Revista num 24 by segla4

REVISTA DE CALIDAD AMBIENTAL INTERIOR EN HOSPITALES, LABORATORIOS, ANIMALARIOS Y SALAS DE AMBIENTE CONTROLADO International Standard Serial Number (ISSN) 2013-746X

Núm. 24, ENERO 2016

Sumario

EDITORIAL

TRABAJAR

FITOPATÓGENAS

CON ALTO

BACTERIAS RIESGO

LABORATORIOS DE BIOSEGURIDAD NIVELES 2 Y 3. Mª Belén Alvarez Ortega. Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias.

18. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3 Juan José Colina Venegas. Microbiólogo. PERÚ

30. EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

Ana Flores. SCSIE-Cultivos Celulares y Citometría de Flujo. Universidad de Valencia. Patricia Martínez. Lic. en Ciencias Químicas y Técnico de Higiene Industrial de la Universitat de València.

45. BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL

Dra. Gloria Cruceta

Epidemia de Ébola: Km. 0 Se confirma una nueva muerte por Ébola, en menos de 24 horas después de que la Oorganización Mundial de la Salud (OMS) declarase el fin oficial del brote, tras 42 días sin nuevos casos. Según un comunicado de la agencia de noticias Reuters, con sede en Reino Unido, “mientras los portavoces oficiales de la OMS declaraban el fin del brote con todas las cautelas necesarias, un laboratorio ubicado en Sierra Leona analizaba muestras sospechosas de una joven fallecida dos días antes en dicho País”. El portavoz de la OMS, Tarik Jasarevic, portavoz de la OMS, defiende que, en cualquier caso, lo ocurrido "refleja que sigue existiendo riesgo y que el brote sigue aún en una fase crítica que nos obligará a mantener toda la vigilancia epidemiológica". A su juicio, es importante diferenciar entre transmisión continuada del virus, que es lo que ha venido ocurriendo en los 2 últimos años (con 28.000 casos y 11.000 fallecidos), y casos puntuales, que son los que se pueden seguir dando todavía. ¿Estamos ante el km0 de una nueva Epidemia de Ébola?

DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN Aitziber Goikoetxea. Master en Arquitectura, Organización y Gestión de Infraestructuras Hospitalarias. Graduado en Ingeniería de Edificación. Arquitecto Técnico en ATHOS Ingenieros.

Directora de la Publicación: Dra. Gloria Cruceta ISSN 2013-746X. Realización: SEGLA s.l. Avda Gaudi, 52 bis, 4º1º Barcelona. 08025 Tel. 934 364 061. Cualquier forma de reproducción, distribución, o transformación de esta obra sólo puede ser realizada con la autorización de los titulares de la publicación. www.biotecnologiahospitalaria.com

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BIOTECNOLOGIA HOSPITALARIA Reconocida como Web Médica Acreditada (WMA), en el programa de certificación de calidad de webs médicas (Colegio Oficial de Médicos de Barcelona). International Standard Serial Number (ISSN) 2013-746X

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TRABAJAR CON BACTERIAS FITOPATÓGENAS DE ALTO RIESGO EN LABORATORIOS DE BIOSEGURIDAD NIVELES 2/3

TRABAJAR CON

RESUMEN:

BACTERIAS

FITOPATÓGENAS DE ALTO

Los patógenos de plantas han despertado cierto

RIESGO EN

interés en los últimos años debido al daño que una parte de ellos puede causar a cultivos que

LABORATORIOS DE

constituyen productos básicos de la alimentación

BIOSEGURIDAD NIVELES 2

humana, en el caso de introducción accidental o liberación intencionada de alguno de ellos.

Como no existe una clasificación de los niveles de contención

Mª Belén Alvarez Ortega

para

este

tipo

patógenos,

normalmente el diseño de instalaciones de Dra. María Belén Álvarez Ortega Investigadora posdoctoral Departamento de Bacteriología INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS (IVIA)

bioseguridad para trabajar con ellos y su manejo se realizan adaptando lo que se conoce para los patógenos de humanos. A continuación se describen brevemente algunos de estos patógenos de

vegetales,

concretamente

bacterias

fitopatógenas de alto riesgo, y se establecen

recomendaciones tanto de diseño de instalaciones de bioseguridad como de manejo de dichos patógenos, para trabajar con ellos de una forma segura para el medio ambiente. Palabras

clave:

agroterrorismo,

cultivos,

patógenos de plantas, epidemia, BSL2, BSL3, cámaras climáticas, inoculación.

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En los últimos tiempos ha habido

una

preocupación

creciente por la posibilidad de actos

terrorismo

Se considera como bacteria fitopatógena aquélla que causa daño a una especie vegetal, independientemente de su gravedad. De hecho, la mayor

parte

enfermedades

estas

que

tienen

bacterias poca

producen o

ninguna

bioterrorismo internacional, y la

importancia económica, y otras causan un daño en

tenencia y/o uso de armas de

pérdidas del rendimiento de las cosechas que es

destrucción

masiva,

han

tolerable. Sin embargo, hay unas pocas que pueden provocar epidemias en cultivos de

cobrado especial relevancia los

considerable valor económico y cuya liberación

agentes biológicos que pueden

intencionada podría dar lugar al desabastecimiento

instigar niveles significativos de

local de la población.

pánico en la población humana. Entre mayor

ellos,

atención

aunque se

centra

normalmente en los que afectan

Actualmente, aunque no hay criterios oficialmente establecidos para seleccionarlas de entre el conjunto de bacterias fitopatógenas, existen listas y publicaciones (ver referencias) que describen a las principales especies:

directamente a la salud humana y animal, la preocupación se ha

‘Candidatus Liberibacter africanus’, ‘Ca. L.

extendido también a los que

americanus’ y ‘Ca. L. asiaticus’. Son bacterias

deterioran las cosechas, entre

sistémicas limitadas al floema y no cultivables,

los

que producen una enfermedad devastadora, el

que

encuentran

bacterias fitopatógenas.

las

huanglongbing (HLB) ó greening de los cítricos. Las

plantas

infectadas

inevitablemente

deterioran y mueren y, una vez establecida la enfermedad, su control hasta el momento no es posible. La dispersión de estos patógenos tiene lugar a través de psílidos vectores y por el uso de material vegetal infectado.

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Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus.

Xanthomonas albilineans. Afecta gravemente a

Produce una enfermedad sistémica de difícil

la caña de azúcar, puede destruir cosechas enteras

control, la podredumbre anular o necrosis

de este cultivo en pocos meses, lo que ha hecho

bacteriana de la patata y los tubérculos infectados

necesario desarrollar variedades resistentes. Esta

y almacenados durante meses que van a ser

bacteria no sólo puede perjudicar el suministro de

sembrados suelen ser la vía de introducción en el

azúcar para alimentación, sino el energético, ya

campo. Aunque la bacteria prolifera normalmente

que el etanol es un importante biocombustible

en zonas frías, parece ser que puede adaptarse a

obtenido en muchos países a partir de la

muy distintas condiciones.

fermentación de la caña de azúcar.

Erwinia amylovora. Afecta a frutales de hueso y

Xanthomonas

pepita, como el manzano o el peral. Puede causar

cancrosis asiática o de tipo A de los cítricos, que

graves pérdidas de cosecha, dependiendo de las

puede llegar a ser devastadora, provocando la

condiciones atmosféricas y del cultivar que se

caída prematura de los frutos y el decaimiento

utilice, ya que entre ellos hay una gran variación

general de los árboles. Este tipo de cancrosis tiene

de tolerancia, lo que los convierte en uno de los

el rango de huéspedes más amplio, afectando a la

factores limitantes en algunos de los países en los

mayor parte de los principales cultivares y, por

que se ha detectado este patógeno.

tanto, es el que produce pérdidas de recolección y

Complejo

especies

Ralstonia

citri

subsp.

citri.

Causa

de campo más importantes.

solanacearum. Produce la marchitez bacteriana en

Xanthomonas oryzae pv. oryzae. Produce la

más de 200 especies vegetales pertenecientes a

enfermedad bacteriana más grave del arroz,

más de 53 familias botánicas, con efectos que

reduciendo considerablemente el rendimiento o

pueden ser devastadores en numerosos cultivos,

causando epidemias. Es una bacteria vascular que

como la patata o el tomate. Una vez introducida en

penetra en la planta por raíces y hojas, y su

el medio ambiente, puede sobrevivir en ausencia

diseminación se ve facilitada por las condiciones

del huésped durante períodos muy largos de

de inundación del cultivo. Las plantas de arroz

tiempo manteniendo su potencial patógeno.

que se dejan para el siguiente período y el uso de material vegetal contaminado son las principales vías de transmisión e introducción en la zona productora, respectivamente.

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Xanthomonas oryzae pv. oryzicola. También

Éstas suelen contemplar el arranque y

afecta al arroz y, aunque suele ser menos agresiva

destrucción de todo el cultivo contaminado,

que X. oryzae pv. oryzae, en condiciones

incluido el que no presenta síntomas de su entorno

atmosféricas favorables puede invadir campos

inmediato.

enteros y causar un daño comparable. Penetra en

incineración

la planta por las hojas y puede sobrevivir durante

oficialmente reconocido.

La o

destrucción por

tiene

cualquier

lugar

otro

por

método

los períodos intercosecha en hojas o restos de hojas infectadas. Xylella fastidiosa. Es un patógeno sistémico devastador para una gran variedad de especies de árboles frutales, entre ellos los cítricos, y otros cultivos. Se transmite por insectos vectores y, aunque en el laboratorio se mantiene con dificultad, el avance de la enfermedad se puede ralentizar, pero no frenar, a través del uso de medidas adecuadas, como el control de los vectores.

Actualmente hay numerosos laboratorios de investigación y diagnóstico en Sanidad Vegetal en todo el mundo trabajando en sus instalaciones de bioseguridad con estos patógenos de alto riesgo, de los que se profundiza en su biología y ciclo de vida con el objetivo común de mejorar tanto las medidas preventivas existentes para impedir la introducción del patógeno en una zona, como los sistemas de control integrado diseñados para hacer frente eficientemente a un foco de cualquiera de estas enfermedades, establecido

En general, cuando a pesar de las medidas

natural o intencionadamente.

preventivas y la vigilancia fitosanitaria llevada a cabo por los diferentes organismos responsables en todo el mundo, aparece un foco de alguna de estas enfermedades, se aplican las medidas oportunas de control y erradicación previstas normalmente

las

correspondientes

legislaciones.

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DISEÑO, INSTALACIONES Y PUESTA EN MARCHA DE LABORATORIOS DE BIOSEGURIDAD BSL3/BSL4 Y ANIMALARIOS DE INVESTIGACIÓN 26 enero / 16 marzo 2016 Plazas limitadas

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LABORATORIO DE SEGURIDAD BIOLÓGICA DE NIVEL 2 (2,5) Para trabajar con estas bacterias fitopatógenas de alto riesgo, es aconsejable el uso de un laboratorio de bioseguridad cuyo diseño y funcionamiento permitan un control suficiente del ambiente interior que minimice los riesgos de escape al medio ambiente. Debido a que los niveles de contención biológica para patógenos vegetales no están claramente definidos en la legislación, esto se consigue realizando una evaluación inicial del riesgo biológico asociado a esta actividad. En general, una propuesta sería la que reuniría las características principales recogidas en el grado de confinamiento 2,5 descrito en la Tabla 1 por comparación con los niveles de bioseguridad 2 y 3.

Especificaciones

Grado de Confinamiento 2

Dependencias laboratorio

2,5

del No se exige en un Separado de otras zonas En un edificio separado, del mismo edificio separado puede estar separado de otras zonas del mismo edificio

edificio

Laboratorio hermético No exigida para efectuar una fumigación

No exigida

Exigida

Existencia de una No exigida entrada y salida independientes

No exigida

Exigida

Superficies resistentes a Exigida (mesa) ácidos, álcalis, disolventes, desinfectantes y agentes de descontaminación y de fácil limpieza

Exigida (mesa y suelo)

Acceso al laboratorio a No exigida través de una esclusa

Opcional (recomendada Opcional con taquillas, sin duchas y con puertas enclavadas)

Equipo

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Presión negativa No exigida respecto a la presión del medio ambiente inmediato

Exigida

Exigida con excepción de casos de transmisión no por vía aérea

Aire de entrada y salida No exigida del laboratorio tratado con filtros HEPA

Exigida en aire de salida

Exigida en aire de salida con excepción de casos de transmisión no por vía aérea

Recinto o campana de Opcional seguridad microbiológica

Exigida

Autoclave

En el edificio

En las dependencias del En las dependencias laboratorio del laboratorio

Normas de Trabajo

Acceso restringido

Exigida

Señalización de un Exigida peligro biológico en la puerta

Exigida

Medidas específicas para Exigida: minimizar el control de la formación y difusión de aerosoles

Exigida: evitar

Ducha

No exigida

Opcional

Indumentaria protección

Guantes

No exigida

de Indumentaria de Indumentaria y calzado Indumentaria y protección adecuada de protección adecuados calzado de protección adecuados Opcional

Control eficaz de los Exigida vectores (por ejemplo, roedores e insectos)

Exigida

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Residuos

Inactivación de los No exigida patógenos en los efluentes de lavabos, desagües y duchas o efluentes similares

Opcional (si no se realiza, Opcional los patógenos deben inactivarse por tratamiento químico antes de llegar a los efluentes)

Inactivación de los Exigida patógenos en el material contaminado y en los residuos

Exigida

Almacenamiento del No exigida equipo en el propio laboratorio

Opcional

Una ventana de Opcional observación o similar para ver a los ocupantes

Opcional

Otras medidas

Tabla 1. Comparación de las medidas de confinamiento y otras medidas de protección para las actividades de laboratorio de niveles de bioseguridad 2 y 3 según aparecen descritas en el Cuadro IA del Real Decreto 178/2004 referido a organismos modificados genéticamente, con respecto a las propuestas para el manejo de bacterias fitopatógenas de alto riesgo, que supondrían trabajar en condiciones por encima del nivel 2, pero por debajo del nivel 3 (nivel 2,5). El diferente sombreado en gris señala las similitudes de este nivel de bioseguridad con el nivel 2 (gris claro) y con el nivel 3 (gris oscuro).

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El acceso al laboratorio se realiza en el mismo edificio donde hay laboratorios de nivel 1 y otras dependencias y está restringido al personal autorizado (Figura 1A), que al entrar debe atravesar una doble puerta con cierre automático dependiente. Este SAS (Figura 1B), da acceso a las salas de laboratorio propiamente dichas, tiene presión negativa y taquillas que contienen los equipos de protección individual (EPI) que el personal debe ponerse encima de su ropa de calle, y que consisten en bata desechable de cierre a la espalda, peúcos de plástico sobre los zapatos de calle y guantes. En el SAS existe un registro de entradas y salidas, donde el personal debe escribir el día y hora de su entrada y la actividad que va a realizar en el laboratorio, también la hora de su salida, cuando se despoja de los EPIs, que son desechables, y los introduce en una bolsa de plástico para su autoclavado. Una vez en las salas de los laboratorios, que mantienen valores de depresión con respecto al SAS (Figura 1C), el trabajo con las suspensiones bacterianas vivas se realiza exclusivamente en las cabinas de seguridad biológica (CSB) (Figura 1D). Para cualquier ensayo que tenga que hacerse fuera de ellas, estas suspensiones se inactivan previamente con calor.

Figura 1. (A) Acceso restringido, señalización de riesgo biológico y alfombrilla descontaminante a la entrada del laboratorio de bioseguridad. (B) Taquillas, señalización de uso de prendas protectoras, bolsa para el autoclavado de éstas a la salida, desinfectante para las manos y teléfono de emergencia en el SAS. (C) Manómetros para el control de la presión negativa en las distintas salas. (D) Cabinas de seguridad biológica para el manejo de agentes patógenos.

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Existe también un sistema de filtración del aire de salida, con filtros HEPA. Para el tratamiento de los residuos, con los sólidos y líquidos contenidos en material de vidrio o plástico autoclavable y/o desechable, se realizan los ciclos convenientes de inactivación en autoclave, que se encuentra en las mismas dependencias del laboratorio de bioseguridad. Los líquidos contenidos en material termolábil, se descontaminan por contacto directo durante el tiempo oportuno con un desinfectante comercial antes de su vertido a la red general de efluentes del edificio.

Laboratorio de Seguridad Biológica de Nivel 3 Cuando los procedimientos experimentales requieren la inoculación de bacterias fitopatógenas de alto riesgo en sus respectivas plantas huésped es aconsejable trabajar con un nivel de contención mayor. Esto es debido a un incremento en el riesgo de escape en el manejo del agente infeccioso, porque pasa de estar controlado en recipientes que maneja directamente el personal del laboratorio, a infectar a su huésped en condiciones óptimas para su multiplicación, en plantas no axénicas de invernadero, en circunstancias lo más cercanas posible a las de campo. Es recomendable por tanto realizar estos ensayos en un laboratorio de nivel 3 que tenga cámaras climáticas adecuadas para el cultivo de vegetales (Figura 2).

Figura 2. (A) Mobiliario, focos, luces de servicio, sistema de humidificación y desagüe en una cámara climática para el cultivo de vegetales. (B) Plantas de tomate inoculadas con un agente patógeno, contenidas en una cámara climática. www.biotecnologiahospitalaria.com

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Estas

cámaras

climáticas

tienen

las

dimensiones de salas de laboratorio, son estancas y en ellas se pueden controlar las condiciones de temperatura de incubación, luz programada según

Como en el resto de la instalación de bioseguridad, el aire de extracción sale al exterior a través de filtros HEPA.

fotoperíodo y humedad relativa del ambiente que

Con respecto a los elementos interiores, los

tendrán las plantas inoculadas, mediante un

suelos de las cámaras climáticas deben tener un

sistema de humidificación. Es deseable que la

desnivel adecuado para el drenaje tras los riegos y,

temperatura

al menos, un desagüe por sala que vehicule los

humedad

sean

más

homogéneas posible en el interior de estas salas.

efluentes hacia el sistema general de conducciones para su descontaminación.

Se requiere también en ellas una ventilación que garantice un

Los materiales de revestimiento de las cámaras climáticas deben cumplir con las características habituales requeridas en este tipo

número de renovaciones de aire

de instalaciones de nivel 3 y, además, ser

por hora que dependerá de la

particularmente resistentes a la elevada humedad

densidad de plantas, además de

relativa que suele ser constante y al desgaste

permitir el mantenimiento de una

debido a los continuos cambios de temperatura

presión negativa con respecto a otras

dependencias

del

que existen en los diferentes climas que se pueden programar. El mobiliario debe estar situado cerca de

laboratorio, lo que constituye un

las paredes o en la parte central, para favorecer su

factor

importante

limpieza, y debe permitir colocar plantas a

que

las

diferentes alturas o en el suelo, ya que los

cámaras climáticas con plantas

diferentes tipos de cultivos con los que se puede

biocontención

inoculadas

con

patógenos

son

trabajar, desde árboles a plantas más pequeñas, deben mantener una distancia con los focos de luz.

salas de alto riesgo. La descontaminación de estas cámaras climáticas

una

vez

terminado

procedimiento experimental puede llevarse a cabo por fumigación, ya que dichas salas son estancas.

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Una cuestión a considerar en el diseño de

las dimensiones de los carros en los que se

instalaciones de nivel 3 de contención biológica

van a transportar estos soportes con las

con salas climáticas para el cultivo de vegetales

plantas hacia las cámaras climáticas; estos

son las dimensiones máximas de los soportes en

carros requerirán de una anchura mínima

los que van a llegar las plantas desde el

del pasillo de distribución y de las puertas

invernadero y que se van a introducir en dichas

que

cámaras y manejar todo el tiempo que dure el

deberán llegar al suelo para permitir el

procedimiento experimental.

avance

Estos soportes pueden ser de considerable tamaño, como por ejemplo las macetas de plástico que se requieren para el cultivo de árboles o las bandejas de invernadero que pueden albergar

deben

atravesar;

los

dichas

carros;

puertas

además,

disposición de las puertas de las antesalas y cámaras climáticas deberá permitir el semigiro de estos carros para su entrada en dichas cámaras.

hasta varias decenas de plantas y que son de uso muy frecuente. Las dimensiones máximas de estos soportes van a influir en: REFERENCIAS -

las dimensiones de las pilas de los fregaderos,

longitud,

anchura

profundidad, ya que en ocasiones hay que lavar estos soportes vacíos con distintos fines durante o al final del procedimiento experimental, -

Adair D, Irwin R. 2008. A practical guide to containment. Plant biosafety in research greenhouses.

2nd

edition.

Information

systems for biotechnology. Blacksburg, VA. Howell J. 2005. National regulation and security

las dimensiones del interior del autoclave

de doble puerta, si se va a realizar la

AVCC’s occupational health and safety

descontaminación de estos soportes vacíos

officers’ conference. Adelaide University.

por autoclavado,

Lambert

dual-use

and

hazardous

CD. 2002. Agricultural

materials.

Bioterrorism

Protection Act of 2002: possession, use, and transfer of biological; agents and toxins; interim and final rule (7 CFR Part 331). Fed Regist 67, 76908–76938.

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Monke J. 2007. Agroterrorism: threats and preparedness. CRS Report for congress, order

code

RL32521.

Congressional

Research Service, USA.

Real Decreto 178/2004, de 30 de enero, por el que

se aprueba el Reglamento general para el

desarrollo y ejecución de la Ley 9/2003, de 25 de abril, por la que se establece el régimen jurídico de la utilización confinada,

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Y, Upper CD. 2008. Plant-pathogenic bacteria as biological weapons – Real threats? Phytopathology, 98:1060-1065.

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CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

INTRODUCCIÓN:

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

La existencia de patógenos peligrosos para el ser humano ha sido documentada desde hace siglos. Sin embargo, no fue hasta finales del siglo XX en que se establecieron los lineamientos para su manipulación de una forma segura en

Juan José Colina Venegas Microbiólogo. PERÚ

instalaciones especializadas, conocidas como laboratorios de bioseguridad de nivel 3 y 4 1. Por tanto, la bioseguridad en el laboratorio es esencial al trabajar con patógenos.

RESUMEN La bioseguridad se define El presente trabajo tiene por objeto describir las

como un conjunto de principios

características principales a tener en cuenta en un

fundamentales

laboratorio de bioseguridad de nivel 3. Para esto

diseñadas para manejar agentes

se tendrá en cuenta los tres elementos de la

contención que son prácticas y técnicas de

biológicos

laboratorio,

potencialmente

equipos

seguridad

(barreras

prácticas

infecciosos infecciosos

o de

primarias) y el diseño de la instalación (barreras

una manera segura y evitando

secundarias), enfatizando más en los dos últimos.

exposición a los trabajadores, la

Concluyendo

que,

bioseguridad

en nivel

un 3

laboratorio depende

de la

comunidad y contaminación del

combinación de estos tres elementos para crear un

medio ambiente. Esta se logra

ambiente seguro para el profesional y el medio

mediante la implementación del

ambiente.

diseño

prácticas

laboratorio,

las

correctas

equipos

laboratorio, laboratorio

equipos

protección personal 2.

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CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

Los

laboratorios

bioseguridad

instalaciones

nivel

con

de 3

EL LABORATORIO DE NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3

La contención se refiere a los métodos

medidas de seguridad biológica

seguros para manejar materiales infecciosos en el

especiales

medio ambiente del laboratorio donde son

para

diseño

son

trabajar

con

agentes indígenas o exóticos que se

pueden

aerosoles,

transmitir producir

enfermedad

grave

potencialmente letal cuales preventivas

reducir o eliminar la exposición de quienes

por

trabajan en laboratorios u otras personas, y del

una

medio ambiente externo a agentes potencialmente

, para los

peligrosos.

existen y

manipulados o conservados; tiene por objetivo

Los tres elementos de contención incluyen

medidas

prácticas y técnicas de laboratorio, equipos de

terapéuticas

seguridad y el diseño de la instalación. La

eficaces 4.

evaluación del riesgo del trabajo a realizar con un agente específico determinará la combinación apropiada de estos elementos.

Este tipo de laboratorio es dedicado al diagnóstico clínico, enseñanza, investigación o producción de reactivos biológicos

1; 3

Barreras primarias de contención (equipos de seguridad) Las barreras primarias se encargan de la

Debido al hecho de las enfermedades reemergentes y farmacorresistentes es necesaria la construcción de laboratorios de bioseguridad de nivel 3 para proteger al personal que trabaja con agentes de alto riesgo, así como evitar la diseminación que ponga en riesgo al medio ambiente 5. El presente trabajo tiene por objeto describir las características principales a tener en

protección del personal y del medio ambiente inmediato del laboratorio de la exposición a agentes infecciosos. Las barreras primarias de contención

incluyen

cabinas

seguridad

biológica (CSB), recipientes cerrados, y otros controles de ingeniería destinados a eliminar o minimizar

las

exposiciones

materiales

biológicos peligrosos; pueden incluir también elementos de protección personal 3.

cuenta en un laboratorio de bioseguridad de nivel 3 (BSL-3). www.biotecnologiahospitalaria.com

Página 19

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

 La cabina de seguridad biológica (CSB) se

 Cubeta centrífuga de seguridad Es un

utiliza para toda manipulación abierta de

recipiente cerrado destinado a prevenir la

materiales potencialmente infecciosos , ya

liberación

que, proporciona contención de salpicaduras o

centrifugado 3.

aerosoles

durante

aerosoles infecciosos generados por diversos procedimientos microbiológicos 3. Para los

 Equipo de protección personal, tales como

laboratorios de bioseguridad de nivel 3 se

guantes,

utiliza la CSB Clase IIA, que protege al

respiradores,

trabajador de los materiales manipulados y al

antiparras

cobertores

anteojos

zapatos, de

botas,

seguridad

mismo tiempo protege dichos materiales de la contaminación externa. Las batas deben ser sin aberturas En este tipo de cabinas aproximadamente 70%

delanteras o envolventes. Éstas

del volumen total de aire es recirculado sobre el

no deben ser usados fuera del

área de trabajo y el 30% restante es extraído

4; 7

La velocidad de entrada del aire para aberturas

laboratorio

frontales de 20cm debe ser como mínimo

descontaminarse

0.4m/s, la velocidad de aire del flujo laminar

lavarse

descendente debe ser como mínimo 0.4m/s . Las CSB Clase IIA deben estar alejadas de las zonas de paso y de los lugares de cruce de

debe antes

. Los respiradores FFP

(Filtering

Facepiece

against

Particles) presentan una eficacia

corriente procedentes de puertas y sistemas de

filtración

del

99%

las

ventilación 4; 6.

partículas sólidas y líquidas 6.

El aire que sale de la CSB, y que habrá pasado por filtros HEPA, deberá expulsarse de manera que no perturbe el equilibrio del aire en la cámara ni en el sistema de

Barreras secundarias de contención (diseño y

evacuación del edificio 4; 6.

construcción de instalaciones)

Las CSB Clase IIA puede usarse para trabajar 6

con microorganismos de los grupos 2 y 3 .

Las barreras secundarias se encargan de la protección

del

medio

laboratorio

ambiente

exposición

externo a

materiales

infecciosos.

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CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

Esto se logra a través del diseño y construcción

las

instalaciones

que

proporcionan una barrera para proteger a las

Con respecto al espacio que

personas fuera del laboratorio; y protegen a personas y animales de la comunidad de agentes

infecciosos

instalación del laboratorio no hay

que

pueden

ser

liberados

accidentalmente del laboratorio . Para el diseño de las instalaciones se prestará atención a aquellas condiciones que pueden ser problemas de seguridad, como:

debe

ninguna

disponer

norma,

para

pero

aconsejable que la superficie del laboratorio

sea,

menos,

 La formación de aerosoles.

20m2 y de 3 m de altura

 Altas concentraciones de microorganismos.

Además, teniendo en cuenta el

 Exceso de personal o de material.

sistema de esclusas (una o varias

 Infestación por roedores y artrópodos.  Entrada de personas no autorizadas.  Circuito de trabajo 4.

esclusas), se debe contar con una espacio adicional entre 6 y 16m2 para dichas esclusas 6.

 Ubicación y espacio del laboratorio El laboratorio debe estar separado de las otras zonas del edificio, al fondo de un pasillo o por un sistema de acceso que delimite un pequeño vestíbulo (entrada de doble puerta o laboratorio básico de nivel de bioseguridad 2), destinado a mantener la diferencia de presiones entre el laboratorio y el espacio adyacente 4.

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Página 21

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

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Página 22

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

 Obra civil Las superficies de las paredes y techos

 Puertas de acceso

deben ser impermeables y fáciles de limpiar.

Para las puertas de acceso al laboratorio

Las uniones entre el suelo y la pared deben ser

es recomendable que sean de junta neumática

redondeadas para evitar zonas donde se

para garantizar una completa estanqueidad.

acumule suciedad y permitir una óptima

Deben ser fácilmente limpiables y sanitizables,

limpieza 6; 9.

evitando rincones, hendiduras y acanaladuras de difícil acceso. Tienen que ser validadas

Todas las aberturas existentes

mediante un test de fugas en todo su perímetro,

estas

soportando una sobrepresión superior a 25 Pa,

superficies

luminarias,

tomas

(enchufes, de

gases,

para garantizar la estanqueidad 9.

tuberías de agua, etc.) deben ser selladas (puede usarse un

 Puertas interiores, mobiliario y accesorios

tipo de producto de silicona

Es recomendable que las puertas y mesas

fungicida)

para

que

estanqueidad

sean de acero inoxidable, lo que garantiza la resistencia ante muchos agentes químicos, fácil limpieza y desinfección.

descontaminación del local sea

Tanto el mobiliario como los accesorios deben

efectiva.

ser de material resistente y no poroso, para su

4, 9

fácil desinfección. Todas las superficies deben ser robustas para resistir golpes e impactos y de bordes Las

ventanas

deben

estar

cerradas

redondeados 9.

herméticamente y llevar cristales resistentes a la rotura 4.

 Sistemas de climatización y ventilación

En las inmediaciones de todas las puertas de

El sistema de ventilación establece un

salida del laboratorio debe haber un lavabo que

flujo direccional de aire que toma el aire para el

no necesite ser accionado con la mano 4.

laboratorio de áreas limpias y lo elimina en

En la zona de biowaste tiene que tener un

áreas contaminadas. Se instalarán dispositivos

cubeto para prevenir los derrames en el equipo

de vigilancia visual, con o sin alarma, para que

el personal pueda comprobar que la corriente

de aire circula en el sentido deseado 3, 4. www.biotecnologiahospitalaria.com

Página 23

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

Las salas del laboratorio deben estar en

La renovación del aire de cada una de las

depresión con respecto al exterior del mismo,

esclusas y el laboratorio se hace mediante

para vigilar la diferencia de presión entre las

extractores de impulsión y expulsión 6. Las

dependencias se instalarán dispositivos de

renovaciones de aire, deben estar comprendidas

presión diferencial 9.

entre las 12- 20 renovaciones por hora 9.

La diferencia de presiones de una sala a otra, dependiendo de las esclusas, debe ser 15 Pa, como mínimo 8, 10. Los sistemas de ventilación deben ser

Todos

los

conductos,

dispositivos

que

forman

climatización/ventilación

difusores

sistema

tienen

que

ser

independientes del resto de las dependencias

estancos, siendo la estanqueidad de clase B

del edificio 4,9.

para el sistema de impulsión y de clase C, para la extracción. Estos sistemas deben ser

En los puntos terminales del sistema de ventilación se instalarán filtros HEPA, con el

comprobados y certificados antes de la puesta en marcha 9.

fin de que todo el aire que llegue sea completamente filtrado y limpio 9.

Anualmente

los

sistemas

deben

ser

climatización/ventilación Para la extracción del aire se

cualificadas para demostrar que mantiene su correcto funcionamiento mediante operaciones

realizará mediante filtros HEPA,

como: test de integridad de filtros y prefiltros,

que deben estar dentro de una

test de filtros HEPA (medida de nivel de

cabina de cambio seguro, las

saturación), test de caudales de aire y tasa de

que deben estar sectorizadas para

realización de pruebas los

filtros

probados

ensayo

presión

diferencial y ensayo de temperatura 11.

limpieza,

descontaminación con gases y

Todos

renovaciones/hora,

4, 9

El laboratorio de bioseguridad de nivel 3

deben

 Esclusas

ser

certificados

debe contar con un pequeño vestíbulo, para mantener la diferencia de presión entre el laboratorio y el espacio adyacente. El vestíbulo

anualmente, pasando por test

debe contar con una zona para separar la ropa

limpia de la sucia

fugas

partículas

6; 9

contaje

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; también puede ser

necesaria una ducha con vestuarios interior y exterior 4, 6. Página 24

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

 Sistemas Estas esclusas deben disponer de dobles

esterilización

descontaminación

puertas de acceso al laboratorio, que deben ser

Dentro de un laboratorio de bioseguridad

de cierre automático y disponer de un

de nivel 3 debe de haber una autoclave, de

mecanismo de interbloqueo, de modo que sólo

doble puerta para descontaminar y transportar

una de ellas este abierta al mismo tiempo 4,6.

el material de desecho desinfectado 6. Se puede optar por una autoclave de una sola puerta y

esclusa

debe

disponer

algún dispositivo que permita la desinfección

(sterilized air system- SAS) que utiliza paraformaldehído de doble puerta, de manera

que el material que soporta la esterilización es

propia

autoclavado y es sacado a través de la cámara

cámara como del material que se

de descontaminación química, tras ser tratado 6.

superficial

ambiental

una cámara de descontaminación química

tanto

introduzca

ella

El material que no soporta el autoclavado

sistema de ventilación para la

será tratado directamente en la cámara antes de

eliminación

ser transportado al exterior 6.

del

desinfectante,

cuando se utilicen sistemas de descontaminación gasificación, nebulización

vaporización

por o

entrada/

salida

material

laboratorio se realizará a través de una autoclave de doble puerta o una cámara SAS, las puertas tienen que estar enclavadas, cuando una permanezca abierta, no se abrirá la otra 8.

En cada esclusa puede haber un sistema de

Anualmente

debe

cualificar

las

alarmas de incendio y desbloqueo manual y

autoclaves y los SAS, para demostrar que

automático, que esté conectado con el exterior.

funcionan correctamente. En las autoclaves se

Además de dispositivos para el control de la

realizan calibración, pruebas de distribución de

depresión en el interior 6.

temperaturas en vacío y prueba de penetración de temperaturas con carga (ropa, residuos, etc.). Para las cámaras SAS se realizan test de integridad de filtros, test de residuos de productos utilizados para la esterilización 11.

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Página 25

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

El tratamiento de efluentes en

los

laboratorios

bioseguridad de nivel 3 de la procedentes

los

En el caso de los priones, los tratamientos deberán ser a temperaturas superiores de 135ºC 11

Como método de control de la esterilización se

laboratorios,

desagües,

usarán

servicios,

deben

aplicación. Asimismo para garantizar un

duchas

indicadores

químicos

separadas de las bajantes del

correcto

funcionamiento

resto del laboratorio y puede ir

realizará

una

directamente al alcantarillado o

ser

tratados

descontaminados

biológicos

validación (esporas

del con de

con

proceso,

cada

indicadores Geobacillus

stearothermophilus) semestralmente. y

esto

Anualmente se debe cualificar los biowaste. El

dependerá de la patogenicidad

objetivo de ello es evidenciar que en todos los

del agente, la dosis infectiva, la

puntos del tanque se alcanza el valor mínimo de letalidad aconsejado por la normativa. Para

concentración del agente, el

ello se realizarán las siguientes operaciones:

volumen

calibración de termopares, calibración de la

concentrado manipularse, genética,

del

material a

instrumentación, prueba de penetración de

manipulación

temperatura con carga y en cada ciclo se

que la

sensibilidad

incluirán indicadores biológicos en posiciones críticas 11.

agentes terapéuticos, etc 6. Antes de poder verter los líquidos Los efluentes se pueden tratar en plantas

tratados se deberá dar cumplimiento a las

biowaste o tanques de tratamiento de efluentes,

normativas locales o autonómicas de vertidos a

para lo cual existen distintas metodologías,

la red de saneamiento y de protección del

aunque el más habitual es la utilización de

medio ambiente, lo cual puede suponer el

calor para la descontaminación

11;

. Se

enfriamiento

del

líquido

por

debajo

considera que un tratamiento térmico de 121ºC

determinada temperatura (normalmente 40°C)

durante

antes de su vertido final o la realización de

minutos

suficiente

descontaminar virus y bacterias.

para

controles sobre el contenido de contaminantes 12

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. Página 26

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

 Redes de servicio

Prácticas y técnicas de laboratorio

Las instalaciones eléctricas tienen que ser independiente

del

resto

las

 El elemento más importante de la contención

otras

es el cumplimiento estricto de las prácticas y

dependencias del edificio, las cuales estarán en

técnicas microbiológicas estándar. El personal

una zona habilitada del mismo laboratorio de

tiene

bioseguridad nivel 3. La zona debe ser

conocimiento de los riesgos potenciales que

accesible al personal cualificado, pero sin tener

existe al trabajar con agentes infecciosos o

que

estar

capacitado

tener

materiales potencialmente infectados 3.

entrar en la zona de contención . Se debe disponer del suministro de energía

 Cada laboratorio está obligado a desarrollar o

eléctrica suficiente y adecuada al tipo de

adoptar un manual de operaciones o de

equipos instalados circuitos

para

. Se deben diferenciar los

las

diferentes

zonas

bioseguridad que identifique los riesgos que se encontrarán o pueden producirse 3.

contención (laboratorios, esclusas, etc.) 8. En la instalación de agua se debe instalar válvulas de corte y de retención, a la entrada

CONCLUSIÓN

del recinto; para evitar el reflujo del agua que

Los laboratorios de bioseguridad de nivel

entra en el laboratorio. Los saneamientos serán

3 comprenden características de cualquier

independientes del resto del edificio 8.

laboratorio con las particularidades de la

Todo el sistema de desagüe tiene que ir 8

centralizado al biowaste. .

contención y barreras de protección de acuerdo al grupo de riesgo. Estas características comprenden el personal, las prácticas y

Las instalaciones para el suministro de

técnicas de laboratorio, el diseño de instalación

gases (como co2 para incubadores) no deben

(barreras secundarias) y equipos de seguridad

estar conectadas a la general del edificio. Se

(barreras primarias), de las cuales va a

debe instalar un sistema independiente sólo

depender un laboratorio de bioseguridad de

para

realizar

nivel 3, ya que, la combinación de éstos va a

mediante tuberías, siempre que sea de forma

generar un medio seguro para el profesional del

estanca 8.

laboratorio y para el medio ambiente.

éste

laboratorio,

puede

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Página 27

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Página 28

forma

parte

del

CLUSTER

biotecnología, biomedicina y tecnologías médicas de Cataluña, junto a más de 500 empresas y una amplia red de centros de investigación, parques científicos, universidades, hospitales y entidades.

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Página 29

EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

Son objeto de evaluación la experimentación

EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS Ana Flores. SCSIE‐Cultivos Celulares y Citometría de Flujo Universidad de Valencia. Patricia Martínez. Lic. en Ciencias Químicas y Técnico de Higiene Industrial de la Universitat de València.

animal y la utilización de agentes biológicos patógenos

organismos

modificados

genéticamente considerando el efecto de estas investigaciones sobre la vida y el medio ambiente.

El Comité de Bioseguridad evalúa los proyectos de investigación en los cuales se utilizan agentes biológicos.

Estos

proyectos

requieren una certificación de la Universidad sobre la aptitud de las instalaciones en las que se va a

desarrollar

investigación

respecto a las condiciones de 1. INTRODUCCIÓN

1.1.

bioseguridad.

Comité de Bioseguridad

La Comisión de Ética en la Investigación Experimental en una Universidad, es un órgano de carácter consultivo y asesor al cual le corresponde la evaluación de los problemas éticos que se

Esta Comisión dispone como órganos asesores de: El

Comité

Experimentación

Humanos,

Comité

Animal

Comité

Bioseguridad.

plantean en el desarrollo de los proyectos de investigación que se llevan a cabo.

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Página 30

EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

.1.2. Yersinia pestis La enterobacteria Yersinia pestis es un bacilo

En este estado, se producen múltiples hemorragias

Gram negativo anaerobio facultativo y patógeno

que dan lugar a manchas negras sobre la piel,

primario, del género Yersinia, que produce en el

procesos de gangrena en los extremos distales de

ser humano la peste pneumónica, la peste

las

bubónica y también la peste septicémica, aunque

linfáticos, postración, shock y delirio. Si la peste

la última es muy poco común.

no es tratada antes del estado septicémico, la

extremidades,

fuerte

dolor

nódulos

muerte sobreviene al cabo de 3-5 días. 1.2.1. Cuadros clínicos Peste neumónica: Este tipo de infección se Peste bubónica: En el tipo de infección más común. Una vez que las células bacterianas han sido introducidas mediante la picadura de una pulga dentro de un ser humano, éstas se desplazan por el torrente sanguíneo hasta los nódulos linfáticos donde generan pequeñas hinchazones denominadas bubones, que están llenos de

produce cuando las células de Yersinia pestis son inhaladas directamente, o bien llegan a los pulmones durante la peste bubónica. La infección suele transcurrir sin síntomas hasta los dos últimos días del proceso infectivo, en los cuales se emiten gran cantidad de esputos con sangre. En ausencia de tratamiento la muerte sobreviene en 2-3 días.

partículas bacterianas. La cápsula viscosa que rodea a las células de Y. pestis evita que estas sean

Peste septicémica: Esta infección implica una

fagocitadas por los macrófagos.

rápida dispersión de Yersinia pestis por todo el cuerpo, a través del torrente circulatorio, sin

En poco tiempo, los nódulos linfáticos periféricos se ven invadidos por bubones secundarios, hasta que se rompen y las células pasan de nuevo al torrente circulatorio, pero ahora en un número

tiempo para que se formen los bubones. La muerte suele

sobrevenir

día,

por

que

habitualmente no da tiempo a ser diagnosticada hasta la autopsia.

mucho más elevado, lo que causa una septicemia generalizada.

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EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

1.4.

Trasporte de un agente biológico

1.2.2. Clasificación Normativa Según el Anexo II de la Guía técnica para la evaluación

transporte

agentes

biológicos:

riesgos

agentes

Real Decreto 65/2006 de 30 de enero, por

biológicos basada en el Real Decreto 664/1997 la

el que se establecen los requisitos para la

bacteria Yersenia pestis está clasificada como un

importación y exportación de muestras

agente biológico del grupo 3. Existe vacuna eficaz

biológicas para el diagnóstico o la

disponible para esta bacteria. Según este Real

investigación en seres humanos.

con

los

relacionados

prevención

para

exposición

Decreto un agente biológico de clase 3 es:

Real Decreto 1301/ 2006, de 10 de

“aquel que puede causar una enfermedad grave en

noviembre, por el que se establecen las

el hombre y presenta un serio peligro para los

normas de calidad y seguridad para la

trabajadores, con riesgo de que se propague a la

donación, la obtención, la evaluación, el

colectividad y existiendo generalmente profilaxis

procesamiento,

o un tratamiento eficaz”

almacenamiento y la distribución de

preservación,

células y tejidos humanos y se aprueban 1.3.

Adquisición de un agente biológico

Es necesario determinar proveedores autorizados para cada tipo de agente biológico o patógeno, según la legislación y la normatividad vigente.

las

normas

coordinación

funcionamiento para su uso en humanos. Orden

SAS/3166/2009,

noviembre, por la que se sustituyen los anexos del Real Decreto 65/2006, de 30 de

La orden de compra será el documento donde se establezcan las condiciones o características especiales con las que los agentes biológicos

enero, por el que se establecen requisitos para la importación y exportación de muestras biológicas.

deben comprarse, transportarse y mantenerse en la Universidad mientras sean utilizados.

Según indica el Ministerio de Sanidad, Política Social e Igualdad.

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1.5.

En este caso la vigilancia de la salud se aplicará

Vigilancia Médica

no sólo a aquellos trabajadores cuya tarea La vigilancia médica en relación con los riesgos por exposición a agentes biológicos, estará realizada por personal sanitario de la Universidad,

implique una manipulación intencionada de los agentes biológicos, sino también a aquellos cuya exposición sea accidental a dichos agentes.

según determinen las autoridades sanitarias en las pautas

protocolos

que

elaboren,

El Ministerio de Sanidad, en las condiciones que

conformidad con lo dispuesto en el apartado 3 del

establece el apartado 3 del Artículo 37 del RD

Artículo 37 del Real Decreto 39/1997, de 17 de

39/1997, de 17 de enero (Reglamento de los

enero, por el que se aprueba el Reglamento de los

Servicios de Prevención), establece el contenido y

Servicios de Prevención.

la periodicidad de aplicación de los protocolos médicos específicos aplicables al trabajador en

La vigilancia de la salud de los trabajadores queda establecida en la Ley 31/1995 sobre Prevención de Riesgos Laborales, la cual determina la obligación

función del riesgo biológico a que esté expuesto el mismo. Dicha vigilancia deberá ofrecerse a los trabajadores en las siguientes ocasiones:

de las empresas de desarrollar una política de vigilancia de la salud de los trabajadores mediante

a) Antes de la exposición.

la prevención de riesgos derivados de su trabajo. El primer reconocimiento se realizará La vigilancia de la salud se realizará siempre en

antes de que el trabajador inicie su

términos de confidencialidad, respetando siempre

actividad

el derecho a la intimidad y la dignidad de la

biológico en cuestión.

profesional

con

agente

persona del trabajador en lo que se refiere a su estado de salud.

Los objetivos de este primer examen, donde se establece el primer contacto con

A los resultados de los exámenes de salud sólo

el personal sanitario, y una vez evaluados

tendrán acceso el propio trabajador, el personal

los riesgos biológicos específicos a los que

médico y las autoridades sanitarias que lleven a

va a estar expuesto el trabajador, son:

cabo la vigilancia, sin que se pueda facilitar a otras personas, salvo consentimiento expreso del trabajador.

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1. Determinar si el sujeto padece algún

El intervalo entre determinaciones va a

tipo de enfermedad previa infecciosa o

depender tanto del agente biológico como

un déficit inmunológico que le pueda

de las características de la actividad

predisponer a la infección, así como si

profesional con relación a frecuencia de

el trabajador padece algún tipo de

exposición

sensibilidad alérgica a los agentes a los

utilizadas, es decir, la periodicidad será

que va a estar expuesto.

ajustada al nivel de riesgo que tenga el

medidas

protección

trabajador. Esta periodicidad podrá variar 2. Determinar el estado de inmunización del

trabajador

frente

los

microorganismos a los que va a estar

función

individuales

las la

características persona

(edad,

inmunosupresión, embarazo, etc.).

expuesto (test de screening). c) Cuando b) A intervalos regulares en lo sucesivo, con la periodicidad que los conocimientos médicos aconsejen, considerando el agente biológico, el tipo de exposición y la

sea

detectado exposición

necesario algún

similar,

por

haberse

trabajador, una

infección

con o

enfermedad que pueda deberse a la exposición a agentes biológicos.

existencia de pruebas eficaces de detección precoz.

Se llevará un historial médico individual en el que se recoja todo lo relativo a la vigilancia periódica

Dentro de los programas de vigilancia sanitaria, y a intervalos regulares, se ofrecerá al trabajador la posibilidad de realizar test de screening y serología con objeto de detectar su estado inmunitario frente a los riesgos biológicos específicos.

del estado de salud, en función del riesgo derivado de la exposición a agentes biológicos, según lo establecido en los Artículos 22 y 23 de la Ley 31/1995 de 8 de noviembre sobre “Prevención de Riesgos

Laborales”.

obligación

conservación viene regulada por los Artículos 9.2, 9.3 y 11.5 del RD 664/1997 La vigilancia de la salud más allá de la finalización de la relación laboral en los casos en los que los riesgos inherentes al trabajo lo hagan necesario.

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1.6.

El personal tendrá que notificar a la autoridad

Vacunación

laboral competente la manipulación deliberada del Si existe vacuna para un agente biológico, ésta se ofrecerá a las personas que vayan a manipular dicho agente, informándoles previamente de las

agente biológico en las instalaciones adecuadas para dicho agente de la Universidad antes de comenzar el desarrollo de su actividad.

ventajas e inconvenientes de la vacunación. El ofrecimiento a los investigadores de esta medida,

1. OBJETIVO

y su aceptación, deberán constar por escrito. 1.7.

El Comité de Bioseguridad de

Documentación: una

Es necesario:

Universidad

recibido

por

parte de un investigador un Proyecto

o Redactar un listado del personal expuesto a

en el que ha de trabajar con Yersinia

los agentes biológicos, indicando el tipo de

pestis. El Comité de Bioseguridad

trabajo efectuado con esta bacteria a las

tiene ue asesorar al investigador

que están expuestos. o Elaborar

sobre donde y cómo ha de trabajar

registro

las

con esta bacteria.

correspondientes exposiciones, accidentes e incidentes.

2. MATERIALES Y MÉTODOS

o La lista del personal expuesto y los historiales médicos se conservarán tanto

2.3.

Análisis de riesgo

por parte del personal sanitario como por

El análisis de riesgo nos va a permitir conocer las

parte

del

condiciones necesarias para poder trabajar con

laboratorio designado por el Comité de

agentes biológicos de forma segura, tanto para el

Bioseguridad

individuo

del

personal

responsable

Universidad

que

los

maneja,

como

para

cuestión durante un plazo mínimo de diez

comunidad y el medio ambiente. Para ello, los

años después de finalizada la exposición;

factores de riesgo que hay que tener en cuenta

este plazo se ampliará hasta cuarenta años

son:

en caso de que así lo considere el personal sanitario. 1.8.

Notificación a la Autoridad Laboral.

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Identidad del microorganismo.

Agente endémico o Exótico.

vestuarios. Dispone de taquillas para

Rango de huéspedes.

dejar la ropa de calle y estanterías con

Modelo de trasmisión: por el aire, por

contacto directo, etc.

batas,

Posibilidad de generación de aerosoles.

calzas).Tiene

Manejo de agentes en grandes cantidades.

accionamiento con el codo, una ducha

Patogeneidad y virulencia del agente

y también consta de un lavaojos de

biológico.

emergencia.

o Esclusa B: en ella se encuentran los

Profilaxis/ tratamiento/ vacuna.

Clasificación,

existe,

del

indumentaria

requerida

mascarillas, un

(mono, guantes,

lavabo

o Esclusa C: sala de recepción de

agente

materiales que dispone de un SAS para

biológico. 10 Adquisición y transporte.

mobiliario y equipos y un autoclave de

11 Riesgo individual y riesgo comunitario.

doble puerta.

12 Vigilancia médica, monitoreo.

o Laboratorio propiamente dicho con el

13 Documentación.

siguiente equipamiento: 2 Cabinas de

14 Notificación a la autoridad Laboral.

Seguridad Biológica de Clase II, 2 agitadores, 3 incubadores de CO2, 2

3.2. Instalaciones de Bioseguridad

centrífugas, pipetas, 1 microscopio, un El laboratorio de Bioseguridad de nivel de

congelador de -80ºC…

contención 3 existente en la universidad tiene la 2

siguiente estructura: 1. Está compuesto por tres esclusas previas al laboratorio en cuestión:

identificación

2.1 Señalización:  De

o Esclusa A: se accede a ella mediante tarjeta

Dispone de:

personal.

Consta de varios armarios que se

seguridad,

según

Real

Decreto 485/1997.  De Advertencia de riesgo biológico según el Real Decreto 664/1997.

emplean como almacén.

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EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

2.2 Dobles puertas interbloqueadas con cierre automático.

2.12

Conducciones que evitan el reflujo

de agua mediante la instalación de válvulas antirretorno.

2.3 Luminarias estancas 2.13 2.4 Presión

negativa

con

respecto

exterior para evitar la fuga de agentes biológicos fuera del laboratorio. La circulación interna de aire será de tal forma que fluirá siempre hacia áreas bajas del laboratorio.

Las distintas estancias de este

laboratorio

están

herméticamente, salvo en las puertas, para permitir el control adecuado del gradiente de presión, así como los procedimientos de descontaminación ambiental

2.5 Filtros HEPA de tratamiento del aire: por donde pasa el aire de entrada y de

separadas

evitando

fuga

del

gas/aerosol desinfectante. 2.14

Superficies:

salida. 2.14.1 No porosas ni rugosas y sin 2.6 Tratamiento Químico de efluentes.

que formen ángulos vivos.

2.7 Esterilización mediante H2O2.

2.14.2. Impermeables al agua.

2.8 Salida de emergencia.

2.14.3. Resistentes a ácidos, álcalis, disolventes y desinfectantes.

2.9 Un sistema de alarmas de incendio. 2.10

Un sistema de desbloqueo de

Grupo

electrógeno,

para

los

sistemas de seguridad, la iluminación, los

sistemas

climatización

ventilación, las cabinas de Seguridad Biológica,…que

fácil

limpieza

desinfección.

puertas manual y automático. 2.11

2.14.4 De

entrará

2.15 Procedimientos y protocolos de trabajo adecuados: 2.15.1. Se dispone de un Manual de Seguridad Biológica.

funcionamiento en caso de corte de suministro eléctrico.

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Página 37

EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

2.15.2. Las superficies de trabajo se descontaminan

2.15.9. Debe llevarse ropa de uso

como

exclusivo en el laboratorio y

mínimo una vez al día y después

nunca la ropa de calle.

cada 2.15.10. Los

derramamiento de material

derramamientos

accidentes que traigan como

infectado.

consecuencia una potencial 2.15.3. Todos los desechos líquidos y sólidos

exposición

descontaminan

infectado

antes de su eliminación.

material

deberán

ser

inmediatamente comunicados al responsable de seguridad e

2.15.4. El personal se debe lavar las manos

abandonar

higiene.

laboratorio.

2.15.11. Se deberá hacer una toma anual de sangre o con la

2.15.5. Se trabaja siempre en las Cabinas

periodicidad que lo requiera

Seguridad

Biológica para evitar

el tipo de trabajo que se

realice de todo el personal

producción de aerosoles. 2.15.6. Las

puertas

que trabaje en el laboratorio.

deben

permanecer siempre cerradas. 2.15.7. Las personas con un alto riesgo de contraer infecciones o para las que éstas puedan resultar

especialmente

RESULTADOS

En el caso que nos ocupa el investigador principal de un proyecto requiere trabajar con Yersinia pestis. El Comité debe tener que realizar el estudio del riesgo biológico que supone su manipulación.

peligrosas tienen prohibida la entrada. 2.15.8. Se lleva a cabo un programa de

desinsectación

desratización. www.biotecnologiahospitalaria.com

Página 38

EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

El análisis de riesgo:

Menos frecuentemente puede penetrar en el organismo por contacto directo con

1. Identidad del microorganismo. Yersinia pestis es un bacilo Gram negativo anaerobio facultativo y patógeno primario, del género Yersinia, que produce en el ser humano la peste pneumónica, la peste bubónica y también la peste septicémica,

tejidos o fluidos de un animal (o una persona) infectado de peste. Otro método posible de transmisión, en las formas neumónicas de la enfermedad, es por inhalación

gotitas

respiratorias

expelidas por una persona o animal

aunque la última es muy poco común.

infectado (sobre todo gatos) al toser.

2. Agente endémico o Exótico. La peste se presenta como endémica (y enzoótica) en muchos países de África, Asia y Sudamérica, reportándose más del 90% de los casos humanos en África. No

5. Posibilidad de generación de aerosoles. Llevar a cabo las tareas y actividades según los procedimientos de trabajo y protocolo establecidos.

hay peste en Australia ni en Europa 6. Manejo

occidental.

agentes

grandes

cantidades. Información que ha de dar el investigador.

3. Rango de huéspedes. El

reservorio

fundamental

esta

enfermedad lo constituyen los roedores, salvajes y domésticos. Otros animales pueden ser infectados por Yersinia pestis, pero

actúan

como

hospedadores

accidentales (al igual que el hombre) y no como reservorios. 4. Modelo de trasmisión: por el aire, por contacto directo, etc. La transmisión más común de Yersinia pestis es por la picadura de pulgas infectadas, siendo Xenopsy llacheopis la especie de pulga que actúa generalmente

7. Patogeneidad y virulencia del agente biológico. La peste bubónica representa del 80 al 95% de los casos, observados en todo el mundo. Sin tratamiento, se calcula que la tasa de letalidad para esta forma es del 40 al 70%; algunas fuentes sugieren que podría llegar al 90%. El tratamiento disminuye la tasa de letalidad de la peste bubónica

septicémica

aproximadamente 5 a 15%.

como vector principal. www.biotecnologiahospitalaria.com

Página 39

EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

La peste neumónica o septicémica casi

12. Vigilancia médica, monitoreo.

siempre es mortal, normalmente en pocos

El personal expuesto a la bacteria Yersinia

días. Cuando se trata correctamente, poco

pestis

después de la aparición de los síntomas, la

periódicamente

mayoría de las personas sobreviven; sin

finalizada su relación laboral y a través del

embargo, la estrecha ventana terapéutica

Sistema Nacional de Salud.

implica que la tasa de letalidad, para la

tiene

derecho su

salud

vigilar

después

13. Documentación.

forma neumónica sigue siendo superior al

El comité de Bioseguridad redactará un

50%.

escrito en el que constará: a. Listado

8. Profilaxis/ tratamiento/ vacuna.

del

personal

expuesto

Existe vacuna para la bacteria Yersinia

Yersinia pestis, indicando el tipo de

pestis.

trabajo efectuado con esta bacteria a la

9. Clasificación,

existe,

del

agente

que están expuestos.

biológico. Agente biológico clasificado en el grupo 3

b. Elaborará

registro

correspondientes

las

exposiciones,

accidentes e incidentes.

10. Adquisición y transporte. En este caso el investigador adquiere la

c. Informará

tanto

investigador

bacteria Yersinia pestis de la Colección

principal como a los colaboradores que

Public Health England (PHE) con número

participan en este proyecto de los

de referencia NCTC 570.

requisitos de Vigilancia médica y

Para

transportar

esta

bacteria

vacunación.

investigador se pone en contacto con una empresa experta en el transporte de

d. La lista del personal expuesto y los

agentes biológicos, que le asesora sobre la

historiales médicos se conservarán

documentación

tanto por parte del personal sanitario

que

tiene

que

cumplimentar. Ha de basarse en la

como

normativa vigente.

responsable

del

laboratorio

designado

por

11. Riesgo individual y riesgo comunitario.

por

parte

del

personal BSL3

Comité

Riesgo individual alto y comunitario

Bioseguridad de la Universidad en

también alto.

cuestión durante un plazo mínimo de

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Página 40

EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

diez años después de finalizada la

Por tanto podemos concluir que a partir del

exposición; este plazo se ampliará

conocimiento del tipo de agente biológico y cómo

hasta cuarenta años en caso de que así

se adquiere el mismo, el Comité de Bioseguridad

lo considere el personal sanitario.

ha evaluado y determinado dónde se debe desarrollar la tarea con este agente, cómo y en qué

14. Notificación a la autoridad Laboral.

condiciones

El personal tendrá que notificar a la autoridad

laboral

competente

trabajar

que

documentación y requisitos legales se han de cumplir para llevar a cabo este procedimiento.

manipulación deliberada de Yersinia pestis en

las

instalaciones

Universidad

antes

BSL3

comenzar

desarrollo de su actividad. 6.

CONCLUSIÓN

BIBLIOGRAFÍA. ‐

LEY 31/1995, de 8 de noviembre, de Prevención de Riesgos Laborales. BOE nº 269 10-11-1995.

‐

REAL DECRETO 39/1997, de 17de enero por el que se aprueba el Reglamento de los Servicios de Prevención.

‐

REAL DECRETO 664/1997, de 12 de mayo, sobre la protección de los trabajadores contra los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos durante el trabajo.

‐

Guía Técnica realizada por el Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo para la evaluación y prevención de los riesgos derivados de la exposición a agentes biológicos durante el trabajo, conforme a lo encomendado a esta Institución, en su disposición final primera, por el Real Decreto 664/1997.

Después de recabar por parte del Comité, toda la información adicional al proyecto y estudiarla, este Órgano comunica al investigador dónde y cómo ha de trabajar con esta bacteria. El investigador estará obligado a desarrollar su proyecto en las instalaciones del laboratorio BSL3 disponibles en los Servicios Centrales de Soporte a la Investigación de dicha Universidad y deberá cumplir con los procedimientos de trabajo, protocolos y prácticas especiales requeridas para el trabajo en este tipo de instalaciones.

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EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

‐

MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO. Organización Mundial de la Salud (OMS) Tercera Edición.

‐

INFORMACIÓN MÓDULO I. Curso SEGLA:” DISEÑO, INSTALACIONES Y PUESTA EN MARCHA DE LABORATORIOS DE BIOSEGURIDAD BL3/BL4 Y ANIMALARIOS DE INVESTIGACIÓN”.

‐

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Página 42

EVALUACIÓN Y ASESORAMIENTO DE UN PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DE UNA UNIVERSIDAD CON EL AGENTE BIOLÓGICO YERSINIA PESTIS

WEBGRAFÍA 

http://www.pheulturecollections.org.uk/pr oducts/bacteria/detail.jsp?refId=NCTC+57 0&collection=nctc#



http://www.vhir.org/DDGRecerca%5CDO CENCIAACTIVITATS%5C2013%5C201 3_0233%5C2013_0233_015.pdf



http://www.msssi.gob.es/profesionales/sal udPublica/sanidadExterior/muestras_Biolo gicas.htm



http://www.cfsph.iastate.edu/Factsheets/es/ peste.pdf



http://www.amse.es/index.php?option=co m_content&view=article&id=150:pesteepidemiologia-y-situacionmundial&catid=42:infepidemiologica&Itemid=50

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Página 43

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Página 44

BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

Las personas involucradas en la producción, cuidado y manejo de los animales de laboratorio, como cualquier usuario de los centros de experimentación animal, están potencialmente expuestas a diversos peligros biológicos, físicos y

Aitziber Goikoetxea Master en Arquitectura, Organización y Gestión

químicos.

de Infraestructuras Hospitalarias. Graduado en

Por ello deben recibir una adecuada formación

Ingeniería de Edificación. Arquitecto Técnico en

sobre técnicas de manejo y comportamiento de las

ATHOS Ingenieros.

especies animales en cuestión y deben conocer el funcionamiento correcto de los equipos de trabajo

para reducir la probabilidad de exponerse a los

INTRODUCCIÓN

posibles riesgos mientras trabaja en el Centro (R.D. 1201/2005). De esta manera, se definen

Un Centro de Experimentación Animal es “toda instalación, edificio, grupo de edificios u otros

cuatro categorías profesionales que se clasifican de la siguiente forma:

locales, incluidos aquellos no totalmente cerrados o cubiertos, así como las instalaciones móviles y

• Categoría A: personal para el cuidado de

todo el conjunto de medios personales y

los animales.

materiales organizados por su titular para la cría,

• Categoría B: personal que lleva a cabo los

el suministro o la utilización de animales de

procedimientos.

experimentación “(Real Decreto 1201/2005, de 10 de octubre, sobre protección de los animales

• Categoría C: personal responsable para

utilizados para experimentación y otros fines

dirigir o diseñar los procedimientos.

científicos).

• Categoría D: personal especialista en Ciencias del Animal de Experimentación con funciones de asesoramiento sobre el bienestar de los animales.

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BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

La O.M.S. en el "Manual de Bioseguridad" y Teniendo en cuenta los riesgos

también el R.D. 664/1997, señalan una serie de

derivados de los animales citados

recomendaciones a seguir en el diseño de los

anteriormente,

los

Centros

Experimentación

Animalarios.

pueden

Además, en el Real Decreto 142/2002, de 7 de

clasificarse en distintos niveles

mayo, por el que se crea y regula el Registro de

establecimientos

bioseguridad.

Esta

clasificación contempla tanto a

cría,

suministradores

usuarios de animales de experimentación y otros fines científicos, se establecen los requisitos que

los animales que van a emplearse

deben cumplir los distintos tipos de Centros, así

en el laboratorio (el grado de

como las condiciones para la realización de

agresividad y tendencia a morder

experimentos con los animales de laboratorio. Se

o arañar de los animales, sus

diferencian cuatro categorías o niveles de

endoparásitos

ectoparásitos

bioseguridad: Centros P1 (Nivel de seguridad 1), Centros P2 (Nivel de seguridad 2), Centros P3

naturales, las zoonosis a las que

(Nivel de seguridad 3) y Centros P4 (Nivel de

son

seguridad 4).

susceptibles

diseminación

posible

alérgenos),

como a los agentes patógenos que

van

utilizarse

los

Los Centros de nivel de bioseguridad 1 son los apropiados para mantener a la mayoría de los animales después del período de

distintos modelos animales (la vía

cuarentena,

de transmisión, los volúmenes y

humanos, respecto de los cuales debe

las concentraciones que van a

salvo

los

primates

consultarse a las autoridades nacionales, y para los animales que son inoculados

manejarse, la vía de inoculación,

deliberadamente con agentes del grupo de

riesgo 1. En general se aplicarán las

vía

excreción

agentes, etc.).

los

medidas del laboratorio básico, no siendo necesario ningún equipo especial de contención.

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Página 46

BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

El personal responsable de los Animalarios

Los laboratorios de contención máxima

con niveles de contención 2 (P2), debe

(nivel de bioseguridad 4) están concebidos

determinar las políticas, procedimientos y

para trabajar con microorganismos del

protocolos para todas las operaciones, así

grupo de riesgo 4 y deben someterse al

como para el control de acceso al Centro y

control

establecer un programa apropiado de

nacionales, u otras apropiadas.

las

autoridades

sanitarias

vigilancia médica para el personal junto con un manual de seguridad de las

Teniendo en cuenta la normativa anteriormente

distintas

diseño,

citada, existe una serie de elementos técnicos, de

construcción, medios de contención y

construcción e ingeniería, aparatos y equipos

equipos de trabajo de este tipo de Centros,

utilizados para la contención de los agentes de

hacen que sean los apropiados para el

riesgo químico, biológico o radiactivo, que recibe

trabajo con animales a los que se inoculan

microorganismos del grupo de riesgo 2.

diferenciarse dos tipos de mecanismos barrera:

operaciones.

El nivel 3 de contención (P3) es el idóneo

para

trabajar

con

animales que son inoculados con

nombre

genérico

barreras.

Pueden

LAS BARRERAS PRIMARIAS Comprende tanto las empleadas para la protección individual de los trabajadores (EPI) como los sistemas

para

evitar

dispersión

agentes incluidos en el grupo de

contaminantes, siendo de gran importancia en el

riesgo

ámbito de la prevención y seguridad en el trabajo.

siempre

que

así

indique la evaluación del riesgo.

Los epis más utilizados en los animalarios son;

Todos los sistemas, prácticas y

batas, monos, calzas, pijamas, gorros, guantes,

procedimientos

ser

mascarilla etc. Y de materiales diversos (vinilo,

certificados

polipropileono, PVC, anilon etc.) La elección de

revisados

habrán

anualmente.

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los mismos se hará en base a una previa evaluación de los riesgos que se deseen eliminar.

Página 47

BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

Entre los equipos cuya función es evitar

distintos

dispersión agentes

Las cabinas de bioseguridad de Clase II están diseñadas de manera que no existe

los

contacto entre la muestra y el aire

empleados,

ambiente del laboratorio. En este tipo de

impidiendo su efecto perjudicial

cabina se genera un flujo vertical de aire

sobre el personal laboral, cabe

limpio (filtrado a través de un HEPA)

destacar el uso de las cabinas de

sobre la muestra que actúa como barrera.

bioseguridad,

Existen hasta cuatro subtipos dentro de

aisladores,

esta clase de cabina (A, BI, BII y BIII),

armarios y racks ventilados.

diferenciándose

principalmente

aspectos mecánicos (proporción de aire recirculado, velocidad y presión del flujo de aire, etc.).

Las Cabinas de bioseguridad se utilizan para la manipulación de muestras de laboratorio y distintos

procedimientos

con

animales,

El último tipo, cabinas de Clase III o aisladores, son las que ofrecen mayor

generalmente roedores, tales como administración

grado de protección. Estos equipos están

de productos, necropsias, cambio de jaulas, etc. Se

totalmente aislados, de manera que a su

clasifican en tres categorías en función del grado

interior se accede mediante guantes fijados

de protección que ofrecen tanto al operario como a

a la estructura que se proyectan hacia

las muestras manipuladas:

dentro. El flujo de aire pasa a través de -

Las cabinas de bioseguridad de Clase I son

filtros HEPA, pudiéndose crear ambientes

equipos de presión negativa dotados de un

interiores de presión negativa o positiva

extractor que aspira el aire de la cabina y

según las necesidades del trabajo.

lo envía al exterior a través de un filtro

HEPA (High Efficency Particulate Air),

Los armarios y los racks ventilados, son

los cuales logran eficacias de filtración del

empleados para estabular a los animales en

99.99%.

condiciones que evitan la dispersión de posibles agentes Ambos dispositivos cuentan con filtración HEPA del flujo de aire, y pueden ajustarse a presión negativa o positiva en función de los requerimientos específicos.

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Página 48

BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

LAS

BARRERAS

SECUNDARIAS

Como medidas preventivas frente a los riesgos que se pueden derivar del trabajo en los

COLECTIVAS O DE INSTALACIONES

Animalarios,

deben

elaborar

planes

normalizados de trabajo(PNT), y utilizar equipos Están

relacionadas

especializados, así como promover y garantizar la

construcción e ingeniería de las

formación de los trabajadores, facilitando al

instalaciones,

como

personal expuesto a riesgos procedimientos claros

medio

y definidos en relación a sus responsabilidades,

función

con

tienen

proteger

exterior de los riesgos contenidos en el propio Animalario y están diseñadas con idea de controlar

peligros y dispositivos de seguridad requeridos. Son protocolos de actuación para las distintas actividades que se llevan a cabo, en los que se detalla de manera exhaustiva la tarea en cuestión,

los flujos de materiales entre la

así como el modo de ejecutarla o el personal

instalación y el exterior, así como

encargado de la misma. De esta manera todos los

para optimizar los procesos de

procedimientos tienen que estar debidamente

limpieza,

desinfección,

esterilización residuos grado

y de

eliminación

proporcionar autonomía

cierto a

protocolizados.

Los Centros de Experimentación Animal varían en función de su utilización, pero se pueden diferenciar las siguientes unidades principales:

instalación. -

Los estabularios; pueden contemplar tanto

las

necesidades

cría

reproducción, para asegurar un tamaño de población

suficiente

para

las

investigaciones que han de llevarse a cabo, como las de mantenimiento de animales en fase de experimentación y de los que están a la espera. Este tipo de estabularios son los denominados “mixto”. www.biotecnologiahospitalaria.com

Página 49

BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

Hay que tener en cuenta que la correcta En ocasiones, los animales se adquieren en centros

distribución de estas tres áreas, son fundamentales

especializados, por lo que en el estabulario se

para evitar que el cruce de estas vías de

realizará el mantenimiento de especies o cepas no

circulación pueda interferir con el nivel de control

producidas en sus instalaciones. Esta opción

necesario. Todos los espacios han de estar

conlleva su riesgo, ya que animales aparentemente

distribuidos de tal manera que las circulaciones

sanos pueden presentar anomalías, además unas

solo permitan ir de zona limpia a la sucia, nunca al

malas condiciones de traslado, un medio de

revés.

transporte inadecuado o simplemente el estrés que padecen los animales por el solo hecho de un desplazamiento

pueden

repercutir

Áreas de un animalario

sus

comportamientos.

Entre las numerosas tareas a llevar a cabo en los animalarios destacar las siguientes:

Áreas utilizadas para experimentación animal; si se trata de trabajar con agentes peligrosos deben estar separadas de otras áreas de alojamiento animal, de los laboratorios de investigación, así como de las áreas destinadas a la atención clínica de los animales, y han de estar identificadas apropiadamente, restringiendo el acceso sólo a personal autorizado.

todos los servicios de personal y de apoyo el

correcto

funcionamiento

alimentación

los

animales

estabulados -

el suministro de agua

suministro de lechos

la eliminación de residuos

el control de plagas

diferentes

cuidados

puedan

sustancias,

veterinarios

plantearse

administración

Resto de servicios. Conforman esta área

para

(cirugías,

fármacos

extracciones

que

otras

sanguíneas…),

etc.

del

animalario, accesos, zona administrativa, sala de máquinas etc.

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Página 50

BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

Esto conlleva un contacto continuo con diversos materiales, ya que se trata de mover jaulas, comida,

productos

farmacéuticos,

sustancias

biológicas, así como el manejo y la manipulación

Para

de animales, por lo que se deberá poner especial

estéril, el aire deberá ser filtrado

cuidado en la organización de las circulaciones de entrada y salida de personal, animales y material para que siempre sean de zonas limpias a sucias.

conseguir

mediante estará

filtros en

ambiente

absolutos

sobre-presión.

y El

acceso de animales será a través En cuanto a los sistemas de alojamiento animal, su

de SAS UV, el de materiales como

elección requiere de conocimientos y criterio

jaulas,

profesional y dependen de la naturaleza del

instrumental

peligro en cuestión, de los tipos de animales

esterilizado

utilizados y del diseño de los experimentos. Los animalarios se componen de las siguientes áreas básicas:

viruta,

comida,

agua,

etc a

será través

autoclaves y aquél material no esterilizable a través de SAS. El personal accederá a través de

Zona de barrera SPF. El denominado

vestuarios con ducha de aire para

animalario en "barrera", está diseñado para

mantener

que los animales no se contaminen de

esterilidad de la zona.

las

condiciones

ninguna enfermedad propia del exterior, están alojados en ambiente estéril, es decir libre de patógenos específico, con lo que el acceso está mucho más limitado y requiere el uso de ropa estéril. El número y dimensiones de las salas de alojamiento dependerá del tipo y número de animales a alojar en el centro.

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BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

Cada una de las salas se deberá diseñar

esterilizan

los

biberones,

jaulas,

teniendo en cuenta las dimensiones de los

piensos,

racks ventilados en los que se alojarán los

quirúrgico

animales, se deberá disponer de una cabina

elementos que entran en contacto con los

de seguridad para realizar el cambio de

animales. En el caso de que sea zona de

cubetas de los animales, así como espacio

biocontención también se tendrá que

suficiente para alojar dos racks, uno con

esterilizar todo el material saliente.

racks, y

materiales general

textiles, todos

los

las cubetas limpias y otrEn la zona SPF deberá prever al menos un almacén estéril

Los equipos de lavado y esterilización se

para alojar la comida y racks para traslado

deberán dimensionar en función del tipo,

de cubetas.

tamaño y cantidad de jaulas a utilizar en el centro, son equipos con requerimientos

Zona de cuarentena o aislamiento. Antes de

específicos en cuanto a dimensiones,

introducir los animales procedentes del exterior en

peso/m2, agua, desagües, vapor de agua,

el animalario, deberán permanecer en esta sala

extracción de gases, instalación eléctrica,

durante el periodo establecido en el centro,

por lo que hay que tener en cuenta que la

también se alojarán los animales sospechosos de

elección de estos equipos condicionará la

padecer alguna enfermedad. Los animales se

distribución

alojarán en racks ventilados autónomos. En estas

requerimientos en cuanto a instalaciones

salas se producirán 20 renovaciones/hora, y

del área de lavado. Dependiendo del

estarán en depresión.

tamaño del animalario convendrá prever

establecerá

los

sistemas automatizados para la limpieza de -

Área de lavado y esterilización. En un

cubetas.

animalario se lavan los biberones, jaulas, racks y en general todos los elementos que

También se deberán contemplar mesas de

entran en contacto con los animales. La

lavado y sistema de aspiración para

esterilización es el procedimiento físico o

limpieza de cubetas o jaulas. Tener en

químico por el cual se elimina cualquier

cuenta que los autoclaves y SAS deberán

forma de vida microbiana, incluidas

ser con doble puerta en comunicación con

esporas bacterianas, pudiendo ser mediante

la zona de barrera.

agentes químicos o agentes físicos.

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Página 52

BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

Zona depósito de cadáveres. Los

Densidad de población

cadáveres de los animales y sus

Las cubetas/boxes donde se van a estabular los

restos

orgánicos

una

vez

animales serán adecuados a las necesidades de

bolsas

cada especie, seguros, confortables, de fácil

plástico y cerradas, saldrán a

limpieza y con ventilación propia, del mismo

introducidos

través del SAS y se depositarán

modo las dimensiones y densidad de ocupación deberán ser las adecuadas ya que una alta

en congeladores -20ºC hasta su

densidad de población además de disminuir la

recogida por parte del gestor de

fertilidad de los animales y de aumentar la

residuos autorizado contratado,

mortalidad de éstos provoca estrés.

conviene que esté cercano a las áreas externas.

Temperatura

Almacén. Conviene que se sitúe cerca de la zona de descarga de material y que esté comunicado con la zona de lavado y esterilización. En él se guardarán los piensos, lechos, desinfectantes,etc.

Esta deberá ser programable en cada celda, para adecuarse a la especie animal alojada. Tanto el

manifestación

ambiente) sobre los animales, hay que tenerla muy presente a la hora del diseño del animalario y controlarla posteriormente porque puede cambiar las propiedades y funciones de los organismos y a

constante y no sobrepasar el intervalo de ±2ºC.

más allá de estos límites, puede provocar la

La influencia de los factores externos (medio

susceptibilidad

estabulario la temperatura debe ser siempre

aumento como la disminución de la temperatura

Condiciones psicofísicas

Tanto en el interior de las cubetas como en el

enfermedad.

Los

enfermedades

infecciosas

latentes, problemas de equilibrio hídrico por falta de agua (como consecuencia de un mayor consumo de ella), variaciones en la dosis letal de los fármacos, variaciones en la cantidad de comida ingerida, variaciones en el metabolismo y variaciones en la toxicidad de ciertas drogas.

principales factores que hay que tener en cuenta son: www.biotecnologiahospitalaria.com

Página 53

BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

Humedad

El tipo de luz más adecuada es la que proporciona un fluorescente. Es preferible la luz artificial, ya

El grado de humedad relativa debe ser, también,

que evita las variaciones de ésta con la estación

siempre constante entre 40% y 60%, con un

del año, condiciones atmosféricas, etc. Es

márgen de oscilación que no supere el 10-15% y

importante

adecuada para la especie animal. Por fuera de

proporcione luz de forma difusa, no localizada; de

estos límites, se aumenta el riesgo de enfermedad:

otra forma podría darse discriminación de

valores por debajo del 45% conllevan, en el caso

estímulos localizados que interferirían ulteriores

de la rata, cambios en la piel y sequedad en la

formas de aprendizaje. Conviene que la potencia

mucosa respiratoria que provocará asma y tos.

de la luz no exceda los 100 W, a un metro o

Además, tanto la rata como el ratón, se vuelven

menos de los animales, ya que potencias

estériles cuando el aire es seco.

superiores son aversivas para la rata.

Luz

Ya que la luz ha de ser uniforme para todos los

que

fuente

iluminación

animales que aloja el estabulario, es necesario El ritmo circadiano de luz-oscuridad ha de

tener previstas soluciones para los animales que,

mantenerse constante, en el número de horas de

al estar situados en las partes superiores del tren

oscuridad/luz y en el momento en que se pasa de

de jaulas, reciben mayor intensidad de luz. (La

luz a oscuridad o al revés. El ciclo, en el caso de la

intensidad de luz varía inversamente con el

rata, debe ser de 12 horas luz y 12 de oscuridad.

cuadrado de la distancia a la fuente luminosa).Al

Sin embargo, en los animales de cría conviene

nivel de la cubeta se recomienda una intensidad de

tener un ciclo de 13-14 horas de luz. Pero no sólo

807-1.345 lumens/m2, intensidades superiores o

la duración del ciclo de luz es importante, lo es

inferiores pueden causar degeneración de los

también la intensidad de la luz y la cualidad de

fotorreceptores de los ojos de las ratas. Este efecto

ésta. En el caso de las ratas y ratones son animales

es más prominente a medida que la edad del

de actividad nocturna, en consecuencia hay que

animal aumenta. Lógicamente, las ratas albinas

dar luz a intensidades bajas. Una iluminación

son más susceptibles a este efecto que las

fuerte, intensa, comportará daños irreversibles en

pigmentadas.

los ojos de los animales.

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BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

Las puertas de acceso a las salas de alojamiento serán

preferentemente

metálicas,

Aire

herméticas,

aisladas acústicamente y dispondrán de ojos de

En todas las dependencias que alojen animales

buey con filtros de color rojo para poder visualizar

llevará sistemas de climatización y ventilación que

la sala desde el pasillo sin afectar a los ciclos de

garantice 20 renovaciones /hora, con posibilidad

luz/oscuridad. En caso de que una celda disponga

de incremento dependiendo de la densidad de

de más de una puerta se instalará dispositivos de

animales. El aire no será recirculado y entrará por

enclavamiento para garantizar que solo una esté

el techo y será aspirado a pocos centímetros del

siempre abierta.

suelo, contando con sistemas de filtro y prefiltro absoluto con el fín de garantizar las condiciones de esterilidad. Es preferible que en el estabulario

Ruido

no haya ventanas y regularmente conviene realizar El estabulario ha de estar insonorizado al máximo,

un control de la contaminación ambiental en todas

para evitar que los posibles ruidos externos

las dependencias del estabulario.

estresen a los animales, provocándoles cambios fisiológicos y conductuales. El ruido puede

En cuanto a la presión atmosférica, ésta será de 15

reducir la actividad maternal destinada al cuidado

Pa superior a la presión atmosférica del exterior,

de la cría de ratas El aire acondicionado deberá

en el pasillo exterior de cada celda deberá

proporcionar una estimulación acústica baja y

identificarse la presión de la sala con respecto al

constante,

pasillo para su control.

evitando

ruidos

extraños

(conversaciones, manipulación del material, etc.). Las alarmas y los timbres, en caso de que los

Debe existir un control centralizado de todos los

hubiere, han de tener una frecuencia de 450 Hz.,

parámetros descritos anteriormente, de manera

para que sean inaudibles por parte de las ratas y

que se puedan programar y visualizar las

audibles para los humanos.

condiciones climáticas, de iluminación, CCTV, accesos a cada una de las celdas en todo momento. Estos puestos de control estarán fuera de la zona estéril.

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BIOSEGURIDAD APLICADA PARA EL DISEÑO DE UN ANIMALARIO EN UN CENTRO DE EXPERIMENTACIÓN

La verificación de las condiciones de alojamiento

de los animales es, por un lado, un requerimiento legal, ya que las condiciones vienen dispuestas por

AVEMCAI Asociación Valenciana de Empresas de Calidad Ambiental Interior, presenta este interesante Proyecto

la normativa europea y española, pero por otro es una necesidad científica ya que las variaciones en las condiciones ambientales de estos animales pueden afectar gravemente a los experimentos.

Bibliografría -

Manual de Bioseguridad de la OMS (3ª edición, 2005).

Real decreto 664/1997, de 12 de mayo, sobre la protección de los trabajadores contra los

CALIDAD DE AIRE EN INTERIOR DE HOTELES

riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos durante el trabajo. -

Decreto 142/2002, de 7 de mayo, por el que se

crea

regula

Registro

establecimientos de cría, suministradores y usuarios de animales de experimentación y otros fines científicos -

NTP

468:

Trabajo

con

animales

experimentación -

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