Automatización de las pruebas de química sanguínea by Medicina Veterinaria JDC

AUTOMATIZACIÓN DE LAS PRUEBAS DE QUÍMICA SANGUÍNEA EN EL LABORATORIO CLÍNICO VETERINARIO MICROZOO DE LA CIUDAD DE TUNJA (BOYACÁ)

ARCADIO AVELLO MONROY

FUNDACIÓN UNIVERSITARIA JUAN DE CASTELLANOS FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA TUNJA 2011

AUTOMATIZACIÓN DE LAS PRUEBAS DE QUÍMICA SANGUÍNEA EN EL LABORATORIO CLÍNICO VETERINARIO MICROZOO DE LA CIUDAD DE TUNJA (BOYACÁ)

ARCADIO AVELLO MONROY

Proyecto de Desarrollo Tecnológico

Director del Proyecto MAURICIO BOYACÁ QUINTANA Médico Veterinario y Zootecnista UPTC Especialista en Laboratorio Clínico UDCA

FUNDACIÓN UNIVERSITARIA JUAN DE CASTELLANOS FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA TUNJA 2011 2

Nota de aceptaci贸n

______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________

______________________________ Firma del Director

______________________________ Firma del Jurado

Tunja, Noviembre del 2011 3

DEDICATORIA

A Dios y a la Virgencita quienes me dieron la fe, la fortaleza, la salud y la esperanza para terminar este proyecto.

A mi adorado hijo Arcadio Joseph quien me prestó el tiempo que le pertenecía para terminar y me motivó siempre con sus sonrisas, miradas de amor y cariño

A mis padres, María Gladys y Arcadio quienes me enseñaron desde pequeño a luchar y a trabajar para alcanzar mis sueños. Mi éxito es el de ustedes, ¡los amo!

A mi esposa, Diana Carolina Castañeda quien me brindó su amor, su cariño, su comprensión, y su apoyo constante.

A mis queridos hermanos, Cristian y Felipe, quienes cuidaron y vieron de mi trabajo mientras realizaba mis estudios ¡Gracias! Sin ustedes no hubiese podido hacer realidad este sueño.

A mis abuelitos que así estén en el cielo se que sienten orgullosos y muy contentos de mis éxitos. Promesa cumplida.

A los que nunca dudaron que lograría este triunfo y a toda mi familia los cuales me han acompañado en mi proceso de formación apoyándome y motivándome con sus concejos ¡Gracias!

AGRADECIMIENTOS Agradezco al doctor Mauricio Boyacá y a la doctora Mónica Liliana Niño quienes me permitieron trabajar con ellos para logra este proyecto, quienes me facilitaron sus instalaciones y me brindaron su apoyo para que el éxito tanto mío como el del laboratorio continúe creciendo.

De igual forma agradezco también al grupo de docentes de la Fundación Universitaria Juan de Castellanos, los cuales me ayudaron y colaboraron arduamente en mi proceso de formación personal y profesional durante mis años de estadía en el plantel.

Agradecimientos a mis jurados los cuales me brindaron su paciencia y su colaboración para que los resultados de este proyecto fueran los apropiados para que mis metas se hayan cumplido.

Y por último agradezco a mis amigos, compañeros y colegas de la Fundación Universitaria Juan de Castellanos, con los cuales compartí muchas experiencias las cuales me permitieron superarme, gracias a todos por compartir tantos momentos y gracias por permitirme ser parte de ellos.

CONTENIDO

Pág. INTRODUCCIÓN

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

2. OBJETIVOS

2.1 GENERAL

2.2 ESPECÍFICOS

3. MARCO REFERENCIAL

3.1 ESTADO DEL ARTE

3.1.1 La eficiencia de la automatización del laboratorio clínico como herramienta de apoyo en el diagnostico de enfermedades

3.1.2 El logro de la eficiencia mediante la automatización del laboratorio

3.2 MARCO TEÓRICO

3.2.1 Automatización de laboratorios

3.2.2 Analizadores químicos

3.2.3 Analizador semiautomático BTS-350

3.2.4 Toma de muestra

3.2.5 Punción y sitios de punción

3.2.6 Transporte de la muestra

3.2.7 Manejo de la muestra

3.2.8 Plasma

3.2.9 Suero

3.2.10 Conservación de la muestra

3.2.11 Spectronic 20

3.2.12 Determinaciones bioquímicas

41 6

3.2.13 Procedimientos operativos estandarizados con el spectronic 20

3.3 MARCO GEOGRÁFICO

3.3.1 División política

3.3.2 Límites con los pueblos vecinos son los siguientes

3.3.3 Situación geográfica y relieve

3.3.4 Demografía

3.4 MARCO LEGAL

3.4.1 Resolución número 01164 de 2002

3.4.2 Decreto 2676 de 2000

3.4.3 Resolución 1599 de 2007

3.4.4 Decreto número 1220

4. METODOLOGÍA

4.1 TIPO DE ESTUDIO

4.2 DESCRIPCIÓN DEL TAMAÑO DE LA MUESTRA

4.3 CAPACITACIÓN

4.4 PLAN DE ACTIVIDADES PARA EL DESARROLLO METODOLÓGICO

5. RESULTADOS

5.1 IDENTIDAD MICROZOO

5.2 DIAGNOSTICO

5.2.1 Selección del equipo

5.2.2 Resultado del diagnóstico 6. RESULTADO Y ANÁLISIS ESTADÍSTICO

6.1 PRIMER MUESTREO DETERMINADO POR EL PROGRAMA ESTADÍSTICO WIN EPISCOPE 2.0.

6.2 SEGUNDO MUESTREO DETERMINADO ESTADÍSTICO WIN EPISCOPE 2.0

POR

PROGRAMA

6.3 DISCUSIÓN

7. ESTANDARIZACIÓN DE LOS NUEVOS PROCESOS EN LAS PRUEBAS DE QUÍMICA SANGUÍNEA DEL LABORATORIO MICROZOO

7.1 IMPLEMENTACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTANDARIZADOS (POE), DE QUÍMICA SANGUÍNEA INHERENTES AL EQUIPO BTS350

7.2 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA DE CREATININA

7.3 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA BUN/COLOR

7.4 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA ALT/GPT

7.5 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA DE FOSFATASA ALKALINA AMP/ALP

7.6 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA AST/GOT

7.7 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA y-GT

8. CONCLUSIONES

9. IMPACTO

10. RECOMENDACIONES

BIBLIOGRAFÍA

ANEXOS

LISTA DE CU ADRO S

Pág. Cuadro 1.Procedimiento para la prueba de Urea

Cuadro 2. Procedimiento para la prueba de Creatinina

Cuadro 3. Procedimiento para la prueba de BUN

Cuadro 4. Procedimiento para la prueba de Transaminasa Glutamica piruvica (GPT- ALT)

Cuadro 5. Procedimiento para la prueba de Transaminasa Glutamica Oxalacetica (GOT - AST)

Cuadro 6. Procedimiento para la prueba de Fosfatasa Alkalina

Cuadro 7. Principio activo de los reactivos A y B utilizados en las pruebas de química sanguínea del presente estudio.

Cuadro 8. Primer muestreo de acuerdo al programa estadístico win episcope 2.0, Esquema de pruebas de química sanguínea

Cuadro 9. Segundo muestreo de acuerdo al programa estadístico win episcope 2.0, Esquema de pruebas de química sanguínea

Cuadro 10. Porcentaje de pruebas recepcionadas los días sábados del mes de Junio del 2011

Cuadro 11. Ficha técnica de los equipos para pruebas de química sanguínea

Cuadro 12. Variables utilizadas en el proyecto de automatización tecnológico

LISTA DE FIGUR AS

Pág. Figura 1. Equipo BTS 350

Figura 2. Sistema integrado de Leeds

Figura 3. Aspirado de la muestra

Figura 4. Bomba peristáltica

Figura 5. Sistema de termostatación

Figura 6. Puerto USB

Figura 7. Pantalla de lectura

Figura 8. Esprectronic 20

Figura 9. Compartimiento para muestra

Figura 10. Registrador

Figura 11. Flujo grama, POE para pruebas de química sanguínea con el SPECTRONIC 20

Figura 12. Mapa del departamento de Boyacá

Figura 13. Mapa de la ciudad de Tunja

Figura 14. Zona de pruebas de química sanguínea.

Figura 15. Bomba peristáltica

Figura 16. Depósito de residuos.

Figura 17. Manqueras siliconas.

Figura 18. Procesamiento de la prueba de creatinina.

Figura 19. Impresión de resultados

Figura 20. Recomendaciones de mantenimiento.

Figura 21. Flujo grama, POE para pruebas de química sanguínea con el BTS 350

Figura 22. Resultado de la prueba de creatinina

Figura 23. Resultado de la prueba de BUN/COLOR

Figura 24. Resultado de la prueba de ALT/GPT

Figura 25. Resultado de la prueba de AMP/ALP

LISTA DE GR ÁFI C AS

Pág. Grafica 1. Utilización de reactivos con el SPECTRONIC 20

Grafica 2. Utilización de reactivos con el BTS 350.

Grafica 3. Utilización de las variables de tiempo con el SPECTRONIC 20.

Grafica 4. Utilización de las variables de tiempo con el BTS 350.

Grafica 5. Utilización de reactivos con el SPECTRONIC 20

Grafica 6. Utilización de reactivos con el BTS 350

Grafica 7. Utilización de las variables de tiempo con el SPECTRONIC 20.

Grafica 8. Utilización de las variables de tiempo con el BTS 350

LISTA DE ANEXOS

Pág. Anexo A. Recopilación de datos del laboratorio clínica veterinario

Anexo B. Cotizaciones

Anexo C. Tamaño de la nuestra programa WIN EPISCOPE 2.0.

Anexo D. Llegada del equipo al laboratorio clínico veterinario Microzoo

Anexo E. Capacitación del nuevo equipo BTS 350

Anexo F. Organigrama del laboratorio clínico veterinario Microzoo

Anexo G. Misión y visión del laboratorio clínico veterinario Microzoo

Anexo H. Presentación de los reactivos

GLOSARIO

ALBÚMINA SÉRICA: es la proteína plasmática más abundante (60%), utilizada para el transporte de proteínas, ácidos grasos, hormonas, fármacos, etc. Se sintetiza en el hígado.

AUTOMATIZACIÓN: (automatización; del griego antiguo auto: guiado por uno mismo) es el uso de sistemas o elementos computarizados y electromecánicos para controlar maquinarias y/o procesos industriales sustituyendo a operadores humanos.

ASPARTATO AMINOTRANSFERASA O AST: antes conocida como transaminasa glutámico-oxalacética (GOT), también llamada aspartato transaminasa (AST) es una enzima aminotransferasa que se encuentra en varios tejidos del organismo de los mamíferos, especialmente el corazón, el hígado y el tejido muscular.

BILIRRUBINA: pigmento biliar de color anaranjado, que se produce por reducción de la biliverdina. Cuando su nivel en la sangre es alto, provoca la aparición de ictericia.

BIOSENSOR: es un instrumento para la medición de parámetros biológicos o químicos. Suele combinar un componente de naturaleza biológica y otro físicoquímico.

BOMBA PERISTÁLTICA: es un tipo de bomba de desplazamiento positivo, es decir, tiene una parte de succión y otra de expulsión, por lo que es utilizada para bombear una gran variedad de fluidos. El fluido es transportado por medio de un tubo flexible colocado dentro de una cubierta circular de la bomba

BUN: siglas inglesas de blood urea nitrogen (nitrógeno ureico plasmático), que corresponde a la cantidad de nitrógeno que forma parte de la urea plasmática. Es una medida imprecisa de la función renal. Su valor es aproximadamente la mitad del de la urea (BUN = = urea/2,14) y su concentración sérica varía entre 5-20 mg/dl. Su valor puede elevarse por insuficiencia renal, una ingesta proteica elevada, el aumento del catabolismo proteico, la presencia de sangrado gastrointestinal y los estados de deshidratación.

CENTRIFUGACIÓN: es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una fuerza rotativa , la cual imprime a la mezcla con una fuerza mayor que la de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad.

CREATININA: producto final del metabolismo de la creatina. Se encuentra en los músculos y en la sangre y se elimina por la orina.

ESPECTROFOTOMETRÍA: es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

FOSFATASA ÁCIDA: hidrolasa que cataliza la reacción del monoéster ortofosfórico y del agua, dando como resultado alcohol más ortofosfato. Es más activa a un pH inferior a 7. Esta enzima se encuentra elevada, de forma considerable, en el cáncer de próstata.

FOSFATASA ALCALINA: a diferencia de la ácida, actúa mejor en un pH alcalino (9,3) y está presente en bastantes órganos, además de en el plasma.

GLUCOSA: Monosacárido de la familia de las aldohexosas y principal azúcar del que se derivan la mayoría de los glúcidos.

LABORATORIO: lugar que se encuentra equipado con los medios necesarios para llevar a cabo experimentos, investigaciones o trabajos de carácter científico o técnico. En estos espacios, las condiciones ambientales se encuentran controladas y normalizadas para evitar que se produzcan influencias extrañas a las previstas que alteren las mediciones y para permitir que las pruebas sean repetibles.

ORINA: líquido excretado por los riñones, cuya composición es bastante estable, si bien la proporción de los distintos componentes varía según la dieta. En condiciones normales es transparente, de un color anaranjado y ligeramente ácido. Su principal componente (además del agua) es la urea (unos 82 g/día). La composición patológica de la orina puede orientar en el diagnóstico de diversas enfermedades. 15

QUÍMICA SANGUÍNEA: es la medición y reporte de los componentes químicos disueltos en la sangre, en el suero es donde están disueltos los componentes que se analiza. Es un conjunto de exámenes de sangre que suministran información acerca del metabolismo del cuerpo.

REACTIVO: es, en química, toda sustancia que interactúa con otra en una reacción química que da lugar a otras sustancias de propiedades, características y conformación distinta, denominadas productos de reacción o simplemente productos.

SANGRE: líquido que circula por el sistema cardiovascular. Es el intermediario entre el exterior y los tejidos: a la sangre van a parar, los alimentos digeridos y el oxígeno del aire que respiramos, y, por otra, los catabólitos que el metabolismo genera y que han de ser expulsados por el riñón y los pulmones.

SEMIAUTOMATIZACIÓN: es el implementar en un proceso manual algunos pasos automáticos pero sin que estos hagan todo el proceso. Lo que quiere decir que este proceso aun tendrá pasos manuales o dependientes de mano de obra humana. Por lo que dependerá de que los dos procesos se ejecuten simultáneamente o en sus dependencias.

SISTEMATIZACIÓN: proceso constante y aditivo de elaboración de conocimiento luego de la experiencia en una realidad específica. Consiste en el primer nivel de teorización de la práctica.

SUERO: líquido que queda después de eliminar los elementos sólidos de la sangre

UREA: compuesto que se forma a partir del amoniaco, a nivel hepático. Es el principal catabólito del metabolismo de las proteínas.

RESUMEN

La automatización de las pruebas de química sanguínea en el laboratorio clínico veterinario Microzoo, soluciona los exámenes requeridos por los médicos veterinarios de las diferentes entidades que ofrecen servicios de la salud animal, en el departamento de Boyacá y principalmente los de la ciudad de Tunja. El laboratorio clínico veterinario, dentro de su plan de mejoramiento tecnológico continuo, cambió el equipo de química sanguínea semiautomatizado (Spectronic 20 Milton Roy Company) por el equipo automatizado y sistematizado (BTS 350 Biosystems), el cual cuenta con software exclusivo para uso de laboratorio clínico veterinario especializado. El tipo de estudio utilizado en este proyecto es de tipo comparativo y analítico, describiendo de forma detallada, la eficiencia de ambos espectrofotómetros de forma individual, con el propósito de evaluar las ventajas y desventajas de los equipos utilizados en el laboratorio para realizar las diferentes pruebas de química sanguínea que se realizan por día. Para poder determinar el tamaño de la muestra del presente trabajo se obtuvo información de la base de datos del laboratorio, determinando que el universo del proyecto son las diferentes clínicas veterinarias de la ciudad, que la población son la cantidad de muestras recibidas en un día por el laboratorio y al final el tamaño de la muestra fue establecido por el programa estadístico WIN EPISCOPE 2.0, que dio un nivel de confianza del 90%, un margen de error del 95% y dando un total de 12 muestras representativas para la realización de la automatización de las pruebas en el laboratorio. Al obtener el nuevo equipó de química sanguínea, se realizaron pruebas simultaneas con el actual equipo y se logro demostrar la reducción significativa hasta en un 40% a 50% del volumen de la muestra y de reactivos, que se requieren para procesar las pruebas de creatinina y BUN entre otras, demostrando notablemente el alto rendimiento del espectrofotómetro (BTS 350 Biosystems) automatizado, frente al existente (Spectronic 20 Milton Roy Company) semiautomatizado, de entre otras variables que supero el nuevo equipo fue la de disminuir los tiempos de procesamiento, los periodos de incubación, la entrega de resultados, y a su vez favoreció en un costo beneficio para el laboratorio como para las clínicas veterinarias de la ciudad.

Palabras Clave: Automatización, Sistematización, Seminautomatizción, Laboratorio Clínico Veterinario, Química sanguínea, espectrofotometría.

ABSTRACT

The automated blood chemistry tests in the clinical laboratory Microzoo veterinarian, solves the tests required by the veterinarians of the different entities that provide animal health services in the department of Boyacรก and especially the City of Tunja. The clinical laboratory veterinarian, within its continuous technology improvement plan, change the semi-automated blood chemistry equipment (Milton Roy Company Spectronic 20) by automated equipment and systematized (BTS 350 Biosystems), which has proprietary software for laboratory use clinical veterinarian. The type of study used in this project is comparative, analytical type, describing in detail the efficiency of both individual spectrophotometers, in order to evaluate the advantages and disadvantages of the equipment used in the laboratory for various Tests blood chemistry that are made per day. To determine the sample size of this study information was obtained from the laboratory database, determining that the universe of the project are different veterinary clinics in the city, the population is the number of samples received in one day the laboratory and in the end the sample size was established by the statistical program BISHOPS WIN 2.0, which gave a confidence level of 90%, a margin of error of 95% and giving a total of 12 samples for carrying out the test automation in the laboratory. When you get the new team of blood chemistry tests were performed simultaneously with the current team and achievement demonstrate the significant reduction up to 40% to 50% of the volume of sample and reagents, which are required to process creatinine tests and BUN among others, demonstrating remarkably high performance of the spectrophotometer (350 BTS Biosystems) automated, compared to existing (Milton Roy Company Spectronic 20) semiautomated, among other variables exceeded the new team was to decrease processing times, the incubation periods, the delivery of results, and in turn encouraged a cost benefit to the laboratory and veterinary clinics in the city.

Keywords: Automation, Systematized, Seminautomatizado, Veterinary Clinical Laboratory, Blood chemistry, spectrophotometry.

INTRODUCCIÓN

Los laboratorios clínicos tienen poco más de 100 años de existencia durante los cuales han experimentado una gran evolución. A comienzos de los años sesenta el número de pruebas que se realizaban en los laboratorios clínicos era reducido; La mayoría de los reactivos se preparaban en el propio laboratorio y los métodos analíticos eran en general poco específicos, con gran cantidad de interferencias y errores. Los laboratorios clínicos, han sufrido cambios profundos: la producción industrial de equipos, de reactivos y la automatización que hizo posible procesar la gran cantidad de pruebas que comenzaba a solicitarse a los laboratorios clínicos.

Durante los años setenta y ochenta siguió creciendo el número de solicitudes por parte de los clínicos, así como su presión para reducir los tiempos de respuesta, lo que llevó a la construcción de equipos analíticos muy potentes con una elevada capacidad de procesos simultáneos, lo que mejoraba los métodos analíticos y se hacía posible un número mayor de determinaciones diferentes en los analizadores automáticos. La automatización ha influido decisivamente en el desarrollo de nuevos métodos y pruebas.

Los laboratorios clínicos veterinarios han evolucionado de manera extraordinaria en todos sus aspectos, ya que con la aparición de la tecnología y del interés de los médicos veterinarios por encontrar prontas soluciones a patologías, aparece la automatización en el laboratorio clínico veterinario Microzoo de la ciudad de Tunja para proporcionar resultados rápidos y confiables. Es acá donde la automatización del laboratorio es un fenómeno que va en aumento, ya que un proceso aplicable a todas las etapas del proceso analítico; el uso de la computación, la incorporación de automatización con el nuevo equipo para pruebas de química sanguínea BTS 350(biosystems) proporciona una serie de ventajas mejorando la eficiencia y la capacidad productiva en beneficio de los pacientes, de los profesionales en veterinaria y del propio laboratorio.

La automatización permitió describir los sistemas y los dispositivos que se utilizan en el laboratorio clínico veterinario Microzoo para realizar las diferentes pruebas de química sanguínea, la automatización del espectrofotómetro ha permitido hacer frente a la enorme carga de trabaja que se ha producido. Al mismo tiempo, se ha reducido la variabilidad de los resultados y los errores inherentes al trabajo manual humano se reducen.

Las pruebas de química sanguínea que se realizan en el laboratorio clínico, muestran mucho más allá, de lo que se puede ver en un examen semiológico de rutina, ya que muchas enfermedades inician su desarrollo sin que se presente un signo o síntoma, es por eso que el médico veterinario se encuentra en la necesidad de tomar muestras y enviarlas al laboratorio en donde se procesan y permite apreciar agentes causales de patologías.

El laboratorio clínico es uno de los mejores recursos que posee las clínicas veterinarias de la ciudad, como ayuda diagnóstica para la orientación de algunas causas patológicas que aquejan y afectan constantemente a los animales, se puede decir que a partir de estas, el médico veterinario podrá tomar una decisión en cuanto al diagnóstico y tratamiento a seguir, pensando siempre en el bienestar y en el mejoramiento de la calidad de vida de los animales y de los propietarios.

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

El laboratorio clínico veterinario Microzoo en la actualidad cuenta con un equipo de química sanguínea cuyo principio es la espectrofotometría, con termostatación externa, el cual hace que el operario clínico tenga mayores dificultades con respecto al procesamiento de las diferentes pruebas, agregando a los resultados un estrecho margen de error humano, dentro de las dificultades en el procesamiento se incluyen: la atemperación de los reactivos por incubación, seguido de preparación del punto de referencia, la preparación del equipo en un mínimo de tiempo de 20 a 30 minutos según el analito, y posteriormente con la preparación del reactivo y del suero a trabajar.

Todo este proceso toma tiempo valioso, tanto para el operario como para el médico veterinario y su paciente, con respecto a la entrega de resultados, además el elevado costo de las diferentes pruebas de química sanguínea no permiten que el personal calificado en las ciencias de la salud animal actué de forma correcta con el proceder de una ayuda para clínica como esta, hacen que los propietarios de las mascotas se nieguen a cubrir los gastos debido a la incapacidad económica, pues estos exámenes en ocasiones aumentan el precio de consulta y retrasan al médico veterinario con respecto a la toma de decisiones.

La automatización de las pruebas de química sanguínea es una de las mejores innovaciones tecnológicas que el laboratorio clínico veterinario Microzoo puede realizar. Si el laboratorio logra adquirir el muevo y mejorado espectrofotómetro BTS 350 (Biosystems), este puede cumplir con eficiencia las demandas y peticiones de los médicos veterinarios, y su vez lograr competir con los laboratorios humanos, ya que estos poseen equipos de última tecnología, ofreciendo servicio a las clínicas veterinarias con pruebas de química sanguínea a bajo costo, con entrega de resultados más rápida y un más confiable resultado por la eficiencia de la automatización con la que cuenta.

2. OBJETIVOS

2.1 GENERAL

Automatizar las pruebas de química sanguínea en el laboratorio clínico veterinario Microzoo, como forma de incorporar un mejoramiento tecnológico a la institución.

2.2 ESPECÍFICOS  Realizar un diagnostico del sistema tecnológico con el que cuenta el laboratorio para el procesamiento de las diferentes pruebas de química sanguínea.  Evaluar comparativamente la eficiencia de los equipos en cuanto a cantidad de reactivo utilizado, volumen de muestras y tiempo de procesamiento de las pruebas de química sanguínea.  Estandarizar los procesos tecnológicos de los equipos a las condiciones del laboratorio y de las pruebas de química sanguínea.

3. MARCO REFERENCIAL

3.1 ESTADO DEL ARTE

3.1.1 La eficiencia de la automatización del laboratorio clínico como herramienta de apoyo en el diagnostico de enfermedades. El laboratorio clínico es una especialidad de apoyo. Debido a que este lugar se encuentra debidamente equipado con los medios y aparatos necesarios para llevar a cabo experimentos, investigaciones o trabajos de carácter científico o técnico. En estos espacios, las condiciones ambientales se encuentran controladas y normalizadas para evitar que se produzcan influencias extrañas a las previstas que alteren las mediciones y para permitir que las pruebas sean repetibles.

Por tanto, el principal rol del médico especialista en laboratorio clínico es trabajar como interconsultor y relacionarse con médicos de las diferentes especialidades, sugiriendo estrategias diagnósticas costo/efectivas y colaborando en la interpretación de resultados de exámenes. Dentro del laboratorio, las funciones del especialista en laboratorio clínico están enfocadas a seleccionar y evaluar los distintos métodos, supervisando su correcta implementación. (González, 2010).

Por tal motivo es necesario contar con personal profesional y capacitado el cual logre desarrollar, interpretar y emitir los diferentes procesos, que se utilizan para realizar las diferentes pruebas de química sanguínea, dentro de algunas de las funciones del médico laboratorista están las de:  Asegurar la calidad de los resultados generados por el laboratorio.  Participar en el desarrollo e implementación de sistemas informáticos, planificar, organizar y dirigir un laboratorio, administrándolo eficientemente.  Desarrollar pruebas de hematología y análisis de química sanguínea (contadores automatizados, morfología celular sanguínea y de otros fluidos, enfermedades de la serie roja, blanca y plaquetas, trastornos de la coagulación, coprólogicos y análisis de orina, etc.).

 Realizar microbiología (bacteriología, parasitología, micología, virología, identificación y susceptibilidad bacteriana, etc.).  Elaborar Medicina transfusional (donación, preparación de componentes, transfusiones y reacciones adversas, procedimientos de aféresis, etc.).  Administración (liderazgo, trabajo en equipo, herramientas financieras, gestión de calidad, etc.).  Manejar la informática (sistemas informáticos de laboratorio, trabajo en red, seguridad y resguardo de la información, etc.).

A pesar de que se realizan esfuerzos importantes por acercar al médico clínico a los conceptos de la Medicina de Laboratorio, en el ámbito latinoamericano esta nueva especialidad no ha logrado insertarse totalmente dentro de la práctica clínica y todavía no es costumbre consultar al médico de Laboratorio Clínico (Guzmán, Quiroga, 2009).

3.1.2 El logro de la eficiencia mediante la automatización del laboratorio. La automatización en el laboratorio por lo general significa la optimización de flujo de trabajo para incrementar la producción, acortando los tiempos de entrega de los informes resultado de las pruebas, y utilizar menos mano de obra. Los intentos de lograr estos objetivos se han centrado en la aplicación de instrumentos y computadoras. Sin embargo, la automatización no ha alcanzado en todos los laboratorios las mejoras perspectivas esperadas en la eficiencia. (Guzmán, Quiroga, 2009).

En consecuencia, la automatización no siempre significa que sustituye a todas las actividades manuales en el laboratorio. Este problema se ve agravado por la incapacidad de los sistemas de instrumentación para acomodar los cambios en los patrones de flujo de trabajo diario del laboratorio. La automatización será cada vez más crucial para los laboratorios clínicos que deseen alcanzar mayores niveles de productividad y eficiencia con respecto a costos.

La automatización ayuda a racionalizar el flujo de trabajo en los procesos de las diferentes pruebas que se realizan en los centros de diagnostico clínico, con menos interacción de manos, lo que puede reducir significativamente los costos y 24

errores, y disminuir la necesidad de mano de obra calificada. A su vez la automatización puede ayudar a aliviar la espera por la escasez de mano de obra provocada por la jubilación de personal calificado.

Uno de los principales motivadores para el aprovechamiento de automatización de laboratorios involucra la reducción de los pasos que no generan ningún valor añadido, incluidos los procesos tales como la clasificación de tubos, destape de los mismos, su centrifugado, la carga en los analizadores, y la preparación y clasificación de materiales para su almacenamiento”. (González, 2010).

Los pasos que no añaden valor por lo general pueden ser abordadas por los sistemas automatizados, lo que libera tiempo de los técnicos. Debido a que la mano de obra representa más del 60% del costo para producir resultados de análisis, la automatización y mejores sistemas de gestión de la información pueden reducir efectivamente el trabajo manual, esto es los procedimientos con interacción manual en un laboratorio y optimizar la eficiencia del trabajo en el laboratorio. La automatización de un laboratorio aumenta el tiempo disponible para los pasos que suman valor (es decir, las tareas que realizan los técnicos que ayudan a hacer una diferencia en la calidad de los resultados de los análisis y en el diagnóstico), tales como la revisión de los resultados críticos y decidir repetirlos. (Guzmán, 2010).

La tendencia hacia la automatización de laboratorio clínico primero se inició a comienzos de la mitad de la década de 1990, gran parte de la discusión se centró sobre la automatización enfocada en la automatización de todas las funciones de laboratorio: la automatización total del laboratorio (TLA por sus siglas en inglés). Dirigida a los laboratorios más grandes, de más alto volumen, TLA requiere un importante compromiso financiero y el espacio para instalar los equipos. Pero TLA no es una solución accesible o práctica para la mayoría de los hospitales pequeños y medianos y otros laboratorios de diagnóstico. La tendencia de la mayoría de los laboratorios clínicos y para muchos fabricantes de sistema de automatización, es hacia la automatización gradual, que incluye analizadores consolidados e integrados, aparatos de trabajo independientes o puestos de trabajo autónomos, y la automatización para el transporte, la manipulación, y para los procesos pre y post-analíticos.” (Quiroga, 2010).

3.2 MARCO TEÓRICO

3.2.1 Automatización de laboratorios. La automatización de laboratorios es una estrategia multidisciplinaria para investigar, desarrollar, optimizar y aprovechar las tecnologías en el laboratorio, permitiendo los procesos nuevos y mejorados.

Los profesionales de la automatización del laboratorio son académicos, comerciales y gubernamentales investigadores, científicos e ingenieros que realizan investigación y desarrollo de nuevas tecnologías para:  Aumentar la productividad.  Elevar la calidad de los datos experimentales.  Reducir tiempos de ciclo del proceso de laboratorio.  Permitir la experimentación, que de otro modo sería imposible.

La aplicación más conocida de la tecnología de automatización de laboratorio es la robótica de laboratorio. De manera más general, el campo de la automatización de laboratorio comprende numerosos actos de laboratorio automatizados, algoritmos de software y las metodologías utilizadas para permitir, agilizar y aumentar la eficiencia y eficacia de la investigación científica en los laboratorios. La aplicación de la tecnología en los laboratorios en la actualidad, requiere alcanzar un progreso oportuno y seguir siendo competitivo. Los laboratorios dedicados a actividades como la selección de alto rendimiento, química combinatoria, pruebas automatizadas de análisis clínicos, diagnósticos, biodepósitos a gran escala y muchos otros, no existiría sin los avances en la automatización del laboratorio.

La automatización del laboratorio médico en el siglo XX puede calificarse de fantástica. Las nuevas aplicaciones de técnicas ya conocidas, la incorporación de la informática, la robótica, la biotecnología, la tecnología de los biosensores y la resonancia magnética nuclear han invadido todos los campos diagnósticos que conforman el actual laboratorio clínico multidisciplinario. Por citar solo un ejemplo, los analizadores, en cualquiera de sus variantes y diseños, han llevado los valores de precisión y exactitud a límites que jamás habrían sido alcanzados si se trabajara sin este desarrollo tecnológico. A esto se une el aumento de la productividad y la disminución, a corto y mediano plazo, de los costos.

La automatización en el laboratorio clínico se refiere a los procesos analíticos que son realizados por equipos, con la menor participación posible del ser humano. Las tecnologías desarrolladas en la actualidad tienen como resultado la aparición de una generación de sistemas analíticos en los cuales el instrumento, su funcionamiento y los reactivos constituyen una unidad funcional. Las operaciones realizadas por los analistas pasaron a ser ejecutadas por el sistema. Este desarrollo tecnológico en el campo del diagnóstico por parte del laboratorio clínico tiene en la actualidad más fuerza que nunca y tendrá que ser enfrentado por todos los profesionales de esta especialidad, quienes tienen la responsabilidad de prepararse para ello.

El proceso de automatización del laboratorio clínico sigue una evolución constante y es cada vez más complejo y sofisticado. Se trata de un proceso diversificado, dentro de unas líneas generales comunes que, dadas la necesidades específicas de cada laboratorio, admite diferentes planteamientos y soluciones es un proceso interdependiente, pues los sistemas analíticos deben relacionarse con componente mecánicos y electrónicos, con otros sistemas analíticos, con los sistemas de información y los operadores. Es un proceso continuo, pues los proyectos de automatización individuales no son más que etapas o fases dentro de un proceso de renovación, de crecimiento y renovación, de crecimiento y de integración.

3.2.2 Analizadores químicos. La historia de la automatización en los laboratorios comenzó en los primeros años de la década de los 50 del siglo XX, cuando Leonard Skeggs, bioquímico de la Western Reserve University en Cleveland, Ohio, se dio a la tarea de encontrar una solución al aumento en la carga de trabajo, unida a la escasez de personal calificado, que tuvo que enfrentar los laboratorios. Después de algunos años de intenso trabajo, se logro alcanzar la meta que se había propuesto y presentó su protocolo a varias compañías. La producción comenzó en el año de 1954. Había surgido el primer analizador y tenía el merito de ser un producto de origen químico clínico, no había sido tomado de ninguna otra disciplina. Sin estos equipos no habría sido posible, ni imaginarse siquiera, enfrentar la carga de trabajo de los laboratorios actuales, obligados a prestar servicios en hospitales de mil camas o más y a atender también a los pacientes ambulatorios de territorios extensos.

Los primeros analizadores que se encontraron en el mercado fueron los de flujo continuo. Estos se mantuvieron durante muchos años como únicos representantes de los nacientes analizadores y ayudaron a resolver, en parte, los problemas originados por el exceso de trabajo. En este tipo de analizador, las muestras se desplazaban una detrás de la otra, separadas por burbujas de aire en el interior de pequeñas mangueras flexibles, durante su recorrido las proteínas presentes se 27

eliminaban (diálisis) y también era posible la incubación al pasar las mangueras por baño de maría con la temperatura requerida. Los analizadores continuos alcanzaron una gran capacidad de procesamiento de muestras (750 muestras /hora) y eran capaces de realizarse a cada muestra más de 125 determinaciones.

A pesar de haber constituido un importante paso de avance, este tipo de analizador tiene algunos inconvenientes que condujeron a que no se continuara su fabricación. Entre ellos:  Arrastre: se trata de la contaminación que produce una muestra con valor elevado de un componente, sobre la que se sigue. Una muestra hiperglicémica contamina a la siguiente normoglicénica, esto ocurría para todos los componentes que se determinaban en el analizador.  Selectividad: un analizador es selectivo cuando el operador tiene la posibilidad de programarle al equipo qué análisis debe realizar a cada una de las muestras. Estos equipos carecían de selectividad.  Cinética enzimática: las determinaciones enzimáticas requieren una o más lecturas fotométricas en periodos determinados. Estos analizadores no eran capaces de realizar este tipo de reacción.

A estos inconvenientes se suman los frecuentes desperfectos mecánicos de las bombas peristálticas que le imprimen movimiento a las muestras en el interior de las mangueras.

Años más tarde (1975), apareció en el mercado una versión más depurada de los analizadores químicos. Conocidos como analizadores discontinuos y discretos, desde el punto de vista metodológico imitan las etapas de los análisis que eran realizados de forma manual. Por ejemplo, la pipeta de muestras aspira la cantidad de muestras requeridas tantas veces como determinaciones tenga indicadas el paciente, y la deposita en cubetas de reacción independientes. Ninguna muestra entra en contacto con la siguiente y esto los identifica como analizadores discretos. Son discontinuos porque las muestras y reactivos no viajan uno detrás de los otros por el interior de la mangueras.

A estas características se suman las siguientes: No existe arrastre (muestras y reactivos independientes). Son selectivos: el operador programa los análisis que se le hacen a cada muestra (paciente), por medio del teclado de una computadora. Los desperfectos mecánicos no son frecuentes.

Los analizadores de flujo continuo, por razones de diseño, impedían que el usurario pudiera seleccionar los análisis que se le iban a realizar a cada muestra. Esto origino serios problemas de caracteres éticos y económicos. Como el equipo le realizaba todas las muestras el total de análisis de todos los pacientes se realizaban determinaciones que no habían sido indicadas por el médico de asistencia y que carecían de interés clínico en muchos pacientes. Ello trajo como consecuencia:  La creación de los perfiles de análisis no justificados, pues obedecían a exigencias del analizador y no tenían en cuenta el interés clínico – diagnóstico.  Diagnósticos que no obedecían a un cuadro clínico, sino al valor elevado de un componente que no era de interés clínico en ese paciente, clínico en ese paciente, pero que solo por estar elevado obliga a averiguar la causa de esa elevación.  La elevación de costos por el gasto que implica el empleo de reactivos costosos en determinaciones que no eran necesarias.  La prolongación del estadio hospitalario. Los analizadores químicos- discontinuos y discretos – utilizan reactivos químicos que se colocan en un aérea determinada, por lo general refrigerada (de 4 a 8ºC) y envasador en frascos de polietileno suministrados por el fabricante. A esto se refiere cuando dice que el analizador utiliza el sistema de química húmeda (wet chemistry) para diferenciarse de otro grupo de analizadores que utilizan química seca (dry chemise). En los primeros, los reactivos en estado líquido se vierten sobre la muestra; en los segundos, la muestra se vierte sobre un soporte constituido por varias capas fotográficas (de 3 a 6), impregnadas en reactivos.

3.2.3 Analizador semiautomático BTS-350. Equipo especializado en realizar determinaciones bioquímicas en un rango de luz visible. Con un diseño atractivo y único como se ve en la figura 1.

Figura 1. Equipo BTS 350

Fuente, Biosystems. 2010

Características del equipo.

Fuente de luz con LEDS  Equipo con características únicas en su segmento con el más completo rango de LEDS (Diodos emisores de luz). 340, 405, 505, 535, 560, 600, 635, 670nm y dos posiciones libres adicionales.  Bajo consumo eléctrico (consumo medio 5 watts).  Vida media del sistema de iluminación LEDS: 5 años. Sistema fotométrico de doble haz  Alta estabilidad en la lectura. Debido a la disposición de los LEDS, como se ve en la figura 2, la luz es medida simultáneamente antes y después de la muestra, lo que permite estabilizar cualquier desviación de la fuente de luz y dar una estabilidad de lectura superior a 0.001 en 60 min. 30

 Resultados mejorados en lectura de parámetros turbidimétricos.

Figura 2. Sistema integrado de Leeds

Fuente, Biosystems. 2010

Diseño óptico optimizado  Filtros hard coating de larga duración.  Rango de medición de 0 a 3, 5 A en todas las longitudes de onda.  Máximo rendimiento en medidas tanto de absorbancia molecular (bioquímica) como de dispersión (turbidimetría).

Sistema de aspiración fluídica de alta precisión  Flujo de cubeta de sólo 18 µL.  Volumen de aspiración programable desde 100 µL a 5 mL. Como se ve en la figura 3.  Bomba peristáltica incorporada. Como se ve en la figura 4.  Cubetas macro, semi-micro y micro.

Figura 3. Aspirado de la muestra

Fuente, autor 2011

Figura 4. Bomba peristáltica

Fuente, autor 2011

Instrumento de bajo mantenimiento  No requiere cambio de lámparas y filtros.

Sistema de alimentación energética 32

 Además de conexión eléctrica, posee un sistema de baterías con indicador de consumo.  Autonomía en un corte de luz en un período de 2 horas, sin pérdida de medición de reacción en curso.

Sistema termostático. Cubeta Peltier de 25 a 40 C. como se ve en la figura 5.

Figura 5. Sistema de termostatación

Fuente, Biosystems. 2010

Puerto USB. Permite la exportación de gráficos y resultados sobre memoria, como se observa en la figura 6.

Figura 6. Puerto USB

Fuente, autor 2011

Capacidad de almacenamiento. Hasta 2000 resultados. 33

Software  De fácil manejo.  Programable en español y otros idiomas.

Control de calidad interno  Se muestran las gráficas de Levey-Jennings con 31 resultados.A42  El análisis del control interno permite aplicar las reglas de Westgard.A39 con se ve en la figura 7.

Figura 7. Pantalla de lectura

Fuente: Bosystems 2010

3.2.4 Toma de muestra. La posición adecuada y sujeción efectiva del animal son esenciales para un muestreo con éxito. El sitio de punción debe estar limpio y libre de patógenos, esto incluye recortar el pelo, lavarlo con jabón, detergente o solución yodada en dos veces y después realizar una limpieza con alcohol. El corte de pelo puede ser indeseable en animales de exhibición por lo que es necesario pedir el consentimiento del dueño, en caso que el corte no sea posible por algún motivo la limpieza debe ser más estricta. La asepsia debe realizarse en sentido contrario al crecimiento del pelo del animal y en forma circular del centro

hacia la periferia. Después de la punción el sitio debe dejarse seco, limpio y libre de sangre ya que cualquier humedad o materia orgánica favorece las infecciones.

3.2.5 Punción y sitios de punción. La sangre venosa es la muestra más común obtenida de los animales. Las técnicas varían de una especie a otra, según la localización de los vasos sanguíneos convenientes y el espesor, dureza y capa de la piel.

Bovinos. La sangre es obtenida de las venas yugular, mamaria (abdominal subcutánea) y caudales y de las arterias carótida, caudal y braquiales. La vena yugular puede ser destacada presionando con los dedos el canal yugular o usando un cordón. El vaso prominente se ve bien en la mayoría de las vacas lecheras y se palpa fácilmente en los animales obesos. Tiene aproximadamente 2 cm de diámetro. Se introduce en la vena una aguja larga calibre 14 y de 5 cm de longitud, o calibre 16 y 10 cm de longitud.

Ovejas. La vena yugular es la más usada pero la vena y arterias femorales son también fáciles de puncionar. La yugular se encuentra con frecuencia debajo de la piel pero puede estar incluida en el tejido adiposo. La piel es blanda y la aguja (calibre 18-22 de 25 mm) entra con facilidad y frecuentemente atraviesa el vaso. Haciendo un poco de succión, la sangre penetrará en la jeringa si la aguja se encuentra en la luz del vaso.

Caballo. Para sangre venosa se utiliza la vena yugular. Con el pulgar izquierdo en el surco yugular a la mitad de su trayecto en el cuello, se comprime y sujeta la vena. Se clava la aguja (cal. 18-20 de 38 mm de longitud) en ángulo aproximado de 15° con la piel 1 cm arriba del pulgar que está sujetando el vaso, se introduce 1 ó 2 cm bajo la piel, se aumenta el ángulo a 45° y se empuja para que entre en la vena. Para la sangre arterial metatarsiana, situada en una canaladura sobre la cara antero-externa del corvejón, entre el tercero y cuarto huesos metatarsianos. Se inyecta en la piel un poco de anestésico local, después de unos minutos, se pincha la arteria con una aguja de calibre 20 y 25 mm, mantenida en ángulo recto con el vaso, firmemente encajado en el surco óseo.

Cerdo. Se usan las venas de las orejas y la cola y la vena cava anterior. De una oreja se toma sangre por incisión de una vena con escalpelo o por punción con una aguja. La punción de la vena cava es peligrosa y deber ser practicada por una persona experta.

Perro y gato. Las venas cefálica y safena son usadas comúnmente en el perro y algunas veces en el gato. El operador inmoviliza el vaso con el pulgar e inserta la aguja (cal, 18, 22,25 o 38 mm) arriba de este punto. De la vena yugular se toma comúnmente sangre en el gato y algunas veces en el perro; el procedimiento es semejante al descrito para otras especies. La sangre arterial se obtiene de la vena femoral, que es palpada en su fosa. Este procedimiento es probablemente más largo y doloroso que la veno punción y se recomienda el uso de anestesia local.

La cantidad de muestra obtenida a través de la punción debe tenerse en cuenta en las diferentes especies, es así como para las especies mayores puede obtenerse por punción sin causar trastornos hasta 15 ml de sangre, y en pequeñas especies la muestra no se puede exceder de 10 ml.

Aves. Igualmente que para las otras especies la sujeción o inmovilización es de gran importancia para el éxito del procedimiento. Existen varios sitios de punción que serán elegidos de acuerdo a la experiencia del operador.

La vena radial (alar), es el sitio de punción más comúnmente elegido por su facilidad; se elige una de las dos alas, se levanta, se sujeta el ala libre junto con las patas del animal, seguidamente quien realizara la punción inmoviliza con los dedos pulgar e índice la vena alar, previo a esto se debe desplumar el recorrido de la vena con el fin de visualizarla mejor, con aguja numero 21 se hace inserción sobre la vena en un ángulo de 15°, se debe tener cuidado de no extravasar ya que la pared de la vena es muy delgada y podría ocurrir con facilidad, observándose hematoma inmediatamente, si esto no sucede se procede a extraer la muestra, aproximadamente de 1 a 2 ml de sangre en aves de mayor tamaño, y en aves mas pequeñas 0,5 ml ya que una cantidad mayor puede producir anemias en esta especie. Otros sitios de punción menos utilizados son la vena atlantooccipital ubicada entre el atlas y la región occipital, la inserción de la aguja debe hacerse perpendicular al sitio antes mencionado. La punción intracardiaca debe realizarse con mucho cuidado ya que un error en ella, al puncionar las aurículas puede causar la muerte inmediata del animal. Esta debe ser debidamente recolectada en un tubo seco o de tapa roja, para posteriormente ser procesada y obtener el suero.

3.2.6 Transporte de la muestra. El cuidado de la muestra sanguínea hasta que es analizada en el laboratorio es importante, debe ser correctamente rotulada y conservada para las pruebas bioquímicas.

Para el transporte y conservación del suero se debe esperar la retracción del coágulo, en nuestro medio, la sangre de los animales se coagula entre 20-30 36

minutos, sin embargo lo mas recomendado es esperar 1-2 horas a temperatura ambiente, cuanto más tiempo se deje para que esta retracción tenga lugar, mayor cantidad de suero se obtendrá, aunque la cantidad de suero no será nunca mayor de un 40% del volumen original de sangre. La retracción y coagulación se pueden producir mucho más rápido si se incuba el frasco a 37°C durante 1 hora y después se coloca en un frigorífico durante media hora más; después de la retracción del coágulo la muestra debe ser refrigerada a 4°C para su transporte, colocándola en hielo picado o en una caja fría.

Para el transporte y conservación del plasma no hay necesidad de esperar que la sangre se sedimente, después de obtenida debe ser refrigerada para su envío al laboratorio en nevera portátil con hielo seco o picado.

El suero y el plasma no deben ser conservados más de 6 horas en refrigeración sin ser separados de los demás componentes sanguíneos, porque esto trae como consecuencia alteración en los diferentes metabolitos de la sangre a determinar y por lo tanto errores en los resultados del laboratorio.

Para la conservación de la muestra se emplean anticoagulantes apropiados para algunas determinaciones, como por ejemplo: se utiliza fluoruro para la glucosa o heparina para la insulina, etc. Debemos tener conocimiento de la aplicación de estos anticoagulantes en nuestro medio para mejorar en lo posible el transporte y conservación de las muestras a nuestro laboratorio y evitar errores en las determinaciones.

La transferencia de muestras de una persona a otra o de un lugar a otro no debe hacerse descuidadamente, la obtención, transporte y análisis de una muestra de sangre siempre debe registrarse en forma oficial. El incumplimiento de los procedimientos formales de registro descalifica la muestra para todo tratamiento ulterior.

3.2.7 Manejo de la muestra. En el laboratorio dependiendo de la muestra (suero o plasma) se procede de la siguiente manera:

3.2.8 Plasma. El tubo que contiene sangre más anticoagulante se debe centrifugar a 1500 - 2000 r.p.m. durante 10-15 minutos para separar las células del plasma. El plasma que constituye la capa más externa, se puede extraer entonces empleando una pipeta Pasteur o un cuenta gotas, y se transfiere a un tubo de almacenamiento. Se debe tener mucho cuidado para no alterar la capa celular, por 37

lo que la pipeta no se debe poner demasiado cerca de la capa de células ya que la succión puede alterar y extraer cierto número de células de la superficie que podrían alterar las determinaciones bioquímicas. Para esto se recomienda centrifugar nuevamente este sobrenadante y repetir el paso anterior, obteniendo el plasma con menos células interferentes.

3.2.9 Suero. El tubo que contiene sangre sin anticoagulante se debe centrifugar a 1500 r.p.m. durante 10 minutos para separar las células del suero. Luego con una pipeta Pasteur se debe separar el suero o sobrenadante y transferir a un tubo de almacenamiento para la realización de las diferentes pruebas.

La separación del suero del coágulo es generalmente mucho más sencilla, cuando se emplean recipientes de vidrio, o de poliestireno especialmente tratados, puesto que el coagulo se retrae con suavidad de las paredes del frasco o del tubo y eventualmente queda como una pequeña protuberancia en la base, entonces el suero se puede verter o aspirar fácilmente con pipeta y transferir a un tubo para almacenamiento. También se recomienda como en el caso del plasma, centrifugar nuevamente el suero y obtenerlo libre de células que pueden interferir en las determinaciones.

3.2.10 Conservación de la muestra. Las muestras de suero o plasma previamente separadas de las células, pueden conservarse a temperatura ambiente (20-30°C) durante un día sin que se deterioren, en la parte refrigerada de un frigorífico (4°C) durante 4 días; en el congelador (-15 a -20°C) durante una semana o indefinidamente. Particularmente, debe evitarse hacer congelaciones y descongelaciones repetidas para que las enzimas no pierdan su actividad inicial.

Las muestras congeladas deben descongelarse lentamente hasta la temperatura ambiente, y entonces las muestras descongeladas se deben mezclar completamente por inversión. De esta manera se conservaran mejor los metabolitos, se obtendrán resultados más acertados y diagnósticos más exactos. Sin embargo el tiempo de conservación de la muestra depende del analito que se quiera medir, pues algunos elementos de la sangre son volátiles, solo permanecen algunos segundos luego de la extracción de la sangre, mientras que otros son estables hasta 10 horas.

3.2 .11 Spectronic 20. Este espectrofotómetro fue el utilizado desde el inicio del laboratorio por su economía y practicidad, se empleo para manejar las pruebas de química sanguínea y la prueba de hemoglobina la cual es útil para al hematología.

El Spectronic 20 como se ve en la figura 8, el cual es un instrumento usado en la física óptica que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos. Figura 8. Espectronic 20

Fuente, autor 2011

Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:

Componentes del Espectrofotómetro. Fuente de luz: La misma ilumina la muestra. Debe cumplir con las condiciones de estabilidad, direccionabilidad, distribución de energía espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son lámpara de wolframio o tungsteno, lámpara de arco de xenón.kl y lámpara de Deuterio (D2).

Monocromador: Aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática. Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida Es un lente 39

que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida.

Compartimiento de Muestra: Como se ve en la grafica 9, es donde tiene lugar la interacción, R.E.M con la materia (debe producirse donde no haya absorción ni disperisón de las longitudes de onda). Es importante destacar, que durante este proceso, se aplica la ley de lambert-beer en su máxima expresión, en base a sus leyes de absorción. Figura 9. Compartimiento para muestra

Fuente, autor 2011

Transductor: Es aquel, que es capaz de transformar una intensidad de ph, masa, etc. en una señal eléctrica. Al mismo tiempo cumple la función de sensor.

Detector: El detector, es quien detecta una radiación y a su vez lo deja en evidencia, para posterior estudio. Hay de dos tipos: a) los que responden a fotones; y b) los que responden al calor.

Registrador: como se ve en la figura 10, convierte el fenómeno físico, en números proporcionales a el analito en cuestión.

Figura 10. Registrador

Fuente, autor 2011

Foto detectores: En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes móviles del equipo

3.2.12 Determinaciones bioquímicas. Las determinaciones bioquímicas que en el laboratorio se realizan utilizando suero como principal muestra, se prefiere trabajar con suero, porque este se hemoliza menos que el plasma, además no contiene anticoagulantes los cuales pueden interferir en las determinaciones que se vayan hacer o pueden extraer el agua de las células sanguíneas originando la dilución de los constituyentes. Sin embargo, el plasma puede ser utilizado en las determinaciones de urea y glucosa porque no existe una diferencia muy marcada en la concentración de estos metabolitos en los hematíes y en el plasma, pero la diferencia en las concentraciones de otros constituyentes es más elevada. En el laboratorio (Microzoo) se realizan con mayor frecuencia y con fines diagnósticos las siguientes determinaciones como se ve en la figura 11.con sus respectivos procedimientos.

Figura 11. Flujo grama, POE para pruebas de química sanguínea con el SPECTRONIC 20

Fuente, autor 2011

3.2.13 Procedimientos operativos estandarizados con el spectronic 20  UREA. Es un compuesto orgánico relativamente simple producido por los mamíferos en el hígado como producto final del catabolismo de las proteínas. Es una de las substancias más difusibles en el cuerpo y se encuentra en todos los líquidos del cuerpo. Es relativamente atóxica, aunque en concentraciones altas desnaturaliza proteínas con la formación de productos tóxicos.

La urea se elimina principalmente por los riñones, pero una porción de ella por la piel, sobre todo en los animales que sudan. Se ha observado que el nitrógeno ureico sanguíneo no se eleva en perros, salvo pocas excepciones, hasta que al menos el 75% del riñón funcional se ha destruido, y se aconseja hacer la determinación en todos los pacientes quirúrgicos de más de 5 años y en toda enfermedad en perros viejos antes de iniciar el tratamiento. La urea se aumenta en sangre por trastornos renales como la insuficiencia renal crónica y aguda; por obstrucción de las vías urinarias; excesiva destrucción de proteínas como en estados de fiebre, toxicidad o sepsis extensa. También se pueden aumentar los niveles de urea por una hemoconcentración debida generalmente a graves vómitos o diarreas; cuando existe alteración de la función cardiaca que reduce el flujo de sangre a través del riñón se ve aumentada la concentración de urea en sangre. 42

El descenso en los niveles de urea son raros, teóricamente pueden presentarse en asociación con graves enfermedades hepáticas o malnutrición de proteínas.

Método. Espectrofotometría

Principio. La urea se hidroliza en presencia de ureasa, en amoniaco y dióxido de carbono. El amoniaco producido en esta reacción se combina con a -cetoglutarato y NADH en presencia de dehidrogenasa de glutamato, para producir glutamato y NAD. La cantidad consumida de NADH determinado por la disminución de absorbancia en el ultra violeta es proporcional a la cantidad de urea en la muestra.

Muestra. Suero, plasma con EDTA y orina diluida 1:50 con agua destilada.

Equipo. SPECTRONIC 20

Reactivos. 1 enzimas/ coenzima/ substrato; 1 A Tampón

Patrón. Urea 80mg/dl. Listo para su uso. La solución 1 se mantiene estable durante 4 semanas de 2- 8°C y durante una semana de 15-25°C.

Condiciones. El animal debe tener un "ayuno" de 12 horas antes de la toma de muestra. Aunque la urea es estable en suero, plasma u orina durante varios días bajo refrigeración, las muestras, especialmente la orina, deberán valorarse a las pocas horas para evitar la contaminación bacteriana, que podrían provocar una perdida rápida de la urea.

Cuadro 1.Procedimiento para la prueba de Urea Preparar el fotómetro a una temperatura de 30°C. ESTÁNDAR

MUESTRA

Solución de trabajo

1000 m l

1000m l

Solución Estándar

10m l

Suero problema

10m l

Leer inmediatamente colocando muestra por muestra. Colocar la solución estándar y presionar la tecla "CALIBRATE", luego colocar la muestra y

presionar la tecla "ANALYSE". (Inserto, BIOSYSTEMS S.A 2011) Fuente: Bosystems 2010

 CREATININA. La creatinina está en el cuerpo principalmente en forma de fosfato de alta energía. En los músculos es fuente de energía. En animales jóvenes de crecimiento se encuentra en mayores cantidades. La creatinina es una substancia muy difusible y distribuida de manera uniforme en el agua corporal. Se elimina del plasma aproximadamente en la tasa de filtración glomerular.

Al estudiar la excreción de creatinina, tiene valor el hecho de que los niveles séricos de creatinina casi no son afectados por la creatinina exógena de los alimentos, por la edad, el sexo, el ejercicio o la dieta. Por lo tanto los niveles elevados solamente se presentan cuando se altera la función renal.

La medición de los niveles de creatinina en sangre proporcionan la misma información para el diagnostico y pronostico de la función renal que la obtenida por la medición del nitrógeno uréico.

Método. Espectrofotometría.

Principio. La creatinina reacciona en un medio alcalino que no contenga proteínas con pricato, para formar un compuesto rojo –anaranjado (Reacción de Jaffe).

Muestra. Suero o plasma. Orina: diluida: 1:50 con agua destilada

Equipo. SPECTRONIC 20

Reactivos. 1 Picrato de sodio 44mmol/L; 2 Hidróxido de sodio 4.0 N

Patrón. Creatinina 2 mg/dl. Listo para ser utilizado. Los reactivos 1 y 2 son estables a temperatura ambiente de 15 a 25°C hasta la fecha de caducidad que viene indicada en la etiqueta.

Condiciones. No requiere ayuno previo, porque su excreción depende muy levemente de la alimentación y la diuresis. No debe estar el animal sometido a

estrés intenso que puede ser causado en el momento de la toma de muestra, por la resistencia que el animal ejerza. Cuadro 2. Procedimiento para la prueba de Creatinina Preparar el fotómetro a una temperatura de 30°C. ESTÁNDAR

MUESTRA

Solución de trabajo

1000 m l

1000m l

Solución Estándar

100m l

Suero problema -100m l Leer inmediatamente colocando muestra por muestra. Colocar la solución standar y presionar la tecla "CALIBRATE", luego colocar la muestra y presionar la tecla "ANALYSE". (Inserto, BIOSYSTEMS S.A 2011) Fuente: Bosystems 2010

 ORINA/BUN. Se expresa en mg/Kg.

Ácido úrico. Este compuesto es el producto final del catabolismo de las purinas y pirimidinas en mamíferos y el producto final del catabolismo de las proteínas en aves y reptiles.

No se conoce muy bien la significación de la elevación o disminución del ácido úrico en la sangre de los mamíferos. Como el ácido úrico se convierte en alantoina en el hígado en todas las especies, excepto en el hombre, los primates inferiores y el perro dálmata, se ha sugerido que su medición es una prueba sensible de función hepática.

Método. Espectrofotometría.

Principio. El ácido úrico es convertido por la uricasa en alantoina y peróxido de hidrógeno.

Muestra. Suero, plasma con EDTA y orina diluida 1:10 con NaOH 0,01 N

Equipo. SPECTRONIC 20

Reactivos. 1 Tampón/enzimas /4 –aminofenazona / 3-hidroxi-2,4,6 ácido triiodobenzoico/ potasio ferrocianuro; 1 A Surfactante Patrón. Ácido úrico 6 mg/dl. Listo para su uso. La solución 1 es estable 4 semanas de 2 - 8°C o una semana de 15 a 25°C, siempre que se mantenga en su botella original.

Condiciones. El animal debe tener un "ayuno" de 8 horas. Evitar el estrés en la toma de la muestra porque aumentan las concentraciones de ácido úrico.

Linealidad. La linealidad del método es hasta 30 mg/dl.

Cuadro 3. Procedimiento para la prueba de BUN Preparar el fotómetro a una temperatura de 37°C BLANCO STANDAR

MUESTRA

Solución 1

1000m l

Solución estándar

20m l

Suero problema --20m l Incubar a 37°C en baño de María por 5 min, o temperatura ambiente por 10 min. Colocar el Blanco en la cubeta de reacción y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estándar y presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la muestra y presionar la tecla "ANALYSE". (Inserto, BIOSYSTEMS S.A 2011) Fuente: Bosystems 2010

 TRANSAMINASA GLUTAMICA PIRUVICA (GPT- ALT). Esta enzima cataliza la transferencia de un grupo a - amino de la alanina al ácido a -cetoglutarico. La enzima se encuentra en el hialoplasma de todas las células y existe una relación lineal entre la GPT hepática y el peso del animal. Siendo este el caso la determinación de GPT es casi específica del hígado del perro y el gato, mientras que es de escaso o de ningún valor en las enfermedades de bovinos y equinos. Se ha encontrada muy elevada en la necrosis hepática.

Es una enzima muy estable, y en estado de congelación se conserva largo tiempo. La ictericia no estorba la determinación de la enzima, pero debe evitarse la hemólisis.

Las enfermedades hepáticas que producen niveles elevados de GPT comprenden neoplasias malignas, cirrosis y hepatitis, incluyendo la que se produce en el perro por el virus de la hepatitis canina infecciosa (HCI) Método. Espectrofotometría. Principio. a - cetoglutanato +L- alanina en presencia de GPT produce L – glutamato + piruvato, este a su vez +NADH +H+ en presencia de LDH produce lactato +NAD.

Muestra. Suero, plasma con EDTA.

Equipo. SPECTRONIC 20 Reactivos. 1 Reactivo Tampón / substrato; 1 A NADH/LDH; 2 a – cetoglutarato; PIRIDOXAL 5-FOSFATO. La solución 1 es estable de 2-8°C durante 3 meses y de 15-25°C durante 1 semana. La solución 2 es estable de 2-8°C durante 4 meses y de 15-25°C durante 1 mes.

Condiciones. El animal debe tener un "ayuno" de 8 horas como mínimo.

Cuadro 4. Procedimiento para la prueba de Transaminasa Glutamica piruvica (GPT- ALT) Preparar el fotómetro a una temperatura de 37°C. Muestra Solución 1

1000 m l

Suero Problema

100 m l

Incubar en baño de María a 37°C Solución 2 100 m l Colocar a temperatura ambiente durante 30 segundos. Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la cubeta de reacción y presionar AL tecla "START". (Inserto, BIOSYSTEMS S.A 2011) Fuente: Bosystems 2010

 TRANSAMINASA GLUTAMICA OXALACETICA (GOT - AST). Esta enzima hialoplasmica se encuentra en la mayoría de las células del cuerpo; la mayor 47

concentración esta en las fibras musculares. De ahí su elevación en la necrosis muscular. La GOT cataliza la transferencia de un grupo a -amino del ácido aspartico al ácido a-cetoglutarico. Su valoración es muy útil en animales grandes como indicación de lesión muscular o necrosis hepática. La enzima se eleva considerablemente en miopatías por ejercicio en caballos, distrofia muscular aviar, en caballos durante el entrenamiento y en la enfermedad de los músculos blandos.

Método. Test cinético UV

Principio. L–aspartaco + acetoglutarato en presencia de GOT (reacción reversible) produce L–glutamato + oxaloacetato, este último con la adición de NADH mas H+ en presencia de MDH produce L – malato +NAD.

Muestra. Suero, plasma con EDTA.

Equipo. SPECTRONIC 20 Reactivos. 1 Reactivo: Tampón / substrato; 1 A NADH/MDH/LDH; 2 a – cetoglutarato; piridoxal 5 fosfato. La solución 1 es estable de 2-8°C durante 3 meses y de 15-25°C durante 1 semana, y la solución 2 es estable de 2-8°C durante 4 meses y de 15-25°C durante 1 mes.

Condiciones. El animal debe tener un "ayuno" mínimo de 8 horas.

Cuadro 5. Procedimiento para la prueba de Transaminasa Glutamica Oxalacetica (GOT - AST) Preparar el fotómetro a una temperatura de 37°C. Muestra Solución 1

1000 m l

Suero Problema

100 m l

Incubar en baño de María a 37°C Solución 2 100 m l Colocar a temperatura ambiente durante 30 segundos. Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la cubeta de reacción y 48

presionar la tecla "START". (Inserto, BIOSYSTEMS S.A 2011) Fuente: Bosystems 2010

 FOSFATASA ALCALINA (ALP). Esta enzima hidroliza los fosfatos orgánicos en fosfato inorgánico y ña fracción orgánica. Es una enzima muy estable y puede ser congelada con poca o ninguna pérdida de actividad se halla gran cantidad en el hígado, riñón, mucosa intestinal y hueso. En la mayoría de los animales, quizá con excepción del gato se elimina en su forma natural por el hígado por lo tanto cualquier obstrucción al flujo de la bilis causa aumento de la enzima en el suero. El problema es determinar la fuente de esta elevación cuando no es patente la enfermedad hepática.

Se producen elevaciones de la enzima en el suero, en enfermedades del bazo, hígado, riñón, mucosa intestinal o hueso. En la obstrucción biliar se eleva notablemente, las neoplasias óseas malignas causan a veces niveles elevados. También se puede elevar la ALP por una mayor actividad de los osteoclastos durante el crecimiento del esqueleto, por enfermedades óseas degenerativas en animales adultos, raquitismo, osteomalacia y en osteosarcoma. Durante interferencias con la excreción hepática, debida a una destrucción de las células hepáticas o a una destrucción del conducto biliar. Los resultados se interpretan mejor en conjunción con los niveles de GPT, que generalmente se encuentran aumentados en estos casos.

Método. Espectrofotometría

Principio. P-nitrofenilfosfato + H2O en presencia de fosfatasa alcalina produce fosfato + P-nitrofenol.

Muestra. Suero o plasma heparinizado.

Equipo. SPECTRONIC 20

Reactivos. 1 Tampón; 1 A substrato

Condiciones. El animal debe tener un "ayuno" mínimo de 8 horas.

Cuadro 6. Procedimiento para la prueba de Fosfatasa Alkalina Preparar el fotómetro a una temperatura de 37°C. Muestra Solución 1

1000 m l

Suero Problema

10 m l

Incubar en baño de María a 37°C durante 20 minutos Solución 2 100 m l Colocar a temperatura ambiente durante 30 segundos. Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la cubeta de reacción y presionar la tecla "START". (Inserto, BIOSYSTEMS S.A 2011) Fuente: Bosystems 2010

3.3 MARCO GEOGRÁFICO

Figura 12. Mapa del departamento de Boyacá

Fuente, Pilos 2009

Figura 13. Mapa de la ciudad de Tunja

Fuente, Pilos 2009

Tunja es la capital del Departamento de Boyacá está, aproximadamente a los 5 grados, 32 minutos y 7 segundos de Longitud al Oeste de Greenwich és de 73 grados, 22 y 04 segundos. Y su longitud en relación con Santafé de Bogotá es de 0 grados, 43 minutos y 0 segundos. Con alturas que van desde los 2700 msnm hasta 3150 msnm en la parte más elevada. Como otras zonas de la región Andina de Colombia se encuentra en un área altamente propensa a la actividad sísmica.

La ubicación resulta estratégica por los ejes viales que la interconectan con los Llanos Orientales, la Costa Atlántica y centro del país; dista de Bogotá 123 kms.

3.3.1 División política. El Municipio de Tunja tiene una extensión de 121.4 Km2 El área urbana el área rural del municipio, de acuerdo al mapa P- 38 del Plan de Ordenamiento Territorial 2001, está conformada por diez veredas así:

Barón Gallero, Barón Germania, Chorroblanco, El Porvenir, La Esperanza, La Hoya, La Lajita, Pirgua, Runta y Tras del Alto con sus diferentes sectores.

3.3.2 Límites con los pueblos vecinos son los siguientes. Al Norte: con Motavita, Cómbita , Oicatá, Chivatá y Soracá. Por el Oriente: Por el Sur: con Boyacá, Ventaquemada y Samacá. Por el Occidente: con Samacá, Sara y Cucaita. a extensión territorial de Tunja es de 118 kilómetros cuadrados, de los cuales el 87% corresponde al área rural y el 13% al área urbana.

3.3.3 Situación geográfica y relieve. Está ubicada en el Altiplano de Tunja, que pertenece a la unidad morfológica del Altiplano Cundiboyacense en la Cordillera Oriental de los Andes.

La región montañosa en el Municipio de Tunja tiene los siguientes accidentes orográficos: Las cuchillas de Perico, Cazadero, Peña Negra y las lomas de la Sierra y la Cascada.

En la zona occidental, en la vía hacia Villa de Leiva se localiza el Alto de San Lázaro, que los conquistadores españoles llamaron La Loma de los Ahorcados, porque en esa colina occidental se levantaban muchas horcas, y de los patíbulos pendientes cadáveres de indígenas. El Zaque Quemuenchatocha castigaba las faltas graves de sus súbditos con la pena de la horca. En el relieve del Municipio de Tunja son importantes también el Alto de Soracá, los Altos de la Cascada, el Alto de Moral, el Alto Cepeda, el Alto de Pirgua y otros.

3.3.4 Demografía. De acuerdo con proyecciones del DANE, el Municipio de Tunja para el año 2008, se proyecta con una población de 164.676 habitantes, de la cual el 47.45%, que corresponde a 78.139 de sexo masculino y el 52.55%, que corresponden al 86.537 de sexo femenino; distribuidos así: en la zona urbana el 95.15% (156.689 habitantes) y en la zona rural el 4.85%, es decir 7.987 habitantes.

Esta concentración de población urbana conlleva a que las Administraciones deban orientar la inversión social hacia esta zona, atender las altas demandas de servicios públicos, salud, educación, vivienda, saneamiento básico, entre otros, con desventaja para el sector rural; de acuerdo con la información del plan de Ordenamiento y proyecciones de población para el año 2008 tenemos una densidad poblacional urbana de 7.630. Hab/km² y rural de 95 Hab/km² cifra que señala el despoblamiento del sector rural.

3.4 MARCO LEGAL

En la realización del presente estudio se asumen los siguientes aspectos, decretos, resoluciones y empresas legales especializadas en recolectar, transportar y procesar residuos biológicos, las cuales cuentan con las respectivas licencias ambientales, lo que permite ofrecer al laboratorio un correcto funcionamiento de sus actividades internas, de acuerdo a la ley y la constitución colombiana.

3.4.1 Resolución número 01164 de 2002 (Septiembre 6). Por la cual se adopta el Manual de Procedimientos para la Gestión Integral de los residuos hospitalarios y similares. La Ministra del Medio Ambiente y el Ministro de Salud, en ejercicio de las facultades conferidas en los numerales 2, 10, 11, 14, 25 del artículo 5° de la Ley 99 de 1993 y en el artículo 31 de la Ley 9ª de 1979 y en desarrollo de lo previsto en los artículos 4° al 38 del Decreto-ley 2811 de 1974, 6°, 7° y 8° de la Ley 430 de 1998, 4° y 21 del Decreto 2676 de 2000.

3.4.2 Decreto 2676 de 2000 (Diciembre 22). El presente decreto tiene por objeto reglamentar ambiental y sanitariamente, la gestión integral de los residuos hospitalarios y similares, generados por personas naturales o jurídicas. Las disposiciones del presente decreto se aplican a las personas naturales o jurídicas que presten servicios de salud a humanos y/o animales e igualmente a las que generen, identifiquen, separen, desactiven, empaquen, recolecten, transporten, almacenen, manejen, aprovechen, recuperen, transformen, traten y/o dispongan finalmente los residuos hospitalarios y similares en desarrollo de las actividades, manejo de instalaciones.

3.4.3 Resolución 1599 de 2007 (Junio 20). Por la cual se dictan disposiciones para el registro de los laboratorios de diagnóstico veterinario. El Gerente General del Instituto Colombiano Agropecuario, en ejercicio de sus atribuciones legales,

especialmente de las previstas en los Decretos 2141 de 1992, 1840 de 1994 y el Acuerdo 008 de 2001.

Considerando. Que corresponde al Instituto Colombiano Agropecuario, diagnosticar e identificar en el nivel de laboratorio, las causas o agentes responsables de las enfermedades animales, zoonosis y problemas zoosanitarios y de riesgo para la salud animal y humana que pudieran llegar afectar la producción de las especies animales domésticas y el comercio nacional e internacional de animales y sus productos; Que los laboratorios de diagnóstico veterinario son potenciales sensores del sistema de vigilancia epidemiológica veterinaria del país; Que es necesario contar con una red de laboratorios de diagnóstico veterinario con criterios de desempeño armonizados para optimizar su funcionamiento; Que la red de laboratorios de diagnóstico veterinario debe cumplir con las normas mínimas de calidad para poder aceptar como válidos los resultados analíticos que se emitan; Que con el fin de ejercer el control técnico en los resultados emitidos a los productores pecuarios, establecer la implementación de normas mínimas de calidad en los laboratorios que manipulan microorganismos patógenos y no patógenos o material genético derivado y minimizar los riesgos que puedan generarse de estos laboratorios a la salud animal, humana y el ambiente, es necesario establecer las normas a las cuales se debe sujetar toda persona natural o jurídica que se dedique a las actividades mencionadas

El manejo del manual de Ppocedimientos para la gestión integral de residuos hospitalarios y similares, es el documento expedido por los Ministerios del Medio Ambiente y de Salud, mediante el cual se establecen los procedimientos, procesos, actividades y estándares de microorganismos, que deben adoptarse y realizarse en la gestión interna y externa de los residuos provenientes del generador. Bajo este decreto DENSCONT S.A debe se rige.

3.4.4 Decreto número 1220 (Abril 21 de 2005). Dentro de este decreto, se maneja un plan Ambiental completo para adquirir licencias ambientales; donde se exige detalladamente las actividades, que están orientadas a prevenir, mitigar, corregir o compensar los impactos y efectos ambientales que se causen por el desarrollo de un proyecto, obra o actividad. Incluyendo los planes de seguimiento, monitoreo, contingencia, y abandono según la naturaleza del proyecto, obra o actividad. El estudio de impacto ambiental es el instrumento básico para la toma de decisiones sobre los proyectos, obras o actividades que requieren licencia ambiental y se exigirá en todos los casos en que se requiera licencia ambiental de acuerdo con la ley para dotas las empresas que efectúen trabajo de manejo de residuos biológicos como lo es en el caso de DESCONT S.A.

4. METODOLOGÍA

4.1 TIPO DE ESTUDIO

Este estudio de sustitución tecnológica es de tipo comparativo / analítico, ya que permitió describir la eficiencia de ambos espectrofotómetros en laboratorio clínico, útiles en el procesamiento de pruebas de química sanguínea. Con el propósito de conocer algunas ventajas o desventajas de cada equipo en forma individual, de manera que esta información sea base para elegir el equipo de mayor eficiencia para mejorar la calidad del servicio del laboratorio clínico. Para tal efecto será necesario tomar datos del funcionamiento del equipo Espectronic 20, frente al mencionado por el manual del usuario del equipo BTS 350 de Biosystem, de manera que se pueda conocer la factibilidad para la adquisición del último.

El desarrollo del estudio se realizo en el laboratorio clínico veterinario MICROZOO ubicado en la carrera 11ª No 23-66 de la ciudad de Tunja (Boyacá), algunas de las variables a medir en la sustitución tecnológica son cantidad de volumen de suero y reactivos A y B, de acuerdo a su principio estos permiten efectuar determinada prueba como se ve en cuadro 13, el tiempo de incubación y procesamiento de prueba total y el preciso resultado son otras de las variables cuantitativas que se midieron en la investigación de cada una de las pruebas realizadas en química sanguínea, para lograr incorporando un equipo con tecnología de punta que pueda satisfacer las demandas del gran mercado que maneja el laboratorio.

Cuadro 7. Principio activo de los reactivos A y B utilizados en las pruebas de química sanguínea del presente estudio. PRUEBA

REACTIVO

PRINCIPIO

CONCENTRACIÓN

ALAMINO AMINOTRANSFERASA (ALT/GPT)

Tris

150 mmol/L

L-alanina

750 mmol/L

Lactato deshidrogenasa

>1350U/L

7.3

NADH

1.3 mmol/L

2-oxoglutarato

75 mmol/L

Hidróxido sódico

148 mmol/L

Sodio azida

9.5 g/L

PRUEBA

REACTIVO

PRINCIPIO

CONCENTRACIÓN

FOSFATASA ALCALINA (ALP/AMP)

2-amonio-2-metil-1-propanol

0.4 mmol/L

Sulfato de zinc

1.2 mmol/L

Acido N-hidroxietil

2.5 mmol/L

Acetato de magnesio

2.5 mmol/L

10.4

4-nitrofenilfosfato

60 mmol/L

Hidróxido sódico

0.4 mmol/L

CREATININA

Detergente

UREA-BUN/COLOR

Acido pícrico

25 mmol/L

Salicilato sódico

62 mmol/L

Nitroprusiato sódico

3.4 mmol/L

Tampón fosfatos

20 mmol/L

GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA (Y-GT)

ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (AST/GOT)

6.9

Hipoclorito sódico

7 mmol/L

Hidróxido sódico

150 mmol/L

Glicilglicina

206.25 mmol/L

Hidróxido sódico

130 mmol/L

7.9

y-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilina

32.5mnol/L

Tris L-aspartato

121 mmol/L 362 mmol/L

Malato deshidrogenasa

>469 U/L

Lactato deshidrogenasa

>660U/L

Hidróxido sódico

255 mmol/L

7.8

NADH

1.3 mmol/L

2- oxoglutarato

75 mmol/L

Hidróxido sódico

148 mmol/L

Sodio azida

9.5 g/L

Fuente: Bosystems 2010

4.2 DESCRIPCIÓN DEL TAMAÑO DE LA MUESTRA

Universo: Las clínicas veterinarias de la ciudad de Tunja.

La base de datos del laboratorio (Ver anexo A), informa que presta servicio a las diferentes clínicas de la ciudad como son ASMEVET, ZOOMEDICA, PET CENTER, MEDIOCENTRO VETERINARIO, ZONA ANIMAL, STUARDS, PET DOCTORS, CLINIVET y fuera de estos centros especializados en la salud animal se cuenta con médicos veterinarios que trabajan en las diferentes zonas aledañas a Tunja con un gran valor agregado por parte rural de los pueblos de Boyacá, ya que de allí llegan muestras de grandes animales. Población: la Cantidad de muestras recibidas en un 1 día “180 pruebas promedió”

Muestra: Se utilizó el programa estadístico Win Episcope 2.0. Ver anexo C, con un tamaño de la población de 180 pruebas, con una prevalencia esperada del 95%, un margen de error aceptado del 10% y un nivel de confianza del 90% este programa arrojo que el tamaño de la muestra es de 12 pruebas de química sanguínea.

4.3 CAPACITACIÓN

Con la compra del equipo BTS350, la empresa BIOSYSTEMS realizo la respectiva capacitación en las instalaciones del laboratorio clínico veterinario Microzoo, el manejo del equipo BTS 350 y el procedimiento de las diferentes pruebas que se manejan, bajo la asesoría de su representante legal la doctora Mónica Valderrama bacterióloga. Como se ve en el anexo E:  Lugar adecuado para la instalación del equipo, como se ve en la figura 13 Se adecuo un lugar para el procesamiento de las muestras de química sanguínea.

Figura 14. Zona de pruebas de química sanguínea.

Fuente. Autor 2011

 Presentación de las diferentes partes que conforman el equipo (BTS 350) y sus funcionalidades. Como se ve en las figura 14 ,15 y 16.

Figura 15. Bomba peristáltica

Fuente. Autor 2011

Figura 16. Dep贸sito de residuos.

Fuente. Autor 2011

Figura 17. Manqueras siliconas.

Fuente. Autor 2011

 Se realizo el procesamiento de una prueba de química sanguínea como se ve en la figura 17, durante la capacitación para la calibración del nuevo espectrofotómetro.

Figura 18. Procesamiento de la prueba de creatinina

Fuente. Autor 2011

 Recomendaciones para el procesamiento de resultados como se ve en la figura 18 y mantenimiento diario del equipó como se ve en la figura 19, ya que después de procesar cada prueba se debe lavar con agua destilada.

Figura 19. Impresión de resultados

Fuente. Autor 2011

Figura 20. Recomendaciones de mantenimiento

Fuente. Autor 2011

4.4 PLAN DE ACTIVIDADES PARA EL DESARROLLO METODOLÓGICO

Previo la capacitación el laboratorio clínico veterinario MICROZOO contando con los dos equipos de química sanguínea por espectrofotometría:  Se realizaron pruebas simultáneas para confrontar los datos, tiempos, velocidad, eficacia, y consumo en volumen de reactivos para procesar cada una de las diferentes pruebas de química sanguínea.  Se realizaron dos procedimientos simultáneos por cada una de las pruebas de química sanguínea con una muestra de suero seleccionado al azar, estos procedimientos se repitieron para un total de 24 pruebas realizadas y así poder verificar el rendimiento de los equipos.  Para el proyecto se seleccionaron las pruebas de creatinina, BUN, ALT, AST, GT y Fosfatasa alcalina, siendo estas las de mayor porcentaje procesadas por día en el laboratorio clínico veterinario Microzoo, a continuación se muestra el esquema del tamaño de la muestra en los cuadros 13 y 14.

Cuadro 8. Primer muestreo de acuerdo al programa estadístico win episcope 2.0, Esquema de pruebas de química sanguínea. ANALLITO

ANÁLISIS/ muestra ESPECTRONIC

ANÁLISIS/ muestra BTS 350

Creatinina

Bun

Alt

Ast

Subtotal

Total

12 pruebas

Fuente. Autor 2011

Cuadro 9. Segundo muestreo de acuerdo al programa estadístico win episcope 2.0, Esquema de pruebas de química sanguínea. PRUEBA

ANÁLISIS/ muestra ESPECTRONIC

ANÁLISIS/ muestra BTS 350

Creatinina

Bun

Alt

Ast

Subtotal

Total

12 pruebas

Fuente: Autor 2011

De acuerdo al programa estadístico win episcope 2.0 se determinó que el tamaño de la muestra es 12 pruebas de química sanguínea el cual se realizo bajo el esquema de los cuadros 8 y 9. Se realizó un segundo análisis bajo las mismas condiciones tomadas del primer muestreo, para poder constatar el rendimiento y funcionamiento de los equipos ESPECTRONIC 20 Y BTS 350.

5. RESULTADOS

5.1 IDENTIDAD MICROZOO

El laboratorio clínico veterinario Microzoo se encuentra ubicado en la carrera 11 A Nº 23-66 pasos arriba al parque Santander de la ciudad de Tunja, sus teléfonos son 7449343 3103410426. Los profesionales a cargo son el doctor Yefer Mauricio Boyacá Quintana Medico Veterinario Y Zootecnista Uptc, especialista en laboratorio clínico, la doctora Mónica Liliana Niño Niño Medico Veterinario Y Zootecnista Uptc.

Es un establecimiento privado, cuenta con un organigrama de estructura grafica vertical y es de tipo general ya que Contienen información representativa del laboratorio como se ve en él (anexo F), en el cual se realizan múltiples pruebas de laboratorio clínico, enfocadas a mejorar los diagnósticos de los profesionales en la Medicina Veterinaria, de los objetivos de Microzoo se encuentra; brindar apoyo a entidades de tipo oficial y privado en procesos de erradicación de enfermedades infecciosas y colaborar en aumentar la eficacia de los tratamientos de acuerdo con los resultados obtenidos, Dentro de las pruebas que el laboratorio realiza se encuentran:  Hematología  Química sanguínea  Urianálisis  Parasitología  Citologías  Serología  Histovacuna  Diagnostico de Brucelosis por Rosa de Bengala en convenio con el Instituto Colombiano Agropecuario ICA.

5.2 DIAGNÓSTICO De acuerdo a la base de datos del laboratorio, la cantidad de muestras recepcionadas en las áreas de hematología y química sanguínea son los 63

exámenes de mayor influencia por día, la información que se ve en el cuadro 10, permitió determinar cuál de estas pruebas de laboratorio es la de mayor importancia, así es que Microzoo decidió automatizar las pruebas de química sanguínea en pro de suplir las altas demandas de las clínicas veterinarias de la ciudad.

Cuadro 10. Porcentaje de pruebas recepcionadas los días sábados del mes de Junio del 2011. PRUEBAS RECEPCIONADAS LOS DÍAS SÁBADO DEL MES DE JUNIO DEL 2011 FECHA EXAMEN CANTIDAD % / PRUEBA HEMOGRAMA 16 19.30% ALT 10 CREATININA 12 BUM 10 AST 8 04/06/2011 80.70% FOSFATASA ALCALINA 9 GGT 7 GLUCOSA 5 COLESTEROL 6 HEMOGRAMA 25 19.50% ALT 22 CREATININA 18 BUM 10 AST 22 11/06/2011 80.40% FOSFATASA ALCALINA 9 GGT 12 GLUCOSA 6 COLESTEROL 4 HEMOGRAMA 30 44.80% ALT 6 CREATININA 5 BUM 5 AST 6 18/06/2011 55.20% FOSFATASA ALCALINA 4 GGT 3 GLUCOSA 3 COLESTEROL 5 HEMOGRAMA 22 28.50% ALT 7 CREATININA 4 64

25/06/2011

BUM AST FOSFATASA ALCALINA GGT GLUCOSA COLESTEROL

4 10 10 8 6 6

71.50%

Fuente: Autor 2011

5.2.1 Selección del equipo. Microzoo cuenta en la actualidad con un equipo de espectrofotometría (SPECTRONIC 20) el cual es especializado para el procesamiento de pruebas de química sanguínea. De algunas desventajas del equipo, es que cuenta con una fuente de luz de tungsteno, con un manocromador el cual permite al operario controlar las perillas para darle precisión a la prueba según su longitud de onda, también cuenta con un compartimiento el cual permite interactuar la muestra con el equipo, el registrador del sistema es una de las mayores desventajas que presenta este equipo ya que la aguja de lectura no permite apreciar claramente el resultado debido a sus movimientos oscilatorios que son causados por la interferencia eléctrica de los diferentes sistemas operativos que se manejan en el laboratorio, entre otros de los inconveniente es que el equipo no cuenta con sistema de termostatación lo cual hace que el laboratorista recurra a usar una incubadora para la atemperación previa de los reactivos, lo que lo hace perder tiempo valioso, el cual se puede usar para el desarrollo de otras actividades dentro de la institución.

Es por eso que el laboratorio recurre a la búsqueda de un nuevo y mejorado dispositivo el cual facilite, economicé y agilice los procesos de las pruebas de química sanguínea permitiéndole al operario mejorar en un cien por ciento en todo su trabajo.

Para la selección del nuevo equipo se realizo un análisis en donde se tuvo en cuenta el presupuesto del laboratorio, las cotizaciones (ver anexo B), el estudio de manuales en donde se muestran las características de las diferentes marcas de equipos, como se ve en el cuadro 11, permitiéndole a Microzoo tomar la decisión de adquirir el BTS 350 (biosystems) ya que este pude llegar a suplir con las necesidades y demandas del laboratorio.

De las bondades que ofrece el BTS 350:  Requiere de bajo mantenimiento. 65

 Permite realizar pruebas con reactivos de otras casas comerciales.  Tiene un muy bajo consumo de energía.  Posee un peso muy liviano, fácil de transportar.  Precisión en los resultados.  Permite imprimir los resultados desde el equipo.  El BTS 350 se puede conectar a un ordenador.  Posee puerto USB para la extracción de dados

Cuadro 11. Ficha técnica de los equipos para pruebas de química sanguínea

ESPÉCTROFOTOMETROS

ITEMS

SPECTRONIC 20

Fuente de luz con Led's

lámpara de tungsteno

Led's

MINDRAY BA 88A Lámpara halógena de cuarzo

Vida util del Led´s Sistema fotométrico de doble haz Diseño óptico optimizado Sistema de aspiración fluídica Bomba peristáltica incorporada Conjunto fotométrico estático Instrumento de bajo mantenimiento Sistema de alimentación energética Compartimiento para muestra

Mantenimiento anual

5 años

2 años

Foto detectores

NO Incorporada

Estabilidad en la lectura Medición de 0 a 3.5 longitud de onda Aspiración desde 100µL a 5 mL.

rueda de filtro de 8 posiciones Medición de 0.5 a 3.0 longitud de onda Aspiración desde 200µL a 2000µL.

NO Incorporada

Incorporada

No contiene partes móviles

Vida útil de lámpara/15 años

No contiene partes móviles No requiere cambio de lámparas ni filtros

Eléctrica sin batería

Eléctrica con batería / 6 horas

Eléctrica con batería / 3 horas

Incorporado

Sistema termostático

NO Incorporado

de 25 a 40°C.

de 27 a 37°C.

Puerto USB Capacidad de almacenamiento Software o De fácil manejo. Control de calidad interno

NO Incorporado

Incorporado

NO Incorporado

1800 Programable en español y otros idiomas

NO Incorporado

2000 Programable en español y otros idiomas Gráficas con 31 resultados programables

Peso Uso de otros reactivos comerciales

12 Kg

6 Kg

8 kg

Pantalla

Registrador por aguja

Digital 7”

Táctil de 7 "

Perillas manuales

NO Incorporado

BTS 350

Requiere cambio de lámparas

Software interno

ITEMS

SPECTRONIC 20

BTS 350

MINDRAY BA 88ª

Teclado Consumo de electricidad

Perillas manuales

Digital

Táctil

130 W

25 W

Impresora

NO Incorporada

Incorporada

Precio

$2´000.000=

$11´600.000=

$16´820.000=

Fuente: Autor 2011

5.2.2 Resultado del diagnóstico. De acuerdo a la base de datos del laboratorio MICROZOO, los días sábado del mes de junio del 2011, como se ve en el cuadro 10 se logró identificar que las pruebas de química sanguínea son los exámenes que se recepcionan en mayor porcentaje por día, mientras que los hemogramas son los de menor incidencia, por tanto el laboratorio veterinario toma la decisión de automatizar las pruebas de química sanguínea; puesto que la demanda de estos exámenes solicitados por parte de los médicos veterinarios de la ciudad va en aumento y es por eso que se requiere implementar un nuevo sistema tecnológico el cual supla esas peticiones.

Para la selección del nuevo equipo se realizo una evaluación minuciosa de los sistemas automatizados para pruebas de química sanguínea que existen en el mercado, posteriormente se les solicito a las empresas comerciales de laboratorios clínicos las cotizaciones de los equipos con sus características como se ve en el cuadro 11, Microzoo estudio y evaluó cada una de las opciones y tomo la determinación de adquirir el BTS 350, debido a que posee una fuente de luz de Leeds, Requiere bajo mantenimiento, permite realizar pruebas con reactivos de otras casas comerciales, consume tan solo 5W de energía, cuenta con software exclusivo para veterinaria y además que la marca que lo respalda tiene una excelente trayectoria mundial en equipos de laboratorio clínico con excelente presentación con un diseño innovador y además el precio se ajustaba muy bien al presupuesto del laboratorio.

6 RESULTADO Y ANÁLISIS ESTADÍSTICO

En el cuadro 12, se clasifican las variables con sus respectivas unidades, las cuales se utilizaron para realizar la interpretación de las graficas y de los datos recopilados por las pruebas efectuadas en el laboratorio con el SPECTRONIC 20 y con el BTS 350.

Cuadro 12. Variables utilizadas en el proyecto de automatización tecnológico Variables Unidades Sigla Cantidad de Reactivo A CRA μL Cantidad de Reactivo B CRB μL Cantidad de Muestra CM μL Tiempo de incubación 1 Min TI – 1 Tiempo de incubación 2 Min TI – 2 Tiempo de incubación 3 Min TI – 3 Tiempo Resultado Min TR Fuente: Autor 2011

6.1 PRIMER MUESTREO DETERMINADO POR EL PROGRAMA ESTADÍSTICO WIN EPISCOPE 2.0.

Grafica 1. Utilización de reactivos con el SPECTRONIC 20

Fuente: Autor 2011

En la grafica 1 se observa que las variables de volumen para el SPECTRONIC 20 determinaron que para las pruebas de creatinina y de BUN son las que requieren de 1000 μL de reactivo A y B, siendo las que mayor volumen utilizaron, mientras que las pruebas de ALT, AST y GT tan solo utilizaron de 500 μL de reactivo A y B, la prueba de FA utilizo de 800 μL de reactivo A y 200 μL de reactivo B, la utilización de suero o muestra en las pruebas de Creatinina, ALT, AST Y GT necesitaron de 100 μL mientras que la prueba de BUN uso 50 μL y la prueba de FA 20 μL.

Grafica 2. Utilización de reactivos con el BTS 350.

Fuente: Autor 2011

En la grafica 2 se observa que las variables de volumen para el BTS 350, determino que la prueba de creatinina requirió de 250 μL de reactivo A y B, el BUN necesito de 500 μL de reactivo A y B, siendo las que mayor volumen utilizaron, mientras que las pruebas de ALT, AST, GT y FA tan solo utilizaron de 400 μL de reactivo A y 100 μL de reactivo B, la utilización de suero o muestra en las pruebas de Creatinina y GT necesitaron de 50 μL, las pruebas de ALT, AST utilizaron 25 μL Y GT necesito de 25 μL y mientras que la prueba de BUN uso 5 μL siendo la prueba que necesito menor volumen de muestra.

Grafica 3. Utilización de las variables de tiempo con el SPECTRONIC 20.

Fuente: Autor 2011

En la grafica 3 se observa que el ESPECTRONIC 20 para el desarrollo de sus pruebas de química sanguínea necesita de varios tiempos de incubación cono se ve en las pruebas de BUN, ALT, AST, GT y FA lo cual hace que el laboratorista incurra en la utilización de tiempo innecesario para obtener un resultado, casi en unos 40 minutos por prueba, mientras la prueba de creatinina necesita un solo periodo de incubación y obtiene el resultado en 35 minutos siendo la prueba de mayor rendimiento con el SPECTRONIC 20

Grafica 4. Utilización de las variables de tiempo con el BTS 350

Fuente: Autor 2011

La grafica 4 demuestra que el BTS 350 cuenta con sistema de incubación interno lo cual facilita y economiza tiempo al operario, como se observa en la grafica de las pruebas de Creatinina, ALT, AST, GT y FA el tiempo que incubaron los reactivos fue tan solo de 5 min y la prueba de BUN la única prueba que no necesita de incubación favoreciendo así al pronto resultado de esta en un lapso de tiempo de 5 min, mientras que las otras pruebas obtuvieron su correspondiente resultado en 15 min.

6.2 SEGUNDO MUESTREO DETERMINADO ESTADÍSTICO WIN EPISCOPE 2.0

POR

PROGRAMA

Grafica 5. Utilización de reactivos con el SPECTRONIC 20

Fuente: Autor 2011

En la grafica 5 se observa que las variables de volumen para el SPECTRONIC 20 determinaron que para las pruebas de creatinina y de BUN son las que requieren de 1000 μL de reactivo A y B, siendo las que mayor volumen utilizaron, mientras que las pruebas de ALT, AST y GT tan solo utilizaron de 500 μL de reactivo A y B, la prueba de FA utilizo de 800 μL de reactivo A y 200 μL de reactivo B, la utilización de suero o muestra en las pruebas de Creatinina, ALT, AST Y GT necesitaron de 100 μL mientras que la prueba de BUN uso 50 μL y la prueba de FA 20 μL.

Grafica 6. Utilización de reactivos con el BTS 350

Fuente: Autor 2011

En la grafica 6 se observa que las variables de volumen para el BTS 350, determino que la prueba de creatinina requirió de 250 μL de reactivo A y B, el BUN necesito de 500 μL de reactivo A y B, siendo las que mayor volumen utilizaron, mientras que las pruebas de ALT, AST, GT y FA tan solo utilizaron de 400 μL de reactivo A y 100 μL de reactivo B, , la utilización de suero o muestra en las pruebas de Creatinina y GT necesitaron de 50 μL, las pruebas de ALT, AST utilizaron 25 μL Y GT necesito de 25 μL y mientras que la prueba de BUN uso 5 μL siendo la prueba que necesito menor volumen de muestra.

Grafica 7. Utilización de las variables de tiempo con el SPECTRONIC 20.

Fuente: Autor 2011

En la grafica 7 se observa que el ESPECTRONIC 20 para el desarrollo de sus pruebas de química sanguínea necesita de varios tiempos de incubación cono se ve en las pruebas de BUN, ALT, AST, GT y FA lo cual hace que el laboratorista incurra en la utilización de tiempo innecesario para obtener un resultado, casi en unos 40 minutos por prueba, mientras la prueba de creatinina necesita un solo periodo de incubación y obtiene el resultado en 35 minutos siendo la prueba de mayor rendimiento con el SPECTRONIC 20

Grafica 8. Utilización de las variables de tiempo con el BTS 350

Fuente: Autor 2011

La grafica 8 demuestra que el BTS 350 cuenta con sistema de incubación interno lo cual facilita y economiza tiempo al operario, como se observa en la grafica de las pruebas de Creatinina, ALT, AST, GT y FA el tiempo que incubaron los reactivos fue tan solo de 5 min y la prueba de BUN la única prueba que no necesita de incubación favoreciendo así al pronto resultado de esta en un lapso de tiempo de 5 min, mientras que las otras pruebas obtuvieron su correspondiente resultado en 15 min.

6.3 DISCUSIÓN

La grafica 1 determina frente a la grafica 2 que el SPECTRONIC 20 consume el 75% más de reactivo A y B para la prueba de creatinina, mientras que el BTS 350 tan solo consume el 25%,esto revela que nuevo equipo permite realizar 4 pruebas y el antiguo equipo tan solo 1 prueba; para las demás pruebas que se realizaron dentro del estudio se observo, que en las graficas para las pruebas de BUN, ALT, AST, GT y FA ahorraron un 50% de reactivos y muestra con el muevo equipo automatizado. Con el BTS 350 laboratorio MICROZOO logro economizar reactivos y suero lo cual proporcionar un reajusté monetario por prueba, esto le contribuirá a las clínicas veterinarias solicitar un mayor número de exámenes sin preocuparse del valor económico.

La gráfica 4 corroboro que el BTS 350 posee un sistema de incubación incorporado lo cual le facilita al laboratorista realizar los procedimientos en las pruebas de química sanguínea y a su vez permitirá que el resultado por prueba sea entregado sin contratiempos. En la grafica 3 se observo que el SPECTRONIC 20 requiere de una incubadora externa para la atemperación repetitiva de los reactivos y del suero durante el procesamiento de las pruebas, y a su vez retrasando el resultado el cual el médico veterinario solicita con premura.

El primer esquema de muestreo confirmo que el SPECTRONIC 20 cumple con las tareas asignadas, pero se logra demostrar mediante el análisis estadístico que el BTS 350 es el equipo ideal, para el laboratorio clínico veterinario MICROZOO, permitiéndole automatizar las pruebas de química sanguínea, así logrando una reducción significativa en el uso de reactivos, suero y tiempos de incubación para finalmente emitir un resultado con tecnología de punta.

Con el segundo muestreo y el análisis estadístico de las graficas 5, 6, 7 y 8 se confirmo que el BTS 350 es superior al SPECTRONIC 20 demostrando nuevamente que el uso de reactivos, suero, tiempos de incubación y emisión de resultados fue minimizado en un 50%, lo cual permitirá llevar a MICROZOO a 74

realizar las pruebas de química sanguínea a otro nivel en la ciudad de Tunja. Ofreciendo servicios de más alta calidad y eficiencia, a un más bajo costo para así seguir favoreciendo el buen uso del laboratorio por parte de las clínicas veterinarias y continuar realzando el buen nombre de la institución.

7 ESTANDARIZACIÓN DE LOS NUEVOS PROCESOS EN LAS PRUEBAS DE QUÍMICA SANGUÍNEA DEL LABORATORIO MICROZOO 7.1 IMPLEMENTACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTANDARIZADOS (POE), DE QUÍMICA SANGUÍNEA INHERENTES AL EQUIPO BTS350 (Ver figura)

El área de Química sanguínea tiene gran importancia porque ofrece información adicional al veterinario para realizar un diagnóstico más preciso que conducirá al tratamiento específico, es decir, al tratamiento de la causa determinante de la enfermedad, en lugar de un tratamiento exclusivamente por síntomas y signos.

Actualmente existe un gran número de pruebas Bioquímicas especialmente útiles en los estudios clínicos, y es claro que el mayor crecimiento y el mayor reto en patología clínica serán del área de la química.

Figura 21. Flujo grama, POE para pruebas de química sanguínea con el BTS 350.

Fuente: Autor 2011

Responsables: Mauricio Boyacá, Mónica Niño y Zoraida González.

Materiales:  Tubos tapa roja.  Jeringas.  Tubos de ensayo.  Reactivos.  Pipetas  Puntas  Espectrofotómetro  Cronómetro  Incubadora

7.2 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA DE CREATININA

Procedimiento:

1. Se toma 1 tubo de ensayo. 2. Se le agrega al tubo, 250 μL de reactivo A y B. 3. El sistema se auto incuba por 5 min a 37ºC. 4. Se agregan 50 μL de suero al tubo con los reactivos. 5. Se lleva la muestra al aspirado. 6. Se lee en el BTS 350 y en cuestión de 2 min se puede apreciar el resultado

Figura 22. Resultado de la prueba de creatinina

. Fuente, autor 2011

7.3 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA BUN/COLOR

Procedimiento:

1. Se requieren 1 tubo de ensayo. 2. Se agrega al tubo 500 μL de reactivo A. 3. El sistema termostata por 5 min en 37ºC. 4. Se agregan 5 μL de suero al tubo con el reactivo. 5. Se agrega al tubo 500 μL de reactivo B. 5. se lleva la muestra al aspirado. 6. Se lee en el BTS 350 y en cuestión de 10 seg se puede apreciar el resultado

Figura 21. Resultado de la prueba de BUN/COLOR

Fuente, autor 2011

7.4 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA ALT/GPT Procedimiento: 1. Se requieren 1 tubo de ensayo. 2. Se agrega al tubo 400 μL de reactivo A. 3. El sistema termostata por 5 min en 37ºC. 4. Se agrega al tubo 100 μL de reactivo B. 5. Se agregan 25 μL de suero al tubo con los reactivos. 5. se lleva la muestra al aspirado. 6. Se lee en el BTS 350 y en cuestión de 5 min se puede apreciar el resultado

Figura 24. Resultado de la prueba de ALT/GPT

Fuente, autor 2011 79

7.5 ESTANDARIZACIÓN AMP/ALP

LA PRUEBA

FOSFATASA

ALKALINA

Procedimiento:

1. Se requieren 1 tubo de ensayo. 2. Se agrega al tubo 400 μL de reactivo A. 3. El sistema termostata por 5 min a 37ºC. 4. Se agrega al tubo 100 μL de reactivo B. 5. Se agregan 10 μL de suero al tubo con los reactivos. 5. se lleva la muestra al aspirado. 6. Se lee en el BTS 350 y en cuestión de 5 min se puede apreciar el resultado

Figura 25. Resultado de la prueba de AMP/ALP

Fuente, autor 2011

7.6 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA AST/GOT

Procedimiento:

1. Se requieren 1 tubo de ensayo. 2. Se agrega al tubo 400 μL de reactivo A. 3. El sistema termostata por 5 min a 37ºC.

4. Se agrega al tubo 100 μL de reactivo B. 5. Se agregan 25 μL de suero al tubo con los reactivo. 5. se lleva la muestra al aspirado. 6. Se lee en el BTS 350 y en cuestión de 5 min se puede apreciar el resultado

7.7 ESTANDARIZACIÓN DE LA PRUEBA y-GT

Procedimiento:

1. Se requieren 1 tubo de ensayo. 2. Se agrega al tubo 400 μL de reactivo A. 3. El sistema termostata por 5 min a 37ºC. 4. Se agrega al tubo 100 μL de reactivo B. 5. Se agregan 50 μL de suero al tubo con los reactivos. 5. se lleva la muestra al aspirado. 6. Se lee en el BTS 350 y en cuestión de 5 min se puede apreciar el resultado

8. CONCLUSIONES

El laboratorio clínico veterinario Microzoo consiguió automatizar las pruebas de química sanguínea, logrando así una sustitución tecnológica, a su vez el nuevo equipo permite a las clínicas veterinarias de la ciudad obtener un resultado más confiable y en menor tiempo.

Con el diagnóstico que se realizo del sistema tecnológico con el que cuenta el laboratorio para el procesamiento de las diferentes pruebas de química sanguínea, se demostró que el SPECTRONIC 20 cumple con el requerimiento para el análisis de pruebas de química sanguínea, pero se determinaron algunas desventajas, cómo es el uso extra de incubadora, el uso exagerado de reactivos y la dificultad de graduar la longitud de onda, ya que muchas de las pruebas de química sanguínea necesitan tener una precisión en su resultado y además de esto hay que realizar cálculos manuales, a su vez el operario pierde tiempo y tiene dificultades en el proceder de su labor frente a otras actividades que se realizan en el laboratorio.

En la evaluación comparativa se demostró la diferencia entre las eficiencia de los equipos en cuanto a cantidad de volumen de reactivos y de muestra, tiempo de incubación y procesamiento de resultados; determinándose así en el análisis estadístico, que BTS 350 de (Biosystem), fue superior, frente al Spectronic 20 en un 75%.

En las pruebas realizadas en el presente estudio se demostró que Spectronic 20 utilizo el doble del volumen de reactivos y de muestra por prueba, que el BTS 350, por lo tanto este equipo economizo el 50% tanto de reactivos y muestras de suero por prueba.

El Spectronic 20 utiliza un tiempo de incubación para la preparación de los reactivos de 20 min, mientras que el BTS 350 cuenta con un sistema de termostatación propio del equipo, reduciendo así el tiempo a tan solo 5 min, lo cual evidencia que el nuevo equipo mejoro esta variable en más del 50%

El BTS 350 requirió un menor tiempo para el procesamiento de las pruebas con su respectivo resultado ya que cuenta con un software específico para cada prueba mientras que el anterior equipo necesito un mayor tiempo, porque en este se realizan formulas y cálculos manuales para emitir el resultado final, restándole tiempo al operario para realizar otros trabajos. 82

Se estandarizaron los nuevos procesos para la realización de las diferentes pruebas de química sanguínea en el laboratorio veterinario Microzoo permitiéndole así al laboratorista acoplarse al rendimiento del nuevo equipo.

Se concluye que el Spectronic 20 no va continuar procesando las pruebas especificas de química sanguínea, pero sí la prueba de hemoglobina para los exámenes de hematología, esto debido a que la tecnología de la actualidad a incorporado equipos más avanzados y clasificados en diversas pruebas.

No hay sistema tecnológico deficiente sino que a medida que la tecnología avanza el laboratorio está en la obligación de incorporar y de sustituir nuevos y mejorados equipos automatizados en el área de química sanguínea y hematología, específicos para procesar muestras de animales que permitan a la entidad suplir las demandas y peticiones de los médicos veterinarios de la ciudad de Tunja.

8 IMPACTO

La automatización de las pruebas de química sanguínea, del laboratorio clínico veterinario Microzoo le permiten incorporar una innovación tecnológica, que ayuda a solucionar las peticiones de los médicos veterinarios y de las diferentes entidades que ofrecen servicios en salud animal del departamento de Boyacá principalmente de la ciudad de Tunja, con el fin de ofrecer a los clientes un mejor servicio en cuanto a confiabilidad y entrega rápida de resultados.

El laboratorio clínico Microzoo, logro reducir costos con respecto al uso de materiales de vidrio, volúmenes de reactivos y de suero, al igual que tiempos en el procesamiento de las diferentes pruebas de química sanguínea

Este proyecto permitió dar a los médicos veterinarios orientación de las diferentes patologías que afectan al sistema digestivo y el sistema renal de los pequeños y grandes animales, en relación con los posibles desbalances metabólicos encontrados en el suero de las muestras procesadas en el laboratorio.

Sabiendo que los laboratorios clínicos veterinarios actualmente son una de las mejores herramientas para el médico veterinario, hay que incentivar el uso de esta ayuda diagnostica para poder establecer criterios con respecto al proceder de algunos tratamientos y diagnósticos frente a patologías relacionadas con este estudio.

10. RECOMENDACIONES  Se deben seguir realizando mejoras tecnológicas dentro del laboratorio, como es adquirir un equipo de hematología automatizado, ya que esto seguirá contribuyendo a reducir el tiempo en el procesamiento de las muestras y agilizara la emisión de los resultados, manteniendo asi la alta calidad.  Utilizar la ayuda del laboratorio por medio de BTS 350 para desarrollar diferentes pruebas que ayudan al diagnostico y tratamiento de enfermedades de origen hepático, renal, etc.  Con la implementación del nuevo equipo orientar y colaborar a las personas interesadas en realizar proyectos a fin con las pruebas de química sanguínea, ya que con este nuevo equipo los costos y el tiempo se verán reflejados en un excelente beneficio para los trabajos de investigación.  Se deben seguir realizando proyectos y estudios de este tipo ya que Colombia posee pocos laboratorios veterinarios con sistemas tecnológicos especializados. Para así ofrecer una mejor calidad y agilidad en resultados a los médicos veterinarios del país.

BIBLIOGRAFÍA

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ANEXOS

ANEXO A RECOPILACIÓN DE DATOS DEL LABORATORIO CLÍNICO VETERINARIO

MICROZOO DEL 24 DE FEBRERO AL 4 DE MARZO DEL AÑO 2011 (FAS)FOSFATASA ALCALINA-(CRE)CREATININA-(B.D)BILIRRUBINA DIRECTA-(B.T)BILIRRUBINA TOTAL-(GLU)GLUCOSA-(CAL)CALCIO ANALITO ALT

AST

BUN

FAS

CRE

B.D

DATOS LABORATORIO CLINICO MICROZOO B.T

GLU

CAL

ESPECIE

CONSUMIDORES

ENTIDAD

FECHAS

LUGAR

Canino

Andrés Caicedo

SOS animal

02/11/2010

Villa de Leyva

Canino

Clara Rivadeneira

Mundo Animal

03/11/2010

Duitama

Canino

Clara Rivadeneira

Mundo Animal

10/11/2010

Duitama

Canino

Aura Momtero

JDC

09/11/2010

Felino

Uriel Parra

Medicentro Vet

11/11/2010

Tunja

Canino

Clara Rivadeneira

Mundo Animal

12/11/2010

Duitama

Canino

UPTC

13/11/2010

Tunja

Canino

Uriel Parra

Medicentro Vet

16/11/2010

Tunja

Canino

Clara Rivadeneira

Mundo Animal

17/11/2010

Duitama

Canino

Luis Chávez

Asmevet

18/11/2010

Tunja

Canino

Andrés Caicedo

SOS animal

18/11/2010

Villa de Leyva

Canino

Luis Chávez

Asmevet

20/11/2010

Tunja

Felino

Uriel Parra

Medicentro Vet

24/11/2010

Tunja

Canino

Clara Rivadeneira

Mundo Animal

29/11/2010

Duitama

Canino

Pedro Luis Coy

UPTC

29/11/2010

Tunja

X X

Canino

Uriel Parra

Medicentro Vet

01/12/2010

Tunja

Canino

Luis Chávez

Asmevet

06/12/2010

Tunja

Canino

Luis Chávez

Asmevet

07/12/2010

Tunja

Canino

Uriel Parra

Medicentro Vet

14/12/2010

Tunja

Canino

Uriel Parra

Medicentro Vet

15/12/2010

Tunja

Canino

Uriel Parra

Medicentro Vet

16/12/2010

Tunja

Canino

Consuelo González

Zoomedica

22/12/2010

Tunja Tunja

X X

Canino

Uriel Parra

Medicentro Vet

31/12/2010

Condor

Viviana Gómez

JDC

13/01/2011

Canino

Uriel Parra

Medicentro Vet

26/01/2011

Canino

Nicolai Díaz

Cll 45BNo 4-64

28/01/2011

Equino

Ricardo Gracía

JDC

29/01/2011

Canino

Luis Chávez

Asmevet

29/01/2011

Tunja

Canino

Luis Chávez

Asmevet

02/02/2011

Tunja

X X

Tunja

(FAS)FOSFATASA ALCALINA-(CRE)CREATININA-(B.D)BILIRRUBINA DIRECTA-(B.T)BILIRRUBINA TOTAL-(GLU)GLUCOSA-(CAL)CALCIO ANALITO ALT

AST

BUN

GLU

CAL

FECHAS

LUGAR

Canino

Eduard Rozo

Pet Center

05/02/2011

Tunja

Canino

Luis Chávez

Asmevet

21/02/2011

Tunja

Canino

Medicentro Vet

28/02/2011

Tunja

Canino

Uriel Parra Juan Carlos Saavedra

28/02/2011

Tunja

Canino

Uriel Parra

Medicentro Vet

02/03/2011

Tunja

Bovino

Alfredo Otalora

04/03/2011

Ventaquemada

Equino

Javier Arias

JDC

07/03/2011

Soraca

Condor

Andrés Martelo

JDC

07/03/2011

Soraca

Canino

09/03/2011

Tunja

Canino

Patricia Vanegas Juan Carlos Saavedra

10/03/2011

Tunja

Canino

Luis Ariel Mesa

10/03/2011

Velez

Canino

Luz Mary Delgado

PetDoctors

12/03/2011

Tunja

Canino

Uriel Parra

Medicentro Vet

22/03/2011

Tunja

X X

B.T

ENTIDAD

X X

B.D

CONSUMIDORES

X X

CRE

ESPECIE

FAS

DATOS LABORATORIO CLINICO MICROZOO

X X

ANEXO B COTIZACIONES

Cra 16 No. 96-64 Of.412 Teléfonos: 7028979-6180905

Bogotá, 23 de Mayo de 2011 Señores MICROZOO Atn: Dr. Mauricio Boyacá TunjaRef. Oferta Comercial Según su solicitud, presento oferta comercial para el equipo y bajo las condiciones siguientes:

DESCRIPCIÓN ANALIZADOR SEMIAUTOMATIZADO PARA QUÍMICA CLÍNICA BTS 350

VALOR

IVA

TOTAL CON IVA

$10’000.000=

$1’600.000=

$11’600.000=

Condiciones Comerciales: Forma de Pago: Contado Validez de la Oferta: Hasta Marzo 31 de 2011 Entrega: Inmediata Nota: En caso de salir favorecidos con la presente oferta les solicitamos se sirvan elaborar orden de Para efectos fiscales les informamos que somos grandes contribuyentes y autoretenedores.

Cordialmente,

ARMANDO VALENZUELA Gerente de Ventas

SERVICIO DE EQUIPOS , REACTIVOS E INSUMOS MEDICOS Y LABORATORIO CLINICO

Bogotá, 25 de Mayo 2011 Señores MICROZOO Atta.: Dr. MAURICIO BOYACA Tunja Respetada señora de la manera más atenta me permito cotizar el equipo que usted solicitó: PRODUCTO

MARCA

CANTI

Mindray

V/UNI

IVA

V/TOTAL

PRESENTACION

Equipo semi-Automatizado BA-88ª

14’500.000 2’320.000 16´820.000

Análisis de Química Sanguínea Modo de lectura. Celda de Flujo o cubeta * Dos puertos USB (teclado, Mouse o impresora) * Permite programar hasta 200 test * Pantalla táctil de 7" * Longitud de onda de 340 - 670 nm * Permite ingresar datos demográficos Anexo características del equipo. Vigencia de la oferta: 30 Días a partir de la fecha de cotización. Condiciones de Pago: 50 % con la orden de pedido y 50 % contra entrega . Plazo de Entrega: A los 30 días de la fecha de orden de pedido Cordialmente,

NEEDY ASTRID BARRIOS H. Bacterióloga U. de los Andes Gerente

ANEXO C TAMAﾃ前 DE LA NUESTRA DADO POR EL PROGRAMA WIN EPISCOPE 2.0.

ANEXO D LLEGADA DEL EQUIPO AL LABORATORIO CLÍNICO VETERINARIO MICROZOO

Fuente, Autor 2011

ANEXO E CAPACITACIÓN DEL NUEVO EQUIPO BTS 350 Inducción y capacitación del manejo del equipo para procesamiento de pruebas de química sanguínea realizado por la Doctora Mónica Liliana Velandia Baez; asesora comercial de (Biosystems) y bacterióloga Colegio Mayor Capacitación

Presentación del equipo

Fuente, Autor 2011

ANEXO F ORGANIGRAMA DEL LABORATORIO CLÍNICO VETERINARIO MICROZOO

LABORATORIO CLÍNICO VETERINARIO DIAGNOSTICO DE BRUCELOSIS POR ROSA DE BENGALA COMITÉ DIRECTIVO

DIRECTOR TÉCNICO

SUBDIRECTOR TÉCNICO

DEP DIAGNÓSTICO

PRUEBAS DE LAB

DEP EXTENSIÓN

DEP DE VENTAS

PRUEBAS DE

PARASITOLOGIA HISTOPATOLOGÍA

SECRETARÍA GENERAL

MICROBIOLOGIA INMUNOLOGIA

HEMATOLOGÍA URIANALISIS

ANEXO G MISIÓN Y VISIÓN DEL LABORATORIO CLÍNICO VETERINARIO MICROZOO

Misión: Apoyar a, Médicos Veterinarios, Zootecnistas, Médicos Veterinarios Zootecnistas, y en general a los profesionales que tengan que ver con la salud pública, en lo referente al proceso y diagnóstico de las diferentes enfermedades que aquejan a la salud de los animales y representan un riesgo potencial de transmisión a las personas, accediendo de esta manera a mejorar la calidad de los productos derivados de la explotación pecuaria, generar conocimiento a través de la aplicación del método científico de manera que pueda contribuir con el desarrollo del arte de curar. Ofrecer cursos de extensión tal que se pueda mejorar el proceso de diagnostico. De la misma forma suministrar equipos e instrumentos médicos y de laboratorio.

Visión: De acuerdo a la identidad y la misión de MICROZOO, proyecta para el año 2015 ser un centro de diagnóstico de importancia departamental, nacional, que contribuya al adelanto de la investigación en el área diagnostica, a través, de la utilización de la mayor cantidad de pruebas totalmente actualizadas, con lo cual se pretende contribuir con el progreso de las ciencias medicas veterinarias, desarrollando, sus actividades con de gran calidad y ética.

ANEXO H PRESENTACIÓN DE LOS REACTIVOS

Prueba de BUN/COLOR

Prueba de ALT/GPT

Prueba de creatinina

Prueba de ALP/AMP

Prueba de AST/GOT

Prueba de y-GT

Fuente, autor 2011