REVISTA DE CALIDAD AMBIENTAL INTERIOR EN HOSPITALES, LABORATORIOS, ANIMALARIOS Y SALAS DE AMBIENTE CONTROLADO International Standard Serial Number (ISSN) 2013-746X
Núm. 28, mayo 2017
Sumario 4.
EDITORIAL
COMPARATIVA
DE
MEDIDAS
DE
CONTENCIÓN BIOLÓGICA PARA UN LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN DE NVEL 3 DE BIOSEGURIDAD. Jacinto Cantero Jimenez. Técnico de seguridad del Servicio de Prevención de Riesgos Laborales de la Universidad de Jaén.
14.
eLearning
BIOSEGURIDAD INVESTIGACIÓN
LABORATORIOS
DE
ANIMALARIOS
DE
NIVEL
DE
Y CON
3
CONTENCIÓN. ESTADO DEL ARTE. 6ª edición 04 octubre – 30 noviembre 2017.
34.
ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA
REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VPH) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES. Rubén Villalba Martinez. Lic. En Veterinaria. Laboratorio Central de Veterinaria. Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación y Medio Ambiente del Gobierno de España.
Dra. Gloria Cruceta
SUBCOMITÉ DE BIOSEGURIDAD AENOR DISEÑO DE INSTALACIONES DE NIVEL 3 DE CONTENCIÓN BIOLOGICA En el ámbito profesional, hay personas que trabajan con seriedad, y van labrando su futuro sin alejarse nunca de las buenas prácticas en sus responsabilidades, pero hay otras, que al mismo tiempo innovan e investigan, que procuran hacerlo siempre mejor, y además, comparten sus conocimientos y logros, para que todos los expertos de sus competencias y sector avancen en la misma línea, y no solo eso, sino que ocupan parte de su valioso tiempo en escribir y darle forma a estas experiencias para comunicarlas y darlas a conocer a los demás. Esto, es lo que está ocurriendo en el subcomité de bioseguridad que elabora la pre-Norma sobre diseño de instalaciones de nivel 3 de contención biológica, que está finalizando su gestación y preparada para ver la luz, como Norma UNE de AENOR. Por esto, por su enorme generosidad, merecen todo nuestro reconocimiento y gratitud.
28. MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS. Mª Isabel Gutiérrez Cabezón, Animalario Universidad de Jaén. Sandra Sánchez López, Unidad de experimentación animal. Centro de Investigación biomédica. Universidad de Granada.
Directora de la Publicación: Dra. Gloria Cruceta ISSN 2013-746X. Realización: SEGLA s.l. Avda Gaudi, 52 bis, 4º1º Barcelona. 08025 Tel. 934 364 061. Cualquier forma de reproducción, distribución, o transformación de esta obra sólo puede ser realizada con la autorización de los titulares de la publicación. www.biotecnologiahospitalaria.com
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COMPARATIVA DE MEDIDAS DE CONTENCIÓN BIOLÓGICA PARA UN LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN DE NIVEL 3 DE BIOSEGURIDAD
COMPARATIVA DE MEDIDAS DE CONTENCIÓN BIOLÓGICA PARA UN LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN DE NIVEL 3 DE BIOSEGURIDAD
RESUMEN
La
manipulación
deliberada
y
Jacinto Cantero Jimenez
segura de agentes biológicos en Técnico Superior en Prevención de Riesgos Laborales en la especialidad de Seguridad en el Trabajo. Técnico de seguridad del Servicio de Prevención de Riesgos Laborales de la Universidad de Jaén.
los laboratorios de investigación implica
que
los
mismos
dispongan
de
medidas
específicas
de
medidas
de
seguridad,
determinadas
contención biológica, y que estas sean
proporcionales
intrínseco
de
los
al
riesgo agentes
biológicos utilizados.
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COMPARATIVA DE MEDIDAS DE CONTENCIÓN BIOLÓGICA PARA UN LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN DE NIVEL 3 DE BIOSEGURIDAD
La relación de medidas recogidas por la legislación española comparadas con las recogidas en otras bibliografías de referencia, hacen que
PALABRAS CLAVE: Agentes biológicos, bioseguridad, contención biológica, laboratorios de investigación, riesgo biológico.
estas resulten insuficientes para conseguir el objetivo perseguido, es decir, una protección eficaz de los trabajadores, del medio ambiente circundante y de la sociedad en general. En este trabajo se analizaran y compararan las medidas recogidas en nuestra legislación con las
mencionadas
en
otros
documentos
de
referencia, tanto nacionales como internacionales.
SUMARIO 1. – INTRODUCCION 2. – OBJETIVO 3. - TABLA COMPARATIVA 4. – CONCLUSIONES 5. - BIBLIOGRAFIA
La comparación se realizara a través de una tabla, donde en la primera columna se describen las distintas medidas, deducidas de los documentos columnas
utilizados aparecerá si
y
en
las
siguientes
la misma ha sido
considerada o no en el documento referenciado. Del análisis de dicha tabla se concluye la necesidad de una modificación en nuestra legislación con el fin de alcanzar una sustancial mejora de nuestros laboratorios que redundaran en la mejora de las condiciones de seguridad y salud de los trabajadores que desarrollan su actividad laboral en estos laboratorios.
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COMPARATIVA DE MEDIDAS DE CONTENCIÓN BIOLÓGICA PARA UN LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN DE NIVEL 3 DE BIOSEGURIDAD
Las medidas de protección a considerar
1.- INTRODUCCION La manipulación deliberada de agentes biológicos que se realiza dentro de algunos laboratorios de investigación, hace imposible evitar el riesgo por exposición a estos agentes, lo cual obliga a tener que realizar una evaluación del riesgo
dependerán, por tanto, de dicha evaluación, que en general tratara de definir el nivel de riesgo o grupo de riesgo del agente biológico al que se pueda estar expuesto (art. 3 R.D. 664/1997 de 12 de mayo):
e implantar una serie de medidas
encaminadas a controlarlo. La evaluación del riesgo biológico viene regulado por el Real Decreto 664/1997, de 12 de mayo, sobre la protección de los trabajadores contra los riesgos relacionados con la exposición a los
agentes
biológicos
durante
el
trabajo,
transposición a normativa laboral española de la Directiva del Consejo 90/679/CEE, de 26 de noviembre. En la misma se determina que la evaluación se debe realizar considerando tanto la naturaleza del agente biológico como el grado y duración de la exposición.
Conocido el agente biológico a manipular, su inclusión dentro de alguno de estos grupos supone una valoración del riesgo intrínseco del mismo, sin olvidar que la clasificación anterior solo está referida al riesgo de infección, sin considerar otros aspectos como sus posibles efectos alérgicos o tóxicos. La existencia del riesgo obliga a implantar una serie de medidas de protección y otra serie de disposiciones y que se recogen en los artículos 5 a 13 del Real Decreto 664/1997.
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Además de estas obligaciones de carácter general, se establecen otras dos disposiciones relativas a: *
En Anexo IV del R.D. 664/1997 de 12 de mayo se recogen las medidas de contención exigibles a los distintos niveles de contención establecidos y coincidentes con los grupos de
Establecimientos
sanitarios
y
riesgo de los agentes biológicos.
veterinarios distintos de los laboratorios de
No obstante, este referido marco legal, nos
diagnóstico (art. 14, R.D. 664/1997 de 12 de
ha de llevar a una reflexión técnica sobre su
mayo)
idoneidad para alcanzar una protección eficaz * Medidas especiales aplicables a los
procedimientos industriales, a los laboratorios y a los locales para animales (art. 15, R.D. 664/1997
sobre la seguridad y salud de los trabajadores que desarrollan su actividad de investigación mediante la manipulación de agentes biológicos.
de 12 de mayo).
Las medidas de contención establecidas en dicho Anexo IV
Será en este último apartado, es decir, el de las
medidas
especiales
aplicables
a
son
de
carácter
mínimo
y,
los
comparadas con las recogidas en
laboratorios donde se realicen trabajos que
la distinta bibliografía técnica de
impliquen la manipulación de agentes biológicos de los grupos 2, 3 ó 4 con fines de investigación, desarrollo,
enseñanza
o
diagnóstico
(art.15
referencia
(Manuales
Bioseguridad
y
normas
de UNE)
apartado a) del R.D. 664/1997 de 12 de mayo),
hacen que estas medidas queden
donde centraremos este trabajo, aplicable, por
o pueden resultar insuficientes.
tanto a las condiciones de los laboratorios de investigación.
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COMPARATIVA DE MEDIDAS DE CONTENCIÓN BIOLÓGICA PARA UN LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN DE NIVEL 3 DE BIOSEGURIDAD
2.- DOCUMENTOS BASE
3.-
Los documentos base, con los que se elaborara la correspondiente tabla comparativa, corresponden
a
Manuales
de
reconocidos
internacionalmente
Bioseguridad como
los
elaborados por la OMS (Organización Mundial de la Salud) o el CDC (Center for Disease Control and Prevention), el texto de la Guía Técnica de agentes biológicos del INSHT (Instituto Nacional
TABLA
COMPARATIVA
DE
LAS
MEDIDAS DE CONTENCIÓN PARA UN NIVEL 3 DE BIOSEGURIDAD Una vez analizadas las distintas medidas recogidas en la documentación de referencia seleccionada, presentamos una tabla comparativa donde se reflejan la inclusión o no de la misma dentro de documento referenciado.
de Seguridad e Higiene en el Trabajo) y la Norma UNE-EN 12128:1998 sobre niveles de contención de los laboratorios. En el apartado de Bibliografía quedan reflejados dichos documentos.
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R.D. 664/1997 Anexo IV
Guía AB 2014 Apéndice 12
UNE -EN 12128:1998
Manual OMS
Manual CDC
Aconsejable
SI
SI
SI
SI
Acceso: sistema de doble puerta con cierre automático e interbloqueo.
-
SI
SI
SI
SI
Sistema de observación del interior (ventanas de observación, sistema de video vigilancia o similar).
Aconsejable
SI
SI
SI
SI
Su tamaño permite realizar los trabajos sin los riesgos asociados a la deficiencia del espacio de trabajo.
-
SI
SI
SI
SI
Nivel de iluminación adecuado (min. 500 Lux).
-
SI
SI
SI
SI
Paredes, suelos y techos impermeables al agua y resistentes a los productos de limpieza y desinfectantes.
Mesa de trabajo y suelo
SI
SI
SI
SI
SI
SI, incluso suelo, techo y paredes
SI, incluso suelo
SI
SI
Fácil limpieza y las labores de mantenimiento.
-
SI
SI
SI
SI
Ducha para el aseo personal en la salida del mismo
-
SI
-
SI
SI
Ventanas herméticas, selladas y con cristal anti rotura
-
SI
-
SI
SI
Ventilación mecánica para mantener un gradiente negativo de presiones.
Aconsejable
SI
SI
SI
SI
Sistema de alarma para aviso de fallos en el mantenimiento de la presión negativa del laboratorio.
-
SI
SI
SI
SI
Ventiladores de impulsión y extracción dotados de un sistema de interbloqueo que impida la presurización de las zonas
-
-
-
SI
SI
SI, para la salida de aire
SI, para la salida. Correcta instalación
SI, para la salida de aire
SI, para la salida. Correcta instalación
SI, para la salida. Correcta instalación
Aconsejable
SI
SI
SI
SI
MEDIDAS DE CONTENCION BIOLOGICA Espacio de uso exclusivo, separado de laboratorios destinados a otros usos y de vías generales de circulación.
Superficies de trabajo resistentes a ácidos, álcalis y disolventes.
Aire introducido y extraído filtrado a través de filtro HEPA e instalados de forma que sea posible su ensayo y su retirada de forma segura La zona se puede precintar para su desinfección (incluido sistema ventilación)
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MEDIDAS DE CONTENCION BIOLOGICA
R.D. 664/1997 Anexo IV
Guía AB 2014 Apéndice 12
UNE -EN 12128:1998
Manual OMS
Manual CDC
Los equipos esenciales, como Cabina de Seguridad Biológica (CBS), estufas y congeladores, con un sistema de suministro eléctrico de emergencia
-
-
Opcional
SI
-
Medio de comunicación con el exterior.
-
-
Opcional
SI
SI
Lavabo próximo a la puerta de salida, con mecanismo sin manos, jabón y desinfectante de manos
-
SI
SI
SI
SI
Lavaojos (ducha de seguridad si agentes químicos), botiquín de primeros auxilios, manta ignifuga, detección automática de incendios y medios manuales de extinción.
-
SI
-
SI
SI
EPI: ropa protección biológica, guantes, mascarilla, gafas de protección.
-
SI
-
SI
SI
Cabina de Seguridad Biológica Tipo II
SI, propagación por aire
SI
SI
SI
SI
Congelador o nevera para almacenamiento de agentes biológicos
SI
SI
-
-
-
Centrifuga de seguridad biológica
-
SI
-
-
SI
Autoclave de doble acceso
-
SI
SI, doble acceso opcional
SI, doble acceso opcional
SI, doble acceso opcional
Sistema para el tratamiento de todos los efluentes líquidos y sólidos (en caso de que existan de este tipo) que se generen en el laboratorio, incluido el agua de las duchas.
-
-
SI
En puertas de acceso, cartel advertencia del riesgo biológico, nivel de contención, agentes biológicos manipulados, y datos de contacto del responsable (Investigador Principal).
Cartel Informativo Riesgo Biológico
SI
Cartel Informativo Riesgo Biológico
SI
SI
El vestuario de ropa de calle separado físicamente del vestuario de trabajo.
SI
SI
SI
SI
SI
Procedimientos de desinfección especificados.
SI
SI
-
SI
SI
-
SI
SI
SI
SI
Los residuos eliminados por procedimientos adecuados teniendo en cuenta la posible contaminación biológica.
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Opcional, Opcional, dependiendo dependiendo del AB de la E.R.
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COMPARATIVA DE MEDIDAS DE CONTENCIÓN BIOLÓGICA PARA UN LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN DE NIVEL 3 DE BIOSEGURIDAD
MEDIDAS DE CONTENCION BIOLOGICA
R.D. 664/1997 Anexo IV
Guía AB 2014 Apéndice 12
UNE -EN 12128:1998
Manual OMS
Manual CDC
Control eficiente de vectores (roedores e insectos).
SI
SI
SI
SI
SI
-
SI
-
SI
SI
-
SI
-
SI
SI
SI
SI
-
SI
SI
Las superficies de trabajo se desinfectaran siempre, una vez acabado un trabajo o al menos una vez al día
-
SI
-
SI
SI
El material potencialmente infeccioso se descontamina antes de la salida por procedimientos contrastados.
-
SI
-
SI
SI
La limpieza del laboratorio y los trabajos de mantenimiento se realizan por personal capacitado e informado sobre los riesgos de exposición a agentes biológicos.
-
SI
-
-
-
Procedimientos por escrito y disponibles dentro del laboratorio (incluyendo las medidas para minimizar la generación de aerosoles y el uso de material punzante).
-
SI
-
SI
SI
Todos los equipos de trabajo, como CBS, autoclave, filtros HEPA y SAS, son sometidos a comprobaciones periódicas de certificación y validación
-
SI
-
-
SI
Se realiza de forma periódica una verificación y comprobación de los parámetros operativos de funcionamiento del laboratorio
-
SI
-
-
-
Formación previa sobre los riesgos de exposición a agentes biológicos para todo el personal. Responsable designado para el laboratorio, que asume las funciones de control sobre el funcionamiento del mismo El acceso al laboratorio solo está permitido al personal previamente autorizado. La autorización del acceso será concedida por el responsable del laboratorio.
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4.- CONCLUSIONES
•
Organización Mundial de la Salud. (2005, 3ª Edición). Manual de Bioseguridad en el
Vista la tabla anterior, se deduce de forma objetiva, que se hace necesario adaptar la
Laboratorio. Ginebra: WHO. •
U.S. Department of Health and Human
legislación actual de forma que se incrementen el
Services. Centers for Disease Control and
número de las medidas de contención para los
Prevention. (2009, 5ª Edition). Biosafety in
laboratorios de investigación donde se manipulen
Microbiological
de
Laboratories. Atlanta: CDC.
forma
deliberada
agentes
biológicos
and
Biomedical
pertenecientes al Grupo 3 de riesgo. 5.- BIBLIOGRAFIA •
Real Decreto 664/1997 de 12 de mayo, sobre la protección de los
trabajadores
contra los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos durante el trabajo. (BOE nº 124, 24 de mayo de 1997). •
Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. (2014). Guía técnica para la evaluación y prevención de los riesgos
ANÁLISIS DE CALIDAD DE AIRE INTERIOR REAL DECRETO 238/2013-RITE
relacionados con la exposición a agentes biológicos. Madrid: INSHT •
Asociación Española de Normalización y
El Real Decreto 238/2013 de Modificaciones del RITE
Certificación.
de
(Reglamento de Instalaciones Térmicas en los
análisis.
Edificios), incluye en el apartado de Mantenimiento
Niveles de contención de los laboratorios
Preventivo, como obligatoria con periodicidad anual,
de
la Revisión de la Calidad de aire interior según la
Laboratorios
investigación,
desarrollo
microbiología,
instalaciones
y
zonas
requisitos
y
de
riesgo,
físicos
de
Norma UNE 171330 de AENOR.
seguridad. UNE-EN 12128:1998. Madrid: AENOR, 1998.
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Programa •
Módulo I: ESTUDIO DE SITUACIÓN ACTUAL Y MEJORAS POSIBLES PARA UN LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD NIVEL 3 EN UN EDIFICIO EXISTENTE. Profesor: CESAR PALACIOS. MQ2 arquitectura.
•
Módulo II: DÓNDE Y CÓMO TRABAJAR CON BACILLUS ANTHRACIS (ANTRAX). Profesora: PATRICIA MARTINEZ. Universidad de Valencia.
•
Módulo III: INSTALACIONES SANITARIAS ADAPTADAS PARA LA ATENCIÓN A ENFERMEDADES INFECCIOSAS DE ALTO RIESGO. Profesor: FCO. JAVIER DE LA VEGA. Medicina Preventiva del Hospital de Melilla.
•
Módulo IV: DISEÑO Y CONSTRUCCIÓN DE CENTROS DE MEDICINA COMPARADA Y ANIMALARIOS DE INVESTIGACIÓN. Profesor MARC PADRÓS. Padrós-Valls arquitectes..
•
Módulo V: ORGANIZACIÓN Y DISEÑO DE UNIDADES DE CIRUGÍA EXPERIMENTAL EN INSTITUTOS DE INVESTIGACIÓN SANITARIA. Profesora AITZIBER GOIKOETXEA. Arq. Técnica.
•
Módulo VI: PROCEDIMIENTO CONTEMPLADO EN LA NORMA UNE 171340 PARA REALIZAR MUESTREOS MICROBIOLÓGICOS DEL AIRE Y SUPERFICIES EN ANIMALARIOS DE INVESTIGACIÓN. Profesora Inés Garrido. SEGLA.
www.segla.net Tel información 0034 934 364 061
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
Dentro de los procedimientos de bioseguridad,
deben
existir
aquellos que traten la limpieza y desinfección, para evitar el riesgo de diseminación de los agentes biológicos
patógenos
a
los
trabajadores (en caso de tratarse de agentes zoonóticos), así como al
Rubén Villalba Martinez Lic. En Veterinaria. Veterinaria.
medio Laboratorio
Central
de
ambiente,
ocasionar
lo
que
epizootias
podría y
las
consiguientes pérdidas económicas
Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación y Medio Ambiente del Gobierno de España.
directas e indirectas, así como el grave
impacto
en
el
bienestar
animal y en la opinión pública. Sirva
INTRODUCCIÓN
como ejemplo el brote de Fiebre Los laboratorios de sanidad animal que manipulan virus patógenos clasificados en el grupo de riesgo 3 (y 4 desde el punto de vista veterinario) deben ser manipulados en instalaciones que cumplan con los requisitos de biocontención para agentes patógenos de esos grupos de riesgo, así como
tener
procedimientos
bioseguridad
bioprotección adecuados.
y
aftosa sucedido en 2007 en Reino Unido.
Estos procedimientos de desinfección deben llevarse
a
cabo
en
diferentes
momentos:
principalmente durante la manipulación de los virus patógenos dentro de la cabina de seguridad biológica (CSB), pero también en los pasos de barrera o en las salas en caso de que suceda un incidente.
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
Por otra parte, para la desinfección se podrán utilizarse desinfectantes de diferente naturaleza (físicos o químicos, principalmente) y utilizando distintos procedimientos, en función de la naturaleza del desinfectante (líquido o gas).
Figura 1. Procedimientos de utilización de desinfectantes químicos. Profesora Águeda Hernández Rodríguez
En el caso de la descontaminación de salas,
Posteriormente se deberá seleccionar el
en primer lugar, debe establecerse el momento y la
procedimiento de descontaminación. Es muy
periodicidad de estos procesos: exclusivamente
recomendable que este procedimiento incluya una
después de un accidente/incidente o de forma
actividad previa de limpieza y preparación de la
preventiva un determinado número de veces al año.
sala. La combinación de una desinfección en superficie con un producto líquido, aplicado, por
Para ello, es recomendable llevar a cabo una
ejemplo, mediante loción (bayetas) seguido de una
evaluación del riesgo y valorar la carga de trabajo,
fumigación con un desinfectante gaseoso, puede ser
los agentes manipulados y su vía de transmisión, el
un procedimiento que asegure una completa
número de incidentes informados, las actividades
desinfección en superficie de toda la sala, e incluso
realizadas en el laboratorio…
del aire que contiene (también se debe tener en cuenta que este tipo de instalaciones tiene un elevado número de renovaciones de aire por hora).
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
En cuanto a la elección de los desinfectantes, se deberá realizar teniendo en cuenta los agentes
DESCRIPCIÓN
patógenos que se manipulan. Se tratará de productos registrados como biocidas según el Real Decreto 1054/2002, de 11 de octubre, por el que se
El
presente
objeto
trabajo
recoger
los
tiene
por
resultados
regula el proceso de evaluación para el registro, autorización y comercialización de biocidas. Estos
obtenidos
en
pruebas
desinfectantes deberán haber superado ensayos de
preliminares realizadas con la
eficacia de fase 1 y fase 2, así como las
finalidad de demostrar que los
valoraciones oportunas en cuanto a su seguridad
tratamientos
para el trabajador y el medio ambiente.
.
de
descontaminación con H2O2 en forma de gas (tecnología VHP®) resultan
efectivos
para
la
eliminación de los patógenos con los que se trabaja habitualmente en
esa
instalación
condiciones actividades
en
las
de
las
desarrolladas
con
propias
esos patógenos
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
En trabajos de evaluación previa, se ha establecido el momento de realización de la descontaminación de sala (caso de accidente como un derrame fuera de CSB), así como el procedimiento que se aplicará para llevarla a cabo (Figura 2) LIMPIEZA DE LA SALA ACONDICIONAMIENTO DE LA SALA (Despejar, abrir cajones, abrir equipos como centrífugas)*
DESINFECCIÓN EN SUPERFICIE CON UN DESCONTAMINANTE LÍQUIDO DE AMPLIO ESPECTRO APLICADO CON BAYETA
FUMIGACIÓN CON DESINFECTANTE GASEOSO
(Virocid diluido 1/50)
(H2O2 VHP)
*Las CSB se mantienen cerradas y se descontaminan usando un procedimiento distinto
Figura 2. Flujo del procedimiento de limpieza y desinfección de sala
El objetivo final es valorar únicamente la eficiencia de la última fase del procedimiento de desinfección de sala establecido (H2O2 VHP), y no la efectividad del procedimiento completo. Se podría englobar, por tanto, dentro de los estudios de evaluación de fase 3.
Figura 3 Fases de los estudios de evaluación Profesora Águeda Hernández Rodríguez
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
Virus de la Fiebre aftosa Virus de la Enfermedad vesicular porcina Virus de la Estomatitis vesicular Virus de la Peste porcina clásica Virus de la Peste porcina africana Virus de la Peste de los pequeños rumiantes Orbivirus (Virus de la Lengua azul y virus de la Peste equina) Virus de la Influenza aviar de alta patogenicidad Virus de la Enfermedad de Newcastle Flavivirus (Virus de West Nile)
Envuelta lipídica NO NO SI SI SI SI NO SI SI SI
Genoma RNA RNA RNA RNA DNA RNA RNA RNA RNA RNA
Genoma s/ds s s s s ds s ds s s s
1) Selección de los virus patógenos para realizar la prueba de eficacia A continuación, se presenta una tabla que recoge los agentes biológicos manipulados en el LBS3. De la tabla anterior, se seleccionan los virus de la Lengua azul (BTV), de la Peste porcina clásica (CSFV) y de la Enfermedad vesicular porcina (SVDV). Todos ellos virus RNA, pero unos con cadena sencilla (s) y otro doble (ds); y uno con envuelta lipídica y otro sin ella.
2) Tecnología de descontaminación VHP© La tecnología de biodescontaminación a baja temperatura con peróxido de hidrógeno vaporizado (VHP) fue desarrollada por la empresa STERIS en 1991. En trabajos previos en el LBS3, se han validado los ciclos de descontaminación de las salas usando indicadores
químicos
y
biológicos
(G.
Stearothermophilus en concentraciones 105 y 106). Dicho proceso de descontaminación se validó inyectando H2O2 hasta alcanzar una concentración de 200 ppm, durante 20 minutos.
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
En el siguiente esquema de la empresa Steris, se describen las fases de un ciclo de descontaminación:
3) Estudios preliminares Antes de llevar a cabo la prueba de eficacia como tal, resulta conveniente valorar diferentes parámetros de toxicidad de este agente químico sobre los cultivos celulares en los que se realizan las pruebas de eficacia, así como de las matrices biológicas en que podrían presentarse estos patógenos teniendo en cuenta las actividades desarrolladas en el laboratorio. 3A) Valoración de la toxicidad del H2O2 en forma de gas (tecnología VHP®) sobre los cultivos 3B) Valoración de la toxicidad de las matrices sobre los cultivos celulares
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
Por otra parte, se debe valorar cómo afecta el
Resultados: los inóculos sometidos a un ciclo de
proceso de desecación de losvirus elegidossobre su
descontaminación son citotóxicos hasta la dilución
viabilidad:
1/1000 (incluida) en ambas líneas celulares y en ambos tipos de inóculo (desecado y sin desecar).
3C) Valoración de un sistema de desecación de
placas
conteniendo
el
agente
patógeno a testar
En ambas líneas celulares, los controles, tanto con inóculos desecados como sin desecar permiten un correcto crecimiento de ambas líneas celulares.
3A) Toxicidad del H2O2 en forma de gas para los cultivos (tecnología VHP®)
3B) Toxicidad de las matrices.
Para esta prueba se someten a un ciclo de
Para esta prueba se consideran una serie de
descontaminación en SAS placas con medio de
matrices, en función de los tejidos de elección
cultivo desecadas y sin desecar. Posteriormente se
para detección de genoma de los agentes
inocula en diluciones sobre células Vero y PK-15,
biológicos con los que se trabaja en el LBS3. Se
para comprobar la toxicidad del inóculo. Como
inoculan en diluciones sobre cultivos celulares en
control se inoculan placas con medio de cultivo
placas de 96 pocillos, con 2 réplicas por dilución.
desecadas y sin desecar pero sin haberlas
Se deja 1 hora en fase de adsorción y
sometido al ciclo de descontaminación.
posteriormente se añade medio de cultivo para las células.
La desecación se lleva a cabo dejando las placas conteniendo 25 µl / pocillo de medio de cultivo, dentro de la CSB durante toda la noche. Posteriormente se rehidratan con el mismo volumen de medio de cultivo.
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
En la siguiente tabla se recogen las matrices utilizadas y los resultados obtenidos:
Dilución hasta la que resulta
Matriz
Especie
Línea celular
Sangre
Cerdo
PK-15
NO
Homogeneizado de heces
Cerdo
PK-15
NO
Sobrenadante de cultivo celular
--
PK-15
NO
Homogeneizado de riñón
Cerdo
PK-15
NO
Suero
Cerdo
PK-15
NO
Sangre
Oveja
VERO
1/16
Homogeneizado de bazo
Oveja
VERO
NO
--
VERO
NO
--
VERO
NO
Homogeneizado de embrión de pollo Sobrenadante de cultivo celular
citotóxico
3C) Valoración de un sistema de desecación de placas conteniendo el agente patógeno a testar Hay publicaciones que exponen un método de desecación para virus en placas de 96, y su posterior reconstitución. Este sistema permite simular gotas conteniendo el agente infeccioso que puedan adherirse a las superficies y quedar desecadas. Estas placas desecadas se congelan (-70ºC) hasta su uso. Para simular este método de desecación de las placas se sigue el siguiente protocolo: - Se distribuyen 25 µl / pocillo de suspensión de virus con medio de cultivo a una concentración conocida. - Se deja la placa abierta toda la noche, dentro de la cabina de seguridad - Al día siguiente se congelan las placas a -70ºC - El día de su uso se reconstituye con PBS y se inocula en cultivo celular para su titulación - Como controles se inoculan con las mismas cepas desecadas, para su titulación placas con las matrices equivalentes pero sin haber sufrido el proceso de desecación. Para valorar este sistema se utilizan 3 virus: BTV, SVDV y CSFV, contenidos en diferentes matrices (sangre, heces, homogeneizado de víscera o sobrenadante de cultivo) También se valora para el caso de BTV, la realización de un lavado del cultivo en la inoculación, tras la fase de adsorción.
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
En la siguiente tabla se presenta un resumen de estos trabajos:
Bazo Desecando
BTV (106,6 TCID50 / ml)
Sangre
No ECP Sin lavar 105,3
Sobrenadante cultivo Sin desecar Desecando
SVDV 105,9 TCID50
2 x 102
Sin lavar
/ ml Sin desecar Desecando Desecando Desecando Sin desecar
SVDV 107,9 TCID50 / ml CSFV 6,3 x 105 TCID50 / ml
Sangre Sobrenadante cultivo Homogeneizado de heces Sobrenadante de cultivo Sobrenadante de cultivo Sobrenadante de cultivo Sobrenadante de cultivo Sobrenadante de cultivo Sobrenadante de cultivo
103,4 106,8
Lavando
No ECP
Sin lavar
10 106,2 104,8 103,1 No ECP 106
Sin lavar Sin lavar Sin lavar Sin lavar Sin lavar
En
general,
establecimiento
CONCLUSIONES
de
en
las
pruebas
efectividad
de
de los
descontaminantes, se considera efectiva una La selección de los agentes patógenos se
reducción de, al menos 4 logaritmos (por ejemplo
ha realizado teniendo en cuenta que estuviesen
AFNOR 86081). La prueba de toxicidad del
representados virus con envoltura lipídica y sin
H2O2 usado para la descontaminación nos muestra
ella; y virus de doble cadena de genoma y cadena
que resulta tóxico hasta una dilución 1/1000 (3
simple. Todos ellos son virus RNA ya que es
log10), por lo que necesitaríamos trabajar con
representativo de la mayoría de los virus
agentes patógenos con una concentración superior
manipulados en esta instalación.
a 107 TCID50 / ml si queremos demostrar una reducción de, al menos, 4 log10, tanto con placas
En
cuanto
a
las
líneas
celulares
desecadas como sin desecar.
seleccionadas para estas pruebas, Vero y PK-15 son líneas celulares muy comunes y que se
Respecto al sistema de desecación de
utilizan para el cultivo más de diversos virus en
placas, podemos concluir que el sistema de
sanidad animal, por lo que su representatividad es
desecación de placas inactiva los virus (en el caso
amplia.
de BTV solamente 1 log10, pero para SVDV y CSFV, entre 3 y 6 log10).
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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA LA REALIZACIÓN DE UNA PRUEBA DE EFICACIA DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIÓN CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO GAS (VHP) UTILIZANDO VIRUS PATÓGENOS EN ANIMALES
Los virus incluidos en diferentes matrices pueden tener menor capacidad de infección de los cultivos que esos mismos virus en sobrenadante de cultivo. Esta prueba se ha realizado únicamente con BTV en sangre.
BIBLIOGRAFÍA • Sistema de Biodescontaminación móvil de ARD VHP. STERIS
Respecto al lavado de las placas después de la fase de adsorción, teniendo en cuenta los resultados obtenidos en BTV, no supone disminuir la capacidad infectiva del virus.
•
HECKERT, R. A. et al. Efficacy of Vaporized Hydrogen Peroxide against Exotic Animal Viruses. APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, Oct. 1997, p. 3916–3918
En la prueba de toxicidad de las matrices, solamente la sangre de oveja se muestra citotóxica. Este hecho puede considerarse como algo aislado, y relacionado con el animal individual, es decir, en el caso de las sangres se trataría de seleccionar una sangre de un animal que no sea citotóxica. El hecho de que la desecación de pequeños volúmenes con elevadas concentraciones de virus, sea capaz en muchos casos de reducir más de 3 log10,
unido
a
descontaminación desinfección
en
que de
la
sistemática
de
salas,
incluya
una
con
un
superficie
descontaminante líquido, hace que el riesgo sea reducido en actividades en las que se manipulan pequeños volúmenes de virus.
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JORNADA DE CERTIFICACIÓN DE CALIDAD AMBIENTAL INTERIOR
Y TÚ, ¿CÓMO CERTIFICAS? Barcelona, 19 mayo 2017 La calidad ambiental en el interior es una realidad consciente, que ya asumimos como parte de la gestión de los edificios, cumpliendo con la Normativa vigente y que proporciona bienestar. Desde ACESEM, queremos dar un paso más para enlazar la salud, la sostenibilidad, la accesibilidad y el medioambiente y por ello presentamos una visión tridimensional, a través de sistemas de certificación, que nos ayuden a avanzar hacia el futuro.
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PROGRAMA 9:30H - 9:45H.
Recepción de participantes
9:45H - 10:00H.
PRESENTACIÓN DE LA JORNADA Ponente: DRA. GLORIA CRUCETA, PRESIDENTA ACESEM
10:00H - 10:45H.
CERTIFICACIÓN LEED-VERDE Ponente. EULALIA FIGUEROLA. Licenciada en arquitectura UPC. Delegada de Green Building Council España GBCe en Catalunya
10:40 A 11:20H.
CERTIFICACIÓN DE LA CAI SEGÚN LA NORMA UNE 171330 Ponente: ANTONIO ALFONSO CARRETERO. Doctor ingeniero industrial por la ETSIIM. Gerente de Facility management y Smart cities en AENOR
COFEE BREAK_ 11:40H - 12:20H
LA ACCESIBILIDAD EN LOS EDIFICIOS
Ponente: Mª CRUZ BLANCO. Arquitecta por la Escuela técnica superior de Arquitectura de Sevilla. Directora de la Consultora “Accesibilidad con arte” (AccArT21) de Urbanismo, Accesibildad, Arquitectura y Movilidad 12:20H - 13:00H
LA CERTIFICATION WELL BUILDING STANDARD Ponente: OLGA BARRACHINA. Ingeniera Industrial Superior por la ETSEIB – UPC. Socia fundadora de la cooperativa ZEROHUB, SCCL, Responsable del área de Calidad Ambiental Interior.
13:00H - APERITIVO 19 de mayo de 2017 Sede Social ACESEM - C/ Viladomat, 174 08015 de Barcelona PRECIO: 25€ socios FEDECAI - 50 € no socios
Mas información Teléfono
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información@acesem.org 934 964 507
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Por motivos de seguridad, los animales
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
deben estar alojados en un local independiente, separado del laboratorio. Si se trata de un local contiguo, deberá estar construido de tal modo que sea posible aislarlo de las partes públicas del laboratorio en caso de necesidad, así como para
Mª Isabel Gutiérrez Cabezón Animalario Universidad de Jaén.
las
de
descontaminación
y
desinfección.
Sandra Sánchez López Unidad de experimentación animal. Centro de Investigación biomédica. Universidad de Granada.
operaciones
El término “contención” se utiliza
para
describir
métodos
seguros para manejar materiales infecciosos en el medio ambiente
1. INTRODUCCIÓN BIOSEGURIDAD
del
laboratorio
donde
son
manipulados o conservados. El El empleo de animales de laboratorio con fines experimentales y de diagnóstico impone al
objetivo
de
la
contención
es
usuario la obligación moral de adoptar todas las
reducir o eliminar la exposición
medidas necesarias para evitar que aquellos
de
padezcan dolores o sufrimientos innecesarios.
laboratorios u otras personas, y
quienes
trabajan
en
del medio ambiente externo a Hay que proporcionar a los animales un alojamiento cómodo, higiénico y de dimensiones suficientes, así como agua y comida de buena
agentes
potencialmente
peligrosos.
calidad y en cantidad suficiente. Al final del experimento habrá que sacrificarlos con el procedimiento menos cruel posible.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
La contención primaria, la protección del personal y del medio ambiente inmediato del laboratorio de la exposición a agentes infecciosos, es provista tanto mediante buenas técnicas microbiológicas como a través del uso de equipos de seguridad adecuados. El uso de vacunas puede brindar un mayor nivel de protección del personal. La contención secundaria, la protección del medio ambiente externo
al
laboratorio
exposición
a
de
la
Todo el personal que trabaja en las
materiales
instalaciones, sea del animalario ó personal
infecciosos, se logra a través de
investigador, debe de ser consciente, en todo
una combinación del diseño de la
momento, de los riesgos que corre cuando se
instalación operativas. elementos
y Por de
prácticas lo
tanto,
los
contención
encuentra trabajando y cuáles son los medios necesarios para minimizar el riesgo. Un Programa de prevención y salud de los trabajadores, debe contar con los siguientes apartados:
incluyen el personal, prácticas y técnicas de laboratorio, equipos de seguridad y el diseño de la instalación.
La
Evaluación de riesgos: reconocimiento de los riesgos existentes y potenciales en las instalaciones es el primer paso. En general,
del
los riesgos que intervienen en el proceso
riesgo del trabajo a realizar con
de experimentación animal y que vamos a
un
encontrar serán de índole física, química,
agente
determinará
la
evaluación
•
específico combinación
biológica o por radiaciones.
apropiada de estos elementos.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
•
Conocimiento de la legislación vigente: el conocimiento
de
la
legislación
es
importante dado que, en primer lugar, podremos adecuar nuestras instalaciones a los mínimos exigidos por la norma; en segundo lugar, nos permite conocer cuáles son las obligaciones y derechos, tanto de los trabajadores como de los directivos para velar por la seguridad de los trabajadores. •
CAMPUS VIRTUAL SEGLA, plataforma online de Formación especializada, diseñado para promover el “intercambio de ideas y conocimientos"
Personal: todo el personal implicado en el trabajo es responsable tanto de su propia seguridad, como la de los demás.
•
Procedimientos
de
trabajo:
la
documentación tanto de procedimientos experimentales,
notas
de
equipo
y
procedimientos de trabajo debe de estar claramente establecida y accesible para todo el personal. Los procedimientos básicos que contribuyen al control de riesgo en instalaciones de producción y/o experimentación animal son: limpieza, desinfección, esterilización, validación y control de procesos o equipos junto con el tratamiento adecuado de residuos.
http://campusvirtual.segla.net/
• Barreras de seguridad: todo el conjunto de equipos y medidas utilizadas para la contención de los riesgos se denominan barreras o mecanismos de barrera. Las barreras primarias son las utilizadas
para
la
protección
“Oportunidades esperando tus ideas”
del
trabajador.. Las barreras secundarias para la protección del medio ambiente.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
2. EVALUACIÓN DE RIESGOS
La definición y cuantificación del riesgo se conoce técnicamente como evaluación de riesgos.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
2.1 Riesgos físicos
Los riesgos físicos están
La utilización de técnicas de diagnóstico por
asociados inevitablemente con la
imagen, desde la radiografía, experimentos in
mayoría
de
destinada
las al
instalaciones
alojamiento
experimentación
con
y
vivo, utilizando radioisótopos, ha incrementado la exposición
a
fuentes
de
radiación
en
la
experimentación animal.
animales
de laboratorio y los podemos dividir
en
las
3. Riesgos asociados al desarrollo de las
siguientes
labores habituales categorías: La mayor proporción de incidencia de accidentes está relacionada con caídas, tropiezos y resbalones 1. Riesgos por interacción con el animal de experimentación
en las áreas de trabajo, asociados a las labores de limpieza, y mantenimiento de las mismas. Existen, no obstante, una serie de riesgos más insidiosos
El riesgo de golpes, arañazos o mordeduras
que operan por acumulación, en lugar de asociarse
esta inevitablemente asociado al contacto y
a un hecho incidental aislado y que podríamos
desconocimiento del buen manejo de los animales
denominar como riesgos de tipo ergonómico, el
de experimentación. Las mordeduras y arañazos,
ejemplo típico son las lesiones de espalda y
además del daño físico, implican un riego directo
articulares debidas al movimiento continuado de
de trasmisión de enfermedades, desde tétanos a
cargas.
diferentes patologías zoonóticas.
2. Riesgos derivados del equipamiento y material para la experimentación En cuanto a los riegos asociados a los equipos utilizados, destacan en primer lugar los objetos cortantes y punzantes (jeringas, bisturís y material de vidrio son los más comunes en un animalario). www.biotecnologiahospitalaria.com
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
2.2 Riesgos químicos Los riegos químicos asociados a la utilización
y
cuidado
de
animales
de
Los riesgos biológicos pueden provenir de 2 fuentes distintas que deberemos controlar:-
experimentación provienen esencialmente de 3
Inherentes
categorías de productos:
experimentación,
a
los
propios
pueden
ser
animales
de
portadores
de
agentes infecciosos trasmisibles al hombre, es 1. Productos utilizados en procedimientos de
decir zoonosis.
limpieza, desinfección, esterilización y control de plagas.
-Agentes intencionalmente
biológicos dentro
introducidos del
proceso
de
investigación. Modelos de infección experimental: 2.
Productos
accesorios
al
procedimiento
xenotrasplantes, trasferencias de células humanas
experimental, tales como anestésicos (líquidos y
o de otros animales y vectores virales para
gaseosos), gases (protóxido, anihídro carbónico,
trasgenización o terapia génica.
oxigeno, nitrógeno, entre otros) o agentes para la preservación de tejidos como el formaldehído. 3. Productos directamente implicados en el procedimiento
experimental,
esencialmente
fármacos, muchos de los cuales pueden poseer de un nivel de riesgo desconocido.
2.3 Riesgos biológicos Los riegos por exposición a agentes biológicos en los laboratorios de microbiología es único, ya que procede de los agentes con los cuales estemos trabajando.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
2.4 Organismos Modificados Genéticamente (OMG)
La NTP establece, entre los riesgos inherentes al trabajo con animales, los derivados del trabajo con OMGs por las peculiaridades que presentan estos organismos. En este sentido, y en base al RD 178/2004 que desarrolla la ley 9/2003 relativa al uso confinado y liberación voluntaria de OMGs quisiéramos dar unas pinceladas sobre las consideraciones especiales que se han de tener con estos organismos. En principio, los OMGs se clasifican en 4 tipos (1 a 4) según el nivel de las medidas de contención que requieran. A estas medidas de contención se llega
mediante
una
evaluación
de
riesgos
asociados al OMG, en la que se han de tener en cuenta no sólo los efectos sobre el ser humano, sino también sus efectos sobre el medio ambiente. La metodología de evaluación de riesgos viene contemplada en el propio RD (Anexo1) y toma en consideración distintos factores como son: -El organismo receptor del material genético. -El propio material genético. -El vector o método de transferencia de dicho material. -El OMG resultante de esta manipulación.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Al mismo tiempo, el RD (Anexo II) contempla las exigencias para cada nivel de contención aplicado a distintas situaciones (laboratorios, unidades de animales, etc.) y contemplando las medidas de confinamiento en distintos niveles (edificios, equipos, instalaciones, normas de trabajo, residuos y otras).
Los agentes biológicos, químicos y físicos, se clasifican según su grado de riesgo tanto para el individuo como para la comunidad en:
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Grupo I Agentes que en general constituyen un bajo riesgo para los individuos y la comunidad.
-Laboratorio de contención.
Grupo II Agentes que constituyen un riesgo moderado para
Es un recinto cuyo diseño contempla un
los individuos y limitado para la comunidad.
acceso restringido y barreras de contención que
Grupo III
protegen al operador. Se puede trabajar con
Agentes que constituyen un alto riesgo para los
agentes de riesgo del grupo III. El laboratorio
individuos y bajo para la comunidad.
debe estar habilitado con un gabinete de
Grupo IV
Bioseguridad apropiado para el patógeno que se
Agentes que constituyen un alto riesgo para los
manipula.
individuos y para la comunidad. -Laboratorio de contención máxima. En relación con el grado de riesgo los laboratorios que manipulan los elementos que
Es un recinto separado o convenientemente
generan este tipo de situación, se clasifican
aislado, con sistemas de apoyo exclusivo y cuyo
actualmente en 3 categorías:
diseño incluye barreras de contención que dan protección máxima al personal y/o comunidad y
Clasificación de los Laboratorios
se puede trabajar con agentes de riesgo del grupo IV. La prevención del escape y dispersión de
-Laboratorio básico.
agentes de riesgo, se logra mediante las barreras de contención.
Es un recinto de diseño estándar, en el cual la mayoría del trabajo se realiza en él y se puede trabajar sobre éste con agentes de riesgo del grupo I y II. Para agentes del grupo II, se recomienda el uso de gabinete de Bioseguridad clase I.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
3. CONTROL DE RIESGO
3.1 Personal Todos
los
trabajadores
deben
Todas y cada una de las personas
conocer con qué peligros están
implicadas en el trabajo de un animalario son
trabajando, como se controlan
responsables tanto de su propia seguridad como de
los
la de los demás. Los programas de prevención y salud laboral solamente pueden cumplirse si los trabajadores conocen plenamente los riesgos a los
riesgos,
cuáles
son
las
prácticas de trabajo, qué equipos de protección deben utilizar y
que están sometidos durante el desempeño de sus
qué deben hacer en caso de
funciones.
emergencia o accidente. Todo ello
Ésta es una responsabilidad que no puede delegarse y, aunque es cierto que puede haber
requiere
trabajadores
que
reciban
encargados de marcar las pautas, conocer y seguir
dosis de formación,
esas pautas es tanto o más importante que el hecho
una
de establecerlas. La función de las personas
entrenamiento,
encargadas de dirigir las instalaciones o los planes de seguridad se centra en motivar, formar e informar al personal, ya sean técnicos, auxiliares o
buen
supervisado
por
los fuertes
así como
carga por
de
supuesto,
personal
con
experiencia.
investigadores. www.biotecnologiahospitalaria.com
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
3.2 Prácticas y Técnicas de Laboratorio Un científico capacitado y bien informado El
elemento
más
importante
de
la
acerca de las técnicas de laboratorio adecuadas,
contención es el cumplimiento estricto de las
procedimientos de seguridad y riesgos asociados a
prácticas y técnicas microbiológicas estándar.
la manipulación de agentes infecciosos debe ser el responsable de la conducción de los trabajos con
Las personas que trabajan con agentes
cualquier agente o material infeccioso.
infecciosos o materiales potencialmente infectados deben conocer los riesgos potenciales, y también
Esta persona tiene la obligación de
deben estar capacitados y ser expertos en las
consultar
prácticas y técnicas requeridas para manipular
bioseguridad u otros profesionales de la salud y
dichos materiales en forma segura.
seguridad respecto de la evaluación del riesgo.
a
profesionales
especializados
en
Cuando las prácticas de laboratorio estándar no El director o la persona a cargo del
son
suficientes
para
controlar
los
riesgos
laboratorio es responsable de brindar u organizar
asociados a un agente o a un procedimiento de
la capacitación adecuada del personal.
laboratorio particular, quizás sea necesario aplicar medidas adicionales. El director del laboratorio es
Cada
laboratorio
a
responsable de seleccionar prácticas de seguridad
desarrollar o adoptar un manual de operaciones o
adicionales, que deben guardar relación con los
de bioseguridad que identifique los riesgos que se
riesgos
encontrarán
o
procedimiento.
especifique
las
destinados
a
puedan
está
obligado
producirse,
prácticas
y
minimizar
o
y
que
relacionados
con
el
agente
o
procedimientos eliminar
las
El personal, las prácticas de seguridad y
exposiciones a estos riesgos. Se debe alertar al
las
personal acerca de los riesgos especiales y se le
complementarse con un diseño de instalación y
debe exigir que lea y cumpla las prácticas y
características de ingeniería, equipos de seguridad
procedimientos requeridos.
y prácticas de manejo adecuadas.
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técnicas
de
laboratorio
tienen
que
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
El trabajo de investigación in vivo, en
3.3 Barreras de seguridad
general se realiza con rigor tanto por motivos planteamiento
El conjunto de elementos técnicos, de
experimental adecuado, con previsión en la
construcción e ingeniería, aparatos y equipos
ejecución y los materiales, y apoyado en buenos
utilizados para la contención de los agentes de
protocolos de trabajo nos llevará a un uso más
riesgo químico, biológico o radiactivo reciben el
racional del animal de experimentación y unos
nombre genérico de barreas o mecanismos de
resultados científicos de calidad.
barrera.
científicos
como
éticos.
Un
Otro tanto ocurre en el campo de la
Se definen como barreras primarias las
seguridad. Conocer de antemano las etapas de un
utilizadas para la protección individual y del
proceso, evitar las prisas y la improvisación son
ambiente interior del
algunas de las claves de un trabajo seguro.
animalario. Se utilizan como barreras primarias
propio
laboratorio
o
los equipos protección personal y los sistemas En
este
sentido,
los
Procedimientos
para
evitar
la
dispersión
aérea
de
los
Normalizados de Trabajo (PNT) son la guía y
contaminantes de cualquier naturaleza. Por su
recordatorio qué debemos hacer, cuándo y cómo.
parte, las barreras secundarias tienen como
Todas las actividades del animalario tienen que
función proteger el medio exterior al propio
estar establecidas mediante PNT, más cuando la
laboratorio o animalario y tienen que ver con la
seguridad está implicada. En este tipo de
construcción e ingeniería de las instalaciones.
instalaciones ningún proceso es trivial y una ejecución deficiente puede tener consecuencias
Todos los elementos o mecanismos de
que va desde lo simplemente molesto a lo
barrera estarán convenientemente garantizados por
decididamente peligroso.
el proveedor o fabricante, y los equipos mecánicos serán validados antes de iniciar su utilización en nuestras instalaciones. Una vez en uso, es esencial un
programa
periódico
para
de
mantenimiento
asegurar
el
y
control
funcionamiento
correcto.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
3.3.1 Barreras Primarias
3.3.1.1 Equipos de protección individual Se incluyen en esta categoría la indumentaria personal, guantes y sistemas de protección respiratoria, ocular y acústica.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
3.3.1.2 Indumentaria En referencia a la indumentaria existen multitud de tejidos, ya sean naturales o sintéticos (polipropileno, PVC, vinilo, nailon, Tyvek etc...) utilizados camisas,
en la confección de batas, monos, pantalones,
delantales,
gorros,
y
cubrezapatos. El uso de vestuario específico en el animalario es altamente recomendable en todos los casos, pero únicamente para el Nivel de Establecido el nivel de riesgo a controlar,
Contención Biológica 4 es obligatorio el cambio
pasaremos a seleccionar el tipo de prenda
total de la ropa de calle por vestuario especial.
adecuado. La legislación europea de referencia establece 6 tipos de prendas de protección: En el momento de seleccionar una determinada prenda y tejido hay que empezar por
Tipo 1: Máxima protección, impermeable a gases.
evaluar los riesgos que se desean evitar y alcanzar
Tipo 2: Alta protección, pero no impermeable a
un equilibrio adecuado entre
gases.
el nivel de
protección necesario y la “comodidad” de la
Tipo 3: Impermeable a líquidos.
prenda.
Tipo 4: Impermeable a pulverizados. Tipo 5: Impermeable a partículas.
La
indumentaria
de
protección
es
Tipo 6: Impermeable a salpicaduras limitadas.
normalmente más incomoda y tiende a dificultar el normal desenvolvimiento del operario cuanta
Existe una batería de pruebas normalizadas
mayor es la protección que ofrece; esta limitación
para definir el tipo de una prenda determinada a
es en sí misma una fuente de riesgos que en
las que se añaden otras que permiten establecer el
ningún caso superará a aquellos frente a los que se
perfil del rendimiento del tejido:
está buscando protección inicial. Pruebas
físicas:
resistencia
al
calentamiento, a la rotura por flexión, al estallido, a la perforación y a la ignición.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Pruebas
de
barrera:
permeabilidad,
Hay diferentes aspectos a considerar:
penetrabilidad, resistencia al paso de partículas, No podemos asumir que el guante ofrece
resistencias al paso de aerosoles y resistencia a la
una protección total. En mayor o menor medida
alteración química
todos los materiales son penetrables por lo que uso Nivel de liberación de partículas por parte
de guantes no elimina la necesidad de un correcto lavado de manos después de quitárselos. En
del tejido
algunos casos, como en el manejo de productos El proveedor de los equipos de protección individual tiene que suministrar información sobre
carcinógenos o altamente tóxicos se recomienda el uso de doble guante.
cualquiera de estos aspectos referentes a las prendas. Finalmente, los aspectos ergonómicos
En la elección se establece un compromiso
(comodidad, y transpirabilidad) y económicos nos
entre la protección obtenida y la limitación de
ayudarán a completar la elección.
pericia manual resultante. El manejo torpe de los materiales puede generar riesgos que superen la protección alcanzada mediante el guante
3.3.1.3 Guantes No hay que olvidar que el guante se Los guantes quizás sean el elemento de
convierte en un vehículo de transmisión del agente
y,
del cual nos protege. No tocar nunca elementos no
probablemente uno de los peor utilizados. Aunque
contaminados, en particular, si son de uso común
el guante de nitrilo es el de uso más extendido,
a otras personas, con las manos enguantadas. Usar
existe una enorme variedad de guantes de
doble guante o un sistema de descontaminación de
composición y características muy diversas para
estos.
protección
individual
más
común
cada una de las labores relacionadas con la experimentación animal, desde la microcirugía al
El guante puede romperse o deteriorarse
manejo de cargas de autoclave o el cuidado de
por un uso prolongado. Cambiar periódicamente
perros y primates. La NTP 180, relativa a uso de
guantes en procedimientos largos.
guantes, puede servir de guía para la elección del tipo de guante más adecuado.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
3.3.1.4 Protección acústica, respiratoria y ocular Respecto a la protección acústica, en situaciones de elevados niveles de ruido se tenderá en primer lugar a intentar adoptar soluciones de ingeniería (insonorización, aislamiento de partes ruidosas de los equipos). La protección acústica personal mediante auriculares de insonorización o sistemas similares será la segunda opción.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
En cuanto a la protección respiratoria u
Los elementos básicos de protección
ocular, es imprescindible en aquellas labores que
respiratoria individual o protectores respiratorios,
puedan dar lugar a salpicaduras o aerosoles
protegen al operador frente al aire inhalado. Para
siempre que no se cuente con otros sistemas
ello, deben ajustar perfectamente al perfil facial y
adecuados de contención (cabinas, aisladores).
no deben ser reutilizados.
En referencia a la protección respiratoria,
Las
europeas
UNE-EN
143
y
149
mencionaremos que la gama existente va desde la
clasifican a los protectores respiratorios en tres
mascarilla quirúrgica hasta los equipos de
categorías, FFP1, FFP2 y FFP3, dependiendo de
respiración autónoma y sistemas de traje integral
su eficacia de filtración de partículas y de la fuga
ventilado
de aire hacia el interior, que representa una
con
presión
positiva
(protección
máxima).
medida de la eficacia del filtro.
Entre ambos extremos encontraremos una
Estos equipos deberán llevar el marcado
gran variedad de mascarillas y dispositivos que
CE visible como garantía de seguridad y pueden
ofrecen protección satisfactoria tanto frente a
disponer de válvula para facilitar la salida del aire
partículas como frente a gases de naturaleza
exhalado.
química diversa. Como
norma
general,
Respecto a las mascarillas quirúrgicas,
recomienda
el
queremos indicar que, aunque son las utiliza
protectores
FFP2
habitualmente el personal sanitario para no transmitir infecciones al paciente, no están aprobadas como protectores respiratorios ya que
estando
se
uso y
de FFP3,
especialmente
recomendadas estas últimas en
no han sido diseñadas para prevenir la inhalación
procedimientos que supongan la
de contaminantes ambientales (no impiden el paso
generación
de aerosoles inferiores a 1 micra ni proporcionan
manejo de agentes patógenos.
de
aerosoles
y
el ajuste facial necesario para evitar la entrada de aire por los laterales).
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
En cuanto a la protección ocular, de nuevo encontraremos múltiples dispositivos, desde las gafas de laboratorio con protecciones laterales (útiles en la mayoría de situaciones) hasta diferentes escudos faciales para manejo de grandes animales y sistemas integrados de protección ocular y mascarilla. En este punto indicar tan sólo que todas las normas de seguridad desaconsejan el trabajo con lentes de contacto en laboratorios y animalarios sin utilizar protección ocular suplementaria.
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3.3.1.5 Principales señalizaciones utilizadas en laboratorio
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3.3.1.6 Equipo de control de dispersión aérea
Los aisladores ofrecen
la protección
máxima, tanto para las muestras como para los
de contaminantes
operarios y se utilizan igualmente para el trabajo Dentro del ámbito de la protección individual existe una serie de sistemas cuya
de laboratorio como para el alojamiento de animales.
función es evitar transmisión por el aire de agentes peligrosos no deseados (químicos, biológicos o
La bases conceptual de todos estos equipos
radiológicos), ya sea del ambiente hacia las
es la delimitación de una zona crítica, que
muestras o animales de experimentación, de éstos
llamaremos área de trabajo, y el control del flujo
al
de aire entre dicha zona y el control del flujo de
ambiente
o
en
ambos
sentidos
aire entre dicha zona y el ambiente del lugar en el
simultáneamente.
que se encuentre emplazado el equipo. En el ámbito de los animales estos equipos Los factores a controlar en el flujo de aire
incluyen:
son por una parte aspectos físicos inherentes al -Cabinas de Bioseguridad
propio flujo (dirección, velocidad, caudal y
-Aisladores
turbulencia) y por otra parte los elementos que el
-Armarios ventilados
aire transporta (gases y partículas). Controlar
-Racks ventilados. Microaisladores.
todos o únicamente algunos de estos aspectos dependerá del propósito y aplicación de cada
Las cabinas de bioseguridad se utilizan
equipo.
para la manipulación de muestras de laboratorio y animales
El control de los aspectos físicos se
(administración de productos, necropsias, etc.).
consigue mediante el diseño del equipo y los
Los
sistemas mecánicos de impulsión y extracción del
procedimientos armarios
con y
pequeños los
racks
ventilados
(microaisladores) se usan para el alojamiento de
aire (ventiladores y extractores).
los animales en condiciones en las que se pretende que los agentes peligrosos no pasen del animal al ambiente o viceversa.
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Mediante el control de los caudales de aire impulsado y extraído se consiguen además dos
Estos filtros alcanzan eficiencias
efectos adicionales muy importantes. En primer
de
lugar, puede controlarse el ritmo de renovación de
aunque en el ámbito teórico se
aire en el área de trabajo del que depende el
considera que son capaces de
tiempo de resistencia de posibles contaminantes en dichas áreas.
filtración
detener
las
del
99.99%,
partículas
y,
>
0.1micrómetros de diámetro por En segundo lugar, el control de caudales
interceptación y las de tamaño
permite generar diferencias o gradientes de
inferir por difusión ( Kruse et al,
presión barométrica entre el aire del área de trabajo y el del exterior, pudiendo obtenerse áreas
1991), el rango aceptado y por el
de trabajo de alta presión relativa (sobrepresión o
cual son validados
presión positiva) o de baja presión (depresión o
micrómetros.
presión negativa). El aire, como cualquier fluido,
denominados ULPA (Ultra Low
se desplazará siempre de las zonas de mayor a la
Penetration
menor presión, obteniéndose de este modo flujos unidireccionales entre el área de trabajo y el exterior.
es de 0.3
Los
Air)
filtros
interceptan
partículas de tamaño inferior a 0.12
micrómetros.
Evoluciones
posteriores de los materiales de Por su parte, el control de los elementos transportados por el flujo de aire se consigue mediante la utilización de filtros de alta eficiencia
construcción
de
los
filtros
permiten disponer actualmente
frente partículas de aéreas, conocidos filtros
de
sistemas
de
retención,
absolutos o HEPA (High Efficency Particulate
virtualmente, tanto de material
Air).
particulado como de cualquier tipo de gas.
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3.3.1.7 Cabinas de Seguridad Biológica (CSB)
La campana de gases (o vitrina extractora de gases) es un recinto ventilado que captura los
Constituyen el principal elemento del
humos y vapores procedentes de la manipulación
equipo de contención física del laboratorio,
de los productos químicos en el laboratorio. Si
sirviendo de barreras primarias para evitar el paso
bien constituye un equipo muy útil en la
de aerosoles a la atmósfera de trabajo.
contención
del
riesgo
químico,
no
ofrece
protección alguna frente a riesgos biológicos. Deben
utilizarse
siempre
que
se
desarrollen procedimientos con riesgo de producir
Las cabinas de flujo laminar son recintos
centrifugación,
que emplean un ventilador para forzar el paso del
trituración, mezclado, agitación enérgica, apertura
aire a través de un filtro HEPA (acrónimo del
de envases cuya presión interior difiera de la
término anglosajón High Efficiency Particulate
exterior, etc.
Air) barriendo la superficie de trabajo. El flujo de
aerosoles
peligrosos,
como
aire puede ser vertical u horizontal. Están diseñadas para proteger al usuario y al ambiente de los riesgos asociados al manejo de
Estas
cabinas
ofrecen
protección
material infeccioso y otros materiales biológicos
únicamente al material que se maneja en su
peligrosos, excluyendo productos radiactivos,
interior, pero nunca al operador, por lo que no son
tóxicos
recomendables para el trabajo en un Animalario
y
corrosivos,
para
los
cuales
se
de NCB 2,3 y 4, sin embargo, un instrumento de
recomiendan otros tipos de cabinas.
trabajo imprescindible en las denominadas "zonas Son cámaras de circulación forzada que,
limpias".
según sus especificaciones y diseño, proporcionan Son
Las cabinas de Seguridad Biológica son
fundamentales en un Animalario de NCB 2, 3 y 4
recintos ventilados diseñados para limitar al
y se clasifican según el nivel y tipo de
máximo el riesgo del personal de laboratorio
protección. En principio es necesario distinguir
expuesto
entre las campanas de extracción de gases, las
especialmente importante si se tiene en cuenta que
cabinas de flujo laminar y las cabinas de
muchas de las operaciones realizadas en un
Seguridad Biológica.
laboratorio implican la formación de aerosoles.
diferentes
niveles
de
protección.
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a
agentes
infecciosos.
Ello
es
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Estos equipos tienen como objetivo principal proporcionar una zona de trabajo que minimice la probabilidad que una partícula transportada por el aire tiene de escapar hacia el exterior de la cabina y contaminar así al operario y a la zona que le rodea. Además, algunas de ellas, ofrecen protección al material que se manipula. Cuando una CSB es utilizada por personal debidamente formado y consciente de las limitaciones de ésta, se convierte en un equipo de contención muy efectivo para reducir el posible escape de contaminación biológica. Sin embargo, es conveniente tener muy en cuenta que una cabina no es nunca un substituto de una técnica microbiológica adecuada. Las CSB disponen de dos sistemas que impiden la salida de contaminación: las barreras de aire y los filtros. Las barreras de aire se crean permitiendo que éste fluya en una sola dirección y a una velocidad constante dando lugar a una verdadera "cortina" de aire que se conoce como flujo de aire laminar. Es, por definición, un flujo con ausencia de turbulencias. Los filtros tienen como finalidad atrapar las partículas contenidas en este flujo de aire y los empleados habitualmente son los HEPA, que retienen con una eficacia del 99,97% partículas de hasta 0,3 micras de diámetro. Las CSB se dividen en tres categorías: clase I, clase II y clase III.
Diseño básico de una cabina de bioseguridad y esquematización del flujo de aire
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Cabinas de clase I. Son cámaras cerradas con una abertura al frente para permitir el acceso de los brazos del operador. El aire penetra por este frontal, atraviesa la zona de trabajo y todo él sale al exterior a través de un filtro HEPA. La velocidad del flujo de aire es de unos 0,40 m/s (75 pies/m). Son apropiadas para manipular agentes biológicos de los grupos 1 y 2. La mayor desventaja que presentan es que no proporcionan protección al material con el que se trabaja, no evitando por lo tanto que éste se pueda contaminar.
Esquema de una cabina de seguridad biológica de clase I.
Para un empleo satisfactorio de este tipo de cabinas, la velocidad de entrada del aire por la parte frontal debe estar comprendida entre 0,4 y 1,0 m/s, con aberturas no superiores a 20 cm, con el fin de evitar la producción de turbulencias y posibles retornos. Se asemejan a las cabinas convencionales de laboratorio químico.
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Esquematización del flujo de aire
Cabinas de clase II.
Se diferencian principalmente de las de clase I en que, además de al operario y su
entorno, ofrecen protección al producto frente a la contaminación. La superficie de trabajo está bañada por aire limpio que ha atravesado un filtro HEPA. La salida del aire se produce a través de otro filtro HEPA. Son equipos válidos para el manejo de agentes biológicos de los grupos 1, 2 ó 3. Existen varios tipos de cabinas de clase II, A, B1, B2 y B3, según sus características de construcción, flujo de aire y sistema de extracción. Están destinadas a proteger a los usuarios, a los materiales manipulados y al medio ambiente, de los riesgos biológicos leves o moderados.
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Cabina de seguridad biológica de clase II con un sólo motor (A) y con dos motores (B).
Estas cabinas están abiertas parcialmente por delante, existiendo una corriente de aire descendente de flujo laminar, uniforme y unidireccional, que atraviesa un filtro de alta eficacia. El flujo laminar que proviene del filtro protege el producto, mientras que el procedente del exterior de la cabina protege al operador. Ambos flujos de aire son conducidos a través de unas rejillas situadas en la parte delantera y trasera de la superficie de trabajo hasta un pleno desde donde se redistribuye el aire. Existen dos tipos básicos de cabina de seguridad de clase II: Tipo A con un solo motor y tipo B con dos motores, si bien ninguno de los dos tipos previene de las exposiciones por contacto de los materiales infecciosos. 3.1 Cabina de seguridad biológica de tipo II clase A: El volumen de aire recirculado sobre el área de trabajo en estas cabinas es del 70%, siendo extraído el 30% restante. La velocidad del aire de entrada, para una abertura frontal de 20 cm, debe ser del orden de 0,4 m/s. En cuanto a la velocidad del aire del flujo laminar descendente se recomienda que no sea inferior a 0,4 m/s. 3.2 Cabina de seguridad biológica de tipo II clase B: En estas cabinas, el volumen de aire recirculado sobre el área de trabajo es del 30%, mientras que el 70% restante es extraído. La velocidad del aire de entrada para una abertura frontal de 20 cm debe ser de unos 0,5 m/s y la del aire del flujo laminar descendente de 0,25 m/s, aproximadamente
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Otra diferencia entre tipo A y tipo B es que las de clase II tipo A están diseñadas para que el aire extraído desemboque en el mismo laboratorio o fuera de éste vía una conexión de tipo canopy y las de tipo B deben disponer de un conducto hermético de salida, exclusivo para ellas, con un extractor y un sistema de alarma apropiado. . Cuando la IIB3 se conecta al exterior mediante conducto hermético, entonces se puede emplear para manipulaciones que impliquen muy pequeñas cantidades de productos tóxicos y radionucleidos. Las restantes cabinas del tipo B, es decir IIB1 y IIB2, se diferencian principalmente en la velocidad del flujo y la proporción de aire que se recircula. En estos dos tipos, la velocidad mínima es de 0,50 m/s (100 p/m), siendo la cantidad recirculada del 30% en las de clase II tipo B1 y del 0% en las de tipo B2. Tanto unas como otras son adecuadas para el trabajo con pequeñas cantidades de tóxicos y radionucleidos.
Diseño básico de una cabina de bioseguridad, tipo A clase II y esquematización del flujo de aire
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Diseño básico de una cabina de bioseguridad, tipo B1, clase II y esquematización del flujo de aire
Diseño básico de una cabina de bioseguridad, tipo B2, clase II y esquematización del flujo de aire
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Diseño básico de una cabina de bioseguridad, tipo B3, clase II y esquematización del flujo de aire
Cabinas de clase III. Constituyen el máximo nivel de seguridad. Son recintos herméticos en presión negativa y, por ello, su interior está completamente aislado del entorno. Se opera en ellas por medio de unos guantes, con trampa para introducir el producto, el aire entra a través de un filtro HEPA y se expulsa al exterior a través de dos filtros HEPA.
Esquema de una cabina de seguridad biológica de clase III.
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Estas cabinas se hallan herméticamente
4. Se instalará sobre una superficie sólida y
cerradas, separando completamente al operador
nunca móvil. Si es posible, en un recinto cerrado o
del trabajo que está realizando, mediante barreras
en una zona de acceso restringido.
físicas como panel frontal completamente cerrado o manipulación a través de guantes de goma.
Al inicial el trabajo: 1. Poner en marcha la cabina durante 5-10
El recinto se mantiene en depresión y es
minutos, a fin de purgar los filtros y
alimentado por aire tomado del local y filtrado por
"lavar"
un filtro de alta eficacia. El aire extraído, que es el
2. Comprobar que el manómetro situado en
100% del aspirado, atraviesa uno de los filtros de
la parte superior del frontal se estabiliza e
alta eficacia para su completa purificación.
indica la presión adecuada (varía con el
También puede incluir un prefiltro para la
modelo de cabina).
adsorción de contaminantes químicos.
3. Apagar la luz ultravioleta (si estuviera
la
zona
protegida.
encendida) y encender la luz fluorescente. Estas
cabinas
están
diseñadas
para
4. Limpiar la superficie de trabajo con un
manipular agentes biológicos de los grupos de
producto adecuado (por ejemplo, alcohol etílico al
riesgo 3 y 4.
70%). 5. Antes y después de haber trabajado en una cabina deberían lavarse con cuidado manos y
CSB. Recomendaciones generales
brazos, prestando especial atención a las uñas. 6. Se aconseja emplear batas de manga larga con
Instalación de la cabina:
bocamangas ajustadas y guantes de nitrilo. Esta
1. Debe situarse lo más lejos posible de las
práctica minimiza el desplazamiento de la flora
rejillas de aire acondicionado, campanas de gases,
bacteriana de la piel hacia el interior del área de
puertas y zonas de mucho tráfico de personas, que
trabajo, a la vez que protege las manos y brazos
claramente interfieren en el flujo laminar.
del operario de toda contaminación.
2. Las ventanas del laboratorio han de permanecer siempre cerradas.
7.
En
determinados
casos,
además
es
recomendable el empleo de mascarilla.
3. Debe existir al menos 0,3 m entre la salida de aire de la cabina y el techo del laboratorio.
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Durante la manipulación: 1. Todo el material a utilizar (y nada más) se sitúa
5. Una vez que el trabajo haya comenzado y sea
en la zona de trabajo antes de empezar. De esta
imprescindible la introducción de nuevo
forma se evita tener que estar continuamente
material, se recomienda esperar 2-3 minutos
metiendo y sacando material durante el tiempo de
antes de reiniciar la tarea. Así se permite la
operación.
estabilización del flujo de aire. Es conveniente
2. Es aconsejable haber descontaminado el
recordar
exterior del material que se ha introducido en la
introduzca en la cabina, la probabilidad de
cabina.
provocar turbulencias de aire se incrementa.
3. Este material se coloca con un orden lógico, de
que
6. Mantener
al
cuanto
mínimo
más
la
material
actividad
se
del
manera que el material contaminado se sitúa en un
laboratorio en el que se localiza la cabina en
extremo de la superficie de trabajo y el no
uso, a fin de evitar corrientes de aire que
contaminado ocupa el extremo opuesto de la
perturben el flujo. El flujo laminar se ve
misma.
fácilmente alterado por las corrientes de aire
4. Según el tipo de manipulación y el modelo de la
ambientales
cabina, la zona de máxima seguridad dentro de la
ventanas abiertas, movimientos de personas,
superficie de trabajo varía. En general, se
sistema de ventilación del laboratorio.
recomienda trabajar a unos 6-10 cm por encima de
provenientes
de
puertas
o
7. Evitar los movimientos bruscos dentro de la
la superficie y alejado de los bordes de la misma.
cabina. El movimiento de los brazos y manos
Especial atención se prestará a no obstruir las
será lento, para así impedir la formación de
rejillas del aire con materiales o residuos.
corrientes de aire que alteren el flujo laminar.
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8. Al igual que en el resto del laboratorio, no debe utilizarse el mechero Bunsen, cuya llama crea turbulencias en el flujo y además puede dañar el filtro HEPA. 9. Cuando deban emplearse asas de platino es aconsejable el incinerador eléctrico o, mejor aún, asas desechables. 10. Si se produce un vertido accidental de material biológico
se
recogerá
inmediatamente,
descontaminado la superficie de trabajo y todo el material que en ese momento exista dentro de la cabina. 11. No se utilizará nunca una cabina cuando esté sonando alguna de sus alarmas. Al finalizar el trabajo: 1. Limpiar el exterior de todo el material que se haya contaminado. 2. Vaciar la cabina por completo de cualquier material. 3. Limpiar y descontaminar con alcohol etílico al 70% o producto similar la superficie de trabajo. 4. Dejar en marcha la cabina durante al menos 15 minutos. 5. Conectar si fuera necesario la luz ultravioleta (UV). Conviene saber que la luz UV tiene poco poder de penetración por lo que su capacidad descontaminante es muy limitada.
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3. Por otro lado, debe tenerse en cuenta que una
5. Anualmente se certificará por una entidad
buena limpieza de la zona de trabajo es una
cualificada.
garantía
de
ausencia
de
polvo
y
otros
contaminantes. La limpieza tiene por objeto
Usos
eliminar la suciedad que se halla adherida a las
Microbiología:
superficies y que sirve de soporte a los
1- Control de aerosoles infecciosos. Se generan en
microorganismos. Al limpiar se elimina también
el procesamiento de muestras o cultivos como:
la materia orgánica, contribuyendo de forma
a.- Manipulación de microorganismos del grupo
decisiva
de riesgo 3.
a
la
eficacia
de
la
posterior
de
la
CSB
en
el
Laboratorio
de
descontaminación.
b.- Machacamiento de tejidos.
4. Es conveniente una vez a la semana levantar la
c.- Descontaminación de muestras para cultivo de
superficie de trabajo y limpiar y descontaminar
Micobacterias.
por
d.- Procedimientos de identificación de hongos.
debajo
de
ella.
5. Nunca se debe utilizar la cabina como almacén
e.- Utilización del Vortex para mezclar muestras
transitorio de equipo o material de laboratorio.
con microorganismos del grupo de riesgo 3.
Esta mala práctica conduce a una acumulación de
f.- Decantación de líquidos en muestras con
polvo totalmente innecesaria.
microorganismos del grupo de riesgo 3.
6. Evitar introducir en la cabina materiales que
2- Protección de muestras o materiales de la
emitan partículas fácilmente como algodón, papel,
contaminación externa:
madera, cartón, lápices...
a.- Procesamiento de líquidos orgánicos estériles con microorganismos del grupo de riesgo 3. b.- Cultivos celulares.
Mantenimiento de la CSB
c.- Preparación de soluciones de medios y
1. Semanalmente se limpiará la superficie de
reactivos que deban ser estériles.
trabajo y el resto del interior de la cabina. 2. Semanalmente se pondrá en marcha a fin de comprobar la medida que da el manómetro. 3. Mensualmente, con un paño mojado, se limpiarán todas las superficies exteriores con objeto
de
eliminar
el
polvo
acumulado.
4. Mensualmente se revisará el estado de las válvulas interiores con que vaya equipada.
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Limpieza y desinfección de la CSB:
1.
Se
llevará
desinfección siguientes
a
cabo
completa
situaciones:
una
en
las
a)
en
caso de que se haya producido un vertido importante; b) antes de cualquier reparación; c) antes de
iniciarse
los
chequeos
periódicos; d) siempre que se cambie el programa de trabajo;
Selección
e)
Biológica
cuando
se
substituyan
los
de
una
Cabina
de
Seguridad
filtros HEPA y f) al cambiarla de lugar (incluso dentro del mismo laboratorio).
A la hora de elegir una cabina de seguridad biológica es preciso tener en cuenta tres cuestiones esenciales:
2. Se realizará con vapores de
Grupo de riesgo al que pertenece el material
formaldehido
manipulado.
o
peróxido
de
hidrógeno y siempre por personal debidamente entrenado y con las
Riesgo de generación de aerosoles al manipular el material. Grado de protección que se pretende obtener
prendas de protección personal
frente al ambiente.
adecuadas.
La siguiente tabla muestra, a modo de esquema, la cabina más idónea a elegir en función del grupo de riesgo.
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GRUPO DE RIESGO 1 2 3 4 TI: Totalmente indicada
CLASE I CLASE II A TI TI TI TI NR PU NR NR PU: Puede utilizarse NR: No recomendable
CLASE II B TI TI PU NR
CLASE III TI TI TI TI
Comparación de las diferentes categorías de cabinas de bioseguridad
La tabla que se presenta a continuación resume las principales características de las CSBs. TABLA DE SELECCIÓN DEL GABINETE DE SEGURIDAD BIOLÓGICA (GSB) SEGÚN EL TIPO DE PROTECCIÓN Tipo de Protección Clase de Gabinete de Seguridad Biológica Protección personal, microorganismos de los grupos de riesgo 1-3
Clase I, Clase II, Clase III
Protección personal, microorganismos del grupo de riesgo 4, cajalaboratorio con guantes
Clase III
Protección personal, microorganismos del grupo de riesgo 4, laboratorio de traje
Clase I, Clase II
Protección del producto
Clase II, Clase III solamente si se incluye flujo laminar
Sustancias radioactivas volátiles, pequeñas cantidades protección química
Clase IIB1, Clase IIA2 ventilado hacia el exterior
Sustancias radioactivas volátiles, protección química
Clase I, Clase IIB2, Clase III
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Los aisladores pueden conectarse a una red 3.3.1.8 Aisladores
centralizada de aire climatizado o bien tener su propio equipo de ventilación autónomo, pudiendo
Los aisladores constituyen el pilar básico en la técnica de producción y mantenimiento de los animales gnotobióticos. Aunque este tipo de animales pueden mantenerse en zonas estériles
regularse la presión diferencial mediante la regulación
de
caudales
y
controlarse
la
temperatura, humedad relativa y renovación del aire en su interior.
bajo barrera o en otros sistemas de estabulación sofisticados como microaisladores ventilados, es indispensable la utilización de aisladores cuando se pretende obtener la máxima seguridad.
Previamente a su utilización, el interior del aislador debe esterilizarse mediante agentes químicos vaporizables (ácido peracéticos, H2O2) y realizar controles de esterilidad. Para trabajar en
Los aisladores son básicamente cámaras cerradas a prueba de gérmenes, cuyo interior y contenido permanecen estériles. Deben poseer características que hagan posible manipular el material y los animales, pudiendo visualizar los procesos y su interior en cualquier momento; una esclusa o transfer que permita un intercambio de material y animales de forma aséptica hacia su interior y viceversa ( sin destruir el estatus libre de
su interior se utilizan mangas gruesas terminadas en guantes de neopreno vulcanizado, que se conectan a la pared del aislador y permiten manipular los animales y el material. En algunos casos
es
necesario
disponer
de
aisladores
auxiliares donde se almacena y traslada el material estéril que va a ser utilizado, pasándolo al aislador principal a través de una esclusa diseñada para ello.
gérmenes conseguido en la cámara) y, por último, un sistema de ventilación que consiga la renovación del aire en la cámara de forma estéril y que pueda generar una ligera sobrepresión en el interior del aislador, lo cual añade un factor más de seguridad al mismo.
Existen multitud de modelos de aisladores y accesorios para los mismos. Los más utilizados por su versatilidad y coste están fabricados en PVC
transparente
Un aislador puede utilizarse también en presión negativa cuando es usado para trabajar material
infeccioso,
armazón
metálico,
utilizándose, sobre todo, para estabulación de roedores,
con
con
evitando
así
la
aunque
también
siguen
usándose
aisladores rígidos en acero inoxidable para estabulación de aves y al manipular agentes patógenos peligrosos
contaminación del medio exterior, aunque, en este caso, deben instalarse los filtros HEPA en la salida del aire del aislador. www.biotecnologiahospitalaria.com
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La mayoría de las consideraciones hechas para las cabinas de bioseguridad son aplicables a estos equipos. Tanto los armarios como los microaisladores cuentan actualmente en todos los casos con filtración HEPA del aire entrante y saliente, y pueden ajustarse a presión negativa o positiva en función de que prime la protección del ambiente o del animal respectivamente. Su complemento indispensable será siempre una cabina de bioseguridad para llevar a cabo cualquier manipulación de los animales en ellos estabulados, incluyendo los cambios de jaula. 3.3.1.9 Armarios ventilados, racks ventilados
La misma función que cumplen las cabinas de bioseguridad durante la manipulación activa de animales y productos (protección del manipulador
Racksventilado,microaisladores Armario Ventilado
/ protección de la muestra) es desempeñada por los armarios ventilados y los racks de jaulas con aporte individualizado de aire (microaisladores) durante
los
periodos
de
estabulación
sin
manipulación activa. Estos equipos se utilizan tanto para proteger al medio ambiente de los contaminantes transportados por los animales, como a éstos de la contaminación procedente del ambiente. Los
primeros
racks
ventilados
individualmente se instalaron en centros del NIH (National Health Institutes) como sistemas de protección frente a la dispersión de alérgenos desde los animales hacia los trabajadores.
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Para llevar a cabo una desinfección adecuada se
3.3.1.10 Inmunización (Vacunación).
tiene que tener en cuenta: Comprende la protección personal del laboratorio estimulando mediante vacunas su sistema inmunológico, para los cual se establece un programa de vacunación, según los organismos a los que se está expuesto. Todo personal de laboratorio debe recibir inmunización protectora contra las siguientes
-La actividad desinfectante del producto. -La concentración que ha de tener para su aplicación. -El tiempo de contacto con la superficie que se ha de descontaminar.
enfermedades; difteria, hepatitisB, sarampión, rubeola, tétanos, tuberculosis y fiebre tifoidea.
- Si es posible, las especies y números de microorganismos que se han de eliminar.
3.3.1.11
Esterilización
y
desinfección
de
instrumentales y superficies.
fungicida, bactericida, viricida, tuberculicida o
Con el uso de agentes químicos y físicos para lograr la eliminación de los agentes infecciosos.
agentes químicos, elimina los microorganismos patógenos de un material, y generalmente presenta efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se sólo
esporicida, estos se agrupan en los siguientes tipos: Alcoholes,
compuestos
de
amonio,
compuestos fenolicos, iodoforos, glutaraldehidos, hipocloritos y peróxido de hidrogeno.
La desinfección es el proceso que emplea
emplea
Los efectos de los desinfectantes pueden ser
en
materiales
inertes.
La
esterilización es el proceso que emplea agentes físicos o químicos, produce la inactivación total de todas las formas de vida microbiana en forma irreversible (estado esporulado y vegetativo).
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Existen diferentes tipos de esterilización, los cuales son: -Esterilización por calor húmedo bajo presión (autoclave).- es el más fiable, eficaz y fácil de usar. Consiste en colocar el material infectado en autoclave durante 20 minutos a
121ºC en
una atmosfera desprovista de aire.
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-Esterilización por calor seco.- consiste en colocar el material en una estufa por el lapso de una hora a 170ºC.
Indicadores químicos. Llamados
termocromos e
indicadores colorimétricos, se trata de compuestos
-Radiaciones ionizantes.- se utiliza para material industrial, consiste en exponer a radiación el material,
lo
que
exige
instalaciones
acondicionadas para la radioactividad.
principalmente a base de sales de diferentes metales. Indicadores biológicos. Los controles microbiológicos confirman si el
-Esterilización con vapores químicos.- consiste en exponer el material a agentes gaseosos como el folmaldehido o el dióxido de etileno, en un intervalo de 30 a 80ºC, exige condiciones
proceso es capaz de alcanzar la pequeñísima probabilidad de supervivencia microbiana (10-6), considerada en toda la legislación internacional como garantía de esterilidad. Existen
especiales para su uso.
muy
diversos
tipos
de
controles
biológicos con esporas bacterianas, como: -Esterilización por filtración.- se emplea para retener microorganismos de muestras que no soportan altas temperaturas, usándose filtros que
a) tiras de papel impregnadas de esporas en envases individuales
por lo general tienen un diámetro de poro de 0.2
b) ampollas con tiras o discos de papel inoculados
micras.
de esporas y provistas de un medio de cultivo incorporado
Control de la esterilización
c) suspensiones de esporas dosificadas para
Los controles de esterilización pueden ser:
inocular los productos a esterilizar. d) suspensiones de esporas en el propio caldo de
físicos, químicos y biológicos.
cultivo. Controles
termoelementos,
esporas
utilizadas
provienen
el
de Bacillus subtilis como control biológico de la
mecánico
mediante
esterilización por calor seco y óxido de etileno y
manómetros,
higrómetros,
físicos. Se trata de controlar
funcionamiento
Las
termómetros, de que están dotados la mayoría de
de Bacillus
stearothermophilus para
la
esterilización por vapor de agua.
los distintos sistemas de esterilización, así como las gráficas. www.biotecnologiahospitalaria.com
Página 66
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
3.3.1.12 Técnicas de laboratorio estándar de
Evitar el uso de jeringas siempre que se
laboratorio (BPL), y según las recomendaciones
pueda y desechar las agujas en contenedores
de la National Committee for Clinical Labotory
rígidos, sin manipularlos.
Standards (NCCLS), del año 2001, con relación a
Desechar de manera adecuada todo el material
los riesgos biológicos se propone:
cortante.
Comprende
las
buenas
prácticas
No pipetear con la boca y no soplar nunca
Utilizar ropa protectora que sirva de
pipetas que contengan materal potencialmente
barrera eficaz frente a materiales potencialmente
infecciosos.
patógenos. Intentar evitar las lesiones accidentales.
No
mesclar
este
tipo
de
material
burbujeando aire a través del líquido.
Fomentar el lavado frecuente de las manos en el laboratorio. Los trabajadores debe lavarse
Hay que tener y emplear barreras de
siempre que vayan a salir del mismo.
protección, como guantes, mascarillas, protectores
Fomentar el hábito de mantener las manos lejos de
oculares y batas, cuando se extraiga sangre de un
la boca, la nariz, los ojos y cualquier membrana
paciente y cuando se manipule todos los
mucosa.
especímenes de los pacientes. esto incluye la
autoinoculacion.
separación de los tapones de los tubos.
Minimizar los goteo y las salpicaduras
Lavarse las manos siempre que se cambien los guates.
Esto
reduce
la
posibilidad
de
Descontaminar todas las superficies y los dispositivos reutilizables tras su uso con los desinfectantes adecuados.
Deben utilizarse barreras de protección facial cuando exista la posibilidad de salpicaduras
No deben utilizarse etiquetas de alarma en los especímenes de los pacientes
de sangre o de líquidos biológicos.
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Página 67
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Siempre que sea adecuado, hay que utilizar procedimientos de seguridad biológica de nivel 2. Antes de centrifugar los tubos, compruébese que no estén rotos. También se ha de comprobar que el
No dejar nunca un tubo de desecho o material infectado sin atender o sin marcar.
interior del recipiente del tubo no contenga signo de erosión o de materia adherida.
Y que los
amortiguadores de goma no tengan ningún trozo
Periódicamente, limpiar los congeladores para eliminar tubos rotos con especímenes biológicos. Durante la limpieza, hay que emplear
pequeño de vidrio.
guantes de goma y protección respiratoria. Utilizar
técnicas
de
eliminación
de
residuos biológicos.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
3.3.2 Barreras Secundarias
3.3.2.1 Diseño y Construcción de Instalaciones El diseño y la construcción de la instalación contribuyen a la protección de quienes trabajan en el laboratorio, proporcionan una barrera para proteger a las personas que se encuentran fuera del laboratorio, y protegen a las personas o animales de la comunidad de agentes infecciosos que pueden ser liberados accidentalmente del laboratorio. La dirección del laboratorio es responsable de la provisión de instalaciones que guarden relación con la función del laboratorio y el nivel de bioseguridad recomendado para los agentes que se manipulan. La barrera o barreras recomendadas dependerán del riesgo de transmisión de los agentes específicos. Por ejemplo, los riesgos de exposición de la mayor parte del trabajo en instalaciones del nivel de Bioseguridad 1 y 2 serán el contacto directo con los agentes o exposiciones a contactos inadvertidos a través de medio ambientes de trabajo contaminados. Las barreras secundarias en estos laboratorios pueden incluir la separación del área de trabajo del laboratorio del acceso al público, la disponibilidad de un sistema de descontaminación (por ejemplo, autoclave) e instalaciones para el lavado de las manos.
Esquema de las instalaciones de un laboratorio con bioseguridad 1
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Esquema de las instalaciones de un laboratorio con bioseguridad 2.
Cuando el riesgo de infección por exposición a un aerosol infeccioso está presente, niveles de bioseguridad 3 y 4, será necesario implementar un mayor nivel de contención y barreras secundarias múltiples para evitar que los agentes infecciosos se escapen hacia el medio ambiente. Dichas características de diseño incluyen sistemas de ventilación especializados para asegurar el flujo de aire direccional, sistemas de tratamiento de aire para descontaminar o eliminar agentes del aire de salida, zonas de acceso controladas, esclusas de aire en las puertas de acceso al laboratorio o edificios o módulos separados para aislar al laboratorio.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Esquema de las instalaciones de un laboratorio con bioseguridad 3.
Esquema de las instalaciones de un laboratorio con bioseguridad 4
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Por lo que las barreras secundarias son el conjunto de elementos de construcción e ingeniería de las instalaciones cuyo objetivo prioritario es proteger el medio ambiente exterior de los riesgos contenidos en las zonas de producción y experimentación animal. De una u otra forma, serán barreras secundarias todos aquellos sistemas que permitan: -Controlas los flujos de materiales entre la instalación y el exterior, entendido materiales en el sentido más amplio del término: sólidos, líquidos, gases (incluyendo muy especialmente el aire), animales y personas. La necesidad de controlar un determinado flujo vendrá impuesta, normalmente con el refuerzo de una normativa legal, por la peligrosidad de los agentes (biológicos, químicos, físicos o radiológicos) que ese flujo pueda transportar. Los elementos de ingeniería y equipos que permiten controlar los flujos de la instalación con el exterior desde un punto de vista de seguridad se recogen de forma resumida en esta tabla:
Barreras para el control de contaminantes en los diferentes flujos existentes entre las instalaciones de investigación, centros de producción animal y el exterior. Flujo
Barrera o proceso aplicable para el control de contaminantes en el flujo
Sólidos con contaminación Biológica Esterilización y Desinfección (Autoclaves, SAS, deep-tank ) Química/radiológ Recogida selectiva/inactivación ica Biológica Esterilización y desinfección (autoclaves, desinfectantes químicos)
Líquidos con contaminación
Química/radiológ Recogida selectiva/inactivación ica Gases con contaminación
Biológica
Animales externos (inclendo vectores artrópodos)
Química/radiológ Filtros de retención específicos ica Barreras físicas Trampas y plaguicidas
Animales de experimentación (como vehículo de introducción de contaminantes en la instalación) Animales de experimentación (como vehículo de salida contaminantes de la instalación)
de
Filtración HEPA
Cuarentenaveterinaria y control sanitario Vigilancia Programa de centinelas
Control de estado sanitario Embalajes adecuados (con filtros) Tratamiento como residuo peligroso
Personas Ducha (Niveles de Contención Biológica 3 y 4) Restricción de accesos (sólo personal imprescindible) Separación física de áreas de servicios técnicos, administrativos y de experimentación.
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Página 72
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Según
-Optimizar los procesos de limpieza, desinfección, esterilización y eliminación de residuos. En este sentido los materiales de construcción serán los
el
nivel
de
bioseguridad,
la
contención secundaria determinara lo siguiente: •
Localización.- recomendando que el área
adecuados para resistir los niveles de desinfección
contaminada se halle alejada de la puerta
que sea necesario aplicar. La construcción deberá
del laboratorio.
minimizar los recovecos y rendijas en los que
•
pueda acumularse la suciedad y que dificulten su eliminación. Adicionalmente, es recomendable
restringido. •
integrar los equipos de limpieza, desinfección y esterilización (sistemas de limpieza y aspiración
Lavatorios.- recomendable aunque sea uno por cada laboratorio.
•
por vacio, sistemas de fumigación atmosférica para desinfección de salas, autoclaves, cámaras de
Acceso de personal.- permite el ingreso
Lavaojos.- recomendado exista para casos de emergencia.
•
Superficies interiores.- recomendado que
descontaminación de doble puerta, tanques de
techos, paredes y pisos sean fáciles de
desinfectante para trasvase de material entre
lavar.
distintas áreas) al diseño de partida de la
•
Superficie de trabajo.- recomendado que
instalación
sean resistentes al calor moderado, y
-Proporcionar autonomía a la instalación. Es
disolventes orgánicos.
necesario evitar que un fallo de suministro o
•
avería de un sistema esencial pueda inutilizar las barreras. Para este propósito, controlaremos con grupos
de
mantenimiento
de
tensión
y
electrógenos, depósitos de reserva de agua y combustibles y duplicación de sistemas vitales como pueden set los del aire acondicionado, particularmente si se utilizan para generar gradientes de presión
diferencial entre las
instalación y el exterior.
Señalización.- correcta marcación de cada área.
•
Presión negativa.- evita que el flujo de aire contaminado se libere del laboratorio.
•
Filtros HEPA (High Efficiency Particle Arresting).- para la purificación de aire
•
Residuos.- para seguridad 3 se emplea un área de manejo de residuos en laboratorio.
•
Servicios
auxiliares.-
como
salas
de primeros auxilios. Todas las medidas de contención secundaria, para los diferentes niveles de bioseguridad, se pueden resumir
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en
el
siguiente
cuadro:
Página 73
. MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Importancia de la bioseguridad Un programa de bioseguridad en un laboratorio comienza con la evaluación del riesgo biológico. Todo el programa se desarrollara conforme al nivel de riesgo determinado para un agente biológico. Las evaluaciones del riesgo deben ser efectuados por las personas que mejor conozcan las características peculiares de los organismos con los que se va a trabajar, el equipo y los procedimientos que van a emplearse, los modelos animales que pueden utilizarse y el equipo y los medios de contención disponibles. Las medidas de contención se divide en dos: la contención biológica y la contención física. La contención biológica es el programa de estudio relacionado directamente al agente biológico. La contención física es el programa de estudio relacionado a las barreras de protección primaria y secundaria disponibles. Con la determinación de las medidas de contención se obtiene los lineamientos y el nivel de bioseguridad.
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. MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Con el nivel de bioseguridad establecido, el programa de gestión de bioseguridad permitirá detallar lo siguiente: •
Diseño de un manual de bioseguridad.
•
Identificación de sitios, tareas y procedimientos en los que podría ocurrir una exposición ocupacional.
•
Control de prácticas laborales.
•
Equipo de protección personal
•
Parámetros de limpieza
•
Manejo adecuado de desechos
•
Etiquetado de equipo y material
•
Información y entrenamiento del personal.
La importancia de realizar un correcto programa de bioseguridad en el laboratorio de microbiología permitirá tener control sobre la ocurrencia de infecciones con agentes infecciosos, minimizando la incidencia de accidentes laborales en el laboratorio. Contexto de las medidas de bioseguridad
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forma parte del CLUSTER de biotecnología, biomedicina y tecnologías médicas de Cataluña, junto a más de 450 empresas y una amplia red de centros de investigación, parques científicos, universidades, hospitales y entidades.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
4. NIVELES DE BIOSEGURIDAD Se
describen
bioseguridad
(BSLs),
combinaciones
de
4.1 Nivel de Bioseguridad 1.
cuatro
niveles
de
que
constan
de
prácticas
y
técnicas
de
laboratorio, equipos de seguridad e instalaciones de laboratorio.
apropiada para las operaciones llevadas a cabo, las vías de transmisión documentadas o sospechadas de los agentes infecciosos, y la función o la actividad del laboratorio. El o los Niveles de Bioseguridad para los organismos mencionados en la Sección VII (Informes Resumidos de Agentes) representan aquellas condiciones bajo las cuales el agente puede comúnmente manipularse en forma segura. El director del laboratorio es la persona y
principalmente
responsable
de
evaluar los riesgos y de aplicar adecuadamente los niveles
de
bioseguridad
recomendados.
En
general, el trabajo con agentes conocidos debe realizarse al nivel de bioseguridad recomendado. Cuando se cuenta con información específica para sugerir que la virulencia, la patogenicidad, los patrones
de
diseño y la construcción de la instalación del Nivel de Bioseguridad 1 son adecuados para laboratorios
destinados
a
la
educación
o
capacitación secundaria o universitaria, y para
Cada combinación es específicamente
específica
Las prácticas, los equipos de seguridad, el
resistencia
a
antibióticos,
la
disponibilidad de vacunas o tratamientos, u otros
otros laboratorios en los cuales se trabaja con cepas
definidas
y
caracterizadas
de
microorganismos viables que no se conocen como generadores sistemáticos de enfermedades en humanos adultos sanos.
Muchos agentes no
comúnmente
con
asociados
procesos
de
enfermedades en humanos son, no obstante, patógenos oportunistas y pueden causar infección en
individuos
inmunodeficientes
jóvenes, o
ancianos,
inmunodeprimidos.
Las
cepas de vacunas que han sido sometidas a múltiples
pasajes
in
vivo
no
deben
ser
consideradas avirulentas por el simple de hecho de ser cepas de vacunas. El Nivel de Bioseguridad 1 representa un nivel básico de contención que se basa en prácticas microbiológicas estándar sin ninguna
barrera
primaria
o
secundaria
especialmente recomendada, salvo una pileta para lavado de manos.
factores han sido alterados significativamente, se pueden especificar prácticas más (o menos) estrictas.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
4.2 Nivel de Bioseguridad 2.
Las prácticas, los equipos, el diseño y la
Los riesgos primarios del personal que
construcción de instalaciones del Nivel de
trabaja con estos agentes están relacionados con
Bioseguridad 2 son aplicables a laboratorios
exposiciones accidentales de membranas mucosas
educativos, de diagnóstico, clínicos u otros
o
laboratorios donde se trabaja con un amplio
infecciosos.
percutáneas,
o
ingestión
de
materiales
espectro de agentes de riesgo moderado que se encuentran presentes en la comunidad y que están
Debe tenerse especial precaución con
asociados con enfermedad humana de variada
agujas o instrumentos cortantes contaminados. Si
gravedad.
bien no se ha demostrado que los organismos que se
manipulan
de
rutina
en
el
Nivel
de
Con buenas técnicas microbiológicas, estos
Bioseguridad 2 sean transmisibles a través de la
agentes se pueden utilizar en forma segura en
vía de aerosoles, los procedimientos con potencial
actividades realizadas en una mesa de trabajo,
de producir aerosoles o grandes salpicaduras -que
siempre que el potencial de que se produzcan
pueden incrementar el riesgo de exposición de
salpicaduras o aerosoles sea bajo. El Nivel de
dicho personal- deben llevarse a cabo en equipos
Bioseguridad 2 es adecuado cuando se trabaja con
de contención primaria o en dispositivos tales
sangre derivada de humanos, fluidos corporales,
como un BSC o cubetas centrífugas de seguridad.
tejidos o líneas de células primarias humanas
Se deben utilizar las demás barreras primarias que
donde puede desconocerse la presencia de un
correspondan,
agente infeccioso. (El personal de laboratorio que
salpicaduras, protección facial, delantales
trabaja con materiales derivados de humanos debe
guantes. Se debe contar con barreras secundarias,
consultar
de
tales como piletas para lavado de manos e
Transmisión por Sangre 2 de OSHA, si desea
instalaciones de descontaminación de desechos a
información
fin de reducir la contaminación potencial del
el
Estándar acerca
de
de
Patógenos
las
específicas requeridas).
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precauciones
tales
como
máscaras
contra y
medio ambiente.
Página 78
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
4.3 Nivel de Bioseguridad 3. 4.4 Nivel de Bioseguridad 4. Las prácticas, equipos de seguridad y el diseño y la construcción de las instalaciones del Nivel de Bioseguridad 3 pueden aplicarse a instalaciones
clínicas,
de
producción,
investigación, educación o diagnóstico, donde se trabaja con agentes exóticos o indígenos con potencial de transmisión respiratoria, y que pueden
provocar
una
infección
grave
y
potencialmente letal. Los riesgos primarios del
Las prácticas, equipos de seguridad, y el diseño y la construcción de instalaciones del Nivel de Bioseguridad 4 son aplicables al trabajo con agentes peligrosos o tóxicos que representan un alto riesgo individual de enfermedades que ponen en peligro la vida, que pueden transmitirse a través de aerosoles y para las cuales no existen vacunas o terapias disponibles.
personal que trabaja con estos agentes están asociados a la auto inoculación, ingestión y exposición a aerosoles infecciosos.
Los agentes con una relación antigénica cercana o idéntica a los agentes de los Niveles de Bioseguridad 4 deben manejarse conforme a las
Al manipular agentes
del Nivel de
Bioseguridad 3 se pone mayor énfasis en las barreras primarias y secundarias para proteger al personal en áreas contiguas, a la comunidad y al
recomendaciones de este nivel. Cuando se han obtenido datos suficientes, el trabajo con estos agentes puede continuarse a este nivel o a un nivel inferior.
medio ambiente de la exposición a aerosoles potencialmente infecciosos.
Los riesgos principales para el personal que trabaja con agentes del Nivel de Bioseguridad
Por ejemplo, todas las manipulaciones de laboratorio se deben llevar a cabo en un BSC u otros equipos cerrados, tales como cámaras de generación de aerosoles estancas al gas. Las barreras secundarias para este nivel incluyen el acceso controlado al laboratorio y requisitos de ventilación que minimizan la liberación de aerosoles infecciosos desde el laboratorio.
4 son la exposición respiratoria a aerosoles infecciosos, la exposición de membranas mucosas o piel lastimada a gotitas infecciosas y la auto inoculación. materiales
Todas de
las
manipulaciones
diagnóstico
de
potencialmente
infecciosos, cepas puras y animales infectados en forma natural o experimental, implican un alto riesgo de exposición e infección para el personal de laboratorio, la comunidad y el medio ambiente.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
El aislamiento completo del personal de laboratorio de los materiales infecciosos en
5.
CRITERIOS
DE
NIVEL
DE
BIOSEGURIDAD DE LOS ANIMALES
aerosol se logra principalmente trabajando en un BSC Clase III o en un traje de cuerpo entero, con
Al
igual
que
los
laboratorios,
los
provisión de aire y presión positiva. Por lo
animalarios pueden clasificarse en cuatro niveles
general, la instalación del Nivel de Bioseguridad 4
de bioseguridad, con arreglo a una evaluación del
es un edificio separado o una zona totalmente
riesgo y al grupo de riesgo al que pertenecen los
aislada con sistemas de gestión de desechos y
microorganismos investigados.
requisitos
de
ventilación
especializados
y
complejos para prevenir la liberación de agentes viables al medio ambiente. En lo que respecta a los agentes patógenos que El director del laboratorio es la persona específica y principalmente responsable de la
van a utilizarse en el laboratorio de animales, hay que tener en cuenta los siguientes factores:
operación segura del laboratorio. Su conocimiento y criterio son esenciales en la evaluación de los
1. La vía normal de transmisión.
riesgos y en la aplicación correcta de estas
2. Los volúmenes y las concentraciones que van a
recomendaciones.
manejarse. 3. La vía de inoculación.
El nivel de bioseguridad recomendado
4. En su caso, la vía de excreción de los agentes.
representa aquellas condiciones bajo las cuales el agente puede comúnmente manipularse en forma
En cuanto a los animales que van a usarse en el
segura. Las características especiales de los
laboratorio, los factores que hay que tener en
agentes utilizados, la capacitación y experiencia
cuenta son los siguientes:
del personal, y la naturaleza de la función del laboratorio pueden influir más aún en la
1. El carácter de los animales, es decir, su grado
aplicación de estas recomendaciones por parte del
de agresividad y tendencia a morder o arañar.
director.
2. Sus endoparásitos y ectoparásitos naturales. 3. Las zoonosis a las que son susceptibles. 4. La posible diseminación de alérgenos.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Como en el caso de los laboratorios, los requisitos
5.2 Animalarios – nivel de bioseguridad 2
relativos a las características de diseño, el equipo y las precauciones son cada vez más estrictos a
Este nivel es apropiado para el trabajo con
medida que aumenta el nivel de seguridad. Esos
animales a los que se inoculan deliberadamente
requisitos se describen a continuación. Las
microorganismos del grupo de riesgo 2. Se
directrices son acumulativas; es decir, cada nivel
aplicarán
incorpora los requisitos de los niveles inferiores.
seguridad:
las
siguientes
precauciones
de
1. Se cumplirán todos los requisitos de los 5.1 Animalarios – nivel de bioseguridad 1
animalarios del nivel 1. 2. Se colocarán señales de advertencia del peligro
Este nivel es el apropiado para mantener a
biológico
en
las
puertas
y
otros
lugares
la mayoría de los animales después de la
apropiados.
cuarentena (salvo los primates no humanos,
3. El local estará diseñado de modo que sea fácil
respecto de los cuales debe consultarse a las
de limpiar y mantener.
autoridades nacionales) y para los animales que
4. Las puertas deben abrirse hacia dentro y
son inoculados deliberadamente con agentes del
cerrarse solas.
grupo de riesgo 1.
5. La calefacción, la ventilación y la iluminación
Se necesitan técnicas
microbiológicas apropiadas.
deben ser apropiadas. 6. Si se instala ventilación mecánica, el flujo de
El director del animalario debe determinar
aire debe dirigirse hacia dentro. El aire utilizado
las políticas, procedimientos y protocolos para
se evacuará al exterior y no se reciclará a ninguna
todas las operaciones, así como para el acceso al
otra parte del edificio.
animalario. Se instituirá un programa apropiado
7. El acceso se limitará a las personas autorizadas.
de vigilancia médica para el personal y se
8. No se admitirá ningún animal distinto de los
preparará y adoptará un manual de seguridad de
utilizados con fines experimentales.
las operaciones.
9. Existirá un programa de lucha contra artrópodos y roedores.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
20. En el local se utilizará ropa y equipo de 10. Si hay ventanas, estas serán seguras,
protección, que se retirará a la salida.
irrompibles y, si se pueden abrir, llevarán rejillas a
21. Se instalarán lavabos y el personal se lavará
prueba de artrópodos.11. Las superficies de
las manos antes de salir del animalario.
trabajo habrán de ser descontaminadas con
22. Todas las lesiones, por leves que sean, deberán
desinfectantes eficaces después del trabajo.
ser tratadas de forma apropiada, notificadas y
12. Se dispondrá de CSB (clases I o II) o jaulas
registradas.
aislantes con suministro especial de aire y
23. Estará prohibido comer, beber, fumar y aplicar
evacuación de aire a través de filtros HEPA para
cosméticos dentro del animalario.
aquellas tareas que puedan entrañar la generación
24. Todo el personal deberá recibir capacitación
de aerosoles.
apropiada.
13. Se dispondrá de una autoclave in situ o cerca del animalario. 14. El material de los lechos de los animales se
5.3 Animalarios – nivel de bioseguridad 3
eliminará de modo que se reduzca al mínimo la Este nivel es apropiado para trabajar con
producción de aerosoles y polvo. 15. Todos los materiales de desecho y de los
animales que son inoculados deliberadamente con
lechos deben descontaminarse antes de ser
agentes incluidos en el grupo de riesgo 3, o
eliminados.
cuando así lo indique la evaluación del riesgo.
16. Se restringirá en lo posible el uso de
Todos los sistemas, prácticas y procedimientos
instrumentos punzantes o cortantes. Estos se
habrán de ser revisados y certificados nuevamente
recogerán siempre en recipientes resistentes y a
una vez al año. Se aplicarán las siguientes
prueba de perforación, provistos de tapa, y serán
precauciones de seguridad:
tratados como material infeccioso. 17. El material destinado al tratamiento con
1.
Deben
cumplirse
todos
los
requisitos
autoclave o a la incineración debe transportarse
correspondientes a los animalarios de los niveles
sin riesgo en recipientes cerrados.
de bioseguridad 1 y 2.
18. Las jaulas de los animales se descontaminarán
2. El acceso debe estar estrictamente controlado.
después de su uso.
3. El animalario estará separado de otros locales
19. Los cadáveres de los animales serán
del laboratorio y destinados a animales por dos
incinerados.
puertas que formen un vestíbulo o antesala. 4. En el vestíbulo se instalarán lavabos. 5. En el vestíbulo se instalarán duchas.
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Página 82
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
6. Habrá que disponer de ventilación mecánica
5.4 Animalarios – nivel de bioseguridad 4
que asegure un flujo continuo de aire en todos los locales. El aire de salida pasará por filtros HEPA antes de ser evacuado a la atmósfera sin ningún tipo de recirculación. El sistema estará diseñado de tal modo que impida el flujo de retorno accidental y que haya una presión positiva en todas partes del animalario.
El trabajo que se realice en estas instalaciones normalmente guardará relación con el del laboratorio de contención máxima – nivel de bioseguridad 4, y habrá que armonizar
las
normas y los reglamentos nacionales y locales para aplicarlos a ambos tipos de instalaciones.
7. Se dispondrá de una autoclave situada en un lugar cómodo respecto del alojamiento de los animales y donde el riesgo biológico esté contenido. Los residuos infecciosos se tratarán en
Para el trabajo en laboratorios que requieren trajes especiales se utilizarán prácticas y procedimientos especiales, además de los que se describen a continuación.
la autoclave antes de trasladarlos a otros lugares de la instalación.
1. Se cumplirán todos los requisitos de los
8. Se dispondrá de un incinerador de fácil acceso en la instalación o se tomarán otras disposiciones al mismo efecto con las autoridades competentes. 9. Los animales infectados con microorganismos del grupo de riesgo 3 estarán alojados en jaulas aisladas o en locales con salidas de ventilación situadas detrás de las jaulas. polvo que sea posible. Toda
la
ropa
3. 2. El acceso estará estrictamente controlado; sólo tendrá autorización para entrar el personal designado por el director del establecimiento. 3. Ninguna persona deberá trabajar sola: se aplicará la regla de las dos personas.
10. Los lechos de los animales tendrán el mínimo 11.
animalarios de los niveles de bioseguridad 1, 2 y
4. El personal habrá recibido el máximo nivel posible de formación en microbiología y estará
protectora
deberá
ser
descontaminada antes de enviarla a la lavandería. 12. Las ventanas estarán herméticamente cerradas y serán resistentes a la rotura. 13. Se ofrecerá al personal la posibilidad de inmunizarse, si procede.
familiarizado con los riesgos que entraña su trabajo y las precauciones necesarias. 5. Las zonas en las que se alojen los animales infectados con agentes del grupo de riesgo 4 mantendrán los criterios de contención descritos y aplicados en los laboratorios de contención máxima – nivel de bioseguridad 4.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
6. Se entrará en la instalación por un vestíbulo de
15. Se someterá al personal a vigilancia médica.
cierre hermético cuya parte limpia estará separada de la parte restringida por las instalaciones de cambio de ropa y duchas.
5.5 Invertebrados
7. El personal deberá quitarse la ropa de calle al entrar y ponerse ropa protectora especial. Después
Como en el caso de los vertebrados, el
del trabajo se quitará la ropa, la separará para ser
nivel de bioseguridad de las instalaciones para
tratada en autoclave, y se duchará antes de salir.
estos animales vendrá determinado normalmente
8. La instalación estará ventilada por un sistema
por el grupo de riesgo del agente estudiado o
de evacuación de aire con filtros HEPA que
según lo que indique la evaluación del riesgo. No
asegure una presión negativa (flujo de aire hacia el
obstante, con ciertos artrópodos, en particular los
interior).
insectos voladores, se necesitan además algunas
9. El sistema de ventilación estará diseñado de
precauciones especiales:
modo que impida el flujo de retorno y la presurización positiva.
1. Se dispondrá de locales distintos para los
10. Para el intercambio de materiales se dispondrá
invertebrados infectados y no infectados.
de una autoclave de doble puerta con el extremo
2. Esos locales podrán sellarse para ser fumigados.
limpio situado en una sala exterior a las salas de
3. Se dispondrá con facilidad de pulverizadores de
contención.
insecticidas.
11. Para el intercambio de materiales que no
4.
puedan ser tratados en la autoclave se dispondrá
«enfriamiento» para reducir, cuando sea preciso,
de una caja de paso con cierre hermético cuyo
la actividad de los invertebrados.
extremo limpio estará situado fuera de salas de
5. El acceso se hará a través de un vestíbulo
contención.
provisto de mosquiteras en las puertas y trampas
12. Todas las manipulaciones de animales
para insectos.
infectados con agentes del grupo de riesgo 4 se
6. Todos los conductos de salida de la ventilación
realizarán en condiciones de contención máxima –
y las ventanas que puedan abrirse estarán
nivel de bioseguridad 4.
equipados con mosquiteras.
13. Todos los animales estarán alojados en
7. No se permitirá que se sequen los sifones de los
aisladores.
fregaderos y desagües.
14. Todos los desechos y el material de los lechos
8. Todos los residuos se descontaminarán en la
de los animales se tratarán en la autoclave antes de
autoclave, ya que algunos invertebrados son
sacarlos del animalario.
resistentes
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Se
dispondrá
a
de
instalaciones
algunos
de
insecticidas. Página 84
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9. Se controlará el número de larvas y formas adultas de artrópodos voladores, reptadores y saltadores. 10. Los recipientes para garrapatas y ácaros se depositarán en cubetas con aceite. 11. Los insectos voladores infectados o potencialmente infectados se albergarán en jaulas de doble malla. 12. Los artrópodos infectados o potencialmente infectados se manipularán en CSB o cámaras aislantes. 13. Los artrópodos infectados o potencialmente infectados podrán manipularse en bandejas de enfriamiento. Deben de aplicarse a las prácticas, equipo de seguridad y metodología en los experimentos. Se recomiendan como estándares mínimos para actividades que utilizan animales infectados con agentes que pueden producir o producen infecciones zoonóticas. . Niveles de contención de los animalarios: resumen de los procedimientos y equipo de seguridad GRUPO DE NIVEL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO Y EQUIPO DE SEGURIDAD RIESGO CONTENCIÓN 1
NBSA-1
Acceso restringido, ropa y guantes protectores
2
NBSA-2
Procedimientos del NBSA-1, más señales de advertencia del riesgo. CSB de clase I o II para las actividades que producen aerosoles. Descontaminación de desechos y jaulas antes del lavado.
3
NBSA-3
Procedimientos del NBSA-2, más acceso controlado. CSB y ropa protectora especial para todas las actividades.
4
NBSA-4
Procedimientos del NBSA-3, más acceso estrictamente restringido. Muda de ropa antes de entrar. CSB de clase III o trajes de presión positiva. Ducha a la salida. Descontaminación de todos los desechos antes de su salida de las instalaciones.
NBSA: nivel de bioseguridad de las instalaciones para los animales CSB: cabinas de seguridad biológica.
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6. LIMPIEZA, DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN Estos procesos juegan un papel central y vital en el correcto funcionamiento y seguro de todas actividades del animalario. En su ausencia, el ambiente no sólo se degrada, sino que se vuelve peligroso y hace inviable un cuidado real de los animales y a la larga una investigación in vivo de falta de calidad.
el riesgo, pero contribuye decisivamente a una
cantidad
importante
de
contaminantes. Resulta totalmente indispensable para poder aplicar correctamente y con garantías cualquier
cuanto
a
la
desinfección
y
la
esterilización, su papel en el control de los riesgos, particularmente biológicos, resulta mucho más evidente. Es precisamente la capacidad de eliminar el máximo número y variedad de agentes infecciosos que se demanda la que lleva implícita que los productos y procesos de desinfección y esterilización no sean inocuos par animales y
La limpieza por sí sola no puede eliminar suprimir
En
proceso
de
desinfección
o
descontaminación posterior hasta el punto que se podría considerar la expresión
“limpieza-
desinfección” como una sola palabra para designar un único concepto. Los restos de materia orgánica o el polvo actúan como un eficaz escudo que protege a los microorganismos de la acción de los desinfectantes y los procesos de esterilización. La suciedad es el mejor caldo de cultivo que podemos brindar a los gérmenes. En cualquier caso, hay que recordar que la limpieza es función de todos y que si bien limpiar es esencial, no ensuciar es la mejor medida.
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personas, convirtiéndose en elementos de riesgos en sí mismos Por su utilidad práctica como método de control de todos los procesos de limpieza y desinfección, podemos recomendar el control microbiológico de superficies mediante Agar de Recuento en Placa (PCA). Este medio de cultico, utilizado en placas Rodac o laminocultivos, permite
obtener
un
recuento
de
Unidades
Formadoras de Colonia (UFC) por cm2 de superficie testada (gérmenes aerobios mesófilos). Estos recuentos pueden compararse con los datos que propone el Comité para contaminación microbiológica de superficies de la American Public Health Association (APHA) que sirve como indicativos del estado
de limpieza de
nuestras instalaciones.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
6.1 Limpieza
Es
el
conjunto
de operaciones
Detergentes: Son compuestos químicos
que
eliminan la materia orgánica e inorgánica del material o superficies. La materia suele estar fijada a las superficies a limpiar con mayor o
que disminuyen la tensión superficial de las soluciones acuosas y emulsionan los compuestos lipídicos permitiendo su suspensión en el agua.
menor fuerza de adherencia, por lo que hay que Estos compuestos no sólo se usan en
emplear medios químicos y mecánicos para superar
las
fuerzas
que
se
oponen
al
limpieza, sino también como agentes humectantes y emulsionantes. Hay tres grupos de detergentes
desprendimiento de dicha materia.
dependiendo de la carga que presente el extremo Los medios químicos utilizados con este propósito se denominan detergentes. En su aplicación tendremos en cuenta factores tales como la temperatura del agua y el detergente disuelto en ella, concentración del detergente y
polar de la molécula: aniónicos, catiónicos y noiónicos. Entre los detergentes aniónicos se incluyen
jabones
y
poseen
efecto
antibacteriano contra organismos gram positivos y ácido- resistentes; los catiónicos incluyen a los compuestos
tiempo de contacto con la superficie a limpiar
los
de
amonio
cuaternario
como
principales representantes. La
limpieza
debe
preceder
a
la Cuando se utilicen dos tipos de detergentes
desinfección y esterilización exceptos cuando hay riesgo biológico grupo 3 y 4 que debe ser a la inversa.
para el lavado, uno puede neutralizar al otro, lo que
exige
hacer
un
enjuague
o
aclarado
intermedio. A igual concentración básica, los detergentes catiónicos son más eficaces que los detergentes aniónicos porque, además de su acción emulsionante, se combinan parcialmente con
proteínas,
grasas
y
algunos
fosfatos
mejorando su “arrastre” durante el lavado.
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Por tal motivo, recurrimos a sustancias
Los detergentes comerciales contienen el agentes
desinfectantes que podemos definir como agentes
tensoactivos o surfactantes, que modifican la
químicos que destruyen las formas vegetativas de
tensión superficial e interaccionan con las grasas;
los microorganismos patógenos y que son menos
sustancias coadyuvantes, que colaboran con el
eficaces frente a las esporas. La acción específica
surfactante y agentes auxiliares (antiapelmazantes,
de los desinfectantes sobre los microorganismos
substancias fluorescentes, blanqueantes, entre
los clasifica en:
detergente
propiamente
dicho;
otros). Algunos detergentes incorporan además algún desinfectante.
• Biocidas (bactericidas, fungicidas, virucidas), si matan
las
formas
vegetativas
de
los
microorganismos. • Bioestáticos (bacterioestáticos, fungiestáticos), si 6.2 Desinfección
interfieren en la reproducción o la multiplicación de los microorganismos sin matarlos realmente.
Este concepto agrupa los procedimientos físicos o químicos empleados para destruir los
•
Esporicidas, si consiguen matar esporas
bacterianas o fúngicas.
microorganismos que tienen capacidad patógena (McDonnell y Russell, 1999; Kahrs, 1995; Russell
Mecanismo de acción de los desinfectantes
y Hugo, 1992). Las esporas bacterianas tienen
A nivel general actúan de la siguiente forma:
características de resistencia que las convierten en
•
los agentes más difíciles de eliminar mediante
precipitación de las mismas, haciéndolas no
estos procedimientos. Podemos considerar que la
funcionales.
desinfección es el paso intermedio entre la
• Rompen la membrana celular, provocando su
limpieza y la esterilidad. El mejor medio de
muerte.
eliminar cualquier organismo es la aplicación de
• Inducen la unión de los grupos sulfhidrilo libres;
calor, pero no siempre resulta posible hacerlo con
las células cuyas proteínas enzimáticas contienen
la intensidad suficiente (si el calor aplicado está
cisteína y cadenas laterales terminadas en SH, no
por debajo de los 100º tiene una acción
pueden funcionar sin que los grupos SH estén
restringida) por la naturaleza de los materiales a
libres y reducidos. Si los grupos sulfhidrilo se
desinfectar.
fijan la célula queda dañada.
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Coagulan
las
proteínas
o
provocan
la
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
• Antagonismo químico; la afinidad de las
Elección y uso correcto de un desinfectante
enzimas por sus substratos naturales es lo que Al
permite realizar la acción catalítica. Si un
plantearnos
la
elección
de
un
compuesto se asemeja mucho a un substrato en
desinfectante debemos realizar una cuidadosa
sus aspectos esenciales, la enzima mostrará
evaluación
afinidad por ese compuesto. Si esa afinidad es
técnicos, económicos y de seguridad con grandes
muy fuerte el compuesto sustituye al substrato
dosis de pragmatismo.
integrando
criterios
científicos,
natural de la enzima, evitando la reacción normal Evidentemente, escoger el desinfectante
e inhibiendo de esta forma el metabolismo celular.
más potente nos podría garantizar la eliminación de la contaminación, pero puede ser un absurdo
Cualidades de un desinfectante perfecto
desde el punto de vista operativo, poseer una tal
relación coste beneficio desfavorable o generar
compuesto, éstas serían las cualidades de un
altos niveles de riesgo para el personal. Hay que
desinfectante perfecto (McDonnell y Russell,
conocer
1999):
microorganismos queremos actuar y en qué
Aunque,
•
desafortunadamente,
Capacidad
no
destructiva
exista
contra
todo
en
primer
lugar,
sobre
qué
proporción se encuentran. A partir de aquí,es
microorganismo.
imprescindible tomar en consideración:
• No debe tener interferencias en su actividad por
•
la presencia de materia orgánica.
compatible con los materiales a tratar.
• Que no sea irritante, alergénico ni tóxico.
• Temperatura de actuación el producto.
• No debe decolorar ni degradar los materiales
• Tiempo de contacto del desinfectante con los
sobre los que actúa.
microorganismos a eliminar.
• Al estar en contacto con el material a
• Concentración de los principios activos del
desinfectar, efectivo en el menor tiempo posible.
producto y forma de preparación.
• Soluble en disolventes comunes y químicamente
• Forma de aplicación (vaporizado, en forma de
estable.
spray, etc.).
• Sus límites de eficacia no serán críticos (efi caz
• Tiempo de recuperación (por ejemplo,k en el
en un amplio rango de concentraciones).
caso de fumigación, sería el periodo que es
• Que carezca de olor desagradable, no manche, ni
necesario
corroa.
fumigada no sea tóxico para las personas)
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Composición
química
del
desinfectante,
esperar, para que el acceso al área
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
Se comparan
cinco importantes familias de
Clasificación de los desinfectantes
desinfectantes, aspectos a tener en cuenta en la elección de un desinfectante. Por otra parte, tanto
Aunque los desinfectantes se puedan
para garantizar la correcta acción del desinfectante
clasificar atendiendo a su composición química,
como la seguridad del personal que deba
creemos más oportuno clasificarlos según su nivel
utilizarlo,
de actividad, teniendo de alto nivel, intermedio o
adoptaremos
las
siguientes
bajo, en función de su capacidad microbicida. Los
precauciones:
desinfectantes de alto nivel son eficaces frente a • Utilizar siempre equipo limpio para su
formas vegetativas de bacterias y hongos y virus.
aplicación. • Limpiar la materia orgánica de la superficie a
En tiempos largos de contacto (3 a 10
desinfectar.
horas) son esporicidas. Algunos ejemplos son el
• Diluir el producto según las recomendaciones
glutaraldehído alcalino, glutaraldehído fenolato,
del fabricante.
N-duopropenida (yoduros de amonio cuaternario),
• Dejar que la superficie tratada permanezca
ácido peracético y peróxido de hidrógeno (Heckert
humedecida con la solución desinfectante al
et al 1997). Los desinfectantes de nivel intermedio
menos durante 5 minutos.
son activos frente a formas vegetativas de
•
Cambiar
la
solución
desinfectante
inmediatamente si se observa alguna suciedad.
bacterias y hongos siendo inactivos frente a esporas y Mycobacterium tuberculosis.
• Renovar la solución desinfectante cuando se cambie de sala o zona.
El hipoclorito sódico (Rutala y Weber,
• Respetar el tiempo de recuperación definido por
1997), algunos compuestos yodados (povidona
el fabricante.
yodada) y losalcoholes (alcohol etílico, alcohol isopropílico) son algunos ejemplos. Por su parte, los desinfectantes de bajo nivel actúan solamente a formas vegetativas bacterianas y algunos virus encapsulados. Suelen utilizarse como antisépticos.
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Según su área de aplicación, también podemos clasificar a los desinfectantes como: • Atmosféricos: pueden convertirse en vapor (por calentamiento –termonebulización-) y se usan para la desinfección de locales y aisladores, como el formaldehído, peróxido de hidrógeno. • Para instrumental: poco corrosivo, fácilmente eliminable por lavado o evaporación (glutaraldehído). • De superficie: para suelos y paredes, mobiliario, cabinas de bioseguridad, etc. Se utilizan casi todas las familias químicas y niveles de actividad en función del grado de desinfección deseado. • Antisépticos: preparaciones aplicadas a tejidos vivos (en la piel, para eliminar en lo posible todos los microorganismos que residen habitualmente o transitoriamente en la misma; en los tejidos en general que son asiento de infección o pueden serlo). Los más habituales son: alcoholes (etílicos e isopropílicos), ácidos (acético, salicílico, láctico, bórico), agentes oxidantes (peróxido de hidrógeno), compuestos halogenados (yodo, povidona yodada) y clorhexidina. Desinfección por radiación ultravioleta Las bacterias, virus y la mayoría de hongos son vulnerables a los rayos ultravioletas con longitud de onda menor de 3.000 Å. Son producidos por lámparas de vapor de mercurio con una emisión de 2.400 a 2.800 Å. La intensidad de las lámparas se expresa en microvatios por cm2 y para obtener la dosis de radiación UV que se está aplicando basta con multiplicar dicha intensidad por el tiempo de exposición. Como ejemplo, para poder matar el 99,9% de un inóculo de Escherichia coli son necesarios 12.000 µw/seg. y cm2.
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6.3 Esterilización
Se define como un proceso físico o químico que produce la eliminación total de la carga microbiana de un objeto, incluyendo las formas esporuladas (Booth y Mcdonald, 1987). Existen tres métodos de esterilización físicos (por
-Esterilización con vapor de agua (autoclave de vapor): Se considera el más adecuado dado su alto poder de penetración, elevada acción microbicida en cortos periodos de tiempo, ausencia de residuos tóxicos, bajo costo y fácil control de los procesos.
calor seco, vapor de agua y radiaciones) y dos métodos
químicos
(óxido
de
etileno
y
formaldehído). -Esterilización por calor seco (hornos): consiste en exponer los objetos a temperaturas elevadas (160 a 200ºC) durante periodos de tiempo de 1 a 2 horas. La acción esterilizante se consigue por conductividad,
pasando
el
calor
desde
las
El principio físico de la esterilización con vapor se basa en el hecho que el agua hierve cuando su presión de vapor iguala a la atmosférica que la rodea. Si aumenta la presión en el autoclave, también aumenta la temperatura de ebullición del agua, situándose por encima de 100ºC.
superficies de los objetos hacia el interior de los mismos.
superficies más frías cede su calor y se condensa
Normalmente, el esterilizador es una cámara con un cuerpo calefactor y con la ayuda de un ventilador se distribuye el calor por la cámara homogéneamente. Los hornos suelen contar también con filtros HEPA para introducir aire que enfríe
Al entrar el vapor en contacto con
el
interior
una
vez
terminada
la
esterilización. El aire es mal conductor del calor, por lo cual éste penetra lentamente en los objetos, necesitándose un tiempo de penetración del calor
en agua. La caída de presión resultará en más vapor aplicado a dicha área hasta que la temperatura de la superficie sea igual a la del vapor. Gracias a este efecto se consigue la penetración del vapor a través de toda la carga a esterilizar, liberándose calor latente que destruye los
microorganismos.
Para
una
correcta
esterilización no debe quedar aire dentro del autoclave ya que el vapor al mezclarse con el aire no podrá llegar a todos los puntos de la carga a esterilizar.
cuidadosamente establecido en función de los materiales a esterilizar. Se define así mismo el tiempo de retención como: El tiempo necesario que asegura que todas las esporas bacterianas resistentes han muerto. www.biotecnologiahospitalaria.com
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-Óxido de etileno: es un gas muy penetrante y altamente explosivo a concentraciones en el aire Suele resolverse este problema realizando
mayores del 3% (la concentración máxima segura
el vacío en la cámara del autoclave antes de
en aire es de unas 10 ppm. en volumen). La acción
comenzar la esterilización. El vapor debe ser puro
esterilizante del óxido de etileno está en función
y saturado, sin partículas, y estar en equilibrio con
del tiempo, temperatura, humedad relativa y
el agua a una determinada temperatura. Se pueden
presión del gas. La acción del oxido de etileno se
programar diferentes ciclos para cada tipo de
atribuye a su poder alquilante de los grupos
material a esterilizar.
sulfhidrilo, amino, carboxilo e hidroxilo de las moléculas proteicas. Es efectivo contra todo tipo
Antes de usar por primera vez un autoclave
de microorganismos, incluyendo virus y esporas
y al menos una vez al año durante la vida del
bacterianas. En los autoclaves basados en este
equipo, debe efectuarse una validación de todos
compuesto, el óxido de etileno se utiliza mezclado
los programas del mismo para confirmar que
con
realiza correctamente su función esterilizadora.
clorofluorocarbonos, en la actualidad dióxido de
-Esterilización mediante radiaciones ionizantes: de
carbono principalmente) sometido a diferentes
alta energía, particularmente la radiación g,
temperaturas según qué se quiera esterilizar (hasta
utilizada para la esterilización de materiales que
60ºC y en concentraciones de 1.2 a 1.4 mg/litro).
no toleran las altas temperaturas y que pueden ser
Los ciclos pueden durar desde 1 hasta 18 horas
atacados
para aquellos materiales que permitan una menor
por
los
desinfectantes
químicos.
otros
gases
de
soporte
(clásicamente
Múltiples elementos plásticos de uso frecuente en
penetración del gas.
los laboratorios se esterilizan mediante este
-Esterilización con formaldehído: normalmente, se
procedimiento, así como algunos piensos para la
utiliza para aquellos materiales que no pueden
alimentación de los animales.
esterilizarse en autoclave de vapor, bien por su tamaño o porque no resisten temperaturas elevadas. La acción esterilizante del formaldehído se debe a su propiedad de reaccionar con los grupos
amino
produciendo
de un
las
moléculas
efecto
letal
proteicas
sobre
los
microorganismos, tanto en estado vegetativo como esporulados. La concentración debe ser del orden de 2 mg/litro. Actualmente esta prohibido.
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7. MANEJO DE RESIDUOS
Del mismo modo que ocurre en muchos otros campos, no existe sin embargo una
Como inevitable resultado de la actividad en los centros de investigación o unidades de producción animal se generará una importante cantidad de residuos. Su correcta gestión y eliminación no es algo trivial, ni desde un punto de vista técnico ni desde la perspectiva de la seguridad y el riesgo laboral.
normativa específica referente al tratamiento y eliminación de residuos en los animalarios. La legislación aplicable a este tipo de instalaciones, además de cualquier legislación de ámbito nacional, autonómico o local sobre residuos en general, es la referente a residuos biosanitarios, tóxicos
(incluyendo
particularmente
a
los
citotóxicos) y peligrosos. En cuanto al material Además de los obvios riesgos físicos inherentes a su manejo, idénticos a los que pueda
radiactivo, toda gestión de residuos en España se hace a través de ENRESA.
implicar cualquier otro material o carga, resulta evidente que los residuos contendrán aquellos agentes químicos, biológicos o radiactivos que se hayan estado manipulando en la instalación y, por lo tanto, deberán ser tratados con las mismas (o incluso superiores) consideraciones de seguridad que apliquemos a cualquier labor de la instalación, tanto por el bien del personal como del medio ambiente y la comunidad en general (Martí y Alonso, 1995). Es precisamente debido a este impacto sobre la comunidad que el tema de gestión de residuos se encuentra intensamente legislado.
Dentro de la sección de legislación que se encuentra al final del capítulo se incluye una recopilación de algunas de las principales disposiciones legales sobre el tema en el ámbito español. Dado las diferencias existentes entre comunidades autónomas y a la continua aparición de nueva legislación acerca de estos aspectos, es imprescindible
mantener
una
actualización
permanente. Existen NTP elaboradas por el INSHT que tratan el tema de los residuos y pueden servirnos de guía general para el tratamiento seguro de los mismos. Podemos citar: • NTP 372 Sobre residuos sanitarios. • NTP 480 Sobre residuos en laboratorios e investigación. • NTP 359 Sobre residuos tóxicos en pequeñas cantidades.
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La gestión de los residuos es, como el resto de los aspectos de la seguridad, tarea de todos. Se
Las labores de transporte, almacenamiento,
inicia en el momento mismo de su producción y
tratamiento (si procede) y eliminación desde la
termina cuando el residuo ha sido destruido o
instalación, serán normalmente desarrolladas por
inactivado de forma segura para la comunidad y el
personal auxiliar o de limpieza. La labor en la que
medio ambiente. Las diferentes acciones que
todo el personal, y muy especialmente el dedicado
abarca esta gestión pueden resumirse como sigue:
a la investigación, es la de segregación en origen,
• Segregación (recogida selectiva) del residuo en
exigiendo si fuere necesaria a los órganos de
el mismo momento de su generación.
gestión de los centros la dotación de los medios
• Transporte y almacenamiento en la instalación
necesarios para llevarla a cabo.
productora. • Tratamiento previo a la eliminación. • Eliminación del residuo (de la instalación productora). • Eliminación definitiva del residuo. El concepto mismo de segregación implica la existencia de diferentes categorías de residuos que se pueden separar en origen. La eliminación definitiva del residuo no compete
a
la
instalación
productora.
Clásicamente, no obstante, algunos centros han estado equipados con incineradoras para cubrir esta etapa final. El creciente rigor de las disposiciones
medioambientales
hace
poco
recomendables este tipo de instalaciones, tanto por motivos de eficacia como por costes económicos, siendo la solución preferente el contar con un gestor autorizado que centralice esta labor.
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN LOS ANIMALARIOS
• Real Decreto 783/2001, de 6 de Julio, por el que se aprueba el Reglamento sobre protección LEGISLACIÓN
sanitaria contra radiaciones ionizantes (BOE 26/07/2001).
De carácter general
• Real Decreto 1836/1999, de 3 de diciembre, por
• Ley 31/1995 de prevención de riesgos laborales
el
que desarrolla la Directiva Marco 89/391/CEE de
Instalaciones Nucleares y Radiactivas (BOE
12 de junio de 1989 y desarrolla el artículo 40.2
31/12/1999).
de la Constitución. Protección frente agentes
Tratamiento y eliminación de residuos
químicos, biológicos o radiológicos
• Ley 42/1975, sobre recogida y tratamiento de
• Real Decreto 665/1997 sobre la protección de
residuos sólidos urbanos, modificada por el Real
los trabajadores contra los riesgos relacionados
Decreto 1163/1986 para la inclusión de los
con la exposición a agentes cancerígenos durante
residuos sanitarios, pero excluyendo productos
el trabajo.
tóxicos, contaminantes y peligrosos.
• Real Decreto 53/1992 de aprobación del
• Ley 20/1986 Básica de residuos tóxicos y
reglamento sobre protección sanitaria contra
peligrosos
radiaciones ionizantes.
• Real Decreto 833/1988 que aprueba el
• Real Decreto 664/1997 sobre la protección de
Reglamento para la ejecución de la Ley 20/1986
los trabajadores contra los riesgos relacionados
• Real Decreto 952/1997 que modifica el
con la exposición a agentes biológicos durante el
Reglamento para la ejecución de la ley 20/1986
trabajo; modificado por la Orden de 25 de marzo
• Ley 10/1998 de Residuos
de 1998.
• Directiva europea 75/442/CEE, relativa a
• Directiva 90/679/CEE sobre la protección de los
residuos, modificada por la directiva 91/156/CEE.
trabajadores contra los riesgos relacionados con la
• Directiva europea 78/319/CEE, relativa a
exposición a agentes biológicos durante el trabajo
residuos tóxicos y peligrosos.
modificada para su adaptación al progreso técnico
• Directiva europea 91/689/CEE, relativa a
sucesivamente por las directivas 93/88/CEE,
residuos peligrosos incluyendo residuos sanitarios.
que
se
aprueba
el
Reglamento
sobre
97/59/CEE y 97/65/CEE. Radiaciones ionizantes • Real Decreto 1891/1991, de 30 de diciembre, por el que se aprueba el Reglamento sobre Aparatos de Rayos X (BOE 03/01/1992).
El objetivo del presente trabajo es realizar una reflexión sobre de la aplicación de la legislación española a la hora de realizar la evaluación del riesgo biológico en unidades de aislamiento de alto nivel y establecer medidas preventivas.
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Revisión de las características constructivas de un laboratorio de microbiología clínica e investigación biomédica, con instalaciones de bioseguridad BSL3.
SEGLA Biotecnología Hospitalaria ha sido reconocida como WEB MEDICA ACREDITADA (WMA) en el Programa de Certificación de Calidad de webs médicas del Colegio Oficial de Médicos de Barcelona.
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