. El empleo de este chip de ADN permitió detectar un 1% de cerdo, oveja y vaca, así como un 0,1% de pollo y pavo en los piensos analizados.

Teletchea y col. (2008) utilizaron la técnica de microarrays de ADN para identificar 71 especies animales en alimentos. Para ello, amplificaron tres fragmentos de 373, 268 y 124 pb del gen citocromo b. La hibridación de las secuencias diana con las sondas especie-específicas permitió la detección de las especies analizadas en muestras cárnicas. Además, demostraron la aplicabilidad de la técnica para el análisis de alimentos procesados y la compararon con otras técnicas como la PCR-secuenciación. La técnica de microarrays de ADN demostró ser más adecuada, ya que permitió detectar con mayor rapidez un gran número de especies en las muestras analizadas.

Iwobi y col. (2011) compararon y evaluaron dos kits comerciales para detectar hasta 14 especies animales en alimentos: el sistema CarnoCheck® (Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Alemania) y MeatSpecies 1.6 LCD Array Kit (Chipron GmbH, Berlín, Alemania). El empleo de ambos chips de ADN permitió detectar entre 0,1 y 0,5% de las especies diana en mezclas cárnicas.

Asimismo, demostraron la aplicabilidad de los dos sistemas mediante el análisis de más de 70 muestras cárnicas comerciales.

técnicas de LABORATORIO

Desde los años 70 a la actualidad, hemos asistido a una revolución en el área de la biología molecular y, en concreto, en el campo de la secuenciación de ácidos nucleicos. El método enzimático de terminación de cadena descrito por Sanger y col.

(1977) ha sido la técnica de secuenciación de ADN más utilizada en las últimas décadas. Esta técnica se basa en la extensión de la cadena simple de ADN mediante la incorporación de análogos de nucleótidos que sirven como terminadores de cadena, ya que carecen de terminaciones 3´ hidroxilo. De este modo, se acumulan una serie de cadenas de distintas longitudes que se separan en un gel de electroforesis, donde los fragmentos aparecen como una escalera de bandas, y la secuencia puede determinarse leyendo el patrón de bandas obtenidas.

Posteriormente, el empleo de compuestos fluorescentes y otras modificaciones permitieron automatizar el proceso, consiguiendo enormes avances como la secuenciación del genoma humano completo (International Human Genome Consortium, 2004). No obstante, el método de secuenciación automática sigue siendo una herramienta analítica costosa para análisis rutinarios. En la búsqueda de soluciones más económicas y rápidas, los laboratorios y empresas biotecnológicas han desarrollado nuevas tecnologías capaces de generar cientos de miles de reacciones de secuencias en paralelo gracias a la inmovilización de dichas reacciones (nanorreacciones) en una superficie sólida. De esta forma, la cantidad de reactivos necesarios se minimiza y se abarata el coste por base leída. Mientras que la secuenciación automática se considera como una tecnología de “primera generación”, a los métodos desarrollados posteriormente se les conoce como métodos de secuenciación masiva en paralelo (MPS, Massive Parallel Sequencing) o de “nueva generación” (NGS, Next Generation Sequencing) (Metzker, 2010). En la actualidad, existen en el mercado distintas tecnologías de secuenciación masiva de ADN, entre las que se incluyen: la pirosecuenciación (Ronaghi y col., 1996, 1998), la secuenciación por nanoporos (Deamer y Branton, 2002; Wanunu y Meller, 2008), la secuenciación por hibridación (SBH, Sequencing By Hybridization) (Bains y Smith, 1988; Drmanac y col., 1989; Khrapko y col., 1989), la secuenciación por terminadores reversibles (CRT, Cyclic Reversible Termination) (Canard y Sarfati, 1994; Metzker y col., 1994) o la secuenciación por ligación (SBL, Sequencing By Ligation) (Brenner y col., 2000).

Las técnicas de secuenciación masiva han revolucionado el campo de la genómica y, en particular, la investigación en epigené-

720

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos tica (Wold y Myers, 2008; Roadmap Epigenomics Consortium, 2015). Entre ellas, la pirosecuenciación fue el primer método utilizado en una plataforma comercial de secuenciación masiva en paralelo (Margulies y col., 2005), y marcó el comienzo de la nueva era del análisis genómico. La técnica de pirosecuenciación se basa en la detección del pirofosfato liberado en la reacción de polimerización que, mediante una cascada de reacciones enzimáticas, genera luz visible proporcional al número de nucleótidos incorporados durante la elongación. La adición consecutiva de nucleótidos genera un Pirograma®. Éste representa la dispensación secuencial de los nucleótidos y la intensidad lumínica asociada que permite su cuantificación (Ronaghi, 2001). Margulies y col. (2005) desarrollaron la primera plataforma comercial de secuenciación masiva en paralelo, que permitió secuenciar 25 millones de bases, con al menos un 99% de precisión, en 4 horas, alcanzando un rendimiento 100 veces superior a la cantidad de bases secuenciadas en ese tiempo mediante un secuenciador automatizado de Sanger. En esta técnica, el ADN diana se fragmenta y mediante ligación se le añaden secuencias adaptadoras a los extremos. Los fragmentos de ADN a continuación se separan en una sola hebra que se inmoviliza sobre la superficie de unas esferas en condiciones tales que favorecen que en cada esfera haya una sola molécula de ADN. Posteriormente, se amplifican en una PCR emulsionada, y se obtienen esferas con millones de copias del ADN molde. La emulsión se rompe, se desnaturaliza el ADN, y las esferas se depositan en pocillos individuales de una placa de muy pequeño volumen (escala de picolitros), donde tienen lugar las reacciones de pirosecuenciación (Margulies y col., 2005). Si bien una de las limitaciones de la técnica hace referencia al largo de lectura (de solo 100 nucleótidos), los equipos de secuenciación más recientes ya proporcionan lecturas de más de 800 nucleótidos de longitud, comparables a las obtenidas por el método de Sanger. No obstante, su gran inconveniente es la dificultad para las lecturas de regiones homopoliméricas (Metzker, 2010).

Los métodos de secuenciación masiva en general, y la pirosecuenciación en particular, constituyen una herramienta con un futuro prometedor en diversas áreas científicas, incluida la trazabilidad y autenticidad de alimentos y piensos. Sin embargo, su empleo en este campo es aún incipiente. Por ejemplo, Binladen y col. (2007) demostraron la capacidad de la técnica de pirosecuenciación masiva en paralelo para la lectura simultánea de fragmentos del gen mitocondrial 16S ARNr, permitiendo la diferenciación de 13 especies de mamíferos. Ortola-Vidal y col. (2007) analizaron un fragmento de 104 pb del gen rbcL del cloroplasto, que permitió identificar polimorfismos de un solo nucleótido (SNP, Single Nucleotide Polymorphism) en varias especies de frutas. Asimismo, De Battisti y col. (2014) han empleado la técnica de pirosecuenciación para la detección de fraudes alimentarios, concretamente en productos derivados de la pesca. En este trabajo, se llevó a cabo la diferenciación de 25 especies de pescado en muestras crudas y procesadas mediante la amplificación y secuenciaron tres fragmentos de ADN en los genes 16S ARNr, citocromo b y la subunidad 2 de la NADH deshidrogenasa.

técnicas de LABORATORIO

Algunos autores han empleado la pirosecuenciación para generar secuencias de ADN de referencia que actúen como etiquetas de identificación molecular de las especies objeto de análisis, en una técnica conocida como DNA barcoding o “código de barras de ADN”. Esta tecnología se basa en la amplificación por PCR y secuenciación de un fragmento de aproximadamente 650 pb del gen mitocondrial que codifica la subunidad 1 de la enzima citocromo c oxidasa (COI), con el fin de generar secuencias de ADN diagnósticas. Así, mediante el estudio y comparación de cada secuencia de ADN problema con muestras de referencia, es posible la categorización de las secuencias y la consiguiente identificación del origen de las muestras analizadas. Este sistema aporta grandes ventajas en comparación con los estándares taxonómicos empleados por bases de datos como Genbank/EMBL (European Molecular Biology Laboratory), dado que una gran parte de las secuencias acumuladas en dicha plataforma no cuenta con ejemplares de referencia de las especies estudiadas. Además, otra característica innovadora de la iniciativa DNA barcoding es que se utiliza la información de una misma región genética en todos los taxones, y con condiciones de secuenciación universalmente aceptadas y estandarizadas. El número de nuevas especies identificadas mediante esta técnica está creciendo exponencialmente y se espera que durante los próximos años se complete la biblioteca de códigos de barras genéticos de todas las especies conocidas (Galimberti y col., 2013, 2015). Sin embargo, cabe resaltar que la mayoría de estos trabajos se centran en estudios de biodiversidad y ecología (Raye y col., 2011), siendo aún incipientes las investigaciones dirigidas a la identificación de especies animales en alimentos (Dalton y Kotze, 2011).

Además, es importante señalar que esta técnica no resultaría adecuada para el análisis de alimentos y piensos sometidos a tratamientos térmicos intensos, ya que la degradación del ADN impediría la amplificación por PCR de fragmentos de elevado tamaño, como es el caso del fragmento de 650 pb del gen citocromo oxidasa (COI).

En resumen, debido a las ventajas en cuanto a rapidez, automatización y rendimiento, así como al progresivo abaratamiento de las técnicas de secuenciación masiva de ADN, en los próximos años se prevé su aplicación de forma rutinaria en diversos campos científicos. Concretamente, el empleo combinado de estas nuevas tecnologías y los métodos genéticos tradicionalmente empleados en el análisis de alimentos y piensos, constituye una herramienta con un futuro prometedor.

Bibliografía La bibliografía de esta segunda y última parte del trabajo contiene 130 referencias. Si desean conocerla en detalle escriban un e-mail a la autora de contacto (npegels@vet.ucm. es) o bien consulten la versión electrónica de este mismo número de Técnicas de Laboratorio (véase el número 407 en el link http://tecnicasdelaboratorio.publica.es)

721

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos Tabla 1. Principales trabajos sobre la aplicación de la técnica de PCR convencional para la detección e identificación de componentes de origen animal en piensos.

Especies

Marcador genético

Límite de detección

Referencia

V

ATPasa6 y 8

0,125% HCH de vaca

Tartaglia y col.

(1998)

V, O, C y P

ATPasa8

0,3% ADN de oveja y vaca y 1% de cerdo

Colgan y col. (2001)

V, O, C y P

ADN mitocondrial

1% HCH de vaca y cerdo y 5% de oveja y pollo

Lahiff y col. (2001)

V

satélite bovino 1709

1% HCH de vaca

Calvo y col. (2002)

R, S y A

SINE (Art2, PRE-1) y LINE CR1)

0,01% HCH de vaca

Tajima y col. (2002)

R, C y A

12S ARNr

0,125% HCH de vaca, oveja, cerdo y pollo y 0,5% de cabra

Bellagamba y col.

(2003)

Vertebrados

16S ARNr

0,06% harinas de pescado

Bottero y col.

(2003a, b)

V

lactoferrina

0,02% HCH de vaca

Gao y col. (2003)

V, O, C y P

ARNtlys, ATPasa6 y 8

0,01% HCH de las especies diana

Krcmár y Rencová (2003)

R, CB y C

COII y ARNtlys

2% HCH de vaca y 10% harinas de sangre de cerdo

Myers y col. (2003)

R, C, A y PD

12S, 16S ARNr y ARNtval

0,004% ADN de pescado y 0,002% resto de las especies

Dalmasso y col.

(2004)

Perro

D-loop

0,05% ADN de perro

Gao y col. (2004)

V, M, R, O y CBR

ATPasa8

0,01-0,1% HCH de vaca (vaca, mamíferos y rumiantes)

Kusama y col.

(2004)

V

cytB

0,025% tejido muscular de vaca

Pascoal y col. (2005)

V, O, CBR y CV

12S, 16S ARNr y ARNtval

0,05% HCH de las especies diana

Ha y col. (2006)

V, O, C y P

ATPasa8, 16S ARNr y cytB

0,2% HCH de las especies diana

Frezza y col. (2008)

C

ATPasa6

0,001% HCH de cerdo

Yoshida y col.

(2009)

A

12S ARNr

0,1-3% ADN diana

Farajollahi y col.

(2009)

CV

16S ARNr

0,1 pg ADN diana

Shinoda y col.

(2010)

V, O, CBR, PD

ATPasa8, 12S ARNr y cytB

0,01% HCH de las especies diana

Safdar y Junejo (2015a)

HCH, Harinas de carne y huesos; V, Vaca; O, Oveja; C, Cerdo; P, Pollo; R, Rumiantes; S, Suidos; A, Aves; CB, Caballo; PD, Pescado; CBR, Cabra; CV, Cérvidos; M, Mamíferos.

Fuente: Elaboración propia.

técnicas de LABORATORIO

722

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos

FASES DEL CICLO DE AMPLIFICACIÓN

Sistemas de detección

A.1)

Desnaturalización

Hibridación

Extensión

SYBR® Green

Molecular Beacons

A.2)

Hybridization probe (FRET)

Light-Up® probe

TaqMan® probe

B.1)

NuPCRTM system

QZymeTM probe

LUXTM primer B.2) Scorpion® probe

ADN complementario

LEYENDA

ADN molde

Cebador

Actividad enzimática

Quencher

Fluoróforo, la señal fluorescente se representa con un halo

Figura 1. Representación esquemática de los sistemas de detección de fluorescencia en los ensayos de PCR en tiempo real más utilizados.

Fuente: Gaˇsparicˇ y col. (2010); Ruijter y col. (2014)

técnicas de LABORATORIO

723

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos Tabla 2. Principales trabajos sobre la aplicación de la técnica de PCR en tiempo real para la detección e identificación de componentes de origen animal en piensos.

Especies

Marcador genético

Límite de detección

Referencia

V

ATPasa6 y 8

0,001% ADN de vaca

Lahiff y col. (2002)

V

hormona del crecimiento

1% HCH de vaca

Brodmann y Moor (2003)

R

SINE Bov-A2

10 fg ADN de vaca

Mendoza-Romero y col. (2004)

R

16S ARNr

0,001% ADN de vaca

Chiappini y col. (2005)

R

cytB

0,001% HCH de vaca y 0,1% de oveja

Rensen y col. (2005, 2006)

R

SINE Bov-B

0,1% HCH de vaca y oveja

Aarts y col. (2006)

VyR

ADN mitocondrial y elementos repetitivos

0,1% HCH de vaca

Prado y col. (2007)

V

12S ARNr

0,1% HCH de vaca

Martín y col. (2008)

CV

cytB

0,1% harina de carne de ciervo

Chen y col. (2009)

R

COI

0,1% HCH de vaca, oveja y cabra

Ekins y col. (2012)

V y CBR

16S ARNr y 12S ARNr

0,003% HCH de vaca y 0,005% de oveja

Safdar y col. (2014)

Rumiantes

Otros mamíferos, aves y pescados V, O, C y P

ARNtlys , ATPasa6 y 8

0,01% HCH de las especies diana

Krcmár y Rencová (2005)

R, C y P

gen PRNP

0,1% HCH de rumiantes

Bellagamba y col.

(2006)

VyC

ARNtlys y ATPasa8

0,1% HCH de vaca y cerdo

Fumière y col. (2006)

V, O, C y P

ATPasa8, 16S ARNr y cytB

0,5% HCH de las especies diana

Frezza y col. (2008)

V, O, C y P

16S ARNr

0,1% HCH de las especies diana

Cawthraw y col.

(2009)

V, O, CBR y A

ATPasa8, 16S ARNr y cytB

0,1% HCH de vaca y oveja

Yancy y col. (2009)

C

12S ARNr

0,1% HCH de cerdo

Martín y col. (2009)

PD

12S ARNr

0,078% harinas de pescado

Benedetto y col.

(2011)

PD

12S ARNr

0,1% harinas de pescado

Martín y col. (2010)

PD

genes RHO y PVALB

≤ 0,05 ng ADN de pescado

Prado y col. (2012, 2013)

VyP

12S ARNr y cytB

0,001% HCH de las especies diana

Safdar y Junejo (2015b)

HCH, Harinas de carne y huesos; V, Vaca; O, Oveja; CBR, Cabra; C, Cerdo; P, Pollo; R, Rumiantes; A, Aves; PD, Pescado; CV, Cérvidos.

Fuente: Elaboración propia.

técnicas de LABORATORIO

724

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos 1. ALI, M.E., KASHIF, M., UDDIN, K., HASHIM, U., MUSTAFA, S. y CHE MAN, Y.B. (2012). Species authentication methods in foods and feeds: the present, past, and future of halal forensics. Food Analytical Methods 5, 935-955.

2. ALI, M.E., RAZZAK, M.A. y HAMID, S.B.A. (2014). Multiplex PCR in species authentication: probability and prospects - a review. Food Analytical Methods 7, 1933-1949.

3. ASENSIO, L., GONZÁLEZ, I., GARCÍA, T. y MARTÍN, R. (2008). Determination of food authenticity by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). Food Control 19, 1-8.

4. ASENSIO, L., GONZÁLEZ, I., ROJAS, M., GARCÍA, T. y MARTÍN, R. (2009). PCR-based methodology for the authentication of grouper (Epinephelus marginatus) in commercial fish fillets. Food Control 20, 618-622.

5. BAI, W.L., YIN, R.H., ZHAO, S.J., DOU, Q.L., YANG, J.C., JIANG, W.Q., ZHAO, Z.H. y LUO, G.B. (2009). Rapid detection of bovine milk in yak milk using a polymerase chain reaction technique. Journal of Dairy Science 92, 1354-1360.

6. BAINS, W. y SMITH, G.C. (1988). A novel method for nucleic acid sequence determination. Journal of Theoretical Biology 135, 303-307.

7. BALLIN, N.Z., VOGENSEN, F.K. y KARLSSON, A.H. (2009).

Species determination - can we detect and quantify meat adulteration? Meat Science 83, 165-174.

8. BELLAGAMBA, F., COMINCINI, S., FERRETTI, L., VALFRÉ, F. y MORETTI, V.M. (2006). Application of quantitative realtime PCR in the detection of prion-protein gene speciesspecific DNA sequences in animal meals and feedstuffs.

Journal of Food Protection 69, 891-896.

9. BELLAGAMBA, F., VALFRÈ, F., PANSERI, S. y MORETTI, V.M. (2003). Polymerase chain reaction-based analysis to detect terrestrial animal protein in fish meal. Journal of Food Protection 66, 682-685.

10. BELLORINI, S., STRATHMANN, S., BAETEN, V., FUMIÈRE, O., BERBEN, G., TIRENDI, S. y VON HOLST, C. (2005).

Discriminating animal fats and their origins: assessing the potentials of Fourier transform infrared spectroscopy, gas chromatography, immunoassay and polymerase chain reaction technique. Analytical and Bioanalytical Chemistry 382, 1073-1083.

11. BENEDETTO, A., ABETE, M.C. y SQUADRONE, S. (2011).

Towards a quantitative application of real-time PCR technique for fish DNA detection in feedstuffs. Food Chemistry 126, 1436-1442.

12. BINLADEN, J., GILBERT, M.T.P., BOLLBACK, J.P., PANITZ, F., BENDIXEN, C., NIELSEN, R. y WILLERSLEV, E. (2007).

The use of coded PCR primers enables high-throughput sequencing of multiple homolog amplification products by 454 parallel sequencing. PLoS One 2, e197.

técnicas de LABORATORIO

13. BOTTERO, M.T., DALMASSO, A., NUCERA, D., TURI, R.M., ROSATI, S., SQUADRONE, S., GORIA, M. y CIVERA, T. (2003b). Development of a PCR assay for the detection of animal tissues in ruminant feeds. Journal of Food Protection 66, 2307-2312.

14. BREMER, M.G.E.G., MARGRY, R.J.C.F., VAESSEN, J.C.H., VAN DOREMALEN, A.M.H., VAN DER PALEN, J.G.P., VAN KAATHOVEN, R.G.C., KEMMERS-VONCKEN, A.E.M. y VAN RAAMSDONK, L.W.D. (2013). Evaluation of a commercial ELISA for detection of ruminant processed animal proteins in non-ruminant processed animal proteins. Journal of AOAC Internacional 96, 552-559.

15. BRENNER, S., WILLIAMS, S.R., VERMAAS, E.H., STORCK, T., MOON, K., MCCOLLUM, C., MAO, J.I., LUO, S., KIRCHNER, J.J., ELETR, S., DUBRIDGE, R.B., BURCHAM, T. y ALBRECHT, G. (2000). In vitro cloning of complex mixtures of DNA on microbeads: physical separation of differentially expressed cDNAs. Proceeding of National Academy Sciences of the United States of America 97, 1665-1670.

16. BRODMANN, P.D. y MOOR, D. (2003). Sensitive and semi-quantitative TaqMan™ real-time polymerase chain reaction systems for the detection of beef (Bos taurus) and the detection of the family Mammalia in food and feed.

Meat Science 65, 599-607.

17. CALVO, J.H., RODELLAR, C., ZARAGOZA, P. y OSTA, R. (2002). Beef- and bovine-derived material identification in processed and unprocessed food and feed by PCR amplification. Journal of Agricultural and Food Chemistry 50, 5262-5264.

18. CANARD, B. y SARFATI, R. (1994). DNA polymerase fluorescent substrates with reversible 3´-tags. Gene 148, 1-6.

19. CATANESE, G., MANCHADO, M., FERNÁNDEZ-TRUJILLO, A. y INFANTE, C. (2010). A multiplex-PCR assay for the authentication of mackerels of the genus Scomber in processed fish products. Food Chemistry 122, 319-326.

20. CAWTHRAW, S., SAUNDERS, G.C., MARTIN, T.C., SAWYER, J., WINDL, O. y REANEY, S.D. (2009). Realtime PCR detection and identification of prohibited mammalian and avian material in animal feeds. Journal of Food Protection 72, 1055-1062.

21. CHEN, F.-C., HSIEH, Y.-H.P. y BRIDGMAN, R.C. (2002).

Monoclonal antibodies against troponin I for the detection of rendered muscle tissues in animal feedstuffs. Meat Science 62, 405-412.

22. CHEN, F.-C., HSIEH, Y.-H.P. y BRIDGMAN, R.C. (2004).

Monoclonal antibody-based sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for sensitive detection of prohibited ruminant proteins in feedstuffs. Journal of Food Protection 67, 544-549.

725

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos 23. CHEN, Y., WU, Y., WANG, J., XU, B., ZHONG, Z. y XIA, J. (2009). Identification of cervidae DNA in feedstuff using a real-time polymerase chain reaction method with the new fluorescence intercalating dye EvaGreen. Journal of AOAC International 92, 175-180.

24. CHENG, Y.H., WEN, C.M., DING, S.T., KAO, C.C. y KUO, T.Y. (2003). Detecting meat-and-bone meal in ruminant’s feeds by species-specific PCR. Journal of Animal and Feed Science 12, 849-858.

25. CHIAPPINI, B., BRAMBILLA, G., AGRIMI, U., VACCARI, G., AARTS, H.J.M., BERBEN, G., FREZZA, D. y GIAMBRA, V. (2005).

Real-time polymerase chain reaction approach for quantitation of ruminant-specific DNA to indicate a correlation between DNA amount and meat and bone meal heat treatments.

Journal of AOAC International 88, 1399-1403.

26. CHISHOLM, J., CONYERS, C. y HIRD, H. (2008). Species identification in food products using the bioMerieux FoodExpert-ID® system. European Food Research and Technology 228, 39-45.

27. COLGAN, S., O’BRIEN, L., MAHER, M., SHILTON, N., McDONNELL, K. y WARD, S. (2001). Development of a DNA-based assay for species identification in meat and bone meal. Food Research International 34, 409-414.

28. DALMASSO, A., FONTANELLA, E., PIATTI, P., CIVERA, T., ROSATI, S. y BOTTERO, M.T. (2004). A multiplex PCR assay for the identification of animal species in feedstuffs.

Molecular and Cellular Probes 18, 81-87.

29. DALTON, D.L. y KOTZE, A. (2011). DNA barcoding as a tool for species identification in three forensic wildlife cases in South Africa. Forensic Science International 207, 51-54.

30. DE BATTISTI, C., MARCIANO, S., MAGNABOSCO, C., BUSATO, S., ARCANGELI, G. y CATTOLI, G. (2014).

Pyrosequencing as a tool for rapid fish species identification and commercial fraud detection. Journal of Agricultural and Food Chemistry 62, 198-205.

31. DEAMER, D.W. y BRANTON, D. (2002). Characterization of nucleic acids by nanopore analysis. Accounts of Chemical Research 35, 817-825.

32. DRMANAC, R., LABAT, I., BRUKNER, I. y CRKVENJAKOV, R. (1989). Sequencing of megabase plus DNA by hybridization: theory of the method. Genomics 4, 114-128.

33. EKINS, J., PETERS, S.M., JONES, Y.L., SWAIM, H., HA, T., LA NEVE, F., CIVERA, T., BLACKSTONE, G., VICKERY, M.C.L., MARION, B., MYERS, M.J. y YANCY, H.F. (2012). Development of a multiplex real-time PCR assay for the detection of ruminant DNA. Journal of Food Protection 75, 1107-1112.

34. FARAJOLLAHI, H., ASLAMINEJAD, A.A., NASSIRY, M.R., SEKHAVATI, M.H., MAHDAVI, M. y JAVADMANESH, A. (2009). Development and use of quantitative competitive

técnicas de LABORATORIO

PCR assay for detection of poultry DNA in fish meal.

Journal of Animal and Feed Sciences 18, 733-742.

35. FREZZA, D., GIAMBRA, V., CHEGDANI, F., FONTANA, C., MACCABIANI, G., LOSIO, N., FAGGIONATO, E., CHIAPPINI, B., VACCARI, G., VON HOLST, C., LANNI, L., SACCARES, S. y AJMONE-MARSAN, P. (2008). Standard and Light-Cycler PCR methods for animal DNA species detection in animal feedstuffs. Innovative Food Science & Emerging Technologies 9, 18-23.

36. FUMIÈRE, O., BAETEN, V. y BERBEN, G. (2009b). Evaluation of the «MELISA_TEK™ Ruminant kit» (ELISA technologies, Inc., Gainesville, FL, USA) for the detection of ruminant proteins in processed animal proteins. Report, July 2009, CRA-W, CRL-AP, Gembloux, Belgium. Disponible on line en: http://www.eurl.craw.eu/img/page/pcr/MELISA_TEK_ final_report_1.pdf.

37. FUMIÈRE, O., BAETEN, V. y BERBEN, G. (2010a). Evaluation of the «MELISA-TEK™ Ruminant kit» (ELISA technologies.

Inc., Gainesville, FL, USA) for the detection of ruminant proteins in processed animal proteins. Second part based on a limited inter-laboratory study on the variability of the blank control. Report, February 2010, CRA-W, CRL-AP, Gembloux, Belgium. Disponible on line en: http://www. eurl.craw.eu/img/page/pcr/MELISATEK2_final.pdf.

38. FUMIÈRE, O., BERBEN, G. y BAETEN, V. (2008). Evaluation of the neogen immunoassay «Reveal® for Ruminant» for the detection of ruminant proteins in processed animal proteins.

Addendum: preliminary tests with the «MELISA-TEKTM» ruminant kit from ELISA technologies, inc., Gainesville, FL, USA. Report, October 2008, CRA-W, CRL-AP, Gembloux, Belgium. Disponible on line en: http://www.eurl.craw.eu/ img/page/pcr/Neogen_final_report_October_2008.pdf.

39. FUMIÈRE, O., DUBOIS, M., BAETEN, V., VON HOLST, C. y BERBEN, G. (2006). Effective PCR detection of animal species in highly processed animal byproducts and compound feeds. Analytical and Bioanalytical Chemistry 385, 1045-1054.

40. FUMIÈRE, O., MARIEN, A. y BERBEN, G. (2012a).

Validation study of a real-time PCR method developed by TNO Triskelion bv for the detection of ruminant DNA in feedingstuffs. Preliminary Report, March 2012, CRA-W, EURL-AP, Gembloux, Belgium. Disponible on line en: http://eurl.craw.eu/img/article/20120309617d721b.pdf.

41. FUMIÈRE, O., MARIEN, A. y BERBEN, G. (2012b). EURL-AP PCR implementation test 2012. Final version. Report, May 2012, CRA-W, EURL-AP, Gembloux, Belgium. Disponible on line en: http://www.eurl.craw.eu/img/page/interlaboratory/ EURL_AP_PCR_ILS_2012_final_version.pdf.

42. FUMIÈRE, O., MARIEN, A. y BERBEN, G. (2013). EURL-AP

726

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos PCR proficiency test 2013. Final version. Report, May 2013, CRA-W, EURL-AP, Gembloux, Belgium. Disponible on line en: http://www.eurl.craw.eu/img/page/proficiency/EURLAP%20PCR%20ILS%202013%20final%20version.pdf.

43. FUMIÈRE, O., MARIEN, A. y BERBEN, G. (2014). EURLAP PCR proficiency test 2014. Final version. Report, September 2014, CRA-W, EURL-AP, Gembloux, Belgium.

Disponible on line en: http://eurl.craw.eu/img/page/ proficiency/EURL_AP_PCR_ILS_2014_final_version.pdf.

44. FUMIÈRE, O., VEYS, P., BOIX, A., VON HOLST, C., BAETEN, V. y BERBEN, G. (2009a). Methods of detection, species identification and quantification of processed animal proteins in feedingstuffs. Biotechnology, Agronomy, Society and Environment 13, 59-70.

45. GALIMBERTI, A., BRUNO, A., MEZZASALMA, V., DE MATTIA, F., BRUNI, I. y LABRA, M. (2015). Emerging DNAbased technologies to characterize food ecosystems. Food Research International 69, 424-433.

46. GALIMBERTI, A., DE MATTIA, F., LOSA, A., BRUNI, I., FEDERICI, S., CASIRAGHI, M., MARTELLOS, S. y LABRA, M. (2013). DNA barcoding as a new tool for food traceability.

Food Research International 50, 55-63.

47. GAO, H.-W., XU, B.-L., LIANG, C.-Z., ZHANG, Y.-B. y ZHU, L.-H. (2004). Polymerase chain reaction method to detect canis materials by amplification of species-specific DNA fragment. Journal of AOAC International 87, 1195-1199.

48. GAO, H.-W., ZHANG, D.-B., PAN, A.-H., LIANG, W.-Q. y LIANG, C.-Z. (2003). Multiplex polymerase chain reaction method for detection of bovine materials in foodstuffs.

Journal of AOAC International 86, 764-767.

49. GASPARIC, M.B., TENGS, T., LA PAZ, J.L., HOLST-JENSEN, A., PLA, M., ESTEVE, T., ZEL, J. y GRUDEN, K. (2010).

Comparison of nine different real-time PCR chemistries for qualitative and quantitative applications in GMO detection.

Analytical and Bioanalytical Chemistry 396, 2023-2029.

50. GIZZI, G., VON HOLST, C., BAETEN, V., BERBEN, G. y VAN RAAMSDONK, L.W.D. (2004). Determination of processed animal proteins, including meat and bone meal, in animal feed. Journal of AOAC Internacional 87, 1334-1341.

51. HA, J.C., JUNG, W.T., NAM, Y.S. y MOON, T.W. (2006). PCR identification of ruminant tissue in raw and heat-treated meat meals. Journal of Food Protection 69, 2241-2247.

52. HIGUCHI, R., FOCKLER, C., DOLLINGER, G. y WATSON, R. (1993). Kinetic PCR analysis: real-time monitoring DNA amplification reactions. Biotechnology 11, 1026-1030.

53. HOLLAND, P.M., ABRAMSON, R.D., WATSON, R. y GELFAND, D.H. (1991). Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5’ ––> 3’ exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA

técnicas de LABORATORIO

polymerase. Proceeding of National Academy Sciences of the United States of America 88, 7276-7280.

54. HOU, B., MENG, X., ZHANG, L., GUO, J., LI, S. y JIN, H. (2015). Development of a sensitive and specific multiplex PCR method for the simultaneous detection of chicken, duck and goose DNA in meat products. Meat Science 101, 90-94.

55. HUBER, I., BLOCK, A., SEBAH, D., DEBODE, F., MORISSET, D., GROHMANN, L., BERBEN, G., STEBIH, D., MILAVEC, M., ZEL, J. y BUSCH, U. (2013). Development and validation of duplex, triplex, and pentaplex real-time PCR screening assays for the detection of genetically modified organisms in food and feed. Journal of Agricultural and Food Chemistry 61, 10293-10301.

56. I NTERNATIONAL HUMAN GENOME CONSORTIUM (2004).

Finishing the euchromatic sequence of the human genome. Nature 431, 931-945.

57. I WOBI, A.N., HUBER, I., HAUNER, G., MILLER, A. y BUSCH, U. (2011). Biochip technology for the detection of animal species in meat products. Food Analytical Methods 4, 389-398.

58. JONKER, K.M., TILBURG, J.J.H.C., HÄGELE, G.H. y DE BOER, E. (2008). Species identification in meat products using real-time PCR. Food Additives and Contaminants 25, 527-533.

59. JUSTÉ, A., THOMMA, B.P.H.J. y LIEVENS, B. (2008). Recent advances in molecular techniques to study microbial communities in food-associated matrices and processes.

Food Microbiology 25, 745-761.

60. KARANAM, M. (2011). An improved protein extraction method for detecting ruminant material in feed using lateral flow device dipsticks. Biotechnology, Agronomy, Society and Environment 15, 25-29.

61. KHRAPKO, K.R., LYSOV YU, P., KHORLYN, A.A., SHICK, V.V., FLORENTIEV, V.L. y MIRZABEKOV, A.D. (1989).

An oligonucleotide hybridization approach to DNA sequencing. FEBS Letters 256, 118-122.

62. KIM, S.-H., HUANG, T.-S., SEYMOUR, T.A., WEI, C.-I., KEMPF, S.C., BRIDGMAN, C.R., CLEMENS, R.A. y AN, H. (2004a). Identification of a biomarker for the detection of prohibited meat and bone meal residues in animal feed.

Journal of Food Science 69, C739-C745.

63. KIM, S.-H., HUANG, T.-S., SEYMOUR, T.A., WEI, C.-I., KEMPF, S.C., BRIDGMAN, C.R., CLEMENS, R.A. y AN, H. (2004b). Production of monoclonal antibody for the detection of meat and bone meal in animal feed. Journal of Agricultural and Food Chemistry 52, 7580-7585.

64. KIM, S.-H., HUANG, T.-S., SEYMOUR, T.A., WEI, C.I., KEMPF, S.C., BRIDGMAN, C.R., MOMCILOVIC, D., CLEMENS, R.A. y AN, H. (2005). Development of

727

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos immunoassay for detection of meat and bone meal in animal feed. Journal of Food Protection 68, 1860-1865.

65. KRCMÁR, P. y RENCOVÁ, E. (2001). Identification of bovine-specific DNA in feedstuffs. Journal of Food Protection 64, 117-119.

66. KRCMÁR, P. y RENCOVÁ, E. (2003). Identification of species-specific DNA in feedstuffs. Journal of Agricultural and Food Chemistry 51, 7655-7658.

67. KRCMÁR, P. y RENCOVÁ, E. (2005). Quantitative detection of species-specific DNA in feedstuffs and fish meals.

Journal of Food Protection 68, 1217-1221.

68. KREUZ, G., ZAGON, J., BROLL, H., BERNHARDT, C., LINKE, B. y LAMPEN, A. (2012). Immunological detection of osteocalcin in meat and bone meal: a novel heat stable marker for the investigation of illegal feed adulteration.

Food Additives and Contaminants 29, 716-726.

69. KUSAMA, T., NOMURA, T. y KADOWAKI, K. (2004).

Development of primers for detection of meat and bone meal in ruminant feed and identification of the animal origin. Journal of Food Protection 67, 1289-1292.

70. KWIATEK, K., SIERADZKI, Z. y PRZENIOSLO-SIWCZYNSKA, M. (2005). Suitability of the FeedCheck test for the detection of processed animal protein in feedingstuffs.

Bulletin of the Veterinary Institute in Pulawy 49, 65-68.

71. LAHIFF, S., GLENNON, M., O’BRIEN, L., LYNG, J., SMITH, T., MAHER, M. y SHILTON, N. (2001). Species-specific PCR for the identification of ovine, porcine and chicken species in meat and bone meal (MBM). Molecular and Cellular Probes 15, 27-35.

72. LAUBE, I., ZAGON, J. y BROLL, H. (2007). Quantitative determination of commercially relevant species in foods by real-time PCR. International Journal of Food Science and Technology 42, 336-341.

73. LIU, L., CHEN, F.-C., DORSEY, J.L. y HSIEH, Y.-H.P. (2006).

Sensitive monoclonal antibody-based sandwich ELISA for the detection of porcine skeletal muscle in meat and feed products. Journal of Food Science 71, M1-M6.

74. LÓPEZ-ANDREO, M., LUGO, L., GARRIDO-PERTIERRA, A., PRIETO, M.I. y PUYET, A. (2005). Identification and quantitation of species in complex DNA mixtures by real-time polymerase chain reaction. Analytical Biochemistry 339, 73-82.

75. MARGRY, R., VAN DEN HOVEN, S., GERRIS, C. y TARABA, B. (2005). Rapid analysis of meat and bone meal in feed. En: Rapid methods for biological and chemical contaminants in food and feed. Van Ameronen, A., Barug, D., Lauwaars, M. (Eds.). Wageningen Academic Publishers, Wageningen, Países Bajos, 193-205.

76. MARGULIES, M., EGHOLM, M., ALTMAN, W.E., ATTIYA, S., BADER, J.S., BEMBEN, L.A., BERKA, J., BRAVERMAN,

técnicas de LABORATORIO

M.S., CHEN, Y.J., CHEN, Z., DEWELL, S.B., DU, L., FIERRO, J.M., GOMES, X.V., GODWIN, B.C., HE, W., HELGESEN, S., HO, C.H., IRZYK, G.P., JANDO, S.C. y col. (2005). Genome sequencing in microfabricated high-density picolitre reactors. Nature 437, 376-380.

77. MARTÍN, I. (2011). Desarrollo de técnicas genéticas de PCR y PCR en tiempo real para la detección de ADN de procedencia animal en piensos. Tesis doctoral, Universidad Complutense de Madrid, Departamento de Nutrición, Bromatología y Tecnología de los Alimentos.

78. MARTÍN, I., GARCÍA, T., FAJARDO, V., ROJAS, M., HERNÁNDEZ, P.E., GONZÁLEZ, I. y MARTÍN, R. (2008).

Real-time PCR for quantitative detection of bovine tissues in food and feed. Journal of Food Protection 71, 564-572.

79. MARTÍN, I., GARCÍA, T., FAJARDO, V., ROJAS, M., PEGELS, N., HERNÁNDEZ, P.E., GONZÁLEZ, I. y MARTÍN, R. (2009). SYBR-Green real-time PCR approach for the detection and quantification of pig DNA in feedstuffs. Meat Science 82, 252-259.

80. MARTÍN, I., GARCÍA, T., ROJAS, M., PEGELS, N., PAVÓN, M.A., HERNÁNDEZ, P.E., GONZÁLEZ, I. y MARTÍN, R. (2010).

Real-time polymerase chain reaction detection of fishmeal in feedstuffs. Journal of AOAC International 93, 1768-1777.

81. MAYER, H.K. (2005). Milk species identification in cheese varieties using electrophoretic, chromatographic and PCR techniques. International Dairy Journal 15, 595-604.

82. MENDOZA-ROMERO, L., VERKAAR, E.L.C., SAVELKOUL, P.H., CATSBURG, A., AARTS, H.J.M., BUNTJER, J.B. y LENSTRA, J.A. (2004). Real-time PCR detection of ruminant DNA. Journal of Food Protection 67, 550-554.

83. METZKER, M.L. (2010). Sequencing technologies - the next generation. Nature Reviews. Genetics 11, 31-46.

84. METZKER, M.L., RAGHAVACHARI, R., RICHARDS, S., JACUTIN, S.E., CIVITELLO, A., BURGESS, K. y GIBBS, R.A. (1994). Termination of DNA synthesis by novel 3´-modified deoxyribonucleoside triphosphates. Nucleic Acids Research 22, 4259-4267.

85. MYERS, M.J., FARRELL, D.E., DEAVER, C.M., MASON, J., SWAIM, H.L. y YANCY, H.F. (2010). Detection of rendered meat and bone meals by PCR is dependent on animal species of origin and DNA extraction method. Journal of Food Protection 73, 1090-1096.

86. MYERS, M.J., FRIEDMAN, S.L., FARRELL, D.E., DOVEPETTIT, D.A., BUCKER, M.F., KELLY, S., MADZO, S., CAMPBELL, W., WANG, R.-F., PAINE, D. y CERNIGLIA, C.E. (2001). Validation of a polymerase chain reaction method for the detection of rendered bovine-materials in feedstuffs. Journal of Food Protection 64, 564-566.

87. MYERS, M.J., YANCY, H.F. y FARRELL, D.E. (2003).

Characterization of a polymerase chain reaction-based

728

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos approach for the simultaneous detection of multiple animal-derived materials in animal feed. Journal of Food Protection 66, 1085-1089.

88. MYERS, M.J., YANCY, H.F., ARANETA, M., ARMOUR, J., DERR, J., HOOSTELAERE, L.A.D., FARMER, D., JACKSON, F., KIESSLING, W.M., KOCH, H., LIN, H., LIU, Y., MOWLDS, G., PINERO, D., RITER, K.L., SEDWICK, J., SHEN, Y., WETHERINGTON, J. y YOUNKINS, R. (2006). Validation of PCR-based method for the detection of various rendered materials in feedstuffs using a forensic DNA extraction kit.

Journal of Food Protection 69, 205-210.

89. MYERS, M.J., YANCY, H.F., FARRELL, D.E., WASHINGTON, J.D. y FROBISH, R.A. (2005). Evaluation of two commercial lateral-flow test kits for detection of animal proteins in animal feed. Journal of Food Protection 68, 2656-2664.

90. MYERS, M.J., YANCY, H.F., FARRELL, D.E., WASHINGTON, J.D., DEAVER, C.M. y FROBISH, R.A. (2007). Assessment of two enzyme-linked immunosorbent assay test marketed for detection of ruminant proteins in finished feed. Journal of Food Protection 70, 692-699.

91. NATONEK, M., SLOTA, E., ZYGA, A. y REJDUCH, B. (2004).

The utilization of methods based on protein and DNA analysis for identification of animal-origin components in feeds. Journal of Animal and Feed Sciences 13, 75-78.

92. NATONEK-WISNIEWSKA, M. (2008). Validation of a method for identification of bovine meat-and-bone meal using PCR. Annals of Animal Science 8, 323-328.

93. ORTOLA-VIDAL, A., SCHNERR, H., ROJMYR, M., LYSHOLM, F. y KNIGHT, A. (2007). Quantitative identification of plant genera in food products using PCR and Pyrosequencing® technology. Food Control 18, 921-927.

94. OTTERO, M.T., CIVERA, T., NUCERA, D. y TURI, R.M. (2003a). Design of universal primers for the detection of animal tissues in feedstuff. Veterinary Research Communications 27, 667-669.

95. PASCOAL, A., PRADO, M., CALO, P., CEPEDA, A. y BARROSVELÁZQUEZ, J. (2005). Detection of bovine DNA in raw and heat-processed foodstuffs, commercial foods and specific risk materials by a novel specific polymerase chain reaction method.

European Food Research and Technology 220, 444-450.

96. PEREIRA, F., CARNEIRO, J. y AMORIM, A. (2008).

Identification of species with DNA-based technology: current progress and challenges. Recent Patents on DNA & Gene Sequences 2, 187-200.

97. POSTOLLEC, F., FALENTIN, H., PAVAN, S., COMBRISSON, J. y SOHIER, D. (2011). Recent advances in quantitative PCR (qPCR) applications in food microbiology. Food Microbiology 28, 848-861.

98. PRADO, M., BERBEN, G., FUMIÈRE, O., VAN DUIJN, G.,

técnicas de LABORATORIO

MENSINGA-KRUIZE, J., REANEY, S., BOIX, A. y VON HOLST, C. (2007). Detection of ruminant meat and bone meals in animal feed by real-time polymerase chain reaction: result of an interlaboratory study. Journal of Agricultural and Food Chemistry 55, 7495-7501.

99. PRADO, M., BOIX, A. y VON HOLST, C. (2012). Novel approach for the simultaneous detection of DNA from different fish species based on a nuclear target: quantification potential. Analytical and Bioanalytical Chemistry 403, 3041-3050.

100. PRADO, M., BOIX, A. y VON HOLST, C. (2013). Development of a real-time PCR method for the simultaneous detection of mackerel and horse mackerel. Food Control 34, 19-23.

101. PRADO, M., FUMIÈRE, O., BOIX, A., MARIEN, A., BERBEN, G. y VON HOLST, C. (2009). Novel approach for interlaboratory transfer of real-time PCR methods: detecting bovine meat and bone meal in feed. Analytical and Bioanalytical Chemistry 394, 1423-1431.

102. RAYE, G., MIQUEL, C., COISSAC, E., REDJADJ, C., LOISON, A. y TABERLET, P. (2011). New insights on diet variability revealed by DNA barcoding and high-throughput pyrosequencing: chamois diet in autumn as a case study.

Ecological Research 26, 265-276.

103. REGLAMENTO 51/2013/CE de la Comisión, de 16 de enero de 2013, por el que se modifica el Reglamento (CE) nº 152/2009 en lo que respecta a los métodos de análisis para la determinación de componentes de origen animal con fines de control oficial de los piensos. Diario Oficial de la Unión Europea núm. L20, de 23 de enero de 2013, 33-43.

Disponible on line en: http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/ LexUriServ.do?uri=OJ:L:2013:020:0033:0043:ES:PDF. 104 RENSEN, G., SMITH, W., RUZANTE, J., SAWYER, M., OSBURN, B. y CULLOR, J. (2005). Development and evaluation of a real-time fluorescent polymerase chain reaction assay for the detection of bovine contaminates in cattle feed. Foodborne Pathogens and Disease 2, 152-159.

105. RENSEN, G.J., SMITH, W.L., JARAVATA, C.V., OSBURN, B. y CULLOR, J.S. (2006). Development and evaluation of a realtime FRET probe based multiplex PCR assay for the detection of prohibited meat and bone meal in cattle feed and feed ingredients. Foodborne Pathogens and Disease 3, 337-346.

106. ROADMAP EPIGENOMICS CONSORTIUM (2015).

Integrative analysis of 111 reference human epigenomes.

Nature 518, 317-330.

107. RODRÍGUEZ, M.A., GARCÍA, T., GONZÁLEZ, I., ASENSIO, L., HERNÁNDEZ, P.E. y MARTÍN, R. (2004a). PCR identification of beef, sheep, goat and pork in raw and heat-treated meat mixtures. Journal of Food Protection 67, 172-177.

108. RODRÍGUEZ, M.A., GARCÍA, T., GONZÁLEZ, I., ASENSIO,

729

Nº 407 DICIEMBRE 2015

piensos L., HERNÁNDEZ, P.E. y MARTÍN, R. (2004b). Quantitation of mule duck in goose foie gras using TaqMan real-time polymerase chain reaction. Journal of Agricultural and Food Chemistry 52, 1478-1483.

109. ROJAS, M., GONZÁLEZ, I., PAVÓN, M.A., PEGELS, N., HERNÁNDEZ, P.E., GARCÍA, T. y MARTÍN, R. (2010a).

Polymerase chain reaction assay for verifying the labeling of meat and commercial meat products from game birds targeting specific sequences from the mitochondrial D-loop region. Poultry Science 89, 1021-1032.

110. ROJAS, M., GONZÁLEZ, I., PAVÓN, M.A., PEGELS, N., LAGO, A., HERNÁNDEZ, P.E., GARCÍA, T. y MARTÍN, R. (2010b). Novel TaqMan real-time polymerase chain reaction assay for verifying the authenticity of meat and commercial meat products from game birds. Food Additives and Contaminants 27, 749-763.

111. RONAGHI, M. (2001). Pyrosequencing sheds light on DNA sequencing. Genome Research 11, 3-11.

112. RONAGHI, M., KARAMOHAMED, S., PETTERSSON, B., UHLEN, M. y NYREN, P. (1996). Real-time DNA sequencing using detection of pyrophosphate release. Analytical Biochemistry 242, 84-89.

113. RONAGHI, M., UHLEN, M. y NYREN, P. (1998). A sequencing method based on real-time pyrophosphate.

Science 281, 363-365.

114. RUIJTER, J.M., LORENZ, P., TUOMI, J.M., HECKER, M. y VAN DEN HOFF, M.J.B. (2014). Fluorescent-increase kinetics of different fluorescent reporters used for qPCR depend on monitoring chemistry, targeted sequence, type of DNA input and PCR efficiency. Mikrochimica Acta 181, 1689-1696.

115. SAFDAR, M. y JUNEJO, Y. (2015a). A multiplexconventional PCR assay for bovine, ovine, caprine and fish species identification in feedstuffs: highly sensitive and specific. Food Control 50, 190-194.

116. SAFDAR, M. y JUNEJO, Y. (2015b). Development and validation of fast duplex real-time PCR assays based on SYBER Green florescence for detection of bovine and poultry origins in feedstuffs. Food Chemistry 173, 660-664.

117. SAFDAR, M., JUNEJO, Y., ARMAN, K. y ABASIYANIK, M.F. (2014). Rapid bovine and caprine species identification in ruminant feeds by duplex real-time PCR melting curve analysis using EvaGreen fluorescence dye. Molecular Biotechnology 56, 770-776.

118. SANGER, F., NICKLEN, S. y COULSON, A.R. (1977). DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 74, 5463-5467.

119. SHINODA, N., TAKAGI, M., HAYAKAWA, T., ONODERA, T. y SUGIURA, K. (2010). Development of primers for

técnicas de LABORATORIO

detection of multiple cervid species in animal feed. Journal of Food Safety 30, 916-923.

120. TAJIMA, K., ENISHI, O., AMARI, M., MITSUMORI, M., KAJIKAWA, H., KURIHARA, M., YANAI, S., MATSUI, H., YASUE, H., MITSUHASHI, T., KAWASHIMA, T. y MATSUMOTO, M. (2002). PCR detection of DNAs of animal origin in feed by primers based on sequences of short and long interspersed repetitive elements. Bioscience Biotechnology and Biochemistry 66, 2247-2250.

121. TARTAGLIA, M., SAULLE, E., PESTALOZZA, S., MORELLI, L., ANTONUCCI, G. y BATTAGLIA, P.A. (1998). Detection of bovine mitochondrial DNA in ruminant feeds: a molecular approach to test for the presence of bovine-derived materials. Journal of Food Protection 61, 513-518.

122. TELETCHEA, F., BERNILLON, J., DUFFRAISE, M., LAUDET, V. y HÄNNI, C. (2008). Molecular identification of vertebrate species by oligonucleotide microarray in food and forensic samples. Journal of Applied Ecology 45, 967-975.

123. VON HOLST, C., BOIX, A., MARIEN, A. y PRADO, M. (2012). Factors influencing the accuracy of measurements with real-time PCR: the example of the determination of processed animal proteins. Food Control 24, 142-147.

124. WANUNU, M. y MELLER, A. (2008). Single-molecule analysis of nucleic acids and DNA-protein interactions using nanopores. En: Single-molecule techniques: a laboratory manual (eds. Selvin, P. & Ha, T.J.), 395-420. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. 125. WEINER, A. y KWIATEK, K. (2008). Evaluation of the usefulness of PCR method for the detection of processed animal protein in feedingstuffs. Bulletin of the Veterinary Institute in Pulawy 52, 411-415.

126. WILHELM, J. y PINGOUD, A. (2003). Real-time polymerase chain reaction. Chembiochem: a European Journal of Chemical Biology 4, 1120-1128.

127. WOLD, B. y MYERS, R.M. (2008). Sequence census methods for functional genomics. Nature Methods 5, 19-21.

128. YANG, Z., HAN, L., FERNÁNDEZ PIERNA, J.A., DARDENNE, P. y BAETEN, V. (2011). The potential of near infrared microscopy to detect, identify and quantify processed animal by-products.

Journal of Near Infrared Spectroscopy 19, 211-231.

129. YOSHIDA, T., NOMURA, T., SHINODA, N., KUSAMA, T., KADOWAKI, K. y SUGIURA, K. (2009). Development of PCR primers for the detection of porcine DNA in feed using mtATP6 as the target sequence. Journal of the Food Hygienic Society of Japan 50, 89-92.

130. ZHANG, C.-L., FOWLER, M.R., SCOTT, N.W., LAWSON, G. y SLATER, A. (2007). A TaqMan real-time PCR system for the identification and quantification of bovine DNA in meats, milks and cheeses. Food Control 18, 1149-1158.

730

Nº 407 DICIEMBRE 2015

cambio climático

El Laboratorio de Ingeniería Marítima de la UPC ensaya soluciones para combatir el cambio climático

El LIM, Laboratorio de Ingeniería Marítima de la UPC, investiga las soluciones de ingeniería más eficientes para combatir el impacto costero del calentamiento global en el conjunto del planeta. En los próximos cuatro años, en el Canal de Investigación y Experimentación Marítima del LIM se ensayarán, con fondos de la UE, iniciativas para combatir el calentamiento global.

E

l LIM de la Universitat Politècnica de Catalunya (UPC) está ensayando diversas soluciones de ingeniería para combatir el impacto costero del cambio climático y evitar que las que se utilizan actualmente sean ineficaces en un futuro no muy lejano.

Estas soluciones se incluyen entre los primeros resultados del proyecto europeo Respuestas al Cambio Climático de la Costa: estrategias de innovación para

escenarios extremos - Adaptación y Mitigación (RISES-AM, según las siglas en inglés del proyecto, llamado Responses to Coastal Climate Change: Innovation Strategies for High End ScenariosAdaptation and Mitigation), que lidera la UPC. El objetivo del proyecto RISES-AM, dirigido por el investigador Agustín Sánchez-Arcilla, es plantear el impacto del

El Canal de Investigación y Experimentación Marítima de la UPC, donde se ensayan soluciones de ingeniería más eficientes para hacer frente al cambio climático.

técnicas de LABORATORIO

731

Nº 364 SEPTIEMBRE 2011

cambio climático en los escenarios más extremos y vulnerables de la costa, a escala planetaria, analizando los efectos de la erosión y la inundación. El proyecto plantea ya las primeras posibles soluciones para mejorar la sostenibilidad y la

cambio climático preservación de las costas. En este sentido, los investigadores están calculando los costes que supone el cambio climático en la zona costera. Por ejemplo, los costes derivados de los daños en infraestructuras, o de los daños indirectos por la pérdida de la extensión de la playa y que, por tanto, no se pueden utilizar para el turismo, así como las pérdidas de vidas humanas. En este estudio, que finalizará en 2016 e incluirá el análisis de los deltas, las playas urbanas y, en general, todas las zonas vulnerables de la costa, también participan 11 centros más de investigación y universidades del Reino Unido, Países Bajos, Alemania, Italia y Rumania.

En el ámbito de la costa catalana, se estudian las zonas más vulnerables que, ante un cambio en el nivel medio del mar o en la distribución de tormentas, pueden perder valores naturales o artificiales tan importantes como, por ejemplo, los que se han construido recientemente en el delta del Llobregat.

Ingeniería flexible para afrontar el cambio Dentro del abanico de respuestas consideradas en el proyecto, se ha empezado a analizar el comportamiento de las soluciones tradicionales de la ingeniería de costas, a base de piedras y arena, y se

las ha comparado con actuaciones más innovadoras, pero aún experimentales.

Se ha comprobado que los márgenes de incertidumbre de la ingeniería tradicional son elevados, ya que el clima varía.

Las nuevas opciones pasan por combinar las soluciones anteriores, pero aspirando a hacer obras más flexibles que se puedan ir adaptando al cambio de clima. Una de estas posibles soluciones que se han planteado a partir del proyecto RISES es la utilización de plantas para fijar la arena de las playas y la combinación de éstas con piedras y arena. El equipo del LIM está trabajando en el diseño de diques submarinos y de barreras naturales con algas y plantas consolidadas para frenar el embate del gran oleaje. En cuanto a las plantas, los investigadores buscan aquellas que mejor se adapten y, recientemente, han analizado la posibilidad de criar bancos de plantas en primera línea de costa. Otra alternativa, y muy necesaria en algunos casos como en el del Maresme, sería retroceder las infraestructuras que limitan la costa, ya que no dejan margen de maniobra para que la playa pueda reaccionar de manera natural ante los cambios.

El nivel del mar y del oleaje, factores clave en la erosión Los factores climáticos que afectan a la zona costera y que han sido objeto

del estudio son, esencialmente, la subida del nivel del mar y las tormentas de oleaje que, al encontrarse con un nivel del mar más elevado, podrían afectar zonas que actualmente están más tierra adentro y, por tanto, protegidas de las acciones de las olas.

La proyección más optimista de escenario RCP 4.5 (uno de los Representative Concentration Pathways establecidos por el IPCC), y con la que trabajan los investigadores, es que el nivel del mar subirá medio metro respecto a la actualidad en todo el planeta hasta en 2100.

La previsión más extrema (RCP 8.5), en cambio, prevé un aumento de 1,8 a 2 m del nivel del mar.

Un aumento de 1 m en el nivel del mar equivale a una pérdida de 100 m de ancho en una playa arenosa de poca pendiente, como algunas de la Costa Dorada y del Maresme, así como en buena parte de los deltas del Ebro, Llobregat y Ter. Esta pérdida de arena disminuye en las playas que tienen más pendiente y que son más estrechas, como las de la Costa Brava.

Otro factor muy importante de erosión de la costa y, sobre todo, de los puertos es lo que provocan las hélices de los barcos. En un panorama de cambio climático en el que se prevé que el nivel del mar y el oleaje aumenten, las hélices

Los investigadores del Laboratorio de Ingeniería Marítima (LIM) Balsa del LIM donde se investiga cómo las hélices de los barcos

de la UPC han analizado la posibilidad de criar bancos de plantas

erosionan la costa y los puertos.

en primera línea de costa para frenar el embate del gran oleaje.

técnicas de LABORATORIO

732

Nº 364 SEPTIEMBRE 2011

cambio climático de los barcos tendrán que trabajar con más intensidad sobre todo al entrar y salir de los puertos, para poder maniobrar bien. Al aproximarse tanto al fondo de la arena, ésta se erosiona. Estos efectos tendrán más impacto en los puertos más grandes del planeta. En la costa catalana, los puertos de la Costa Brava serán los que se verán más afectados.

En este contexto, se han analizado los escenarios más extremos del mundo donde, de no aplicarse soluciones, podrían empezar a desaparecer a partir del 2025. Según los primeros resultados del estudio, las zonas costeras más vulnerables son las más bajas como los deltas del Ebro y el Danubio; las ciudades costeras muy pobladas, como por ejemplo Ho Chi Minh (Vietnam), y algunas islas, como las Maldivas.

También se ha incorporado la costa catalana como zona vulnerable extrema, ya que en el estudio se ha podido comprobar que en los próximos años la presión demográfica de Cataluña irá aumentando mucho más rápidamente que la población mundial.

El delta del Ebro es una zona extrema porque el río ya no aporta sedimentos y, por este motivo, provoca erosión e inundación. Ante los escenarios de clima futuros, los científicos prevén una pérdida acelerada tanto de superficie horizontal del delta como en vertical. En una previsión para el año 2100, el delta se reducirá a casi la mitad de lo que es ahora.

Los investigadores creen que una de las soluciones podría ser abrir las compuertas y dejar bajar el sedimento almacenado, pero el actual volumen de caudal de 100 m3/s (como cifra de referencia) no es suficiente para mover la arena. Se necesitaría que este se multiplicara por cuatro, como mínimo.

El cambio climático se acelerará en la segunda mitad de este siglo, según los datos del Panel Intergubernamental para el Cambio Climático (IPCC), en su informe publicado en 2013. A partir de 2025 se prevé un pequeño cambio ambiental respecto al actual, y el impacto de este

cambio se multiplicará por un factor 2 en el 2050 y por 4 en 2100.

En el caso de la ciudad asiática de Ho Chi Minh el problema es la gran densidad de población y, si no se aplican medidas para hacer frente a la desaparición de la costa, en unos años se podría perder el sustrato físico y se produciría una emigración masiva de población. En cuanto a las Maldivas, éstas tienen una baja densidad de población, lo que conlleva que este estado independiente no se pueda sostener económicamente con autonomía y necesite la ayuda de la comunidad internacional.

El investigador Agustín Sánchez-Arcilla, director del Laboratorio de Ingeniería Marítima (LIM) de la UPC, en la Escuela de Caminos, y coordinador del proyecto europeo RISES-AM.

El efecto del oleaje en playas artificiales Las olas son la principal causa de la erosión actual de la costa y, debido al cambio climático, en algunos lugares aumentarán y en otros disminuirán, pero en ambos casos los daños serán mayores debido a que el nivel del mar subirá. La dirección de las olas se prevé que también cambie y afectará mayoritariamente aquellas costas con más zonas artificiales, como la catalana, lo que puede suponer una mayor necesidad de inversión.

La dirección de las olas no provocaría daños si la playa fuera más ancha, ya que tendría suficiente espacio para reorientarse por ella misma y reaccionar ante los cambios. El problema de costas como la del Maresme, por ejemplo, es que las playas no pueden reaccionar porque son pequeñas y, además, el ferrocarril está en primera línea. Para que la playa pueda reaccionar debe tener un ancho de costa considerable y un volumen de arena suficiente.

La mayoría de las playas de Cataluña son artificiales. Son excepción las calas de la Costa Brava. Estas mantienen su capacidad de reacción natural, a pesar de ser playas más pequeñas y pueden reaccionar mejor. En cuanto al Maresme y muchas playas de Tarragona son artificiales y podrían desaparecer de aquí al año 2100, en caso de que no se tomen medidas.

técnicas de LABORATORIO

733

Nº 364 SEPTIEMBRE 2011

La Costa Dorada tiene un sedimento muy fino y la hace mucho más vulnerable; en el Maresme se ha construido mucho en primera línea de mar y los deltas son muy artificiales actualmente porque los ríos ya no aportan sedimentos. Las playas de Barcelona y de otros núcleos urbanos requerirán un mantenimiento adicional.

El canal, laboratorio de ensayo europeo La Unión Europea ha otorgado financiación al LIM de la UPC para que adecue las instalaciones de su Canal de Investigación y Experimentación Marítima, con el objetivo de que, en los próximos cuatro años, los países de la UE y asociados puedan llevar a cabo los ensayos científicos de las propuestas que se planteen para afrontar el cambio climático, teniendo en cuenta el clima futuro. Estas ayudas se enmarcan en el proyecto Hidralab+.

El Canal de Investigación y Experimentación Marítima de la UPC, vinculado a la Escuela Técnica Superior de Ingenieros de Caminos, Canales y Puertos de Barcelona (ETSECCPB), es un equipamiento de investigación en ingeniería marítima dedicado a la generación combinada de oleajes y corrientes para realizar ensayos hidráulicos controlados en ingeniería de puertos, costas y oceanográfica, así como en otros ámbitos como el aprovechamiento energético de los recursos marinos.

encuentros

Simposio ‘Tratamiento precoz que impacta a largo plazo’, en la LXVII Reunión Anual de la SEN

• Para determinar el tratamiento adecuado para cada paciente hay que analizar el grado de actividad de la enfermedad y la eficacia en la prevención de brotes y de la progresión de la discapacidad.

• Toda decisión terapéutica debe ser un equilibrio entre seguridad y eficacia, y el mecanismo de acción puede influir en el balance seguridad/eficacia.

• Al valorar la seguridad a largo plazo de un tratamiento crónico es fundamental analizar sus efectos a corto, medio y largo plazo.

En veinte años, la esclerosis múltiple (EM) ha pasado de ser una enfermedad sin tratamiento a contar con más de diez posibles opciones terapéuticas en el caso de la EM recurrente remitente.

Por eso, en la actualidad el campo de la esclerosis múltiple es muy dinámico desde el punto de vista terapéutico, y existen diversos aspectos para determinar el tratamiento adecuado para cada paciente, como quedó patente en el simposio ‘Tratamiento precoz que impacta a largo plazo’, que Merck organizó en la LXVII Reunión Anual de la Sociedad Española de Neurología (SEN), celebrada en noviembre en Valencia.

Entre los factores que determinan la elección de uno u otro tratamiento, el Dr. Javier Carod, del Departamento de Neurología del Hospital Raigmore, en In-

verness (Reino Unido), enumeró el grado de actividad de la enfermedad y la eficacia en la prevención de recidivas y de la progresión de la discapacidad. Por su parte, Dr. Sergio Martínez Yélamos, de la Unidad de Esclerosis Múltiple ‘EMxarxa’ del Servicio de Neurología del Hospital Universitario de Bellvitge, en Barcelona, añadió que “lo que debe guiar la decisión de tratar es la relación entre el beneficio esperado y el riesgo que asumimos.

Una vez diagnosticada la enfermedad y se esté seguro de que se encuentra en una fase activa, cuanto antes se inicie el tratamiento adecuado, antes empezaremos a controlar sus efectos.”

La seguridad de los tratamientos es uno de los aspectos básicos que modulan la decisión acerca del tratamiento más adecuado, y está muy relacionada con el curso de la enfermedad, como recordó el Dr. Carod en el simposio: “Los pacientes con elevada actividad de la enfermedad se pueden beneficiar de tratamientos más agresivos, de carácter inmunosupresor. Sin embargo, estos nuevos fármacos pueden tener un perfil mayor de efectos secundarios a corto, medio y largo plazo.

Aunque los pacientes que sufren formas más agresivas o activas de la enfermedad están interesados en un rápido control de los brotes, el tratamiento con fármacos inmunosupresores puede asociarse con un riesgo de padecer infecciones, neoplasias y leucopatia multifocal pro-

técnicas de LABORATORIO

734

Nº 407 DICIEMBRE 2015

gresiva (LMP). En cambio, los pacientes con formas menos agresivas prefieren un fármaco inmunomodulador de primera línea, cuyo perfil de eficacia y seguridad se conoce mejor a largo plazo.”

Por todo ello, la decisión sobre el tratamiento en EM debe ser consensuada entre médico y paciente. En el aspecto médico, “siempre existe preocupación por el riesgo de efectos adversos que pueden aparecer a largo plazo. Toda decisión terapéutica debe ser un equilibrio entre seguridad y eficacia, y el mecanismo de acción puede influir en el balance seguridad/eficacia. De hecho, los fármacos inmunomoduladores clásicos se asocian con un mejor perfil de seguridad en comparación con los fármacos inmunosupresores”, añadió el Dr. Carod.

Conocimiento actual de la seguridad terapéutica Afinando en el tema de la seguridad que ahora mismo se conoce en los diversos tratamientos de la EM, Carod explicó “la experiencia clínica superior a los 15 años avala la seguridad a largo plazo del tratamiento con interferón y acetato de glatiramer en la esclerosis múltiple recurrente remitente; conocemos sus efectos a corto, medio y largo plazo. Sin embargo, los datos de seguridad disponibles de los nuevos tratamientos proceden de

encuentros

los ensayos clínicos en fase III y de los estudios de extensión, mientras que los datos sobre seguridad a largo plazo son más limitados.”

De ahí la importancia de desarrollar programas de monitorización de seguridad a largo plazo. El objetivo, según el especialista del Hospital Raigmore, es “la detección precoz de cualquier efecto adverso asociado a largo plazo en pacientes con esclerosis múltiple (incluyendo el riesgo de neoplasia, teratogénesis e infección) y su incidencia”.

“Nuestro objetivo principal es reducir la discapacidad permanente del paciente a lo largo de los años. Para ello hay que convencer a la persona con esclerosis múltiple de que las molestias derivadas de tratarse hoy con fármacos con una administración relativamente incómoda se van a ver recompensadas en el futuro con una mayor autonomía personal. Se trata de una inversión en salud”, subrayó el Dr. Martínez Yélamos.

Por tanto, el control de la seguridad de los tratamientos se establece como un objetivo básico que se puede abordar de distintas formas: “En el Reino Unido, la monitorización se realiza mediante un equipo multidisciplinar integrado por un neurólogo clínico con experiencia en esclerosis múltiple, un farmacéutico hospitalario y una enfermera especializada en EM. Estos programas de estratificación de riesgo y de monitorización de seguridad

forman parte de un esquema de riesgo compartido, de tal modo que los médicos de atención primaria ayudan y participan en la detección de cualquier anomalía bioquímica o sanguínea (hepatopatia, linfopenia, etc.)”, concluyó el Dr. Carod.

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad crónica del sistema nervioso central, que incluye el cerebro, la médula espinal y los nervios ópticos. A pesar de que hoy en día no existe cura para la esclerosis múltiple, cada vez se controla mejor con la ayuda de fármacos modificadores del curso de la enfermedad, que logran reducir el número, la frecuencia y la intensidad de los brotes y la cantidad y volumen de lesiones que aparecen en el cerebro. En España, la prevalencia es de 100-125 pacientes de EM por cada 100.000 habitantes.

Merck en Neurología Desde 1992, el compromiso de Merck con la comunidad de esclerosis múltiple (EM) en España se ha traducido en el desarrollo de terapias innovadoras que han conseguido modificar el transcurso de la enfermedad. En cualquier caso, la innovación en esta patología va más allá de los fármacos, con servicios de valor añadido para el paciente, como dispositivos de administración (RebiSmart™) y herramientas de gestión de la enfermedad (MSdialog™), que facilitan la adherencia terapéutica del paciente y el seguimiento de ésta por el clínico.

técnicas de LABORATORIO

735

Nº 407 DICIEMBRE 2015

Merck cuenta con una sólida inversión en I+D en el área neurológica, programas de formación continuada y nuevas líneas de apoyo específicas a la comunidad de EM. Este apoyo se materializa con la edición de guías de apoyo que buscan ayudar en el día a día a los pacientes y que tratan temas como aspectos emocionales, sexuales, familia y amigos, alimentación… Asimismo, pone a disposición de la comunidad de la esclerosis múltiple las nuevas aplicaciones móviles ‘Con la EM’ y ‘NeuroMerck’, esta última dirigida a neurólogos especializados. Las decisiones en el abordaje de la EM son muy importantes: qué tratamiento, alimentación y estilo de vida escojo y cómo me relaciono con mi entorno son aspectos que preocupan y condicionan el futuro del enfermo de esclerosis múltiple. Este compromiso de Merck resulta clave, y la firma lo resume con el siguiente mensaje: ‘Lo que decido HOY, importa MAÑANA’.

Merck Merck es una compañía dedicada a la ciencia y tecnología en los sectores de Salud, Life Science y Performance Materials. Unos 40.000 empleados trabajan para desarrollar tecnologías que mejoren la vida de las personas, ya sea a partir de terapias biofarmacéuticas para tratar el cáncer o la esclerosis múltiple, de sistemas innovadores de investigación y producción, o de cristales líquidos para smartphones y televisores LCD. En 2014, Merck generó unas ventas de 11.300 millones de EUR en 66 países.

Fundada en 1668, Merck es la compañía farmacéutica y química con más historia del mundo. La familia fundadora sigue siendo el accionista mayoritario de la compañía. Merck, Darmstadt (Alemania), posee los derechos globales del nombre Merck y su marca. Las únicas excepciones son EE.UU. y Canadá, donde la compañía opera como EMD Serono, EMD Millipore y EMD Performance Materials. www.merck.es

I+D

I Reunión Multidisciplinar de Tumores de Cabeza y Cuello en Extremadura

La complejidad y la rareza del cáncer de cabeza y cuello hacen muy necesaria la multidisciplinariedad en el manejo de esta patología. Se ha demostrado que los tumores raros (el de cabeza y cuello supone un 5% de todos los tipos) se tratan mejor por comités y en centros de referencia. Las nuevas tecnologías hacen que la ausencia de un determinado tipo de especialista, como el oncólogo radioterápico, no sea un obstáculo para contar con comités multidisciplinares en los hospitales españoles.

L

a complejidad de la Medicina moderna, unida a un sistema que tiene cada vez más al paciente como centro del proceso, han hecho de la multidisciplinariedad una tendencia en la Sanidad española, que en el caso del manejo del cáncer es ya casi obligatoria, según se ha concluido en la 1ª Reunión Multidisciplinar de Tumores de Cabeza y Cuello en Extremadura que Merck ha celebrado en Mérida (Badajoz).

“Si ya es difícil mantenerse al día de los avances de la propia especialidad, abarcar el campo de otras disciplinas es sencillamente imposible. Solo en un comité integrado por todos los especialistas involucrados en el manejo de una patología se puede ofrecer al paciente la mejor opción de tratamiento”, afirma el Dr. Joaquín Cabrera, oncólogo radioterápico del Hospital Infanta Cristina, de Badajoz, y moderador de la reunión.

Si se aborda el caso concreto del cáncer de cabeza y cuello, “se dan dos circunstancias especiales que hacen imperativo el trabajo en el seno de un comité multidisciplinar: la complejidad y la rareza”.

técnicas de LABORATORIO

El Dr. Cabrera incidió en la complejidad, comenzando por la anatómica: “En la región de la cabeza y el cuello se concentran los órganos de los sentidos, la facultad de la fonación y la deglución. Es una zona siempre expuesta, y el impacto estético de las terapias oncológicas es fundamental.” En lo que se refiere a la complejidad terapéutica, “la radioterapia y la cirugía proporcionan resultados oncológicos superponibles en muchos supuestos y, además, la elección del tratamiento ideal para un paciente puede no ser igual que para otro con exactamente el mismo tumor pero otros condicionantes clínicos (comorbilidades). Por otra parte, las secuelas derivadas de las terapias oncológicas son considerables y precisan de rehabilitación y tratamiento específicos.”

La última complejidad a la que se refirió el moderador de la reunión fue la clínica: “La primera causa del cáncer de cabeza y cuello en nuestro medio es el consumo excesivo de tabaco y alcohol. Los enfermos con una larga historia de abuso de estas sustancias presentan problemas médicos graves (pulmonares, hepáticos, desnutrición) y sociales (divorcio, aislamiento social,

736

Nº 407 DICIEMBRE 2015

I+D conductas autodestructivas), todos ellos con incidencia demostrada en el cumplimiento terapéutico y en la supervivencia posterior al tratamiento. Hay estudios que sugieren una mayor supervivencia de los enfermos cuando han sido evaluados en el seno de comités multidisciplinarios; una revisión reciente (Taplin y cols. J Onco Pract 2015) demuestra que la adherencia a las guías clínicas y a los tratamientos es mejor cuando el paciente es tratado por un comité.”

Respecto a la rareza, el Dr. Cabrera especificó que los tumores de cabeza y cuello son una patología relativamente “poco frecuente en comparación con otros tipos de cáncer, como pulmón, mama, colon, próstata, etc. Su incidencia es baja; supone sólo el 5% de los tumores, y está demostrado que los tumores raros se tratan mejor por comités y en centros de referencia.”

Prevalencia de los comités multidisciplinares Por tanto, la multidisciplinariedad se está convirtiendo poco a poco en algo más habitual en los hospitales españoles, como lo demuestran los comités multidisciplinares que tratan casos oncológicos: “Los grandes centros suelen tener estos comités en funcionamiento. En el caso concreto de Extremadura, solo existen dos que funcionen regularmente con cooperación multidisciplinar: los hospitales San Pedro de Alcántara (Cáceres) e Infanta Cristina (Badajoz). En ambos, las reuniones son semanales e incluyen la presencia rutinaria de cirujanos, oncólogos médicos y oncólogos radioterápicos, así como de radiólogos y patólogos. En ellos se presentan todos los nuevos casos y se decide el tratamiento idóneo”, aclaró el Dr. Cabrera. “En otros centros de la comunidad autónoma, aunque existen sesiones clínicas sobre pacientes con tumores de cabeza y cuello, no pueden considerarse verdaderos comités multidisciplinarios por varios motivos: no todos los hospitales cuentan con un servicio de oncología radioterápica, solo se presentan los casos ‘difíciles’ y las reuniones son ‘a demanda’, es decir, no están programadas.”

En todo caso, las nuevas tecnologías pueden servir para extender este tipo de formas de gestión entre la red hospitalaria española: “Todos los hospitales con pacientes con cáncer de cabeza y cuello deberían tener un comité multidisciplinar.

La ausencia de un determinado tipo de especialista, como el oncólogo radioterápico, no debería ser un obstáculo, ya que las videoconferencias y la telemedicina están disponibles en cualquier centro”, ha dicho el oncólogo radioterápico del Hospital Infanta Cristina. Los comités multidisciplinares deben tener un calendario fijo y presentar todos los casos antes de tomarse cualquier decisión con el paciente. De esta forma, “además de la ventaja demostrada en la adherencia al tratamiento, se facilitaría la derivación de casos y se mejoraría la demora entre las diferentes etapas del proceso”.

técnicas de LABORATORIO

Concienciación en cáncer de cabeza y cuello El hecho de que más del 60% de los cánceres de cabeza y cuello se diagnostiquen en fase avanzada pone en evidencia que no existe suficiente concienciación sobre la importancia de esta patología. Según el Dr. Cabrera, son tres los factores que contribuyen a este escenario: “Su baja incidencia hace que sea un desconocido para la población general y para la Medicina de Familia. Además, nuestro paciente tipo es un varón con hábitos tóxicos afianzados y de larga evolución, que no suele recurrir al médico hasta el final. Por último, el cáncer de cabeza y cuello se asocia a una conducta muy determinada y padece un estigma social.”

Para evitarlo, el Dr. Cabrera propone llevar a cabo más campañas de salud, como la campaña europea Make Sense, en la población general y promover hábitos saludables. “Es importante hacer notar que aunque el virus del papiloma humano no es aún la principal causa de cáncer de cabeza y cuello, está cobrando una importancia creciente; por tanto, las conductas sexuales de riesgo deben formar parte de la concienciación en estas campañas.” En el ámbito profesional, cree que “debe mejorarse la formación de los profesionales sanitarios, tanto en la base (médicos de Familia) como en el nivel especializado. Debemos tomar conciencia de que el comité multidisciplinar tiene que ser un estándar de atención sanitaria”.

www.merck.es

737

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias

Noticias

AQUALIA

6,5 millones de EUR en mejoras del Servicio Municipal de Aguas de Sóller en la última década

Aqualia, la empresa que gestiona el Servicio Municipal de Aguas de Sóller desde 2005, ha invertido en los últimos 10 años 6.531.450 EUR en mejoras en las infraestructuras hidráulicas y renovación de la red de abastecimiento y saneamiento de agua.

En estos años, se ha pasado de suministrar 1.832.694 m3 a 967.012 m3, lo que supone una reducción del agua necesaria para el servicio de un 47%. Además, se ha pasado de un rendimiento del 40% en 2005 a un rendimiento actual del 84% y se ha reducido en un 63% el consumo de electricidad.

“Estos datos vienen dados por la mejora de la gestión y las diferentes mejoras en las infraestructuras hidráulicas del municipio, la renovación y mejora de las redes, la concienciación ciudadana y las mejoras técnicas aplicadas al servicio, como la detección y reparación del parque de contadores y la instalación del sistema de telecontrol y telegestión de las instalaciones, entre otros”, explica el responsable del Servicio Municipal de Aguas de Sóller, Francesc X. Martorell.

Entre las actuaciones más importantes llevadas a cabo durante este tiempo, destacan la interconexión Sóller-Sa Costera-Port

técnicas de LABORATORIO

de Sóller, que ha permitido suministrar agua de calidad al Puerto de Sóller, la ampliación del depósito de Pau Noguera, pasando de 400 a 1.400 m3, la implantación del sistema de telecontrol y telegestió de las instalaciones y la renovación del 97% de los contadores domiciliarios.

Además, para garantizar la calidad del agua, aqualia realiza unos 5.000 análisis al año, en los que se controlan 90 parámetros diferentes.

Otras importantes mejoras del Servicio Municipal de Aguas de Sóller se han dirigido a la mejora de la atención a los ciudadanos. Además de tener una oficina de atención al cliente en el nº 30 de la C/ Romaguera, los vecinos de Sóller disponen del Centro de Atención al Cliente, aqualia contact, a través del cual pueden hacer gestiones sin desplazarse a la oficina. El centro recibe cada año más de 1.000 llamadas, de las cuales solo el 0,30% son reclamaciones. También tienen a su disposición la oficina virtual aqualiaonline. En los últimos 5 años, las gestiones on line se han octuplicado. www.aqualia.es

738

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias AIR LIQUIDE

El hidrógeno como combustible, clave para el desarrollo sostenible de la automoción Air Liquide participó en el Seminario de Energía 2015 (Universidad Politécnica de Valencia, 23-26 de noviembre), donde analizó el papel del hidrógeno como un vector energético viable e innovador.

Este encuentro fue un espacio de debate y reflexión en el que los expertos del sector presentaron sus propuestas en torno a la producción racional de energía, su transporte y su uso eficiente.

Se trata de un reto para la sociedad actual, tanto por la necesidad de incorporar nuevas fuentes de energía menos contaminantes, como por conseguir un transporte y almacenamiento apropiados y, en último lugar, hacer un uso adecuado de ellas.

Durante su exposición, Fernando Grau, responsable Ibérico de Ventas Alphagaz e Hidrógeno Energía de Air Liquide destacó las grandes oportunidades que ofrece la energía generada a base de hidrógeno, además de sus desafíos, como el que supuso el desarrollo de la pila de combustible de hidrógeno, capaz de convertir la energía de la molécula de hidrógeno en electricidad.

Asimismo incidió en la importancia de invertir en este tipo de avances tecnológicos, afirmando que “para Air Liquide el cuidado del medio ambiente es una prioridad, por ello la compañía apuesta por el desarrollo de tecnologías innovadoras aplicadas al hidrógeno. De esta forma, el futuro de los combustibles alternativos se convierte en una realidad cada vez más cercana.”

Air Liquide tiene más de 50 años de experiencia en toda la cadena del hidrógeno que comprende desde la producción, hasta su distribución y el desarrollo de aplicaciones relacionadas con este sector.

Así, en Europa, Air Liquide ha arrancado un proyecto junto con IKEA para la instalación de una primera estación de distribución de hidrógeno en Francia. Esta estación permitirá en un primer momento suministrar a una veintena de carretillas elevadoras provistas de pilas de combustible de hidrógeno HyPulsion. Además, en enero de 2015 instaló en Saint Lô una estación de hidrógeno para el Consejo General de La Mancha y en junio de 2015 puso en marcha otra estación de hidrógeno en la región de Rhône-Alpes para permitir la recarga de los vehículos de hidrógeno a los primeros usuarios del proyecto HyWay. Asimismo, en 2014 la compañía instaló cuatro estaciones de servicio de hidrógeno en Dinamarca con el apoyo de la Comisión Europea. En América, los equipos del Grupo Air Liquide garantizan el suministro de hidrógeno de una estación de distribución que alimenta a la flota de carretillas elevadoras con pilas de combustible del grupo de distribución Walmart en su centro logístico de Canadá. En EE.UU., Air Liquide suministra el hidrógeno necesario para 37 carretillas elevadoras en la fábrica de distribución y embotellado de Coca-Cola en California. Estos proyectos se suman a las más de 60 “hidrogeneras” que Air Liquide tiene instaladas en el mundo. La firma pertenece a la Asociación Española del Hidrógeno desde su fundación en 2002. www.airliquide.es (Véase anuncio en la sección Guía del Comprador.)

ENAC

Primer laboratorio acreditado en España para analizar el grado de limpieza de componentes de automoción La Entidad Nacional de Acreditación (ENAC) ha concedido al centro tecnológico IK4-Tekniker la primera acreditación en España para realizar ensayos del grado de limpieza técnica de componentes de automoción según las normas de la serie ISO 16232:2007. Para José Rodríguez, responsable técnico del ensayo en IK4-Tekniker, estar acreditado era primordial, ya que “la acreditación convierte al centro tecnológico en la alternativa a otros laboratorios europeos, facilitando a empresas del sector industrial nacional, especialmente del sector de automoción, poder verificar el cumplimiento de los requisitos exigidos”, añade Rodríguez.

Con los ensayos ahora acreditados se determina la contaminación residual presente en piezas y componentes que van a ser insertadas en sistemas con alto grado de exigencia como motores, sistemas de suspensión, dirección y electrónicos, con el objetivo de evitar fallos y alargar su vida útil. El ensayo evalúa la cantidad de contaminantes presentes en los componentes mediante análisis gravimétrico, clasificación y contaje automático de partículas.

“Verificar adecuada y correctamente la presencia de partículas contaminantes en componentes y fluidos es un requisito indispensable para garantizar rendimientos fiables y disminuir posibles desgastes prematuros”, asegura Rodríguez.

técnicas de LABORATORIO

739

Nº 407 DICIEMBRE 2015

El vídeo del ensayo puede verse en: https://youtu.be/arNVpSFDuP4 www.enac.es

noticias VEOLIA

Contrato de Antero Resources para una planta de reutilización de agua en EE.UU. años bajo un acuerdo adicional que contempla la garantía de rendimiento por actividad, la ampliación de la vida mecánica y la capacidad para gestionar una amplia gama de flujos de retornos y características del agua producida, cumpliendo con los estándares del estado de Virginia Occidental en materia de aguas de vertido.

En palabras de Antoine Frérot, presidente y CEO de Veolia: “Cubriendo todo el ciclo del agua, nuestra experiencia encaja perfectamente en las necesidades de la industria del petróleo y gas. La capacidad para tratar y reutilizar el agua producida es un aspecto crítico para las industrias de extracción y producción de petróleo y representa un avance significativo en términos de reducción de riesgos ambientales.”

El mercado del petróleo y gas es uno de los principales mercados para Veolia. Actualmente, su cifra de facturación en este sector es de 1.500 millones de EUR, estimándose alcanzar los 3.500 millones en 2020.

Antero Resources ha elegido a Veolia, a través de sus filiales Veolia Water Technologies y Veolia Norte América, para llevar a cabo el diseño, la construcción y la operación de una planta de reutilización de agua de 9.500 m3/día valorada en 275 millones de dólares.

Antero Resources, compañía productora de petróleo y gas natural de Denver (Colorado, EE.UU.), ha otorgado a Veolia un contrato para el diseño y la construcción de una nueva planta de reutilización de agua, así como su operación y mantenimiento durante 10 años. Este proyecto, ubicado en Doddridge County (Virginia Occ.), representa un nuevo éxito para Veolia en el mercado del petróleo y gas.

La puesta en marcha de la planta, prevista para finales de 2017, permitirá el reciclaje de 60.000 barriles de agua producida por día, un caudal equivalente a 9.500 m3/diarios. El proceso estará compuesto por tecnologías exclusivas de Veolia, como la tecnología de lecho móvil AnoxKaldnes™ MBBR, el proceso Actiflo™ para la clarificación de agua o el proceso CoLD™, conformando una línea de tratamiento particularmente innovadora en materia de reutilización de agua. La elección de estos procesos energéticamente eficientes que, además, producen agua para reutilización de alta calidad, demuestra el compromiso de Antero con la gestión responsable del agua.

El agua reutilizada del complejo petrolero permitirá a Antero un ahorro de unos 150.000 dólares al año por cada pozo, así como la reducción del riesgo y los costes asociados de traer agua desde larga distancia para su inyección en pozos profundos.

Según el acuerdo, Antero será propietario de los activos de tratamiento y las instalaciones auxiliares (construidas por Veolia) durante los próximos dos años. Transcurrido este periodo, Veolia se encargará de la operación de los sistemas por 10

www.veolia.es

EMPRESAS

MTB España distribuirá los equipos de Electrolab MTB España comunica la nueva distribución en España de los equipos para ensayos farmacéuticos de Electrolab. Dicha empresa, con sede en India y fundada en 1984, exporta más del 50% de su producción a todo el mundo y está especializada en

técnicas de LABORATORIO

equipos para ensayos de disolución, dureza, friabilidad, fugas y bombas peristálticas”. www.mtb.es

740

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias EMPRESAS

Veolia Water Technologies realiza una instalación para el tratamiento de los efluentes de Merck con tecnología de lecho móvil

Se trata de una solución modular, basada en la tecnología de lecho móvil AnoxKaldnes™, que permite la eliminación biológica de los compuestos orgánicos en un reducido espacio de implantación.

La filial española de Veolia Water Technologies ha resultado adjudicataria de un nuevo contrato para el diseño e instalación de una planta biológica para el tratamiento del efluente de la factoría de Merck en Tres Cantos (Madrid).

Esta instalación consistirá en una planta modular Mb-brx, basada en la tecnología de lecho móvil AnoxKaldnes™ MBBR, una nueva tecnología específicamente desarrollada por Veolia Water Technologies para el tratamiento de los efluentes industriales con elevadas concentraciones de compuestos de alta biodegradabilidad y caudales relativamente pequeños.

Diseñada para el tratamiento de 90 m3/día, la nueva planta permitirá a Merck tratar los vertidos de la fábrica, reduciendo al 50% la DQO del efluente. Gracias al diseño modular de la solución Mb-brx, la capacidad de tratamiento de la instalación puede ser fácilmente ampliable para hacer frente a futuros incrementos de producción y, además, la modularidad reduce el espacio de implantación de forma considerable frente a otras tecnologías.

Con este pedido, Merck renueva su confianza en Veolia Water Technologies como tecnólogo de referencia para el tratamiento de agua. En 2008, la filial española de Veolia se encargó del diseño e instalación de una planta de producción de agua

técnicas de LABORATORIO

purificada con una capacidad de 7,5 m3/hora, también para la factoría de Tres Cantos.

Merck, la compañía farmacéutica y química más antigua del mundo, destaca en productos de alta tecnología, innovadores y de gran calidad en los ámbitos de Healthcare, Life Sciences y Performance Materials. Tiene unos 39.000 colaboradores en 66 países que trabajan para mejorar la calidad de vida de los pacientes.

El grupo Veolia es la referencia mundial en la gestión optimizada de los recursos. Presente en los cinco continentes con más de 179.000 empleados*, el Grupo crea y aporta soluciones de gestión de agua, residuos y energía, que favorecen el desarrollo sostenible de las ciudades y las industrias. Con sus tres actividades complementarias, Veolia contribuye al desarrollo del acceso a los recursos, y a la preservación y renovación de los recursos disponibles.

En 2014 el grupo abasteció de agua potable a 96 millones de personas y prestó servicio de saneamiento a 60 millones, produjo 52 millones de MWh y valorizó 31 millones de toneladas de residuos. Veolia Environnement registró en 2014 una facturación consolidada de 24.400 millones de EUR*. www.veolia.com *Cifras 2014 pro forma, incluyendo Dalkia International (100%) y excluyendo Dalkia Francia.

741

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias INICIATIVAS

La entidad ganadora del ranking de juegos de la app ‘Con la EM’, incluye la tecnología en sus instalaciones de Lleida La Fundación Esclerosis Múltiple (FEM) ha incorporado a sus instalaciones de Lleida una nueva mesa interactiva para los pacientes de esclerosis múltiple (EM). La mesa está pensada como una herramienta de rehabilitación cognitiva para estos pacientes. Ha sido desarrollada por la empresa española Virtualware y donada por la compañía alemana Merck como resultado del ranking realizado por los usuarios de la aplicación ‘Con la EM’.

La mesa, denominada ‘Atouch Interactive Table’, permite trabajar desde el juego las habilidades cognitivas, rehabilitando los problemas de equilibrio y la falta de coordinación, los trastornos de movimiento y de la postura y los déficit motores. Es una mesa adaptada a las personas en silla de ruedas y provista de tecnología ‘multitouch’, que permite interactuar a varias personas a la vez. Además, al ser multitáctil, permite a los pacientes jugar y competir de manera colaborativa, fomentando el trabajo en grupo.

“La mesa interactiva supone un gran avance para la rehabilitación de los pacientes, ya que les permite ejercitar su estimulación cognitiva y su memoria de una forma divertida. De alguna forma, favorece la adherencia a la rehabilitación”, ex-

técnicas de LABORATORIO

plica Conxita Tarruella, vicepresidenta de la FEM y presidenta de Esclerosis Múltiple España (EME). “Contar con herramientas que les adhieran a los ejercicios es muy positivo, y por eso queremos agradecer a Merck que podamos contar con la mesa en nuestro centro de Lleida”.

Las instalaciones de FEM en Lleida se trasladarán próximamente para ampliar servicios, y “la mesa ayudará a que, a través de las nuevas tecnologías, podamos facilitar la rehabilitación a pacientes”, dice Tarruella.

“La mesa interactiva hace que la rehabilitación sea más atractiva y visual”, explica el Dr. Luis Brieva, jefe de Sección de Neurología y coordinador de la Unidad de Esclerosis Múltiple del Hospital Universitario Arnau de Vilanova (Lleida), en el que se encuentran las instalaciones de FEM que han incorporado la ‘Atouch Interactive Table’. Brieva también cree que “contar con tecnología avanzada como esta nos coloca en una situación privilegiada para investigar en rehabilitación. Hay muchas novedades en tratamientos patogénicos, pero hay pocos estudios que muestren el impacto de la rehabilitación. Es deseable que podamos analizar cómo el uso de estas herramientas tec-

742

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias nológicas mejora la plasticidad neuronal. De momento, hemos podido observar que con ellas los pacientes pueden aumentar su velocidad de procesamiento mental y mejorar la memoria.”

En la misma línea que el Dr. Brieva, Santiago Almazán, responsable de Pacientes de Merck España, apunta que más allá del desarrollo de nuevas moléculas, “en Merck nos preocupamos por la innovación en todo aquello que pueda ayudar a los pacientes de EM en su día a día. Un ejemplo de esta innovación es la apuesta por la ‘Atouch Interactive Table’, que supone un avance en la rehabilitación cognitiva de los afectados de esclerosis múltiple, así como el desarrollo de aplicaciones móviles como Con la EM.” Los usuarios de la app ‘Con la EM’, desarrollada por Merck para la comunidad de la esclerosis múltiple han otorgado entre tres asociaciones de pacientes de EM los puntos obtenidos tras participar en los juegos de la app. La ganadora del ranking en esta segunda ocasión ha sido Fundación Esclerosis Múltiple. La primera vez la mesa fue para la Asociación Española de Esclerosis Múltiple (AEDEM-COCEMFE).

‘Con la EM’ cuenta con dos partes: ‘Conectamos todos’, en la que los afectados pueden dejar su testimonio e interactuar con el resto de usuarios, y ‘Jugamos todos’, donde, a partir de juegos de memoria, lógica o cálculo, se trabajan los aspectos cognitivos. La app, pensada para el día a día, se dirige a cualquier paciente, familiar o amigo interesado en compartir su experiencia y sugerencias.

La app está en renovación constante, y por eso en los últimos meses se ha hecho más visual y adecuada a los problemas de visión de los pacientes con EM y ha publicado nuevas temáticas en ‘Conectamos todos’, como ‘Gestión del Tiempo’, ‘Temas tabú y Sexualidad’, ‘Información sobre EM - no todo vale’ y ‘Miedos y fantasmas’. También se han incluido nuevos juegos, adaptados a las particularidades de los pacientes con EM, como ‘Farolillos de luz’ y ‘Atrapa el Oso Panda’.

Ya está en marcha la tercera misión, por la cual se entregará una mesa interactiva a otra asociación de pacientes con EM. La EM es una enfermedad crónica del sistema nervioso central, que incluye el cerebro, la médula espinal y los nervios ópticos.

A pesar de que hoy en día no existe cura, cada vez se controla mejor con la ayuda de fármacos modificadores del curso de la enfermedad, que logran reducir el número, la frecuencia y la intensidad de los brotes y la cantidad y volumen de lesiones que aparecen en el cerebro. En España, la prevalencia es de 100-125 pacientes de esclerosis múltiple por cada 100.000 habitantes.

Desde 1992, el compromiso de Merck con la comunidad de esclerosis múltiple (EM) en España se ha traducido en el desarrollo de terapias innovadoras que han conseguido modificar el transcurso de la enfermedad. En cualquier caso, la innovación en esta patología va más allá de los fármacos, con servicios de valor añadido para el paciente, como dispositivos de administración (RebiSmart™) y herramientas de gestión de la enfermedad (MSdialog™), que facilitan la adherencia terapéutica del paciente y el seguimiento de esta por el clínico.

técnicas de LABORATORIO

Merck cuenta con una sólida inversión en I+D en el área neurológica, programas de formación continuada y nuevas líneas de apoyo específicas a la comunidad de EM. Este apoyo se materializa con la edición de guías de apoyo que buscan ayudar en el día a día a los pacientes y que tratan temas como aspectos emocionales, sexuales, familia y amigos, alimentación, etc.

Asimismo, pone a disposición de la comunidad afectada las nuevas aplicaciones móviles ‘Con la EM’ y ‘NeuroMerck’, esta última dirigida a neurólogos especializados. Las decisiones en el abordaje de la EM son muy importantes: qué tratamiento, alimentación y estilo de vida escojo y cómo me relaciono con mi entorno son aspectos que preocupan y condicionan el futuro del enfermo de EM. Este compromiso de Merck resulta clave, y se resume con el siguiente mensaje: ‘Lo que decido HOY, importa MAÑANA’.

www.merck.es

743

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias BURDINOLA

Participación en la Design Faktoria de la Universidad de Mondragón

Burdinola, proveedor de soluciones integrales para laboratorios, participó en el evento Design Faktoria dentro de la Bilbao Bizkaia Design Week 2015. Esta iniciativa, organizada por la Universidad de Mondragón, tiene como objetivo demostrar en la práctica el valor del diseño como herramienta para crear productos y servicios innovadores.

Design Faktoria pone a prueba la capacidad de creatividad y diseño de los participantes –estudiantes de tercer curso y profesionales–, invitándoles a dar respuesta en 24 horas a los retos que se les plantean desde las empresas colaboradoras, referentes en sus sectores de actividad. La participación de Burdinola se enmarca en su apuesta por la innovación, por los nuevos entornos colaborativos y por la colaboración estrecha con los

centros de conocimiento: “Creemos que este tipo de iniciativas resultan necesarias y muy enriquecedoras porque favorecen el acercamiento del mundo laboral al universitario, situándonos en un ámbito que nos aporta nuevas perspectivas e ideas y contribuye a generar innovación”, señalaban en la empresa.

La edición 2015 de Designs Faktoria se celebró en Bilbao el último fin de semana de noviembre con una apretada agenda de trabajo y la participación de 100 personas organizadas en 20 equipos. El viernes a las 14:00, se realizó la apertura oficial y se exponían los retos orientados a la creación de nuevos servicios o productos, aportando los materiales necesarios a los equipos de trabajo. En este contexto Burdinola presentaba su actividad y el valor añadido de sus productos, acercando a los participantes la realidad del sector de los laboratorios. Como reto se les ha propuso trabajar en la creación de nuevos accesorios para las mesas de laboratorios con el horizonte de mejorar o aportar nuevas funcionalidades al usuario.

Durante las siguientes horas se desarrolló el maratón de creatividad de los equipos, que prácticamente pasaron toda la noche trabajando sus proyectos hasta la finalización del plazo, al día siguiente a las 15:00. A esa hora se expusieron al jurado las soluciones propuestas por todos los equipos y se realizó la entrega de premios. www.burdinola.com (Véase anuncio en la sección Guía del Comprador.)

INYCOM

Distribución exclusiva en España de analizadores de tamaño de partículas Fritsch Inycom cuenta desde noviembre con una nueva marca representada al servicio de sus clientes. Se trata de la empresa alemana Fritsch, especialista con más de 25 años de experiencia en el ámbito del análisis del tamaño de partícula con la que Inycom ha llegado a un acuerdo para la distribución en exclusiva de una de sus líneas de producto especializado en España.

La empresa alemana revolucionó en 1985 la precisión de las mediciones con la introducción de la difracción láser con un haz láser convergente, utilizando un proceso de medición patentado. Desde entonces se ha convertido en el estándar internacional para un análisis del tamaño de partícula fácil, rápido y fiable.

Los distintos modelos de Fritsch, Analysette 22 y Analysette 28, destacan mundialmente por su precisión en la determinación del tamaño de partícula para análisis de producción y control de calidad, así como para investigación y desarrollo.

Operación extremadamente sencilla, tiempos de análisis redu-

técnicas de LABORATORIO

cidos, resultados reproducibles y exactos hacen de Fritsch la marca con la mejor relación precio/rendimiento del mercado.

La Unidad de Laboratorio y Diagnóstico de Inycom, concretamente el área de Analítica, ofrece soluciones de análisis para laboratorios en todo el territorio nacional. Se encarga de la comercialización y asesoramiento de todo tipo de equipamiento de análisis y laboratorio, posicionándose en laboratorios de control de calidad, de investigación, laboratorios clínicos y laboratorios de docencia. Mediante esta unidad de negocio, Inycom ofrece equipos para análisis alimentarios, instrumentación analítica, mobiliario de laboratorio, preparación de muestras, purificación de agua, etc.

www.inycom.es (Véase anuncio en la sección Guía del Comprador.)

744

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias LABMAS

Nueva junta directiva Labmas, asociación de fabricantes de equipos, consumibles, reactivos y mobiliario de laboratorio, procedió en la asamblea celebrada el 18 de septiembre, al nombramiento de la nueva Junta Directiva, que quedó configurada como sigue: - Presidencia: Penélope Álvarez, Orto Alresa - Secretaría: Àlex Canals, Cruma - Tesorería: Carlos Árboles, Carlos Árboles - Vocalías: Teresa Espinar, Raypa Victoria Estrada, Cisa-Pobel Francesc Gascó, Teknokroma.

La nueva junta se propone: • Favorecer el espíritu de grupo para la promoción de las actividades de las empresas asociadas y la defensa de sus legítimos intereses.

• Fomentar las exportaciones de equi-

pos y productos para laboratorio fabricados por los asociados.

• Unificar criterios para promover legislación y normativa en materia relacionada con el sector y su expansión.

• Vertebrar el sector de fabricantes de equipamiento científico para defender los intereses de los fabricantes del sector de modo que Labmas se convierta en el interlocutor habitual con los organismos o agentes que influyan en el desarrollo del sector.

• Favorecer acciones encaminadas a agrupar intereses comerciales, industriales, científicos y de promoción, en vistas a una mayor economía y racionalización.

• Fomentar la internacionalización de los asociados: promoción y comercio exterior y marcas, proyectos empresariales y de inversión, promoción Internacional, formación, inversiones, etc.

• Estimular la I+D de la instrumentación científica y técnica mediante premios a trabajos o estudios relacionados con el sector.

La junta recién constituida trabajará para alcanzar estos objetivos en favor de sus asociados, así como de todas las nuevas incorporaciones que se den durante su mandato. www.labmas.es

METROHM

Fully automatic determination of chloride in hardened concrete Environmental influences and errors during the processing of concrete as a building material often lead to costly damage in structures such as bridges, underground parking garages, and others. These structures are also exposed to various environmental influences such as cold, heat, humidity, and condensation water.

Over the years, effects associated with chloride lead to pitting corrosion of the steel used for reinforcing the concrete.

The concrete is therefore checked for chloride content as part of the inspection of the integrity of the affected structures.

Drill dust samples are collected from various pre-determined points in the structure, generally from different depths, for chloride content determination.

The samples are investigated in a laboratory to determine the chloride content in accordance with the DIN EN 14629 standard or by means of potentiometric titration as described in Booklet 401 of the German Committee for Structural Concrete. The titration is easy to understand, robust in application, and rapidly provides correct results with high precision.

Metrohm offers the right analysis systems for this purpose.

From a simple individual workstation all the way to a fully automated titration system - controlled by tiamo, the world’s leading titration software (see our ‘Novedades’ section).

www.metrohm.com

técnicas de LABORATORIO

745

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias OERLIKON LEYBOLD VACUUM

New Online Shop improves on Speed and Services – in the web and on the road Oerlikon Leybold Vacuum has launched the Vacuum Online Shop, the allnew online store for our vacuum technological products and accessories.

After running the Vacuum Shop in the US successfully, the Online Store is now open and ready for operation in 12 additional countries in six languages to shop for products and after sales services.

With high-tech products and innovative vacuum solutions, Oerlikon Leybold Vacuum supports its customers in making full use of their potential.

Convenient purchasing access and quick delivery enhances their production processes.

• Broad range of products. Logging into the Online Shop opens the chance to discover an exciting array of products, spare parts and accessories. The Vacuum Shop is built around a friendly, easy to use interface. Oerlikon Leybold Vacuum is dedicated to providing products and services to the customers that will assure a professional experience when shopping with them. More than ever, value is important, and having an easy access to original spare parts, standardized maintenance kits, small items such as flanges, fittings, valves, or measuring instruments will help to save money and time. Therefore, the Online-Shop focusses on all items, which can be sold without any consultancy - but it also offers vacuum pumps, which are easy to install and represent state-of-the-art components. The shop offers state-of-

the art options for payment: advanced payment, secure payment with credit cards or by invoice. Furthermore, there is a discount on all order effected through the shop, even with free shipping for orders exceeding a certain amount. This will also be the forum to check for special offers and sales promotions.

For other items requiring specific consultation, the shop still offers the option to place a request for an offer.

Then, highly experienced experts will get back to you to clarify your needs and requirements – from standardized systems to fully customized solutions.

• After Sales Services on the Road.

With this easy online shopping access, Oerlikon Leybold Vacuum is electronically improving on the already excellent personal customer proximity through the widespread sales and service network. In order to execute on the new global service concept, Oerlikon Leybold Vacuum is investing in the enhancement of the field service network with highly experience and trained service staff.

These service technicians will now be equipped with new field service vans containing all items needed to perform high quality maintenance or servicing task directly at the customers’ site.

This localized service complements the new offer on remote monitoring of vacuum components – in case of any necessary service, field service may be a perfect option to increase the customers’ uptime. www.oerlikon.com/leyboldvacuum.com

técnicas de LABORATORIO

746

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias EMPRESAS

Aqualia dice no a la violencia de género Con motivo de la celebración del Día Internacional contra la violencia de género, Aqualia puso en marcha una nueva edición de la campaña “Yo, contigo” para concienciar a la sociedad sobre este problema. La iniciativa giró en torno a la red social twitter, en la que, hasta el 30 de noviembre se difundieron mensajes con la etiqueta #AqualiadiceNOalaViolenciadeGénero. En los mensajes se podía incluir fotografías individuales o de grupo portando el cartel de la campaña, personalizado con el nombre de los fotografiados o el deseo que cada uno quisiera expresar en su rechazo a la violencia.

La campaña también se difundió a través de WhatsApp, con una imagen que se pudo utilizar como imagen de contacto (avatar) durante la semana que duró la campaña.

Todas las localidades en las que Aqualia está presente se implicaron en la acción. Las oficinas se adornaron y llenaron de mensajes de concienciación, tanto de los propios empleados como de los clientes que se acercaban a realizar sus gestiones. Todos se fueron adhiriendo con sus tweets e imágenes a la campaña.

En paralelo, Aqualia participó en diferentes actos conmemorativos en Archidona y Ronda (Málaga), Denia (Alicante), Ávila y Oviedo.

En Ávila, Santiago Lafuente, director Nacional de Aqualia, y Carmen Rodríguez, directora de RRHH de Aqualia, intervinieron en una mesa redonda en la que, bajo la temática general “¿Qué podemos hacer para evitar esta lacra?”, se debatió sobre las iniciativas que empresas, colegios, instituciones en general pueden llevar a cabo para luchar contra este problema. En la mesa estuvieron presentes varios representantes del ayuntamiento de Ávila. El debate se enmarcó en un día lleno de actividades que comenzó con la suelta de globos a media mañana.

Una suelta de globos inició también la jornada de concienciación en Archidona y Ronda. En Archidona, además, alumnos de 6ª de Primaria de los dos centros del municipio colaboraron con la campaña de RRSS de Aqualia, escribiendo mensajes que posteriormente se expusieron en un gran mural.

En Ronda, desde primera hora de la mañana la oficina de Aqualia acogió la campaña con el pegado de corazones en sus puertas para todas las personas que quisieran dejar sus mensajes.

Archidona.

Ávila.

En Denia fue el Centro Deportivo, gestionado por Aqualia, el que acogió el lanzamiento de globos, contando con la presencia de la concejala de deportes del ayuntamiento y diversos miembros de la corporación municipal, acompañados de monitores y personal de Aqualia.

En Oviedo también hubo suelta de globos delante del Auditorio, lugar emblemático para el Servicio Municipal de Aguas, pues su interior alberga los restos del primer depósito que tuvo la ciudad, y la oficina recibió los mensajes de los clientes en el corazón morado que simbolizaba la campaña de Aqualia.

Estas acciones se integran en las actividades que Aqualia viene desarrollando como empresa con el sello Distintivo de Igualdad otorgado por el Ministerio de Sanidad, Asuntos Sociales e Igualdad. www.aqualia.es

Denia.

Oviedo.

técnicas de LABORATORIO

747

Nº 407 DICIEMBRE 2015

noticias ZEISS

Buen balance del año fiscal 2014/15 En el año fiscal 2014/15 (finalizado el 30 de septiembre de 2015), Zeiss aumentó sus ingresos y ganancias: los ingresos subieron hasta los 4.511 millones de EUR, por 4.287 millones el año pasado. Esta cifra representa un aumento de un 5,2%. Con una cifra de 369 millones de EUR, la cifra EBIT estuvo ligeramente por encima de la cifra del año pasado (360 millones). “El año fiscal 2014/15 fue bastante complicado para Zeiss Group en algunos mercados. A pesar de ello, gracias a nuestra amplia cartera, conseguimos una trayectoria de crecimiento de todo el grupo, consiguiendo un éxito general”, afirmó el Dr. Michael Kaschke, director General y consejero delegado de Carl Zeiss AG. “Pese a las buenas cifras de ingresos para la mayor parte de los segmentos empresariales, debemos seguir modelando nuestra competitividad si queremos mantener la posición de liderazgo que hemos

mantenido muchos años”, explicó Kaschke.

La cifra de empleados aumentó un poco hasta llegar a los 24.946. El gasto de las actividades de I+D subió en un 4% hasta los 466 millones de EUR. Las inversiones en propiedad, planta y equipamiento alcanzaron los 160 millones de EUR. Para el año fiscal 2015/16, Zeiss anticipa solo un crecimiento moderado de la economía mundial. Pese a ello, Zeiss Group espera un crecimiento ligero en los ingresos para el año 2015/16.

Zeiss es una empresa de tecnología internacional que realiza operaciones en la industria óptica y de optoelectrónica.

Zeiss Group desarrolla y distribuye óptica de litografía, tecnología de medición, microscopios, tecnología médica, lentes para gafas, lentes de cámara y cine, prismáticos y tecnología planetaria. Gracias a sus soluciones, la compañía avanza de

forma constante en el mundo de la óptica, ayudando a modelar los progresos tecnológicos. Se divide en cuatro grupos empresariales: tecnología de fabricación de semiconductores, tecnología de investigación y calidad, tecnología médica y cuidado de la visión/óptica de consumo. Zeiss está representada en más de 40 países, cuenta con más de 30 instalaciones de producción, dispone de más de 50 localizaciones de ventas y servicio y unas 25 instalaciones de I+D. Fundada en 1846 en Jena, la compañía tiene su sede central en Oberkochen (Alemania).

Carl Zeiss AG es una compañía de gestión de holding estratégico que gestiona Zeiss Group. La compañía es una filial de propiedad completa de Carl Zeiss Stiftung (Carl Zeiss Foundation).

www.zeiss.de

I+D

Un ingrediente de bloqueador solar podría prevenir infecciones de implantes médicos Un ingrediente común en la protección solar podría ser un recubrimiento antibacteriano eficaz para implantes médicos como marcapasos y articulaciones.

Investigadores de Universidad de Michigan encontraron que una capa de nanopirámides de óxido de zinc puede interrumpir el crecimiento de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA), reduciendo la película en los materiales tratados en más del 95%. Alrededor de un millón de dispositivos médicos implantados se infectan cada año con MRSA y otras especies bacterianas.

“Tratar estas infecciones es extremadamente difícil”, dijo J. Scott VanEpps, profesor clínico e investigador en el departamento de medicina de emergencia la Facultad de Medicina de la U-M, cuyo equipo dirigió el estudio biológico.

El tratamiento consiste en ya sea un largo curso de antibióticos, que pueden conducir a la resistencia a los mismos y a efectos secundarios tóxicos, o en reemplazar quirúrgicamente los implantes, lo que puede ser

bastante complejo para dispositivos tales como válvulas cardiacas y prótesis articulares, según VanEpps.

Lo ideal sería, en primer lugar, evitar que las infecciones se produjeran. Una opción es recubrir los dispositivos con algo en lo que las bacterias no pueden crecer. Los nuevos resultados, publicados en la revista Nanomedicine, sugieren que tal revestimiento se podría hacer a partir de nanopartículas de óxido de zinc, un ingrediente común en los protectores solares que hace que la loción sea más gruesa y relativamente opaca.

Si las nanopartículas tienen la forma de una pirámide con una base en forma de hexágono, son muy eficaces en la prevención de una enzima llamada beta-galactosidasa que descompone la lactosa en azúcares más pequeños para que las bacterias las utilicen como combustible.

La forma es importante, tanto para la enzimas como para las nanopartículas. La enzima tiene que ser capaz de torcerse para cortar la lactosa en azúcares más pequeños.

Dos aminoácidos, o bloques de construc-

técnicas de LABORATORIO

748

Nº 407 DICIEMBRE 2015

ción de proteínas, se sitúan uno frente al otro a través de una ranura de la enzima. La lactosa encaja en la ranura, y los aminoácidos se unen para catalizar la ruptura en glucosa y galactosa.

“Aunque se necesitan más estudios, creemos que nanopirámides de óxido de zinc interfieren con este movimiento de torsión”, dijo Nicholas Kotov, profesor de ingeniería química, cuyo grupo hizo las nanopartículas.

El estudio fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias de EE.UU. (NFS por sus siglas en inglés), los Institutos Nacionales de Salud (NIH), la Fundación Nacional de Investigación de Corea y Sociedad Académica de Medicina de Emergencia.

(Resumen del estudio: J. Scott VanEpps, Laboratorio Kotov.

www.umich.edu

guía del COMPRADOR

A

guía del COMPRADOR

A-B

guía del COMPRADOR

B-C

guía del COMPRADOR

D-E-F

guía del COMPRADOR

F-G

guía del COMPRADOR

G-H-I

guía del COMPRADOR

H-I-J-K

guía del COMPRADOR

DISEÑO, FABRICACIÓN, INGENIERÍA Y APLICACIONES ESPECIALES EN:

• • • • • • •

CROMATOGRAFÍA DE GASES HRGC CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS HPLC y LC SISTEMA MULTIDIMENSIONAL HPLC+HRGC (Pat) SISTEMAS COMBINADOS HRGC-HPLC-DIP-MS ESPACIO DE CABEZA, P&T, SPME, ...

LABORATORIO DE ANÁLISIS ESPECIALIZADOS CURSOS DE FORMACIÓN

Barcelona T +34.93.590.28.40 F +34.93.590.28.44 ventas@konik-group.com Madrid T +34.91.328.25.26 F +34.91.328.36.54 madrid@konik-group.com Única compañía europea con gama completa de HRGC/HPLC/MS

K-L-M

guía del COMPRADOR

M-N-O

guía del COMPRADOR

O-P-Q

guía del COMPRADOR

R-S

guía del COMPRADOR ® Shodex Capture the essence

High Performance LC columns www.shodex.es

Shodex Europa info: Tel.: +49 89 9399 6237 Distribuidor España: ANORSA Tel.: +34 93 3006050 www.anorsa.com

S-T

guía del COMPRADOR

T-V-W

Un modelo para cada necesidad Disponemos de una amplia gama de Grifería de Laboratorio para: agua, gases y aguas especiales, con un diseño moderno y elegante, permitiendo su instalación en mesa, pared y suspendido, así como en vitrinas para gases.

Fabricados en materiales anticorrosivos como polipropileno, acero inoxidable o con recubrimiento de poliamida, impidiendo que los ácidos utilizados en el laboratorio dañen la superficie de los grifos.

Desde el año 1944 venimos suministrando Grifería de Laboratorio cumpliendo las normas DIN 188, de Grifería de Laboratorio.

La respuesta en Equipos de Emergencia Las Duchas y Lava-Ojos de Emergencia son la respuesta inmediata para la descontaminación por proyección de agua para la protección por disolución y lavado extractivo de las agresiones debidas a los productos químicos, cáusticos, ácidos, así como la radiactividad..., que podrían provocar lesiones graves e irreparables.

Desde hace más de 30 años, venimos fabricando Equipos de Emergencia cumpliendo las normas DIN EN 15154/2006 y ANSI - Z358 - 2004.

Mod. 2210 Lava-Ojos de emergencia con soporte mural.

Los Lava-Ojos ofrecen un gran caudal de agua aireada a baja presión que no dañan los delicados tejidos oculares. Incorporan filtro de acero inoxidable, recogedor de agua de plástico ABS amarillo o acero inoxidable, y van equipados de cubiertas anti-contaminación de funcionamiento automático en la puesta en marcha.

www.carlosarboles.com

Mod. 4220 Ducha Lava-Ojos con doble mando.