Correlación entre la cristalización del moco cervical la ecografía y la concentración de estrógenos by Medicina Veterinaria JDC

CORRELACIÓN ENTRE LA CRISTALIZACIÓN DEL MOCO CERVICAL LA ECOGRAFÍA Y LA CONCENTRACIÓN DE ESTRÓGENOS EN VACAS, PARA LA DETECCIÓN DEL MOMENTO ÓPTIMO DE LA INSEMINACIÓN ARTIFICIAL

YAMITH RANGEL RAMIREZ SILVA

FUNDACION UNIVERSITARIA JUAN DE CASTELLANOS FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA Tunja, 2014

CORRELACIÓN ENTRE LA CRISTALIZACIÓN DEL MOCO CERVICAL LA ECOGRAFÍA Y LA CONCENTRACIÓN DE ESTRÓGENOS EN VACAS, PARA LA DETECCIÓN DEL MOMENTO ÓPTIMO DE LA INSEMINACIÓN ARTIFICIAL.

YAMITH RANGEL RAMIREZ SILVA

DIRECTOR Dr. GIOVANNI MORENO MV, Msc, Ph.D.

CODIRECTORA Dra. ANASTASIA CRUZ CARRILLO MV, Esp, Msc.

FUNDACION UNIVERSITARIA JUAN DE CASTELLANOS FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA Octubre 2014, Tunja (Boyacá)

GLOSARIO

Celo: Se define como el periodo comprendido entre la aparición del estro y hasta el comienzo el siguiente, o bien, el intervalo de tiempo comprendido entre dos ovulaciones. La duración del ciclo estral depende de cada especie.

Cérvix o cuello uterino: Parte inferior del útero que ocupa aproximadamente la tercera parte de este órgano. Constituye el canal de comunicación del cuerpo uterino con la vagina de la hembra.

Ciclo ovárico: Es el proceso mediante el cual se desarrollan los gametos femeninos (óvulos u ovocitos) y se producen una serie de cambios dirigidos al establecimiento de una posible preñez . Ciclo estral: Es el periodo comprendido entre la aparición del estro y comienzo del siguiente, o bien, el intervalo de tiempo comprendido entre dos ovulaciones.

Cuerpo lúteo: También conocido como cuerpo amarillo, es una estructura ovárica que aparece después de la ovulación, por hiperplasia e hipertrofia de las células de la teca interna, caracterizada por producir progesterona.

Días abiertos: Los días abiertos son aquellos que transcurren desde el día que una vaca hace un parto hasta cuando inicia una nueva preñez.

Edema vulvar: Aumento del tamaño de la vulva que ocurre en el estro de las vacas, por extravasación de líquidos

Estrógeno: Hormona esteroidea implicada en el desarrollo de los caracteres sexuales secundarios de la hembra, en la regulación del ciclo estral y de la ovulación y en las manifestaciones del celo.

Fecundación: Es el encuentro de las dos células reproductoras masculina y femenina y se produce en una de las trompas de la hembra, donde se encuentra el ovulo.

Folículos: Acumulación de células esféricas que se encuentran en el interior del ovario, rodeando un ovocito.

Fractalidad: Estructura natural cuya forma es fragmentada o irregular se repiten a diferentes escalas.

Hormona: Sustancia que poseen los animales y los vegetales que regula procesos corporales como, el metabolismo, la reproducción y el funcionamiento de distintos órganos.

Hormona liberadora de gonadotropinas (GNRH): sustancia producida en el hipotálamo, que estimula a la glándula pituitaria para que libere las gonadotropinas FSH y LH

Hormona folículo estimulante (FSH): Hormona gonadotrópica de naturaleza glicoproteica producida por el lóbulo anterior de la hipófisis, que en la hembra estimula la maduración del folículo de DeGraaf del ovario y la secreción de estrógenos.

Hormona luteinizante (LH): Hormona gonadotrópica de naturaleza glicoproteíca producida por el lóbulo anterior de la hipófisis, su acción se manifiesta sobre las

células de la granulosa del folículo DeGraaf del ovario, favoreciendo la ovulación y la formación del cuerpo lúteo.

Inseminación artificial: Método de reproducción en el que el esperma es depositado en la hembra mediante instrumental especializado y utilizando técnicas que reemplazan a la copula.

Intervalo entre partos: El intervalo entre partos muestra el periodo transcurrido entre un parto y otro, está constituido por la sumatoria de los días abiertos más los días de duración de la gestación.

Moco Cervical: La parte más interna de la vagina es bloqueada por un tapón de mucosidad

espeso

moco

ácido.

Después

pasado

tiempo

(aproximadamente 7 días), la película de moco y su pH se incrementa hacia la neutralidad (disminuyendo su acidez), generando que el moco sea de carácter más elástico. Esto último permite a los espermatozoides pasar a través del cérvix a las trompas de Falopio, donde esperarán un óvulo que pueda ser fecundado.

Moco Cervical, cristalización: La cristalización es la consecuencia de la organización de los cristales de cloruro sódico y potásico alrededor de un eje orgánico, la mucina, durante la desecación. En condiciones fisiológicas, la arborización característica en hojas de helecho es proporcional a la concentración de estradiol circulante y por tanto máxima en la fase preovulatoria.

Ovulación: Expulsión del ovario, espontanea o inducida, de uno o varios óvulos.

Ovarios: Órgano propio de las hembras de los animales, encargado de producir las células reproductivas llamadas óvulos.

Progesterona: Hormona esteroidal producida por las células del cuerpo lúteo del ovario y de la placenta, en algunas hembras

Prostaglandina: Sustancias similares a hormonas,

derivadas del ácido

araquidónico (ácido graso), que se sintetiza en casi todos los tejidos del animal y modulan diversidad de acciones fisiológicas.

Sincronización de Celo: Describe el ajuste temporal de algún evento. Se habla de sincronización cuando determinados fenómenos ocurran en un orden predefinido o a la vez. Utilizando hormonas para la inducción del celo y por ende la ovulación de la hembra.

Útero: Víscera, aplanada, con forma bicornual, localizada en la pelvis de las hembras de la mayoría de los mamíferos. Es el órgano donde se implanta el ovulo fecundado para su desarrollo.

Vagina: Conducto muscular que conecta el cuello (cérvix) del útero con el exterior, y que sufre cambios visibles en el momento del estro

Vulva: Abertura externa de la vagina.

TABLA DE CONTENIDO

1. RESUMEN

2. INTRODUCCION

3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

4. OBJETIVOS

4.1.OBJETIVO GENERAL

4.2.PBJETIVOS ESPECIFICOS

5. JUSTIFICACION

6. MARCO REFERENCIAL

6.1. ESTADO DEL ARTE

6.2. MARCO TEORICO

6.2.1. Control Endocrino de la Función Reproductiva

6.2.2. Ciclo estral

6.2.3. Características del moco cervical bovino

6.3. MARCO LEGAL

7. HIPÓTESIS

8. DISEÑO METODOLOGICO

8.1. TIPO DE ESTUDIO

8.2.

MARCO GEOGRAFICO Y CLIMÁTICO

8.3.

ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

8.4.

DISEÑO METODOLOGICO

8.5.

PROCEDIMIENTOS

8.5.1. Protocolo de Sincronización

8.5.2. Evaluación de las Manifestaciones de Celo

8.5.3. Toma de Muestra y Envio al Laboratorio

8.5.4. Toma de Impronta Laminar

8.5.5. Realización de Ecografía

9.ANALISIS DE LOS RESULTADOS

10.RESULTADOS

10.1.RESULTADOS

10.1.1. Ecografía Ovárica

10.1.2. Características del Moco Cervical

10.1.3. Manifestaciones Externas del Estro

10.1.4. Niveles de Estrógenos Séricos

10.1.5. Comparación de las Características del Estro Evaluadas en el Tiempo 0

10.1.6. Comparación de las Características del Estro Evaluadas a las 4 Horas 60 10.1.7. Comparación de las Características del Estro Evaluadas a las 12 H.

10.1.8. Comparación de las Características del Estro Evaluadas a las 20 H

10.1.9. Comparación de las Características del Estro Evaluadas a las 24 H

10.2 DISCUSIÓN.

11. IMPACTO

12. CONCLUSIONES

13. RECOMENDACIONES

14. BIBLIOGRAFIA

LISTA DE IMÁGENES

Imagen 1.

Moco cervical

Imagen 2.

Helechos formados por el moco cervical cuando se acerca

el momento de la ovulación Imagen 3.

Mapa ubicación del proyecto

Imagen 4.

Animales de estudio

Imagen 5.

Vacas manifestando externamente el estro

Imagen 7.

Toma de la impronta laminar del moco cervical

LISTA DE TABLAS

Tabla 1.

Criterio de las manifestaciones del estro utilizadas durante el estudio

Tabla 2.

Categorías para evaluar las características del moco cervical Cristalizado

Tabla 3.

Tipo de folículos ováricos identificados mediante ecografía en diferentes tiempos

Tabla 4.

Características del moco cervical según categorías determinadas56

Tabla 5.

Hallazgos de las manifestaciones externas del estro en el tiempo de estudio

Tabla 6.

Valores encontrados de estradiol en los animales de estudio

Tabla 7.

Características del celo evaluadas al tiempo 0

Tabla 8.

Correlación estadística de las trevariable al tiempo 0

Tabla 9.

Características del celo evaluadas a las 4 horas

Tabla 10.

Correlación estadística de las tres variables a las 4 horas

Tabla 11.

Características del celo evaluadas a las 12 horas

Tabla 12.

Correlación estadística de las tres variables a las 12 horas

Tabla 13.

Características del celo evaluadas a las 20 horas

Tabla 14.

Correlación estadística de las tres variables a las 20 horas

Tabla 15.

Características del celo evaluadas a las 24 horas

Tabla 16.

Correlación estadística de las tres variables a las 20 horas

Tabla 17.

Correlación estadística de las tres variables a las 20 horas

1. RESUMEN

La detección del celo en hembras bovinas, favorece el desempeño reproductivo de los hatos, porque permite establecer el momento indicado para realizar la inseminación artificial (IA) o la monta natural. En tal sentido, se han utilizado diferentes mecanismos para lograr este fin y siendo: la observación de las manifestaciones externas del celo, la medición de hormonas, la palpación rectal y la valoración ecográfica, aplicadas unas u otras, de acuerdo con las posibilidades de cada productor. Sin embargo, existe otro parámetro que resulta útil al momento de de la ovulación, que corresponde a las características físicas del moco cervical el cual adquiere una disposición típica al momento de la ovulación en hembras bovinas, permitiendo relacionar, esta última, con el tipo de cristalización lograda. A pesar de que en Boyacá, se realizó un estudio que buscó caracterizar la cristalización del moco en la fase preovulatoria, este no se realizó, hasta el momento de la ovulación, no algunas horas posteriores a esta, es decir que no se tiene la caracterización completa de la cristalización de moco cervical, en el periestro de vacas Bos taurus.

Por lo anterior, el objetivo de este trabajo es

establecer todos los cambios estructurales microscópicos, que sufre el moco cervical, antes, durante y después del estro, para proponerlo como herramienta diagnóstica del mismo. Se tomaron 10 hembras bovinas adultas, sanas, las cuales se sincronizaron, con un protocolo a base de progesterona, prostaglandina F2-alfa y estrógenos. Posterior a la sincronización, se hizo un seguimiento a la hora 0, 4, 12, 20, 24, valorando la cristalización del moco cervical, el estado folicular (ecografía), las manifestaciones externas del celo y los niveles séricos de estrógenos. Se espero caracterizar las ramificaciones que forma el moco cervical en las etapas de observación, corroborando la fase del ciclo estral con las otras valoraciones mencionadas.

Palabras clave: actividad folicular, estro, manifestación de celo, ovulación, impronta laminar

ABSTRACT

The detection of estrus in bovine females favors the reproductive performance of these because it allows for the right time to perform artificial insemination (AI) or natural mating In this sense, we have used different mechanisms to achieve this purpose and being: the observation of the external manifestations of estrus, measuring hormones, rectal palpation and ultrasound assessment, applied one and the other according to the capacities of each product. However, there is another parameter that is useful when defining the time of ovulation, which corresponds to the physical properties of cervical mucus which acquires a typical arrangement the time of ovulation in female cattle allowing relate the latter, with the crystallization rate achieved. Although in Boyacรก, a study that sought to characterize the crystallization of mucus in the ovulatory phase is performed, this was not conducted, to the time of ovulation, not a few hours after this, is not a complete characterization of the crystallization of cervical mucus in Bos taurus cows periestro. Therefore, the aim of this work is to establish all of macroscopic structural changes experienced by the cervical mucus, before, during and after estrus, to propose it as a diagnostic gadget, 10 adult female cattle, healthy were taken, which will sync with a protocol based on progesterone, prostaglandin F2alpha and estrogen. After the synchronization, it will track when 0, 4, 12, 20, 24, valuing the crystallization of cervical mucus, follicular status (ultrasound), the external manifestations of estrus and serum estrogen levels. The ramifications are expected to characterize the cervical mucus that forms in the stages of observation, corroborating the stage of the estrous cycle with the other reviews mentioned.

Key words: follicular activity, estrus manifestation of estrus, ovulation, mark sheet

2. INTRODUCCIÓN

En los sistemas de producción bovina que utilizan la Inseminación Artificial (IA) y en casos donde se realiza la monta directa, pero que el toro no se encuentra en contacto permanente con las hembras, la detección del celo constituye el factor más determinante del éxito reproductivo de la explotación. Bajo tales condiciones, en la reproducción bovina el principal problema es la detección del celo ya que algunas hembras no siempre muestran receptividad sexual hacia el macho, sino cambios que difícilmente se pueden detectar a simple vista. El moco cervical es una de estas manifestaciones que da mayor índice de asertividad de manera económica con respecto a la detección del celo y el acercamiento del día de la ovulación, (García, 2010).

Es así como desde hace varios años se ha propuesto que el moco cervical producido por las hembras bovinas durante el estro, adquiere formas específicas una vez se cristaliza y que ello puede ser un factor predictivo para que el pequeño productor identifique, el momento ideal para realizar la IA (Velásquez, 2006).

Por lo tanto el presente trabajo se realizó con el fin de establecer las características

físicas

macroscópicas

del

moco

cervical

cristalizado

correlacionar esto, con el estado folicular, las manifestaciones externas de celo y los picos estrogénicos, propios de la ovulación, teniendo en cuenta que no todas las hembras en celo liberan moco cervical.

3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Se han creado a lo largo del tiempo técnicas para detectar el celo en las hembras bovinas, con diferentes grados de efectividad y aunque algunas de ellas dan aciertos cercanos a 100%, por los costos que implica, no están al alcance de todos los productores. Por lo anterior, la herramienta a la que pueden acceder los pequeños productores, son las manifestaciones externas de las hembras que pueden pasar desapercibidas, en algunos casos, llevando a aumento de los días abiertos (DA) y del intervalo entre partos (IEP) (Gonzales, 2008), servicios por consepcion.

Como consecuencia del aumento de los DA y del IEP, se alteran los parámetros reproductivos del hato, disminuyendo el número de nacidos en el año y eso repercute de manera directa sobre la rentabilidad del sistema de producción, sin importar cuál sea. Es así como cualquier falla o limitante en la detección del celo en las hembras bovinas, constituye un impacto negativo para el productor, que se magnifica, si sucede en las mayoría de las hembras (Roberto, et al, 2009).

Como se ha mencionado, el problema no es la ausencia de métodos diagnósticos del estro y de la ovulación, sino el costo que este representa para los pequeños e incluso medianos productores. De esa manera, se ha propuesto correlacionar varios parámetros indicativos del estro con el fin de determinar el momento de la ovulación en las hembras bovinas; si bien las manifestaciones externas del estro, el comportamiento hormonal y las características ecográficas de los ovarios son conocidas, la cristalización del moco cervical, no ha sido plenamente caracterizada en todo el peri-estro de esta especie y puede constituir una herramienta eficaz y a bajo costo, para la detección del celo en las hembras (Báez, 2010).

Es por ello que la búsqueda de métodos económicos y eficaces para la detección del celo, constituye una necesidad para favorecer la I.A o la monta natural, en el sentido general mayor éxito en el proceso, representado en mayor porcentaje de fertilidad.

En colombia es común que los pequeños productores no utilicen tecnologías de la reproducción lo que limita el mejoramiento genético y con ello la producción de carne y leche de manera competitiva con otros mercados. Es deber de los médicos veterinarios, proponer mecanismos que promuevan el mejoramiento genético, el desempeño productivo y reproductivo de los hatos, a cualquier escala y de fomentar tecnologías de diferentes niveles, que también estén al alcance de pequeños productores. Y mejorar los porcentajes de preñes por medio de las técnicas bioreproductivas, donde algunos autores indican que la tasa de consepcion es del 50% para la inseminación artificial y otros para la transferencia de enbriones de un 30%(BO) et al 2002.

4. OBJETIVOS

4.1 OBJETIVO GENERAL

Correlacionar la cristalización del moco cervical con los resultados de la ecografía endorrectal, la concentración de estrógenos y las manifestaciones externas del celo en vacas, para la detección del momento de la ovulación.

4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS Caracterizar los cambios estructurales macroscópicos del moco cervical en el periestro de hembras bovinas.

Establecer si hay relación entre la dinámica folicular por medio de ecografía endorectal con los cambios físicos macroscópicos del moco cervical.

Establecer si hay relación entre la concentración de estrógenos séricos con los cambios físicos macroscópicos del moco cervical.

Establecer si hay relación entre las manifestaciones externas del celo en vacas, con las características macroscópicas del moco cervical.

5. JUSTIFICACIÓN

Mediante el análisis y el estudio de las formas que adquiere el moco cervical en las fases pre-ovulatoria y ovulatoria en hembras bovinas, se buscó identificar en qué momento realizar la IA de éstas (Billings, 2003). Por ello, si se logra establecer cuáles son las estructuras que el moco cervical adopta en el momento óptimo para la fecundación, se logrará obtener mayores tasas de preñez en la preñez,

lo que brindará a los pequeños ganaderos una herramienta para

aumentar su producción, por esta razón, se debe comprobar si el moco puede servir como un método de detección de calores para el momento óptimo de la IA.

La búsqueda o profundización del conocimiento en una técnica poco utilizada, pero eficaz y económica para la identificación del momento ideal para la monta natural o la inseminación, constituye un beneficio a bajo costo, que puede mejorar el desempeño reproductivo de las hembras bovinas en cualquier tipo de producción, mejorando el número de DA y del IEP, repercutiendo esto, en el mejoramiento de la eficacia reproductiva del hato y la productividad del mismo.

Si se logra determinar una relación clara entre la estructura del moco cervical cristalizado con el momento de la ovulación, se ofrecerá una herramienta más y nuevos conocimientos para decidir el momento de la monta o de la IA, sin inducir a que las técnicas existentes se dejen de utilizar, sería un aporte más para confirmar dicho momento.

6. MARCO REFERENCIAL

6.1 ESTADO DEL ARTE

Saba & Martínez (2010), determinaron las características del moco cervical, horas antes del estro, en hembras bovinas sincronizadas, con el fin de relacionar el aspecto físico de este con el momento ideal de la ovulación. Se pudo determinar que en el momento del estro, la impronta del moco cervical muestra alto número de ramificaciones.

Cortés y Gonzales (2012) afirma que la fractalidad ha surgido como una característica propia de algunos sistemas biológicos y que por ella varias secreciones biológicas presentan patrones de tipo fractal al cristalizar; no obstante, su presencia en las cristalizaciones de moco cervical bovino aún se desconoce. Con el objetivo de investigar la presencia de fractalidad en las cristalizaciones de moco cervical bovino, se obtuvieron muestras de este fluido de vaquillas en estro, observándose los patrones cristalinos encontrando que, las dimensiones fractales obtenidas fueron estadísticamente iguales al ser dichas áreas analizadas con un programa computacional apropiado. Esta comunicación breve demuestra por primera vez que uno de los patrones de cristalización de moco cervical bovino en estro está caracterizado por una organización de tipo fractal.

La falla en las vacas lecheras para quedar gestantes después de repetidas inseminaciones artificiales IA es causa de pérdidas económicas. Esta situación se debe a múltiples factores, entre ellos la composición del moco cervical (MC). Numerosos trabajos han demostrado una fuerte interacción entre éste y el espermatozoide. Además, sus propiedades influyen en el movimiento espermático individual, aun cuando el espermatozoide pueda evitar el cérvix como es el caso

de la IA. Una de las propiedades biofísicas del mucus es la cristalización (formación de helechos), la cual permite la detección del celo y juega un papel importante sobre la motilidad espermática. (Lucy, et al; 2006).

En el 2007 Ahmadi et al, evaluaron la influencia de diversos métodos de sincronización en la composición celular del moco cervical en 60 hembras bovinas raza Holtein días antes de la IA. A pesar de que los protocolos utilizados estuvieron constituidos por diversos tipos de hormonas no se encontró efecto directo de las misma sobre la proporción de las células evaluadas (neutrofilos, linfocitos, células epiteliales (Ahmadi et al, 2007).

6.2 MARCO TEÓRICO

El sistema reproductor de la hembra bovina está constituido por los órganos internos y

externos. Dentro de los primeros, se incluyen los ovarios y el sistema

de conductos formados por el oviducto, trompas de falopio, útero (cuerpo, cuernos), cérvix y vagina y los segundos estan representados por el vestíbulo y la vulva (Rivera, 2009).

La vulva es la parte más externa y está formada por los labios vulvares derecho e izquierdo que son pliegues de la piel que miden aproximadamente 12 cm, de longitud. La vulva posee receptores de estrógenos por lo que durante el estro se observan cambios en las características físicas de la misma. En su parte ventral se encuentra el clítoris. Inmediatamente después de la vulva se encuentra el vestíbulo vaginal en el cual se encuentra el meato uretral y el divertículo vaginal (saco ciego), ubicado en la parte ventral del mismo. El vestíbulo continúa con la vagina. La vagina desempeña varias funciones en la reproducción, siendo la más importante de servir de receptáculo natural del semen depositado por el toro en la monta natural y como vía de salida del fetodurante el parto (Rivera, 2009)

El cuello uterino o cérvix

forma parte del útero y es una estructura de tipo

cilíndrica con bordes transversales o espirales alternados, llamados anillos que en la hembra bovina, generalmente son tres. Continuando el cérvix que oscila entre 8 a 10 cm de longitud. Dentro de sus principales funciones están la de facilitar el transporte de los espermatozoides hacia la luz del útero, mediante la producción de moco, actúa como reservorio de espermatozoides y durante el celo, por influencia de los estrógenos induce la relajación de la musculatura lisa del cérvix, se relaja bajo la influencia de los estrógenos posibilitando la abertura del canal cervical lo cual facilita la IA (Singer, 2004).

En contraste con esto, durante la gestación y el diestro el conducto cervical queda sellado por un moco viscoso que actúa como barrera contra el transporte de semen y la invasión de bacterias. Es importante hacer notar que el tamaño, la consistencia y la forma del cérvix varía de acuerdo a la edad del animal, la raza, el número de parto, y la etapa del ciclo estral (Prange et al, 2007).

El útero de la vaca es de tipo bicornual, es decir, que cuenta con un cuerpo uterino pequeño que oscila entre 2 a 4 cm y dos cuernos uterinos que miden de 35 a 45 cm de longitud, aproximadamente. En su trayectoria, los cuernos se curvan hacia atrás y hacia arriba (Rivera, 2009).

Inmediatamente después de los cuernos uterinos inician los oviductos, los cuales son los encargados de transportar tanto a los espermatozoides como a los óvulos. Los oviductos tienen una medida aproximadamente de 25 cm. y se encuentran divididos en forma funcional en tres segmentos que son: 

Infundíbulo, que es el encargado de recibir al óvulo cuando este es expulsado del ovario cuando ocurre la ovulación.



Ámpula (ampolla), es la parte media del oviducto y es el sitio en el que normalmente ocurre la fecundación.



Istmo que es la parte que comunica con los cuernos uterinos y funciona como reservorio de espermatozoides (Rivera, 2009). Los ovarios se consideran los órganos más importantes del aparato reproductor de la hembra, ya que en ellos se producen los óvulos

y las hormonas. El ovario puede tener una medida

aproximadamente de 2 a 4 cm. de largo por 1 a 2 cm. de ancho. Además el ovario como glándula sexual femenina es

responsable de organizar y dirigir la vida

sexual de la hembra. Los ovarios permanecen en la cavidad abdominal, en donde en condiciones normales liberan un óvulo aproximadamente cada 21 días (Chagoy et al, 2001; Dubey et al, 2007).

6.2.1 Control Endocrino de la Función Reproductiva

En la reproducción bovina, juegan un papel muy importante las diferentes hormonas y órganos productores de éstas, ya que gracias a la presencia de estas sustancias durante toda la vida reproductiva de la vaca y en especial durante el ciclo estral, se observan diferentes cambios fisiológicos y anatómicos que son un indicativo de la presencia del estro en las hembras bovinas (Wiltbank et al, 2006).

Dentro de las hormonas que intervienen durante el ciclo estral se destacan, el factor liberador de gonadotropinas (GnRH), la hormona folículo estimulante (FSH), la hormona luteinizante (LH), los estrógenos, la progesterona, la prostaglandina F2α y la inhibina; cada una de ellas desencadenando acciones definidas y determinantes para el correcto funcionamiento del ciclo estral.

El GnRH

es un péptido de diez aminoácidos, sintetiza por el hipotálamo y

almacena en la eminencia media, hasta el momento en que haya despolarización neuronal, momento a partir del cual es liberado hacia los capilares fenestrados por el sistema portal hipofisiario, para llegar a la hipófisis, donde actúa, estimulando la

liberación de FSH o de LH, de acuerdo con el pulso recibido (Munar, 2007; Gigli et al, 2006).

Por su parte, la FSH, que también es una hormona de tipo peptídico, se produce en la adenohipofisis y cumple tareas muy significativas como la inducción del crecimiento y maduración de los folículos ováricos (Echeverría, 2006). Adicionalmente, esta hormona actúa en las células de la teca interna de los folículos terciarios, estimulando la acción de la enzima aromatasa, con lo que se favorece el paso de andrógenos a estradiol, por ello se indica que los folículos maduros producen estrógenos y que esto es desencadenado por la FSH. De manera complementaria en los folículos dominantes, esta hormona, mejora la irrigación de los mismos, con lo que se logra mayor nutrición; así mismo promueve la mitosis de las células de la granulosa, incrementando las capas que rodean al ovocito y por ello favoreciendo su crecimiento. Finalmente la FSH, junto con los estrógenos que están siendo producidos, sensibilizan las células de la granulosa de los folículos ovulatorios para expresar los receptores de LH, hormona que se producirá posteriormente (Gigli et al 2006).

La LH (hormona peptídica), se produce en la adenohipofisis y cumple funciones durante el ciclo estral como reactivar la meiosis en el folículo ovulatorio, estimular la ovulación, favorecer la formación y el mantenimiento del cuerpo lúteo. Su sito de acción corresponde a receptores ubicados en las membranas celulares de las células de la granulosa y de la teca en el folículo ovulatorio. Durante la fase luteal, esta hormona se mantiene en bajas concentraciones y aumenta antes del estro, alcanzando su pico máximo, un día después de la ovulación (Gigli et al, 2006; Syntex, 2005).

Los estrógenos, ayudan en la función reproductiva de las hembras bovinas ya que son sintetizados por los ovarios y en menores cantidades por las glándulas adrenales. Los estrógenos, en las hembras jóvenes, estimulan el desarrollo del

aparato reproductor femenino, de las mamas y de las características sexuales secundarias y después de la pubertad, participan activamente en las manifestaciones del estro y en varias fases del ciclo estral y del parto (Echeverría, 2005; Rodríguez, 2005). Específicamente favorece la apertura del cérvix para el paso de los espermatozoides y altera la viscosidad del moco cervical, haciéndolo menos viscoso (Echeverría, 2006). Otra de las principales funciones de los estrógenos es estimular a nivel hipotalámico, la producción de GnRH-LH, con lo que se estimula a nivel hipofisiario, la producción de LH para la ovulación. Los estrógenos son las hormonas típicas femeninas, también esteroides, y el principal es el estradiol. Son producidos por el ovario en respuesta al estímulo de la FSH.

Sus funciones más características las ejercen sobre los órganos reproductores pero tienen también acción sistémica. Son responsables del desarrollo de los órganos genitales durante la pubertad, de los caracteres sexuales secundarios y de la hiperemia, el edema, y el aumento de la vascularización y de la actividad secretora que sufre el aparato genital femenino durante el estro. Tienen acción trófica, favoreciendo las mitosis en el epitelio del aparato genital, el desarrollo glandular en el endometrio y el desarrollo de los conductos en la glándula mamaria. Estimulan la foliculogénesis ovárica, producen queratinización vaginal durante el estro y aumentan el tono del miometrio uterino y el nivel de anticuerpos del aparato genital. A nivel sistémico, son responsables del comportamiento característico de la hembra durante el estro, regulan la secreción de FSH y LH (Echeverría, 2005).

Una hormona necesaria para el desarrollo reproductivo de la hembra es la Progesterona, que es producida por las células del cuerpo lúteo y en algunas hembras por la placenta y cumple funciones tales como mantenimiento de la gestación estimulando el crecimiento de una membrana protectora en el útero en donde el óvulo fecundado pueda crecer y convertirse en un feto sano, también activa el desarrollo del aparato secretor de las mamas (Stevenson, 2008).

La prostaglandina F-2 alfa es producida a partir del ácido araquidónico, ácido graso presente en los fosfolípidos de la membrana celular de las células endometriales, con mediación de la enzima ciclo-oxigenasa-1, en la vía del ácido araquidónico, por lo cual, tiene estructura de ácido graso polinsaturado de 20 carbonos. Esta prostaglandina, llega al ovario a cumplir su función por un mecanismo de contracorriente entre la vena y la arteria ovárica. Dentro de sus funciones se destaca la vasoconstricción de los capilares que nutren el cuerpo lúteo, conduciendo a la regresión del mismo (luteólisis); igualmente, favorece la contracción uterina durante el parto y la relajación del cérvix (Echeverría, 2006; Pareja, 2006; Callejas &Taurus, 2004).

6.2.2 Ciclo estral Se define como “el período comprendido entre la aparición del estro y hasta el comienzo del siguiente, o bien, el intervalo de tiempo comprendido entre dos ovulaciones”. El ciclo estral bovino tiene una duración promedio de 21 días, y lo más característico de este ciclo, es la manifestación de receptividad sexual, por periodos limitados, por parte de las hembras. Igualmente durante las fases del ciclo estral se manifiestan una serie de acontecimientos los cuales se pueden establecer o dividir

y así mantener de forma concisa y ordenada la clasificación

de las diferentes fases ( Rippe, 2009;Lucy,2006).

Muchos autores clasifican el ciclo estral en cuatro fases, el proestro, en la que se forman los folículos ovulatorios y hay secreción de estrógenos; el estro, en la que se observa la receptividad del macho y continua la producción de estrógenos; en el metaestro se forma el cuerpo lúteo y por ello inicia la producción de progesterona, la cual se mantiene durante la fase conocida por diestro. (Senger, 2004). Otros lo denominan como fase folicular que incluye proestro y estro y la luteal, constituida por metaestro y diestro. Para otros, las fases del ciclo estral son

la folicular o de regresión lútea, la periovulatoria constituida por estro y metaestro y la luteal también denominada diestro (; Rippe, 2009; lucy,2006).

Fase folicular o de regresión lútea (proestro)

Este período, cuya duración es de 3 días, comienza con la regresión del cuerpo lúteo del ciclo anterior y finaliza con la manifestación de celo. Al producirse la destrucción del cuerpo lúteo los niveles de progesterona descienden

y como

consecuencia de esto, disminuye la retroalimentación negativa que dicha hormona ejerce sobre el hipotálamo. Inmediatamente el hipotálamo comienza a producir GnRH y con ello aumenta la frecuencia pulsátil de la hormona FSH, la cual estimula el crecimiento folicular con el desarrollo de un folículo con un tamaño inicial de 20 a 30 mm de diámetro. A medida que ese folículo va desarrollándose comienza la producción de estrógenos (Sintex, 2005; Senger, 2004).

* Fase prevulatoria (estro y metaestro) Esta fase comienza con la receptividad al macho e involucra todos los cambios que permiten la ovulación y comienzo de la formación del cuerpo lúteo.

Como se dijo anteriormente por acción de la FSH ha habido maduración de varios folículos aunque la hembra sea monotoca. Dichos folículos comienzan a producir inhibina, la cual ejerce retroalimentación negativa sobre el hipotálamo, interrumpiendo la producción de GnRH-FSH con el fin de que no maduren más folículos. De manera paralela el folículo que ha comenzado a producir estrógenos al llegar a mayores concentraciones estimulan en el centro hipotalámico la producción de GnRH-LH con lo que se logra un pico de LH suficiente para desencadenar la ovulación. Así mismo esa concentración de estrógenos que ha venido en ascenso va desencadenar de manera progresiva las manifestaciones de

celo (Narváez, 2007). Posteriormente, 4 a 12 horas después de la onda de LH, se incrementan la concentración basal y la amplitud de los pulsos de FSH, relacionándose esto con la primera onda de crecimiento folicular. Luego de 12 a 24 horas de comenzado el celo, el sistema nervioso de la vaca se torna refractario al estradiol y cesan todas las manifestaciones psíquicas del mismo. (Mihm et al, 2006).

La activación folicular se divide en dos etapas diferentes. La primera se denomina activación inicial y la segunda activación de folículos antrales. La inicial abarca la diferenciación de folículos primordiales hasta folículos terciarios. Tanto la activación inicial como el crecimiento hasta la formación del antro es gonadotrófico independiente, es decir que no depende de las concentraciones séricas de FSH y LH como se ha mencionado anteriormente. Aún no se ha podido determinar cual o cuáles son los mecanismos que determinan el momento preciso en que un grupo de folículos primordiales comienzan a diferenciarse y a crecer (Gigli et al, 2006).

La activación de folículos preantrales en bovinos sugieren que la hormona antimulleriana (AMH) secretada por las células granulosas de folículos primarios, tendría como función inhibir la activación de folículos primordiales. Cuando predominan estos últimos, un grupo de folículos primordiales abandona el grupo de folículos inactivos y comienza el proceso de diferenciación. Los folículos preantrales pueden quedar retenidos en su crecimiento por largos períodos hasta que ocurre la segunda activación denominada activación de folículos terciarios o antrales (Gigli et al, 2006). Esta segunda fase de activación tiene características muy diferentes a la primera ya que requiere niveles elevados de FSH. Esta activación en el caso particular de la especie bovina ocurre solamente en la temporada reproductiva. Los primeros estudios

foliculogénesis

fueron

realizados

mediante

seguimientos

ecográficos por eso sólo describen el patrón de comportamiento de los folículos terciarios. A partir de estos estudios ecográficos se definió a la onda folicular como

la activación y crecimiento simultáneo de un grupo de folículos terciarios que en un punto divergen continuando uno de ellos su crecimiento y diferenciación (folículo dominante) mientras que los otros (folículos subordinados) se atresian. A medida que los estudios moleculares fueron avanzando, han permitido determinar que los folículos secundarios ya expresan receptores para FSH y requieren de su estimulación para formar la cavidad antral (Gigli et al, 2006).

Una vez que los folículos primordiales comienzan a diferenciarse, es decir abandonan la población de folículos de reserva tienen dos caminos posibles a seguir: ovular o atresiarse en algún punto de su diferenciación. Alrededor del 99% de los folículos que comienzan la activación se atresian sin llegar nunca a ovular. El proceso de atresia puede ocurrir en cualquier momento de la foliculogénesis. Histológicamente la atresia se caracteriza por la presencia de vacuolas en el citoplasma del ovocito y por la presencia de núcleos picnóticos en las células de la granulosa (Gigli et al, 2006).

El período inmediato a la finalización del celo, es el metaestro (6 días). En este período ocurre la ovulación de la vaca. La ovulación ocurre 28 a 32 horas de iniciado el celo. A la ovulación sigue una hemorragia profunda y el folículo se llena de sangre convirtiéndose en cuerpo hemorrágico (Senger, 2004).

La luteólisis involucra una muerte progresiva de las células luteales, que se acompaña de la caída de los niveles progesterona. La prostaglandina F2 alfa es la principal sustancia luteolítica. Es producida en el endometrio del útero que haya recibido el impacto previo de la progesterona durante determinada cantidad de días, aparentemente a partir del estímulo provocado por estrógenos secretados por folículos en desarrollo (Senger, 2004).

La prostaglandina F2 alfa es secretada de forma pulsátil. Durante el período de la luteólisis el cuerpo lúteo

responde a cada pulso de prostaglandina F2 alfa

secretando oxitocina. A su vez aproximadamente la mitad de los pulsos de oxitocina generan una respuesta del endometrio, secretando un pulso de prostaglandina F2 alfa. El hecho de que la respuesta de prostaglandina F2 alfa a la oxitocina sea menor que la de la oxitocina a la prostaglandina F2 alfa se debe al tiempo requerido para reponer los fosfolípidos que origina el ácido araquidónico (Senger, 2004).

Una vez pasado el período en que la progesterona es capaz de ejercer el efecto inhibidor, el aumento de estrógenos proveniente del folículo en crecimiento induce un incremento en los receptores uterinos de oxitocina, de forma de permitir que se desencadene el mecanismo de retro alimentación positivo oxitocina lutealprostaglandina F2 alfa endometrial. El primer estímulo desencadenante de la luteólisis es la oxitocina proveniente de la hipófisis, que estimula el endometrio una vez que aumentaron sus receptores de oxitocina a secretar prostaglandina, generándose así el retrocontrol positivo que terminan con la actividad del CL. Este es un mecanismo por el cual se puede afirmar que el CL es directamente responsable de la finalización de su propia actividad (Senger, 2004).

La prostaglandina F2 alfa que sale del útero a través de la vena uterina pasa por difusión a la arteria ovárica en el plexo arterio-venoso existente en los rumiantes. Esto permite que las concentraciones de prostaglandina F2 alfa que alcanzan el ovario sean altas, ya que de ingresar ésta a la circulación sistémica, el 90% es metabolizado en cada pasaje por los pulmones. La caída de la progesterona permite el aumento de pulsaciones de GnRH y LH lo que estimula la secreción de estradiol por el ovario. El aumento sostenido de estradiol estimula el comportamiento estral y los aumentos preovulatorios de GnRH y LH. El aumento de LH induce la ovulación y luteinización con lo que disminuye la secreción de estradiol, iniciándose un nuevo ciclo (Senger, 2004).

Por otra parte el sangrado en el metaestro se presenta entre uno y tres días, luego de la ovulación pudiéndose presentar una pequeña hemorragia, proveniente de la rotura de diminutos vasos sanguíneos del útero, debido al aumento de producción de progesterona y descenso rápido los niveles de estrógenos necesarios para mantener los vasos sanguíneos (Tsiligianni et al, 2003).

No todas las vacas muestran esa descarga sanguinolenta. La presencia de sangre en el metaestro no es indicio determinante de que la vaca este o no gestante; cuando se observa el sangramiento es generalmente tarde para realizar la inseminación. Si una vaca a la que no se le ha detectado el celo, tiene una descarga sangrienta, ella debería de ser marcada en el calendario de los 21 días para revisar si manifiesta signos de celo en el periodo de los 17-19 días (Lucy, 2006).

* Fase luteal (diestro)

Esta fase se caracteriza por la presencia y dominio del cuerpo lúteo en el ovario y la producción de progesterona, y está regulada por las secreciones de la glándula pituitaria anterior, útero, ovario y la presencia de un embrión. Esta va desde el día 5 del ciclo estral hasta el día 18, la hormona LH que es considerada primariamente luteotropica y la concentración de receptores luteales a la LH estan directamente relacionados con los cambios en los niveles de progesterona y el crecimiento del cuerpo lúteo en el ovario (Lamb et al., 2009).

La hormona FSH también interviene uniéndose a receptores en el cuerpo lúteo y provocaría un aumento en la secreción de progesterona. El cuerpo lúteo recibe la mayoría del flujo sanguíneo del ovario y la cantidad de flujo recibido esta altamente relacionado con la cantidad de progesterona producida y secretada. Los niveles de progesterona más altos se alcanzan en torno al día 10 del ciclo estral y

se mantienen hasta el día 16 o 18 del ciclo dependiendo de la presencia o no de un embrión. Si la vaca esta gestante, el cuerpo lúteo se mantiene y los niveles de progesterona son altos, bloqueándose la reaparición de celos.

El embrión alcanza el útero entre los dias 3 a 4 del ciclo estral; durante los siguientes 10 a 12 dias el embrión crecerá rápidamente y comenzara la formación de la placenta. La presencia de estas células embrionarias son las responsables de producir una señal química, que bloquea la producción de PGF2 alfa por parte del útero, bloqueando la regresión del cuerpo lúteo en torno al día 16 del ciclo estral; este proceso se conoce con el nombre de (reconocimiento maternal). Por tanto el mantenimiento del cuerpo lúteo y los altos niveles de progesterona dependen de la presencia de un embrión en desarrollo en el útero. Si la vaca no está preñada el cuerpo lúteo se degenera, por la acción de la PGF2 alfa. En este caso debido a la ausencia del embrión y por ello de las señales químicas que este produce, la célula endometrial libera PGF2 alfa, cuyas concentraciones se incrementan durante la parte final de la fase luteal o diestro.

La PGF2 alfa producida por el útero es transportada por la vena utero-ovarica a la arteria ovárica por un mecanismo llamado a contracorriente y de allí al cuerpo lúteo. La PGF2 alfa tiene una acción directa e indirecta causando la luteolisis o regresión del cuerpo lúteo en rumiantes. Por último comienza la disminución de los niveles de progesterona y con ello el final de la fase luteal o diestro y el reinicio del proestro o fase de regresión del cuerpo lúteo (Lucy et al, 2009).

* Dinámica folicular bovina El proceso de crecimiento continuo y regresión de folículos antrales que conduce al desarrollo del folículo preovulatorio se conoce como dinámica folicular y se refiere al crecimiento de dichas estructuras en oleadas o grupos. (Bo et al, 2006).

Durante un ciclo estral pueden ocurrir una o más oleadas. En cada oleada, un grupo de folículos es reclutado o escogido para que salgan del estado de latencia e inicien un proceso de crecimiento. De este conjunto, uno o varios son seleccionados y finalmente uno de ellos se convierte en dominante (en hembras monotocas), mientras el resto sufre atresia en tanto que el folículo dominante de la última oleada en un ciclo estral (CE) está destinado a ovular (Soto et al, 2006).

En hembras de diferentes especies el número de oleadas foliculares durante el CE o menstrual es variable. En vacas, el desarrollo folicular durante el CE ocurre con mayor frecuencia en un patrón de dos a tres oleadas. El ciclo estral es más largo en hembras con tres oleadas que en aquellas con dos, debido a que en las primeras (tres oleadas) se prolonga la fase lútea. Si la función lútea declina antes, el folículo más grande de la segunda oleada alcanza su máximo diámetro, permanece viable y se transforma en un folículo ovulatorio (Rodgers et al, 2010)

El reclutamiento folicular se refiere a la formación de una población de folículos antrales de donde uno o varios, dependiendo de la especie (monotoca o politoca), es seleccionado para la ovulación en cada ciclo ovárico. Así es reclutado un grupo de folículos primordiales que crecen de manera continua debido a los incrementos en las concentraciones de FSH. Aún se desconoce por qué algunos folículos inician su crecimiento tan pronto como se forman, mientras que otros permanecen en latencia durante meses, años, o aún durante décadas, a estas respectivamente se han propuesto dos conceptos en cuanto al reclutamiento folicular, el reclutamiento inicial y el reclutamiento cíclico (Nishimoto, 2009).

El reclutamiento inicial se atribuye a que dejan de estar presentes algunos factores inhibitorios que mantenían a los folículos en latencia. Se considera que es un proceso continuo que se inicia poco después de la formación del folículo, mucho antes de la pubertad. Tan pronto como ocurre la formación del folículo, algunos de ellos dejan la reserva y empiezan a crecer. Este proceso se conoce como

activación folicular. Cuando algún folículo sale de esta reserva, sigue creciendo hasta la ovulación o hasta que degenera. (Bernabucci et al, 2005).

En cuanto al reclutamiento cíclico este tiene inicio después de la pubertad y resulta del incremento en los niveles de la FSH en la circulación sanguínea durante cada ciclo ovárico en que se rescata a un grupo de folículos antrales de la atresia. Antes de la formación del antro, el ovocito no es capaz de crecer más allá del diploteno de la primera división meiótica. Sin embargo, la mayoría de los ovocitos en folículos antrales son meióticamente competentes. Durante el reclutamiento cíclico, solamente sobrevive un número limitado de folículos y el destino del resto es la atresia. Los ovocitos en los folículos que sobreviven completan su crecimiento, adquieren su zona pelúcida y son competentes para reiniciar la meiosis (Díaz, 2005)

La selección folicular ocurre al final de la fase común de crecimiento. El folículo dominante crece a una tasa constante y el resto de los folículos subordinados sufren atresia o temporalmente crecen a una velocidad menor y posteriormente dejan de hacerlo. A este fenómeno se le ha denominado desviación. La desviación durante la oleada folicular en bovinos empieza con una reducción en la tasa de crecimiento de los folículos subordinados; en contraste, se presenta una tasa de crecimiento constante en el folículo dominante (Espinoza et al, 2007). 

Manifestaciones del Ciclo Estral

Se dice que el celo comienza durante la noche o a primera hora de la mañana debido a la producción de GnRH, que en este caso esta mediada por la melanina y al confort del animal. En novillas, el momento del día en el que se producen los picos de aparición en celo se sitúa entre la 7:00 y las 8:00 am, coincidiendo con el suministro de concentrado, pero en vacas en producción se producen a lo largo del día tres picos coincidentes con los periodos de ordeño (Dransfield et al, 2005).

La ovulación ocurre en promedio a las 27,6 ± 5,4h después de iniciado el celo, sin que haya diferencias entre ovulaciones espontáneas o inducidas por hormonas exógenas PGF2a. Se a estimado un tiempo de 9,5h desde que se produce la primera monta hasta que éstas cesan, por lo que las mayores tasas de concepción se consiguen con IA realizadas 5 a 6h después del primer evento de celo (Velázquez et al, 2006).

Vliet, V (1996) registro los principales signos de estro y dieron puntuación a cada uno de ellos, determinando el inicio del estro en función del momento en el que las vacas alcanzaban una puntuación concreta en base a los signos de estro acumulados en un período de 24h. Dentro del ciclo estral, la duración del celo oscila entre 9 a 28h, dependiendo de la localización geográfica, de la raza y de la edad de la vaca. Generalmente, el celo es más corto en el trópico y en las zonas subtropicales que en las templadas. En climas templados o moderados la duración del estro puede ser de 20 a 30% más duradero que en vacas de ambientes muy calurosos o fríos (Citado por Sepúlveda et al, 2005).

En vacas Holstein también se han observado diferencias en la longitud del estro, medida por el periodo de receptividad sexual, en función de si hay solo una o más vacas en estro al mismo tiempo.

Es así como todos los eventos hormonales ocurridos durante el celo llevan a la presentación de características que pueden ser valoradas con el fin de determinar el momento ideal para la inseminación artificial o el apareamiento, y son estas manifestaciones como los cambios estructurales de los folículos ováricos y del moco cervical. (Heydon et al, 2006). 

Manifestaciones externas

Las hembras bovinas pueden presentar tres niveles en la manifestación conductual del estro, niveles que son de especial importancia para lograr con éxito el apareamiento con un macho. Éstos son la atracción, la proceptividad y la receptividad (Maatje et al, 2007).

La atracción se mide en función del grado en que la hembra evoca respuestas sexuales al macho. La respuesta depende tanto de los olores que ella produce como de su proceptividad, es decir, la medida en la que manifieste comportamiento de invitación o solicitud, y la receptividad es la predisposición de la hembra a aceptar el cortejo y la cópula del macho. Los signos de estro en el bovino pueden incluir las siguientes manifestaciones, ya que en el presente trabajo es primordial conocer la conducta adoptada por los animales para obtener conocimiento preciso del momento ideal de la recolección de datos. Dentro de estas manifestaciones tenemos, primarias y secundarias.

La manifestación primaria es, que las vacas se quedan inmóviles mientras son montadas por otras.

Por otra parte las manifestaciones secundarias se pueden dividir en dos, las primeras que hacen referencia a la conducta, dentro de las cuales está el bramido, monta, lameteo, olfatea, persigue a otras vacas e incremento de la actividad. Las segundas son las físicas que tiene que ver con la vulva edematizada, transparencia en el moco, abrasiones en la cadera y pérdida de pelo en la vulva (Rojas, 2003)

Incremento en la actividad, donde la hembra se observa inquieta, el pastoreo y la alimentación quedan muchas veces interrumpidos, el tiempo de rumia se reduce y la producción de leche disminuye. En vez de pastorear, la vaca aumenta sus desplazamientos, e intenta montar o solicita ser montada por otras vacas sin reparar en el rango social (Sepúlveda et al, 2005). Esta locomoción se incrementa

entre las 8 y 16 horas antes del celo. El mugido, donde la vaca en estro muge más de lo normal. También suele observarse que la cola queda levantada y aumenta el número de veces que orina, no observándose tal incremento en el número de defecaciones (Vásquez et al, 2008).

Características de la vulva, en la cual es posible observar tumefacción de la vulva, con aumento de temperatura de producción de una mucosidad clara que puede quedar adherida a la cola o caer sobre el suelo, denominado moco cervical. Sin embargo el moco cervical bovino no solo hace referencia la existencia del mismo, sino a las características que adquiere una vez se haya cristalizado (Vásquez et al, 2008).

Producción de moco (Figura 1), que se genera por medio del estradiol y progesterona, las cuales estimulan la secreción del epitelio cervical y células glandulares del cérvix y este se secreta con el fin facilitar la penetración y paso de los espermatozoides a través del cuello del útero para alcanzar y unirse al óvulo proveniente del ovario (Vásquez et al, 2008).

Imagen 1. Moco cervical (Hernández et al., 2009) El moco cervical en las vacas aunque no imprescindible es útil para el trasporte de los espermatozoides. Durante la fase del celo este moco fluye por la vulva y

físicamente, se caracteriza por ser transparente, limpio, filante y extensible parecido a la clara del huevo de gallina (Tsiligianni et al, 2003).

En ocasiones esta secreción se puede observar con sangre y además purulenta, con estrías blanquecinas y otras anomalías, que pueden afectar la fecundación. El aspecto y la composición de las secreciones genitales varían fuertemente según el momento del ciclo ovárico, esta secreción se hace viscosa y compacta durante la fase luteínica para quedar transformada en un tapón denso y blanquecino en caso de gestación. Las sales contenidas en el moco cervical, se organizan en forma de hojas de helechos abundantes, finos, con una nervadura central delgada y con numerosas

proyecciones

perpendiculares,

presentando

ramificaciones.

cristalización muestra hojas de helechos de escaso tamaño, pero abundantes en número. Cada hoja presenta muy poco desarrollo, el espacio entre diente y diente de cada hoja es mayor que en el caso anterior (Sepúlveda et al, 2005).

Monta, donde la vaca en estro intenta montar a otras vacas. Al iniciar el estro las vacas se montan unas a otras, siendo difícil para el observador identificar cuál vaca del grupo se encuentra en estro. Pero cuando un animal en particular queda quieto al ser montado por otros, está en estro. Por ello, también se puede observar el pelo hirsuto en el flanco y base de la cola (Sepúlveda et al, 2005).

6.2.3. Características del moco cervical bovino

El moco cervical durante el periodo anterior a la ovulación es escaso, blanquecino y de textura pegajosa, pero horas o minutos previos a la ovulación es abundante, transparente y filante (forma de hilos que se estiran y no se cortan) siendo similar a la clara de huevo, como consecuencia del aumento del nivel de estrógeno, lo que indica que el moco cervical va cambiando su morfología hasta llegar a establecer una forma definida en el momento de la ovulación (Chagoy, 2001).

Por estudios de laboratorio se ha comprobado que el período más fértil del ciclo coincide con la secreción del moco con características de fertilidad, es decir que entre más cerca este el momento de la ovulación este moco toma ciertas formas de helechos en su morfología. Además este moco le da al esperma una envoltura protectora que le permite mantener su capacidad para fertilizar al óvulo. Si no existiera el moco para proteger a los espermatozoides, éstos se destruirían en unos minutos por el medio ácido de la vagina. Además el moco fértil nutre las células del esperma, al suministrarle los elementos energéticos para su supervivencia (Billings, 2003).

Se dice que existen cuatro tipos de moco cervical llamados L, S, P y G, ya identificados por Odeblad en 1983 por métodos biofísicos y cristalográficos, pero estudios más recientes demuestran por

primera vez que tienen diferente

ultraestructura, concluyendo que el moco de lumen del cérvix aparece como una entidad morfológicamente heterogénea que contiene tipos diversos de secreción cuyas proporciones pueden variar a lo largo del ciclo estral. Las diferencias de los tipos parecen estar relacionadas con su arquitectura glicoproteica y se producen en distintas zonas de secreción del canal cervical (Billings, 2003).

Uno de los hallazgos más importantes en cuanto a la formación del moco cervical es la localización de diferentes criptas en el canal cervical que producen los distintos tipos de moco. Además, éstos tienen una ultraestructura diferente que incluso puede identificarse en muestras que no se han extraído de cada una de las criptas, sino directamente del canal cervical. Durante el periodo postovulación el 98 por ciento del moco que se extrae del canal es de malla poco porosa, muy densa, que impide el paso de los espermatozoides (moco del tipo G) (Billings, 2003).

Es decir, que durante el ciclo se sintetizan diferentes tipos de mocos. De hecho, existe un moco cervical propio de la ovulación, el tipo P que se genera por los

altos niveles de estrógenos y cuya forma en varillas paralelas ayuda arquitectónicamente al paso de

los espermatozoides, microscópicamente

buscando definir la estructura que adopta el moco cervical a medida que se acerca el celo indica que al cristalizarse la forma adquirida se asemeja a un helecho (foto 2) y que a medida que se acerca el momento de la ovulación se observa mayor número de ramificaciones, lo que índice que estas ramificaciones sirven de medio de transporte para los espermatozoides (Billings, 2003).

Imagen 2. Helechos formados por el moco cervical cuando se acerca el momento de la ovulación (Ramírez 2014).

Este moco se genera por medio de los estrógenos y la progesterona, las cuales estimulan la secreción del epitelio cervical y células glandulares del cérvix y este se secreta con el fin facilitar la penetración y paso de los espermatozoides a través del cuello del útero para alcanzar y unirse al óvulo proveniente del ovario.

El moco cervical en las vacas aunque no imprescindible es útil para el trasporte de los espermatozoides. Durante la fase del celo este moco fluye por la vulva y físicamente, se caracteriza por ser transparente, limpio, filante y extensible parecido a la clara del huevo de gallina. Además el moco cervical tiene una fase acuosa o componente de baja viscosidad y una fase gel o componente de alta viscosidad. La mucina constituye la fase gel en forma de micelas ordenadas de tal manera que bajo la influencia de estrógenos o progestágenos abre o cierra la luz de los canales paralelos y permiten el paso de los espermatozoides. La fase acuosa contiene proteínas solubles, iones inorgánicos, compuestos orgánicos de bajo peso molecular, células y agua la cual representa del 90 al 98% de la composición total del moco cervical (Chagoy, 2001).

La penetración máxima del moco cervical en bovinos ocurre durante la fase ovulatoria con una marcada reducción antes y después de ésta fase, en éste período los estrógenos predominan y el moco cervical que es secretado es claro con un alto contenido de agua, más elástico, con un patrón de cristalización mayor y un menor contenido de células y proteínas, siendo esto contrario cuando la progesterona es la que predomina, presentándose esta secreción espesa, opaca e impenetrable para los espermatozoides (Chagoy, 2001).

Es así como la viscosidad y filancia del moco cervical depende del dominio hormonal, concordante con la fase del ciclo estral. Durante el estro y a medida que se acerque el momento de la ovulación, cuando hay predominio estrogénico, se caracteriza por ser traslúcido, abundante y menos viscoso para favorecer el paso de los espermatozoides. Igualmente muestra una mayor ramificación al momento de cristalizarse. El dominio de progesterona sucedida después de la ovulación, conduce a una modificación del moco cervical, el cual se hace viscoso, con mayor celularidad y menor porción líquida

Factores que afectan el Moco Cervical

La fertilidad indica la habilidad de una hembra para quedar preñada después de la inseminación artificial. La fertilidad es la expresión de un conjunto de aspectos biológicos y ambientales que favorecen o impiden la fecundación y el desarrollo temprano de la gestación. El efecto de los principales factores que afectan la fertilidad como son el manejo la alimentación, el medio ambiente y las enfermedades reproductivas. Así mismo los dispositivos intravaginales producen vaginitis y secreciones mucupurulentas del cuerpo vaginal. (Pérez et al. 2005).

6.3 MARCO LEGAL

Los profesionales en Medicina Veterinaria están regidos por la ley 84 del 27 de diciembre de 1989, por medio de la cual se adopta el Estatuto Nacional de Protección de los Animales y se crean unas contravenciones y se regula lo referente a su procedimiento y competencia. Herramienta fundamental para el desempeño idóneo y ético de la profesión (www.comvezcol.org.co).

En el artículo primero del primer capítulo se enuncia que los animales tendrán en todo el territorio nacional especial protección contra el sufrimiento y el dolor, causados directa o indirectamente por el hombre. Las disposiciones de la presente Ley, tienen por objeto prevenir y tratar el dolor y el sufrimiento de los animales, promover la salud y el bienestar de los animales, asegurándoles higiene, sanidad y condiciones apropiadas de existencia y erradicar y sancionar el maltrato y los actos de crueldad para con los animales. En tal sentido en el presente trabajo no se producirá ningún tipo de dolor o sufrimiento a los animales de estudio, por la metodología que aquí se plantea.

El artículo cuarto señala que toda persona está obligada a respetar y abstenerse de causar daño o lesión a cualquier animal. Igualmente debe denunciar todo acto de crueldad cometido por terceros de que tenga conocimiento, además el artículo quinto nos dice que se les debe suministrar bebida y alimento en cantidad y calidad suficientes. Dando cumplimiento a la Ley, en este trabajo los animales se mantendrán en buenas condiciones de manejo, tendrán alimentación de acuerdo a sus requerimientos y en ningún caso recibirán un mal trato.

Con respecto al uso de animales vivos en experimentos e investigación el artículo 24 de esta Ley relata que los animales usados en cualquier experimento deberán ser puestos bajo los efectos de anestesia lo suficientemente fuerte para evitar que sufra dolor. En este trabajo los animales utilizados no necesitarán ningún tipo de

anestesia ni de analgesia, ya que los procedimientos realizados no lo requerĂan teniendo en cuenta que estos no tuvieron ningĂşn proceso invasivo que pudiese causarle daĂąo a los semovientes.

HIPÓTESIS

Hipótesis nula (Ho): Las características físicas del moco cervical cristalizado no son indicativas del momento de la ovulación o del momento óptimo para la fecundación.

Hipótesis alternativa (Ha): Las características físicas del moco cervical cristalizado son indicativas del momento de la ovulación o del momento óptimo para la fecundación.

8.DISEÑO METODOLÓGICO

8.1 TIPO DE ESTUDIO.

El presente estudio fue de tipo experimental, en razón a que se manipularon variables como son 10 hembras raza Holstein.

8.2 MARCO GEOGRÁFICO Y CLIMÁTICO El presente trabajo se desarrolló en la finca “El Sural” ubicada en el municipio de Pesca, el cual se encuentra en la zona Sugamuxi del departamento de Boyacá, ubicado en la Cordillera Oriental al oriente de la capital del Departamento (Figura 1).

Imagen 3. Mapa ubicación del proyecto (www.pesca-boyaca.gov.co)

El municipio limita por el norte con el Municipio de Firavitoba, al nororiente con Iza, al Oriente con Tota, al Sur con Zetaquira, al Sur - Occidente con Rondón y Siachoque, al Occidente con Toca y al Noroccidente con Tuta. Tiene una extensión de 282 Km2. Representada en 2.4252 Km2, de área urbana y 279.5748 Km2, de área rural. Se encuentra entre 2.600 a 4.000 m.s.n.m, con una temperatura media de 15º C, su precipitación media anual es de 984 milímetros.

Hidrográficamente se encuentra entre la cuenca del Río Chicamocha y la subcuenca del Río Pesca; a la primera pertenece el sector occidente del municipio y el segundo atraviesa el territorio municipal de sur a norte; posee altitudes que van desde los sobre el nivel del mar. Territorialmente el departamento de Boyacá se encuentra agrupado por doce (12) provincias

La zona rural del municipio está dividida en veintiuna (21) veredas (Tobacá, Mochagá, Chincua, Santa Barbara, Buchín, Soacá, Chaviga, El Hato, Carbonera, El Palmar, Butagá, Chaguatá, Puerta Chiquita, Tintal, Corazón, Comunidad, Nocuatá, Suaneme, Llano Grande, Toledo y Naranjos) en las cuales residen aproximadamente 11.800 habitantes. Los sectores de las veredas, están constituidos básicamente como entidad territorial que demarca el límite veredal. El municipio de Pesca cuenta con ecosistemas estratégicos, como el Páramo, complementados con actividades productivas agropecuarias y bosques que hacen de éste un territorio privilegiado.

La economía del municipio se basa en la agricultura y la ganadería. Entre los productos agrícolas se destacan la papa, el trigo, el maíz, las arvejas, los frijoles, las ibias, así como diversas hortalizas. En cuanto al ganado se cría principalmente el vacuno (POT, Pesca, 2007).

8.3 ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN

Los animales utilizados durante la fase experimental del proyecto son de propiedad de la finca “El Sural” ubicada en el municipio de Pesca Boyacá. Adicionalmente estos animales se mantuvieron en potrero aislados de los demás animales de la finca. Se les realizó una respectiva desparasitación a base de Febendazol. Para facilitar la diferenciación de los animales se les realizó la respectiva enumeración con chapetas en la oreja tomando como referencia de 001 a 010.

La selección de animales para el estudio se realizó con base en criterios de inclusión que se han definido así:

-hembras adultas -no gestantes -mínimo con un parto -sanas -condición corporal entre 3ª 3,5.

Con base en la información obtenida en la finca donde se realizó el estudio, se sabe que estos animales son de raza Holstein, con pesos entre 400 a 500 Kg, con edades entre 4 y 5 años, entre 2do-3er parto. Los animales son mantenidos en pastoreo de kikuyo (Penisetum clandestino) (Grama gruesa o pasto africano) y Rye grass, con sal mineralizada y agua a voluntad. Al iniciar el trabajo se desparasitaron con fenbendazol por vía oral y se verifico que su estado de salud fuera bueno, mediante un examen clínico tradicional, haciendo énfasis en el sistema reproductivo, mediante palpación rectal y ecografía. Durante todo el estudio se mantendrán en el mismo lugar y recibirán el mismo manejo hembras de 120 dias postparto. Cave mencionar que los animales de estudio estaban en anestro.

Imagen 4. Animales de estudio (Ramirez)

8.4 DISEÑO METODOLÓGICO

Se utilizó un diseño aleatorio simple, donde al azar se tomaron diez hembras fueron sincronizadas con el mismo protocolo, y a partir del día 10 de iniciado éste, se procedió a hacer el seguimiento de los parámetros a evaluar, tomando muestras como fueron inpronta laminar, ecografía y manifestaciones externas de celo en diferentes tiempos con intervalos (0, 4, 12, 20, 24) horas, hasta que ocurriera la ovulación. Es así como en la fase de seguimiento, en cada uno de los tiempos mencionados, se realizo ecografía, se tomo muestra de suero para su envío al laboratorio para la medición de estrógenos , se tomo una impronta laminar, y mediante inspección, se evaluaron las manifestaciones externas del celo.

Las

cuatro

valoraciones

mencionadas,

constituyen

las

variables

dependientes que se tuvieron en cuenta en el estudio y que permitieron dar cumplimiento a los objetivos del mismo. 47

8.5.PROCEDIMIENTOS

Como se mencionó en el desarrollo de la fase experimental se realizaron diferentes procedimientos.

8.5.1 Protocolo de Sincronización

Se utilizó un método de sincronización el cual consiste en la aplicación de 2 mg de benzoato de estradiol via intramuscular y de un dispositivo de progesterona de 1 mg, al día cero, se ubica vía intravaginal antes del cérvix; luego el día octavo del protocolo se retiraran los dispositivos de progesterona (DIB), se administraran 2 mg de prostaglandina vía IM, el día nueve se administraran 1ml de benzoato de estradiol como dosis total vía IM para que al finalizar el protocolo, las hembras quedaran sincronizadas con el fin de que estas entraran en celo (Figura 4)

8.5.2. Evaluación de las Manifestaciones de Celo.

Mediante observación de las hembras de estudio, se valoró la presencia de aquellos signos que se relacionan con el estro y son ellos:

Los celos en las hembras se empiezan a observar desde las 48 a 72 horas después de aplicar prostaglandina y de retirar el dispositivo, en este caso la inseminación se realizo el día 10. *la hembra se deja montar de otras *se observa lamido por parte de otras hembras *hay descarga vaginal, espontánea, de moco traslúcido *la vulva está enrojecida y edematosa.

Imagen 5. Vacas manifestando externamente el estro

Buscando dar una calificación cuantitativa a los anteriores signos, se hará una escala que permita a los investigadores dar valor numérico a lo observado en los animales de estudio (Tabla 1)

Tabla 1. Criterio de las manifestaciones del estro utilizadas durante el estudio (Adaptado de Saba y Martínez, 2010) CATEGORIAS

CALIFICACIÓN

INTERPRETACIONES

Ausente

Ausencia de cualquier signo

Parcial

Presencia de 1 signo

Aceptable

Presencia de 2 signos

Bueno

Presencia de 3 signos

Muy bueno

presencia de 4 signos

Excelente

Presencia De más de 4 signos

8.5.3. Toma de Muestra y Envío al Laboratorio

A todos los animales de estudio, se les tomó una muestra de 10 ml de sangre en la vena coccígea, utilizando aguja y tubo vacutainer sin anticoagulante (tubo tapa roja) (Imagen 3). Posteriormente, los tubos fueron centrifugados a 2500 rpm durante 5 minutos así el suero, el cual fue pasado a un tubo Eppendorf, para ser almacenado, bajo condiciones de congelación. Para la medición de estrógenos, los tubos fueron transportados en una nevera plástica con hielo gel hasta el laboratorio.

La totalidad de los animales fue muestreado en los cuatro tiempos de medición, sin embargo en razón que el protocolo de sincronización usado, incluía benzoato

de estradiol, el seguimiento de la concentración de estrógenos bajo tales condiciones, disminuía su significacia y por cuestiones de costos se decidió únicamente hacer la medición en el momento en que había folículo pre-ovulatorio, esperando que en ese momento estuviera en el pico estrogénicoLa medición de los estrógenos se hizo mediante la técnica de ELISA

8.5.4. Toma de Impronta Laminar

Se realizó el día 10 del protocolo a las horas 0, 4, 12, 20, 24 en total las láminas fueron 5 por vaca.

Se utilizó una lámina portaobjetos, la cual fue colocada en la parte interna de los labios vulvares, e inmediatamente retirada, verificando la presencia de moco cervical (Imagen 7). Posteriormente se marcó cada lámina, con el número correspondiente al animal y al momento de muestreo. Se dejo secar a temperatura ambiente, para su lectura, la cual se hizo con un microscopio óptico convencional observando primero en aumento de 10X y posteriormente 40X, observando varios campos.

Imagen 7. Toma de la impronta laminar del moco cervical (Ramírez)

Inicialmente se verificó la uniformidad del extendido, y se procedio a organizar las laminas de su posterior lectura y calificación según las categorías generadas por tal fin. (Tabla 2).

Tabla 2. Categorías para evaluar las características del moco cervical cristalizado (Adaptado de Saba y Martínez, 2010). CATEGORIAS CARACTERISTICAS DESCRIPCIONES 0

Ausente

Sin presencia de helechos

Hilos

Filamentos pero sin helechos

Atípicas

Baja ramificación

Alta ramificación

Destrucción

Presencia de hilos con burbujas, planos y estrellados Presencia de helechos con regular ramificación Presencia de helechos con buena ramificación Pérdida total y destrucción de helechos, cristales sueltos

8.5.5. Realización de Ecografía

El estado folicular fue evaluado durante el día 10 hasta que las hembras ovularon haciendo tomas en las horas 0, 4, 12, 20, 24. Este estado se valoró mediante la toma de ecografías con palpación rectal con transductor lineal endorectal, el cual es el específico para este fin. En la ecografía se evaluó útero, cuernos uterinos, ovarios y principalmente folículos, los cuales se clasificaron según su estado y se categorizaron así: * Folículos pre-ovulatorios, aquellos folículos cuyo diámetro fue inferior a 16 mm * Folículos ovulatorios, aquellos folículos cuyo diámetro estuvo entre 17 y 18 mm.

9. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Los resultados correspondientes a las variables dependientes de tipo cuantitativo, esto es el diámetro folicular se agruparon en dos categorías, folículos preovulatorio, para aquellos folículos en los que el diámetro encontrado fue menos a 16 mm y folículo ovulatorio, cuando el diámetro fue superior a 17 y 18 mm. Lo anterior debido a que para los objetivos del estudio, interesaba determinar si dicho folículo estaba próximo a la ovulación o no.

Por otra parte, las variables dependientes de tipo cualitativo, ramificación del moco cervical, seis categorías) y manifestación de celo (cinco categorías). Lo anterior para facilitar el análisis de los resultados y el análisis estadístico.

Con base en lo anterior, inicialmente se analizaron los datos de manera descriptiva, para luego realizar la correlación entre las tres variables aplicando el coeficiente de concordancia de Kendall que es una prueba no paramétrica que va de valor cero (0: ningún acuerdo) a uno (1: acuerdo completo) utilizando observaciones categóricas, las cuales están codificadas como moco de 0 a 5, folículo de 1 a 3 y manifestaciones de celo de 0 a 4, para cada uno de los tiempo de observación (0, 4, 12, 20, 24 horas).

Fue así se formularon las siguientes hipótesis:

Hipótesis nula: no existe concordancia entre los tres parámetros evaluados (p<0.05); Hipótesis alterna: existe concordancia entre los tres parámetros evaluados (p<0.05).

10. RESULTADOS

A continuación serán presentados los resultados de manera descriptiva para luego hacer los análisis estadísticos respectivos.

10.1 RESULTADOS

10.1.1 Ecografía Ovárica

De acuerdo con el diámetro encontrado en las estructuras ováricas en los cinco tiempos de evaluación, seis de los 10 animales de estudio, logró desarrollar folículos ovulatorios entre las 12 – 24 horas de estudio, en todos los casos en el ovario derecho. En algunas hembras se encontró que el ovario contra-lateral no mostró actividad folicular en todo el tiempo de estudio (Tabla 4). Se puede afirmar, que bajo las condiciones planteadas en este estudio, la madurez folicular se logró a partir de las 12 horas de iniciada la observación, es decir 36 horas después de aplicado el benzoato de estradiol.

Tabla 3. Tipo de folículos ováricos identificados mediante ecografía en diferentes tiempos. Bovino

Hora 0

Hora 4

Hora 12

Hora 20

Hora 24

O.D

O.Iz

O.D

O.Iz

001

F.PO

F.PO F.PO F.PO F.PO F.PO F.PO F.PO

002

F.PO

F.PO F.OV F.PO F.OV F.PO F.OV F.PO

003

F.PO

SPF

F.PO

SPF

004

F.OV

F.PO

005

F.PO

SPF

F.PO

SPF

006

F.PO

F.PO F.PO F.PO F.OV F.PO F.OV F.PO

007

F.PO

SPF

F.PO

SPF

008

F.PO

F.PO F.OV F.PO F.OV F.PO F.OV F.PO

009

F.PO

F.PO F.OV F.PO F.OV F.PO

010

F.PO

F.PO F.PO F.PO F.PO F.PO F.PO F.PO

O.D

F.OV

O.Iz

SPF

O.D

F.OV

O.Iz

SPF

O.D

F.OV

O.Iz

SPF

F.OV F.PO F.OV F.PO F.OV F.PO F.OV F.PO F.PO

F.PO

SPF

F.PO

SPF

F.PO

F.OV

SPF

F.PO

Folículo preovulatorio (F.PO); folículo ovulatorio (F.OV); Sin presencia de folículo (SPF); Cuerpo Hemorrágico (CH)

10.1.2. Características del Moco Cervical

Respecto a las características morfológicas de cristalización del moco cervical, se puede observar que al inicio del celo, cuando las hembras comenzaron a producir el moco (tiempo 0), solo en una de las hembras de estudio, éste mostró ramificaciones aunque bajas y en el resto, no hubo formación de helechos. Sin embargo con el paso de las horas estas estructuras fueron cambiando, de manera que hacia las 4 horas, cuatro hembras ya iniciaban con la formación de helechos, los cuales adquirieron una alta ramificación hacia las 12, 20 y 24 horas. En ningún caso se observaron estructuras de cristalización excesiva con destrucción de helechos (Tabla 5).

Tabla 4. Características del moco cervical según categorías determinadas Bovino

TIEMPO DE MUESTREO (Horas) 0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

010

10.1.3 Manifestaciones Externas del Estro.

De acuerdo con las manifestaciones externas del celo, la literatura reporta que existen varios tipos de signos externos de celo presentes en las hembras, lo cual depende de 56

las condiciones en las que se encuentren los animales. Se considera que las hembras bovinas presentas ciertos signos característicos durante el momento previo a la ovulación (Estero, 2006). Con base en esto durante la hora 4 las hembras empezaron a presentar dos de los cinco signos de celo y a medida que transcurrió el tiempo se presentaban más de dos signos lo que indica que la mayoría estaban próximas al momento ovulatorio. (Tabla 6).

Tabla 5. Hallazgos de las manifestaciones externas del estro en el tiempo de estudio Bovino

CALIFICACIÓN SEGÚN TIEMPO DE MUESTREO (Horas) 0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

010

10.1.4 Niveles de Estrógenos Séricos.

De acuerdo a los niveles séricos de estrógenos en sangre las concentraciones normales oscilan entre 0.5 y 120 (BO. Según los resultados obtenidos, cuando hay presencia de celo a medida que se acerca el momento de la ovulación los niveles de estrógenos van ascendiendo; cuando se producen niveles muy bajos de E2 se podría producir una regresión del celo. Por otra parte, se presentan casos en los que los

niveles de estrógenos se encuentran en los rangos normales lo que quiere decir que podría haber una regresión del celo o una posible ovulación tardía (Callejas. 2007).

10.1.5. Comparación de las Características del Estro Evaluadas en el Tiempo 0

Respecto a los diferentes parámetros evaluados en las diez hembras a la hora cero la muestra de moco cervical mediante impronta laminar, se encontró que la cristalización del mismo a la hora cero era muy baja y en algunos casos había ausencia de helechos.

Tabla 6. Valores encontrados de estradiol en los animales de estudio IDENTIFICACION

Nivel de Estradiol

VALORES

DEL ANIMAL

(pg/ml)

NORMALES

001

002

162

003

154

004

181

005

142

006

0.7

007

128

008

009

010

156

0.5-120

Con relación a los resultados encontrados en la primera ecografía se encontró folículos preovulatorios debido al anestro posparto en los ovarios se encontraban folículos que llegaban hasta la fase de emergencia o desviación Por otra parte en la primera observación de las manifestaciones del celo se observaron pocos signos en la mayoría de las hembras. (Tabla 8).

Aplicada la prueba de concordancia de Kendall, se encontró al tiempo cero, que el valor de p (p=0.616, p≥0.05; W=0.048) (Tabla 9), indicando que no hubo concordancia entre los hallazgos en la ramificación del moco cervical con el diámetro folicular y las manifestaciones de celo, para ese tiempo de medición.

Tabla 7. Características del celo evaluadas al tiempo 0

Bovino

Folículos

Categoría

Signos

Moco

Externos

O.D

O.Iz

Cervical

de Estro

001

F.PO

002

F.PO

003

F.PO

SPF

004

F.OV

F.PO

005

F.PO

SPF

006

F.PO

007

F.PO

SPF

008

F.PO

009

F.PO

010

F.PO

O.D.: ovario derecho; O. Iz.: ovario izquiero; F.PO: folículo preovulatorio; F.OV.: folículo ovulatorio; SPF: sin presencia de folículo

Tabla 8. Correlación estadística de las trevariable al tiempo 0 Rango promedio Moco 2.00 Folículo 2.20 Celo 1.80 Estadísticos de contraste N 10 W de Kendall .048 Chi.970 cuadrado Gl 2 Sig. asintót. .616 Variable

10.1.6. Comparación de las Características del Estro Evaluadas a las 4 Horas

Las muestras de moco cervical tomadas en la hora 4, mostraron un patrón similar al del caso anterior, con formas atípicas y de hilos inicialmente y posteriormente fueron constituyendo la forma de helechos con baja ramificación. En la toma ecográfica se evidencio presencia de folículos preovulatorios en la mayoría de los casos. En las manifestaciones de celo se observo que en la hora cuatro presentaban uno de los signos en la mayoría de las hembras. (Tabla 9).

De acuerdo con la prueba de concordancia de Kendall, se obtuvo un valor de p (p=0.431, p≥0.05; W=0.084) (Tabla 11), demostrando que para este tiempo tampoco hubo concordancia entre la ramificación del moco cervical, el diámetro folicular y las manifestaciones de celo

Tabla 9. Características del celo evaluadas a las 4 horas Folículos Bovino

Categoría

Signos

Moco

Externos de Estro

O.D

O.Iz

Cervical

001

F.PO

002

F.PO

003

F.PO

SPF

004

F.OV

F.PO

005

F.PO

SPF

006

F.PO

007

F.PO

SPF

008

F.PO

009

F.PO

010

F.PO

O.D.: ovario derecho; O. Iz.: ovario izquiero; F.PO: folículo preovulatorio; F.OV.: folículo ovulatorio; SPF: sin presencia de folículo

Tabla 10. Correlación estadística de las tres variables a las 4 horas Rango promedio Moco_4 2.20 Foliculo_4 1.80 Celo_4 2.00 Estadísticos de contraste N 10 W de Kendall .084 Chi1.684 cuadrado Gl 2 Sig. asintót. .431 Variable

10.1.7. Comparación de las Características del Estro Evaluadas a las 12 Horas

Las características morfológicas del moco cervical a la hora 12 mostraron formas atípicas, se evidencio estructuras de helechos con bajas y altas ramificaciones. En las ecografías se observo presencia de folículos preovulatorios y ovulatorios. Al observar las manifestaciones del celo se evidencio parcialmente los signos del celo. (Tabla 12).

A diferencia de los dos tiempos anteriores, para la horas 12 de observación, la prueba de correlación de Kendall indicó que hubo correlación entre las tres variables evaluadas, en razón a que se obtuvo un valor de p (p=0.0, p<0.05; W=0.772) (Tabla 13).

Tabla 11. Características del celo evaluadas a las 12 horas Folículos Bovino

Categoría

Signos

Moco

Externos de Estro

O.D

O.Iz

Cervical

001

F.PO

002

F.OV

F.PO

003

F.OV

SPF

004

F.OV

F.PO

005

F.PO

SPF

006

F.PO

007

F.PO

SPF

008

F.OV

F.PO

b009

F.OV

F.PO

010

F.PO

O.D.: ovario derecho; O. Iz.: ovario izquiero; F.PO: folículo preovulatorio; F.OV.: folículo ovulatorio; SPF: sin presencia de folículo

Tabla 12. Correlación estadística de las tres variables a las 12 horas Rango promedio Moco_12 2.90 Foliculo_12 1.65 Celo_12 1.45 Estadísticos de contraste N 10 W de Kendall .772 Chi15.438 cuadrado Gl 2 Sig. asintót. .000 Variable

10.1.8. Comparación de las Características del Estro Evaluadas a las 20 Horas

Las muestras de moco cervical tomadas en la hora 20 mostraron características descritas como helechos con altas ramificaciones. En las ecografías se observo folículos preovulatorios y ovulatorios en la mayoría las hembras bovinas. Al observar las manifestaciones del celo, se evidencio que durante la hora 20 dichos signos estaban más evidentes observándose en algunos casos más de 2 signos (Tabla 14)

De manera similar a la hora 12, en la prueba de concordancia para la hora 20, el valor de p (p=0.001, p<0.05; W=0.739) (Tabla 15) indica que si hay concordancia entre los valores de ramificación del moco, diámetro folicular y manifestaciones externas celo

10.1.9. Comparación de las Características del Estro Evaluadas a las 24 Horas

Las características morfológicas del moco cervical a la hora 24 se observo de nuevo formas atípicas constituyendo finalmente helechos con altas ramificaciones. En las tomas ecográficas se evidencio que los folículos estaban próximos a la ovulación. En

Tabla 13. Características del celo evaluadas a las 20 horas Folículos Bovino

Categoría

Signos

Moco

Externos

O.D

O.IZ

Cervical

de Estro

001

F.PO

002

F.OV

F.PO

003

F.OV

SPF

004

F.OV

F.PO

005

F.PO

SPF

006

F.OV

F.PO

007

F.PO

SPF

008

F.OV

F.PO

009

F.OV

F.PO

010

F.PO

O.D.: ovario derecho; O. Iz.: ovario izquierdo; F.PO: folículo preovulatorio; F.OV.: folículo ovulatorio; SPF: sin presencia de folículo

Tabla 14. Correlación estadística de las tres variables a las 20 horas Rango Variable promedio M_20 2.90 F_20 1.50 C_20 1.60 Estadísticos de contraste N 10 W de Kendall .739 Chi14.788 cuadrado Gl 2 Sig. asintót. .001

las manifestaciones del celo se observo que todas las hembras habían presentado signos del celo. (Tabla 16).

Finalmente en la última medición (24 horas), el valor de p que se obtuvo (p=0.001, p<0.05; W=0.715) (Tabla 16), indica que hubo concordancia entre los valores de ramificación del moco, diámetro folicular y manifestaciones externas del celo.

Tabla 15. Características del celo evaluadas a las 24 horas Folículos Bovino

Categoría

Signos

Moco

Externos de Estro

O.D

O.IZ

Cervical

001

F.PO

002

F.OV

F.PO

003

F.OV

SPF

004

F.OV

F.PO

005

F.PO

SPF

006

F.OV

F.PO

007

F.OV

SPF

008

F.OV

F.PO

009

F.PO

010

F.PO

O.D.: ovario derecho; O. Iz.: ovario izquierdo; F.PO: folículo preovulatorio; F.OV.: folículo ovulatorio; SPF: sin presencia de folículo

10.1.10. Correlación de las Variables en las Cuadros Mediciones Finalmente, buscando corroborar en los cuatros tiempos de medición, de manera simultánea, en cuál de ellos se observó correlación de las tres variables dependientes consideradas en el estudio, se determina que éstas tienen mayor concordancia a las 12h (W=0.772), estando el valor máximo entre las 12h y las 20h porque el valor más próximo de W es el de 20h (0.739) (Tabla 17).

Tabla 16. Correlación estadística de las tres variables a las 20 horas Rango Variable promedio Moco_24 2.90 Foliculo_24 1.55 Celo_24 1.55 Estadísticos de contraste N 10 W de Kendall .715 Chi14.294 cuadrado Gl 2 Sig. asintót. .001

Tabla 17. Correlación estadística de las tres variables a las 20 horas Valor W de Valor P Hora Kendall .048 .616 0 .084 .431 4 .772 .000 12 .739 .001 20 .715 .001 24

10.2 DISCUSIÓN.

De acuerdo con lo que se esperaba el protocolo de sincronización utilizado en este estudio fue efectivo. Todas las hembras entraron en celo en un periodo de tiempo cercano, a pesar de que el protocolo utilizado no fue IATF (inseminación artificial a tiempo fijo). Se utilizó progesterona (dispositivo intravaginal), benzoato de estradiol y

prostraglandina, que hacen parte de las hormonas que frecuentemente se usan para sincronización de estro con buenos resultados (Callejas & Taurus, 2004)

Con el implante de progesterona, se buscó generar inhibición hipotalámica sobre el GnRH, para suspender la maduración de nuevos folículos, durante los días de permanencia de éste (Mota et al 2011; Colazo et al 2007) a su vez ningún de las animales de estudio presento catarro genital por uso de los dispositivos ya que algunos autores reportan vaginitis con el uso de los dispositivos mas de una vez (Piccinali & Trinidad 2003) . Fue así como una vez retirado el implante, de manera simultánea todas las hembras reiniciaron la maduración folicular. Adicionalmente, el uso de estrógenos en sincronización de celo, se basa en la función que ejercen éstos sobre los folículos; de esa manera con la inclusión de benzoato de estradiol dentro del protocolo, al tiempo que se colocó el implante, se buscó generar atresia del folículo dominante existente, para permitir el comienzo de una nueva onda folicular (Montiel et al, 2011). El uso de prostaglandina F2-alfa, una vez retirado el implante, se fundamenta en su acción luteolítica, con lo que se garantiza la regresión de los cuerpos lúteos que pudieran tener los animales al finalizar la acción del implante (Mota et al 2011). Con lo anterior, se propició el descenso de los niveles de progesterona, buscando la reactivación del ciclo que iniciaría con la producción de GnRH. Finalmente, el benzoato estradiol, administrado el día 8 del protocolo, se basa en que esta hormona en ausencia de progesterona, estimula la expresión de los receptores para GnRH, favoreciendo la acción de ésta en el nuevo ciclo que inicia, de manera sincronizada en todos los animales. De forma complementaria, también favorece las manifestaciones de celo y estimula la producción de LH, para la futura ovulación (Montiel et al 2011). Con lo anterior, se sustenta que el protocolo escogido fue eficaz, toda vez que la totalidad de los animales de estudio entraron en celo y lo manifestaron satisfactoriamente, en el día 10, en un lapso aproximado de 6 horas. Una vez se culminó la sincronización y se inició el periodo de evaluación en este estudio, se pudo determinar cómo en las primeras horas, las hembras no hicieron fninguna manifestación externa de celo en razón a que aún no había un dominio estrogénico, producto de la presencia de folículos maduros, lo cual se pudo verificar con 67

las ecografías realizadas. Fue así como los resultados obtenidos en este estudio, respecto a la ausencia de manifestaciones externas de celo, antes del estro, coincidieron con lo reportado por la literatura, para estas fases del ciclo estral en hembras bovinas (Campaña & Gamboa, 2012). A medida que pasaron las horas, entre las 12 y 20 horas de observación, se comenzaron a identificar algunas de las manifestaciones reportadas para la especie, las cuales fueron más notorias en la totalidad de los animales de estudio, hacia la hora 20. Dichas manifestaciones fueron concordantes con la literatura (Campaña & Gamboa, 2012) toda vez que en cuanto a comportamiento, las hembras se mostraron inquietas, se olían unas a otras y se dejaban montar; adicionalmente, las vulvas estuvieron edematosas y rosadas, con presencia de moco abundante, poco viscoso y traslúcido.

Durante la fase experimental del trabajo, se encontró que a medida que avanzaba el ciclo estral y se aproximada el momento de la ovulación, como producto del protocolo de sincronización utilizado, las hembras produjeron moco cervical visible, traslúcido y filante que salía espontáneamente por la vulva. Es sabido que la producción de dicho moco, así como las características del mismo, dependen de la fase del ciclo estral en el que esté la hembra, principalmente, de los niveles de estrógenos producidos por el folículo pre-ovulatorio (Tsiligianni et al, 2014; Ruttlant et al, 2002). Esta dependencia hormonal, se sustenta en el hecho de que las características fisicoquímicas del moco cervical deben garantizar la supervivencia de los espermatozoides y el ascenso de los mismos hacia la trompa de Falopio; es así como la viscosidad, pH y demás características del moco cervical, son favorables para los espermatozoides bajo el dominio estrogénico y son desfavorables durante los picos de progesterona (Ruttlant et al, 2002).

El volumen y filancia del moco cervical que se observó en este trabajo, hacia las 12 y 20 horas de iniciada la observación, coincide con las características composicionales de dicho moco, el cual posee glicoproteínas producidas por las células epiteliales cervicales. Estas glicoproteínas (mucinas), son polipéptidos (20-25%) con múltiples cadenas de heterosacáridos (80-75%), que dependiendo en la concentración que se

encuentren, determinan el grado de viscosidad del mismo. En tal sentido, a medida que se acerca el momento de la ovulación, la producción de moco se hace mayor en volumen, pero disminuye la viscosidad del mismo (Ruttlant et al, 2002), lo cual fue observado en el presente estudio

Se indica que las características de cristalización y arborización del moco cervical, producido durante las fases del estro, varían y por ello se pueden utilizar como factores indicadores del momento de la monta o de IA (Campaña & Gamboa, 2012). Tsiligianni et al (2014), afirma que la capacidad de cristalización del moco cervical, es promovida de manera directa, por la presencia de estrógenos y disminuida durante los picos de progesterona. Lo anterior, concuerda con los resultados obtenidos en este estudio, en razón a que el grado de cristalización y formación de “helechos” ramificados, fue aumentando a medida que se acercaba el momento de la ovulación lográndose las formas más ramificadas hacia las horas 12-20 las cuales coincidieron con la presencia de folículos preovulatorios

A pesar de que la literatura indica que la viscosidad, ramificación y cristalización del moco cervical producido por las hembras bovinas, durante el estro, es diferente cuando el celo ha sido espontáneo a cuando éste ha sido inducido hormonalmente (Tsiligianni et al, 2014), para el diseño metodológico que se siguió en este estudio y por razones logísticas, no se hizo la comparación entre las características del moco cervical bajo condiciones naturales de ovulación, lo que impide especificar si la cristalización aquí observada sería la misma a la encontrada en animales en los que no se haya hecho un plan de sincronización

Es de anotar que hace cerca de 55 años, se encuentran reportes de literatura en la que se hace referencia a la capacidad de arborización o de formación de estructuras de “helechos” con patrones diferentes, en el moco cervical de mujeres, de acuerdo con la fase del ciclo menstrual, es decir con base en el dominio hormonal. Es así como se describen patrones, desde mocos que no muestran ningún tipo de cristalización hasta aquellos en los que hay ramificaciones que semejan formación de helechos muy bien

definidos (Wearing 1959), tales reportes coinciden con lo encontrado en este trabajo ya que se pudieron identificar los cuatro patrones con base en los cuales, se hizo la categorización. En las primeras mediciones (hora 0 y 4), se observó muy poco patrón de cristalización pero hacia las 12 horas en todas las hembras de estudio hubo arborizaciones que permitieron clasificarlas como grado 3 y 4 principalmente. Dichos resultados coinciden con la presencia de folículos preovulatorios y de manifestaciones externas de celo.

11. IMPACTO

Con la realización de este proyecto se logrará, comprobar que este generará un impacto social ya que la impronta laminar se podrá utilizar como un método alternativo para la detección del momento pre-ovulatorio, momento optimo de inseminación artificial o monta natural y además ofrecerá la posibilidad de ser una herramienta para el pequeño y mediano productor por su bajo costo y su fácil realización en la toma de muestras.

Por lo tanto aporta conocimiento sobre el tipo de características que se observa por medio de la impronta laminar del moco cervical bovino. Consecuente con esto el modo de interpretar los datos obtenidos por cada una de las muestras que se obtenga son de fácil tabulación. Por consiguiente va a determinar que haya menos dias abiertos, mayor producción de leche e incrementar tasas de preñez.

También nos da un avance científico por el cual logramos una vida útil al animal y una mayor producción llevando a un desarrollo mas avanzado y económico para así cumplir y abastecer el mercado.

12. CONCLUSIONES

La ausencia de helechos es reflejo de una fase folicular no ovulatoria ya que está demostrada que una hembra en fase ovulatoria debe manifestar cambios conductuales y los folículos deben tener un diámetro superior a 1,7 cm, con la ayuda ecográfica.

Se puede afirmar que la presencia de helechos es respuesta de una fase folicular madura ya que se demostró entre la hora 12 a la hora 24 en la presencia de celo este estudio, coincide con la que fase ovulatoria, con el incremento de la manifestaciones externas y con la existencia de folículos de un diámetro folicular entre 17mm-18mm.

A pesar de que la literatura indica que a las 12-16 horas de completado el protocolo de sincronización seria el momento ovulatorio; en este trabajo las condiciones ideales se observan entre las 16-20 horas de culminado el protocolo de sincronización.

A su vez se observó que si hay una correlación entre la formación de helechos, diámetro folicular y las manifestaciones de celo, siendo el momento óptimo para la inseminación entre las horas 12 – 20.

13. RECOMENDACIONES

 Seguir profundizando sobre la formación de los helechos en celo natural ya que esta es una herramienta útil en la identificación del celo en los bovinos.  Comparar en las diferentes razas la formación del moco cervical y sus ramificaciones con el fin de definir si este puede servir como una forma fácil de predecir el momento óptimo de inseminación artificial. 

Describir la morfología del moco cervical y su relación con la relación de la dinámica folicular en las diferentes razas bovinas.

 Realizar estudios en otras especies como son ovinos y caprinos ya que es un método económico para la detección de celos.  Realizar un nuevo estudio con protocolos sistémicos e IATF.  Evaluar la calidad y las características del moco cervical en relacion con la nutrición de los animales.

14. BIBLIOGRAFIA

Bó GA, Baruselli ps, Moreno D,Cutaia L, Caccia M, Tribulo R, Tribulo H, Mapletoft RJ. The control of follicular weve development for self-appoointed embryo transfer programs in cattle.Theriogenology 57.53-72.2002a.

BERNABUCCI, U.; RONCHI, B.; LACETERA, N.; NARDONE, A. influence of body condition score on relationships between metabolic status and oxidative stress in peripartirent Dairy cows. J. DairySci. 88 (2005).

BILLINGS, E. Articulo control de la fertilidad (2003). Disponible en www.seap.es

CALLEJAS, S.; TAURUS Control farmacológico del ciclo estral bovino: bases fisiológicas, protocolos y resultados. As., (2004).

CONSIDERACIONES

HIGIÉNICAS

USO

DISPOSITIVOS

INTRAVAGINALES PARA SINCRONIZAR CELO EN BOVINOS PARA CARNE Méds. Vets. R.L. Piccinali y J.A. Trinidad*. 2003. Vet. Arg., Bs. As., 20(200):739-744. *Técnicos E.E.A INTA Concepción del Uruguay, Entre Ríos, Arg.

CHAGOY, A.M.J. Participación de algunas propiedades físico-químicas del moco cervical en el síndrome de la vaca repetidora. Tesis realizada para obtener el título de Maestro en Biología de la Reproducción. Universidad Autónoma Metropolitana, Iztapalapa, México. 2001.

CORTES,

Manuel

E; HAUYON,

Roberto; GONZALEZ,

Fernando y VIGIL

Pilar.Evidencia de Fractalidad en un Patrón de Cristalización de Moco Cervical Bovino Obtenido en Estro. Int. J. Morpho. 2012, vol.30, n.4, pp. 1461-1562

DÍAZ, T. Dinámica del desarrollo folicular ovárico durante el ciclo estral en el bovino. Rev. Fac. Cien. Vet. UCV 40: 3-18 (2005).

DRANSFIELD, M.; NEBEL, R.; PEARSON, R.; WARNICK, L. Article Timing of insemination for dairy cows identified in oestrus by a radiotelemetricoestrus detection system (2005).

ECHEVERRÍA, J. Endocrinología Reproductiva: Benzoato de estradiol. Boletín técnico elaborado para Laboratorio Biogénesis S.A. (2005). ECHEVERRÍA, J. Endocrinología Reproductiva: Prostaglandina F2α en vacas. Vol. VII, Nº 01, Enero/2006. Disponible en www.veterinaria.org/revistas/redvet/n010106.html

ESPINOZA, J.; ORTEGA, R.; PALACIOS A.; VALENCIA, J.; ARÉCHIGA, C. Articulo crecimiento folicular ovárico en animales domésticos, (2007).

Estatuto

Nacional

protección

los

animales;

disponible

en;

(wwww.comvezcol.org.co)

Estudio de la Cristalización del Flujo Cérvico Vaginal en Hembras Holando Argentino. Vet. Arg. – Vol. XXIX - Nº 286 – Febrero 2012. Prado, A.1; Bernardi, S.1; Bassi, A.2 y Marini, P.R.2

GARCIA, T.L. Caracteristicas del ciclo estral. Disponible en www.engormix.com el 15 de enero de 2010.

GIGLI, I. RUSSO, A; AGÜERO, A. Consideraciones sobre la dinámica ovárica en equino, bovino y camelidos sudamericanos. In Vet. 2006, 8 (1): 183-204.

GONZALEZ, F.I. Sincronizacion de celos e inseminación artificial. Tercera jornada de apoyo al sector lechero. 2008. Disponible en www.cgrbiotecnologia.com.

HERNANDEZ, C.J. Y ORTEGA, L. A. Articulo manual de inseminación artificial en bovinos con presencia de moco cervical. Departamento de reproducción. Facultad de medicina veterinaria y zootecnia. Universidad nacional autónoma de México. Enero (2009).

HEYDON, R. A. Y ADAMS, N. R. comparative morphology and Mucus Histochemistry of the Ruminant Cervix: Differences between Crypt and surface Epithelium. Division of animal Health, CSIR 0, institute of agriculture, university of Western Australia, Nedlands, Western Australia 6009, Australia. Biology of reproduction 21, 557-562 (2001)

LUCY, M.C. Estrus: Basic Biology and Improving Estrous Detection. Proc. Dairy Cattle Reproductive Conferenc. Pp. 29-37 (2006).

MAATJE, K; LOEFFER,S ENGEL H.B. Optimal time of insemination in cows that show visual sing of oestrus by estimating onset of oestrus with pedometers, J. DairySci. (2007).

MIHM, DM; BAKER, P. J. SMITH. G.W. CUOSSENS, P.M. EVANS, A. IRELAND, J.J. Molecular evidence that growth of dominant follicle involves a reduction in follicle stimulating hormone dependence and an increase in luteinizing hormone-dependence in cattle. Biol. Reprod. (2006).

MUNAR, C. Articulo evolucion de las herramientas de seleccion y biotecnologias aplicadas a los bovinos en la republica argentina durante la última década y perspectivas. Sumario Ganadero; CABIA (2007).

MONTIEL JUP. CHAYER R. USLEGHI G. CALLEJAS.S Efecto de diferentes esteres de estradiolusados para sincronizar la ovulación sobre el porcentaje de preñes post IATF en vaquillas angus.Invet(2011) .13(2):39 a la

NISHIMOTO, H; HAMANO, S;HILL, G.A; MIYAMOTO, A;TETSUKA, M. Classification of bovine follicles base don the concentrations of steroids, glucose and lactate in follicular fluid and the status of accompanying follicles. Journal of Reproduction and Development, vol. 55 (2009).

ROBERTO E.Tatis Z. (M.V.Z.) presidente de la asociación colombiana de criadores de ganado de doble propósito, asodoble fedegan N° 89 (2009).

RODGERS, S.J. IRVING H.F. Morphological classification of bovine ovarían follicles. The Robinson Institute, Research Centre for Reproductive Health, Discipline of Obstetrics and Gynaecology, University of Adelaide, South Australia 5005, Australia. Pp. 309-318 (2010).

ROJAS. L. E. Comparacion del efecto de tres análogos de prostaglandina F2 alfa via intravulvar, en dosis reducidas, para la inducción del celo en ganado lechero especializado. Trabajo para obtener el titulo de medico veterinario. Guatemala, noviembre (2003).

Rodolfo Catalano* y Santiago Callejas. Deteccion de celos en bovinos. factores que la afectan y metodos de ayudan. Revista de Medicina Veterinaria( 2001) Rutllant M. López-Béjar P. Santolaria J. Yániz and F. López-Gatius. Rheological and ultrastructural properties of bovine vaginal fluid obtained at oestrus J. Anat. (2002)

SABA Y MARTINEZ. Caracterizacion de moco cervical mediante impronta laminar durante el estro en hembras bovinas, (2010).

SENGER, P.L. Ciclo estral, exploración sistémica: Definicion, Componentes internos y externos, importancia, Diagnostico. Capitulo 7, pagina 145 (2004).

SEPULVEDA, N, RODERO, E. Articulo comportamiento sexual durante el estro en vacas lecheras. INCI V 28 Caracas set. (2005). 77

SINTEX. Articulo fisiología reproductiva del bovino. Laboratorio de especialidades veterinarias. Sitio argentino de producción animal. www.produccion-animal.com.ar (2005

SOTO, C. HECTOR; GONZALEZ B.H. Articulo evaluación de las actividades ováricas de bovinos explotados en condiciones tropicales. Instituto de estudios científicos y tecnológicos Universidad Experimental Simón Rodríguez (2006).

STEVENSON,

J.S.

Progesterone,

Follicular,

and

Estructural

Responses

Progesterone-Based Estrus and Ovulation Synchronization Protocols at Five Stages of the EstrousCycle. Department of Animal Sciences and Industry, Kansas State University, Manhattan. Journal of Dairy Science Vol. 91 N°. 12 (2008).

TSILIGIANNI, A; KARAGIANNIDIS, A; BRIKAS, P Art. Enzime activity in bovine cervical mucus during spontaneous and induced estrus. Can J. Vet. Res. (2003).

Th. Tsiligianni, A. Karagiannidis, Ph. Saratsis, P. Brikas. Enzyme activity in bovine cervical mucus during spontaneous and induced estrus .( 2003) VELAZQUEZ, J.G; CARDOZO J; NORBERTO J.; CUSME, W. Relación del moco cervical con la fertilidad del bovino doble propósito en el trópico bajo. Investigadores CORPOICA, SENA. (2006).