Identificación de la presencia de anticuerpos contra neospora by Medicina Veterinaria JDC

IDENTIFICACIÓN DE LA PRESENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA Neospora caninum EN PERROS (Canis familiaris) DE FINCAS LECHERAS DEL MUNICIPIO DE VENTAQUEMADA, BOYACÁ

RUTH ELIANA MARIÑO PEÑA

FUNDACION UNIVERSITARIA JUAN DE CASTELLANOS FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS MEDICINA VETERINARIA TUNJA 2015

IDENTIFICACIÓN DE LA PRESENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA Neospora caninum EN PERROS (Canis familiaris) DE FINCAS LECHERAS DEL MUNICIPIO DE VENTAQUEMADA, BOYACÁ

RUTH ELIANA MARIÑO PEÑA

Trabajo de grado, modalidad investigación, para optar el título de MÉDICO VETERINARIO

DIRECTOR ANA CONSUELO GONZÁLEZ PATIÑO M.V, Esp. Pequeños Animales CO –DIRECTOR GUILLERMO GRANADOS M.V.Z, Esp. Pequeños Animales

FUNDACIÓN UNIVERSITARIA JUAN DE CASTELLANOS FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS MEDICINA VETERINARIA 2015

NOTA DE ACEPTACIĂ&#x201C;N

____________________________________________

_________________________________________ Firma del presidente del Jurado

_________________________________________ Firma del Jurado

DEDICATORIA

Este trabajo lo dedico enteramente a mis padres, quienes por su dedicación, amor y esfuerzo me colaboraron a cumplir una meta más, a quienes por sus enseñanzas estoy realizando uno de mis sueños por todo su apoyo en los momentos difíciles, mis hermanas, por acompañarme en el desarrollo de este proceso, por brindarme compañía y ayuda cuando me la pudieron brindar.

A mi hija Isabella que es el regalo más grande y la compañía más bella que tengo a mi lado, por hacerme mejor persona por enseñarme que la paciencia y la comprensión es la clave.

A José López por brindarme tanto amor, compañía y comprensión durante estos años juntos.

A la Dra. Consuelo González y el Dr. Guillermo Granados a quienes por su ayuda incondicional, consejos, orientación y acompañamiento en el desarrollo de esta investigación, por brindarme una amistad sincera y enseñarme tantas cosas útiles para lograr una de las mejores prácticas profesionales

Al Dr. Luis Carlos Riaño por una amistad incondicional por su ayuda y apoyo en los momentos tanto difíciles como en los buenos por compartir risas y tristezas

A la Dra. Viviana Gómez por su ayuda apoyo y motivación para culminar esta etapa, y por cada granito que se colocó para la formación profesional que logro culminar

A mis mascotas compañeros fieles por demostrarme un amor distinto puro y verdadero

AGRADECIMIENTOS

Al Doctor Giovanni Moreno jurado lector, por sus aportes y sugerencias apropiadas para el desarrollo de esta investigaci贸n.

Al Doctor Fabi谩n S谩nchez jurado lector, por las sugerencias en el desarrollo de esta investigaci贸n

GLOSARIO

Aborto Esporádico: interrupción de la gestación que se presenta en forma aislada, Expulsión del feto de forma espontánea antes de las 20 semanas de preñes en general, los abortos espontáneos suelen estar causados por problemas cromosómicos, aunque también disfunciones hormonales en la madre o infecciones pueden ocasionarlo. Se ha calculado que la mitad de los óvulos fecundados no evolucionan favorablemente y son abortados espontáneamente.

Ataxia: incoordinación de los movimientos voluntarios con conservación muscular característica de ciertas enfermedades neurológica

Autólisis: la autolisis celular es el proceso de autodestrucción celular que conduce a la degradación de un tejido o de un órgano, fenómeno por el cual las células se autodestruyen en medio estéril

Bradizoíto: fase de lenta multiplicación de algunos parásitos protozoarios, forma quistes en los tejidos infectados que pueden permanecer durante muchos años en el huésped sin que se observen signos clínicos, posee una pared que engrosa con el tiempo. Los quistes pueden son comunes en el sistema nervioso central.

Endemia: proceso patológico que se mantiene a lo largo de mucho tiempo en una población o zona geográfica determinada

Endodiogenia: tipo de reproducción asexual en la cual se forman dos células en el interior de una célula madre dando origen a dos células hijas desapareciendo la célula madre.

Esporozoíto: es la forma infecciosa de los ooquistes. Un esporozoíto es una etapa del ciclo de vida de un parásito protozoario durante la cual puede infectar a 6

nuevos huéspedes. Los esporozoítos se forman por esporogonia, que es la división múltiple de una espora o cigoto dando cada uno de los fragmentos origen a un esporozoíto. Es característica de muchos apicomplejos.

Etiología: es la ciencia centrada en el estudio de la causalidad en medicina patogénesis que se refiere al origen de la enfermedad.

Exoftalmía: prominencia o protrusión del globo ocular, fuera de órbita puede ser unilateral o bilateral efecto de diferentes tipos de patologías puede comprimir el nervio óptico o la arteria oftálmica y producir ceguera.

Feto Momificado: ocurre cuando el feto muere y no es expulsado por su tamaño tampoco puede ser reabsorbido y no sufre contaminación bacteriana sin desarrollo y deshidratado con aspecto de momia

Hiperreflexia: aumento o exaltación de los reflejos, es una reacción del sistema nervioso autónomo a la estimulación excesiva dicha reacción puede incluir cambios en la frecuencia cardiaca cambios en la coloración de la piel.

Huésped definitivo: es aquél que aloja la forma adulta de ciertos parásitos que necesitan más de un huésped para cumplir su ciclo biológico

Inmunosupresión: disminución o caída de la inmunidad provocada por enfermedades o fármacos. Se Entiende por inmunosupresión la administración de sustancias que alteran de forma significativa la capacidad del sistema inmunitario para responder a la estimulación antigénica, mediante la inhibición de la inmunidad humoral y celular. La inmunosupresión puede ser deliberada, como en la preparación de trasplantes, para evitar el rechazo por parte del huésped de los tejidos del donante o accidental, o como el trastorno del sistema inmunitario, caracterizado por una marcada inhibición de respuesta ante un estímulo antigénico. 7

Mortinato: se presenta cuando un feto que se esperaba que sobreviviera, muere durante el nacimiento, muerte que ocurre antes de la completa expulsión o extracción del producto de una fecundación, a partir de la semana 20 de edad gestacional. La muerte es determinada por el hecho de que el feto no respire ni muestre otra evidencia de vida, tal como latido fetal, pulsación del cordón umbilical, o movimiento definido de los músculos voluntarios.

Necrosis: mortificación o gangrena de los tejidos del organismo, Es la muerte de tejido corporal y ocurre cuando no está llegando suficiente sangre al tejido, ya sea por lesión, radiación o sustancias químicas. La necrosis es irreversible.

Ooquistes: forma transmisibles de los protozoarios

Parasitemia: presencia de parásitos en la sangre, Las parasitemias causan la difusión del microorganismo en el cuerpo y en algunas enfermedades suelen ser diagnósticas o de tamizaje.

Paresia: la paresia es una pérdida de una parte de la motricidad de uno o varios músculos del cuerpo, de forma temporal o permanente, la paresia sólo dará lugar a una limitación de la motricidad. A menudo constatamos una simple pérdida de la fuerza muscular.

Patognomónico: se utiliza para denominar aquellos signos (manifestaciones visibles) o síntomas (manifestaciones no visibles, subjetivas) que, si están presentes, aseguran que el sujeto padece un determinado trastorno. Se dice del síntoma o signo que caracteriza y define una determinada enfermedad.

Prevalencia: medida de la proporción de enfermos o de reaccionantes positivos en una población. Cuantifica la proporción de personas en una población que tienen una enfermedad o cualquier otro suceso en un determinado momento y 8

proporciona una estimación de la proporción de sujetos de esa población que tenga la enfermedad en ese momento

Propiocepción: hace referencia a la capacidad del cuerpo de detectar el movimiento y posición de las articulaciones, regula la dirección y rango de movimiento, permite reacciones y respuestas automáticas, interviene en el desarrollo del esquema corporal y en la relación de éste con el espacio, sustentando la acción motora planificada. Otras funciones en las que actúa con más autonomía son el control del equilibrio, la coordinación de ambos lados del cuerpo, el mantenimiento del nivel de alerta del sistema nervioso y la influencia en el comportamiento.

Protozoo: son organismos microscópicos, unicelulares o compuestos por un grupo de células que son idénticas entre sí sin diferenciación de tejidos y que vive en medios acuosos o en líquidos internos o ambientes húmedos de organismos superiores

Puerperio: periodo que va desde la finalización del parto hasta que el útero vuelve a su tamaño previo a la gestación, tiempo en el que las hormonas y el aparato reproductor

vuelvan

las

condiciones pregestacionales

aminorando

las

características adquiridas durante el embarazo. En el puerperio también se incluye el período de las primeras 2 horas después del parto, que recibe el nombre de posparto inmediato.

Quiste: saco que encierra un organismo en su forma inmóvil de resistencia y de multiplicación. Así se protegen de los ácidos del estómago y, una vez en los intestinos, lo rompen y emergen. Es el estado infectante

Reflejo Patelar: reflejo que provoca la extensión de los miembros posteriores, como consecuencia del estiramiento del tendón rotuliano,. Orienta sobre

el estado de la médula . Es el más conocido y el más investigado de los reflejos tendinosos.

Taquizoíto: forma activa de replicación, responsable de la diseminación de la infección y de la destrucción tisular. Se le encuentra en sangre y tejidos durante la infección aguda. Son motiles, forman quistes y se encuentran en vacuolas dentro de las células infestadas

Técnica Elisa: es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable como cambio de color

Transmisión Horizontal: cuando el hospedador susceptible, contrae la infección mediante contacto físico con un hospedador infectado, o mediante contacto con las excreciones o secreciones infectadas de aquel, o cuando supone la existencia de un vehículo intermediario vivo o inanimado, que transmite la infección entre un hospedador infectado y otro susceptible.

Transmisión Vertical: ocurre durante la gestación, el parto o la lactancia de una madre infectada a su producto. Existen dos tipos: Hereditaria son aportadas por el genoma de algunos de los progenitores, y congénita, aparecen desde el momento del nacimiento, se refiere a las enfermedades adquiridas en el útero.

Vector: los vectores son todos aquellos insectos o animales que son medios de transmisión de enfermedades desde el animal al ser humano

RESUMEN

El descubrimiento del protozoo, llamado Neospora caninum, ha despertado un gran interés dentro de la comunidad científica, debido a que es el causante actual de grandes pérdidas económicas dentro de las producciones lecheras del mundo. Por tal razón, el propósito de este trabajo es determinar la existencia de este protozoo en algunas fincas lecheras del Municipio de Ventaquemada (Boyacá). Se realizó el estudio en 42 caninos (Canis familiaris) pertenecientes a varias fincas lecheras, localizadas en el municipio de Ventaquemada, determinando la seropositividad del parásito por medio de la prueba ELISA indirecto; ésta prueba detecta anticuerpos positivos (contando como positivos los que tengan valores mayores 100%): se encontró una prevalencia general del 61,9% de anticuerpos contra N. caninum, Asimismo, se revisó el género como factor predisponente, por medio de una Tabla de Contingencia evaluada con un Test exacto de Fisher, obteniendo que la prevalencia no depende del género (p=0,4649) y la asociación entre prevalencia y edad, se evaluó por medio de un Chí-cuadrado, dando como resultado que no hay independencia entre estos dos (X2=2,57 y p=0,5). También, se evalúo si las condiciones de vida y la exposición a desechos animales, influyen en la presencia de este protozoo y el desarrollo de la neosporosis en los bovinos. Los resultados proporcionaron datos sobre la presencia del protozoo en caninos y se asoció a los abortos en el ganado lechero de estos hatos, siendo una de las consecuencias reproductivas negativas en éstos.

Palabras

Claves:

Abortos,

Ganado

Seropositividad

Lechero,

Protozoo,

Prueba

Elisa,

ABSTRACT

The discovery of the protozoan, called Neospora caninum, has awakened great interest within the scientific community, because it is the current causing of a great economic losses in milk production in the world. For this reason, the purpose of this study is to determine the existence of this protozoan in some milk farms in the borough of Ventaquemada (Boyacรก). The study of 42 dogs (Canis familiaris) belonging to several milk farms was conducted, located in the borough of Ventaquemada determining seropositivity parasite through indirect ELISA test; This test detects antibodies positive (counting as positive those with higher values 100%): an overall prevalence of 61.9% of antibodies against N. caninum, also gender as a predisposing factor was reviewed, through a contingency table evaluated with Fisher exact test, obtaining the prevalence of gender depends not found (p = 0.4649) and the association between prevalence and age, was evaluated using a Chi-square, resulting in no independence between these two (X2 = 2.57 and p = 0.5). I will also evaluate whether the conditions of life and exposure to animal waste, influence the presence of this protozoan and the development of neosporosis in cattle. The results provided data on the presence of protozoa in dogs and was associated abortions in dairy cattle in these herds, one of the negative reproductive consequences in them

Keywords: Abortions, Dairy, Protozoa , Elisa test , seropositivity

TABLA DE CONTENIDO

INTRODUCCIÓN

2. MARCO DE REFERENCIA

2.1. ESTADO DEL ARTE

2.2. MARCO TEÓRICO

2.3. MARCO LEGAL

3. OBJETIVOS

3.1. OBJETIVOS GENERAL

3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

4. DISEÑO METODOLÓGICO

4.1. AREA DE ESTUDIO

4.1.1. Marco geográfico y climático

5. HIPÓTESIS

6. TIPO DE ESTUDIO

6.1. DISEÑO EXPERIMENTAL

6.1.1. Población y Muestra

6.1.2. Prueba ELISA indirecta

6.2. PREVALENCIA

6.3. ANÁLISIS DE DATOS

7. RESULTADOS

7.1. CARACTERÍSTICAS DE LA MUESTRA

7.2. PRESENCIA Y PREVALENCIA DE Neospora caninum

7.3. INFLUENCIA DEL GÉNERO EN LA PREVALENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA Neospora caninum

7.4. INFLUENCIA DE LA EDAD EN LA PREVALENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA Neospora caninum

7.5. ABORTOS Y Neospora caninum

8. DISCUSIÓN

9. IMPACTO

10. CONCLUSIONES

52 13

11. RECOMENDACIONES

12. LITERATURA CITADA

13. ANEXOS

LISTA DE FIGURAS

Figura No. 1:

Ciclo biológico de Nespora caninum

Figura No. 2.

Ruta de transmisión de la Neospora caninum.

Figura No. 3:

Mapa de Boyacá. Ubicación Municipio de Ventaquemada

Figura No. 4:

Porcentaje de seropositividad encontrado en los caninos de la zona rural de Ventaquemada. Encerrado en el recuadro aparecen los animales considerados negativos, por encima del 100% están los caninos positivos a anticuerpos de Neospora caninum

Figura No. 5:

Frecuencia de casos positivos y negativos de anticuerpos contra Neospora caninum en caninos por vereda del municipio de Ventaquemada.

Figura No. 6:

Presencia de anticuerpos de N. caninum en caninos de diferentes razas de Ventaquemada

Figura No. 7:

Presencia de anticuerpos de N. caninum en caninos de diferente edad y género de la zona rural de Ventaquemada

Figura No. 8:

Frecuencia de casos positivos para anticuerpos contra N. caninum por edad del canino en la zona rural de Ventaquemada

Figura No. 9.

Relación entre los abortos la positividad a la presencia de neospora caninum en los predios objeto de muestra.

Figura No. 10:

Toma de muestras

Figura No. 11:

Área para terneros

Figura No. 12:

Canino en el área de ordeño

Figura No. 13:

Área de ordeño

Figura No. 14:

Bovinos en pastoreo

Figura No. 15:

Caninos muestreados

LISTA DE TABLAS

Tabla 1.

Valores máximos y mínimos de seropositividad a anticuerpos de N. caninum en caninos de diferente género y raza en la zona rural de Ventaquemada

Tabla 2.

Tabla de Contingencia con la frecuencia de casos positivos y negativos a anticuerpos contra Neospora caninum por género del canino

Tabla 3.

Prevalencia de anticuerpos contra Neospora caninum en caninos de diferentes edades de la zona rural de Ventaquemada

Tabla 4.

Prevalencia de anticuerpos contra Neospora caninum en caninos de diferentes edades de la zona rural de Ventaquemada

INTRODUCCIÓN

Neospora caninum constituye una enfermedad causada por un parásito de tipo protozoo (Phylum Apicomplexa), que puede provocar abortos en bovinos entre el tercero y noveno mes de gestación, aunque es más común que suceda entre el quinto y sexto mes (Bjorkman et al, 2003).

Afecta principalmente al ganado lechero y se considera importante causa de aborto en Europa, Sudáfrica, Japón, Australia, Nueva Zelanda y diferentes países de América, incluyendo México (Dubey et al 2002) y Colombia (López et al, 2007). Después de su reconocimiento como agente etiológico de enfermedad en perros, se identificó en fetos bovinos abortados y momificados y en terneros con síndrome neurológico como parálisis neonatal (Valenzuela P, 2005). Por tal razón, se han incrementado los estudios de este parásito, siendo reconocido en muchos lugares del mundo, demostrando que Neospora caninum es la forma de infección común y similar al toxoplasma (Prelaud P, 2008).

Hasta 1998 se conocía poco sobre la transmisión de este parásito cuando McAllister, en este mismo año, determino su ciclo de vida y demostraron que el hospedero definitivo es el perro. Así, la cercanía del perro con los bovinos lecheros lo evidencian como fuente potencial de transmisión y causal de abortos (Wounda et al, 1999). Recientemente se considera al N. caninum como agente primario de enfermedad neuromuscular en perros jóvenes. (Font A et al, 1995)

En rebaños lecheros, el impacto económico radica principalmente en la pérdida de los fetos, reemplazo de vacas con registros de abortos, incremento en el intervalo entre partos y disminución en la producción de leche. Los terneros pueden no presentar síntomas, la serología puede ser negativa y a pesar de ello, pueden tener quistes y taquizoítos. En vacas seropositivas, nacidas de madres

seronegativas, se vio una mayor susceptibilidad al aborto que la observada en vacas seropositivas nacidas de madres seropositivas (Patituccia 2001).

En Colombia se ha reportado la neosporosis principalmente en ganado lechero a través de técnicas serológicas, estas técnicas son inusuales en caninos sin embargo, este animal es considerado hospedero del protozoo portador del parásito que causa la neosporosis, por esta razón es importante y necesario la elaboración de este estudio para la preservación de la salud y bienestar de los caninos y su interacción con los bovinos.

Dentro de los principales problemas de acuerdo a las encuestas realizadas a los productores lecheros del municipio de ventaquemada son las pérdidas económicas, debido a los abortos que se presentan sin determinar su etiología. Quizás por falta de conocimiento de los productores, en cuanto a prácticas de manejo, dándose así la probable presencia de neosporosis en fincas de este municipio.

Esta deducción plantea que puede estar involucrada la existencia del parásito Neospora caninum, el cual, según diversos investigadores es la causa de un alto porcentaje de las pérdidas económicas en los diferentes hatos del mundo (Dubey, 2003), llegándose a demostrar su prevalencia en muchos países del planeta. A través de muchas investigaciones se ha determinado que los Caninos (canis familiaris) es el diseminador de esta enfermedad dentro de los hatos, siendo este el huésped definitivo, provocando aborto al ganado (Lozada E, 2004). La patología se presenta en su totalidad por la existencia de los caninos en las fincas; cuando el ganado se encuentra en proceso de parto, los caninos por instinto llegan al lugar para ingerir la placenta y así continuar con el ciclo biológico del parásito (Dubey, 2003),

2. MARCO DE REFERENCIA

2.1.

ESTADO DEL ARTE

Neospora caninum causa aborto tanto en ganado de leche y ganado de carne. Las vacas de cualquier edad pueden abortar del tercer

mes de gestación

término. La mayoría de los abortos inducidos por neosporosis-ocurren en el quinto y sexto mes de gestación. Los fetos pueden morir en el útero, ser reabsorbido, momificado, autolizados, nacidos muertos, nacidos vivos con signos clínicos, o nacidos clínicamente normal, pero infectadas crónicamente. Abortos inducidos neosporosis-se producen durante todo el año.( Dubey, 2003 )

Las vacas con N. caninum (seropositivos) tienen más probabilidades de abortar que las vacas seronegativas y esto se aplica tanto a los de leche y de carne. Sin embargo, hasta el 95% de los terneros nacidos infectados congénitamente seropositivos siguen siendo clínicamente normal. La edad de la madre, número de lactancia, y la historia del aborto en general, no afectan a la tasa de infección congénita, pero hay informes que indican que en los bovinos persistentemente infectados la transmisión vertical es más eficiente. (Jenkins et al, 2002)

Poco se sabe en la actualidad en relación con la patogénesis de la infección en las vacas después de la infección con una ruta natural (oral) y el uso de la etapa de transmitirse de forma natural del parásito (oocistos) aunque ooquistes son infecciosos para el ganado por la ruta oral. Los resultados de los experimentos con lácteos

carne

vaca

vacas

inoculadas

por

vía

parenteral

con N. caninum taquizoítos indican que el feto puede infectarse y, a veces enferma por 4 semanas después de la inoculación del parásito.Incluso en la primera etapa, había lesiones en placenta y el SNC y la encefalitis fue la lesión predominent. El alcance de los daños a la placenta directamente debido a la multiplicación de N. caninum y por la respuesta inmune no se conoce la edad 19

gestacional se puede determinar el resultado de la infección. Los fetos infectados temprano en el embarazo son propensos a morir. (Buxton et al, 2002)

Los signos clínicos sólo se han reportado en el ganado de menos de 2 meses de edad. Neospora

caninum

becerros

infectados

pueden

presentar

signos

neurológicos, tener bajo peso, incapaz de levantarse, o haber nacido sin signos clínicos de la enfermedad. Extremidades posteriores o extremidades anteriores o ambos pueden ser flexionado o hiperextensión. El examen neurológico puede revelar la ataxia, disminución de los reflejos rotulianos, y la pérdida de la propiocepción consciente. Los terneros pueden tener exoftalmia o apariencia asimétrica en los ojos. Neospora caninum en ocasiones causa defectos de nacimiento, incluyendo hidrocefalia y estrechamiento de la médula espinal.

Los abortos pueden ser epidémica o endémica ( Wouda et al., 1999). En las zonas infectadas, tantos como 33% de los fetos de vacas lecheras se han reportado para abortar dentro de unos meses. Abortos se consideraron epidemia si más del 10% de las vacas en riesgo abortado dentro de 6-8 semanas. Una pequeña proporción (<5%) de las vacas se ha informado que han repetido aborto debido a la neosporosis ( Anderson et al., 1995).

Con la problemática que ha causado la presencia de este parásito se han realizado investigaciones a nivel mundial, por ejemplo en lima Perú en diciembre de 2003 fue realizado un estudio para ver la Frecuencia de Neospora caninum en perros de establos lecheros del valle de Lima. Se evaluaron 104 muestras de suero de caninos mayores a 3 meses de edad, provenientes de 23 establos lecheros, mediante la detección de anticuerpos contra N. caninum a través de la prueba de inmunofluorescencia indirecta. El 32.7 ± 9.0% (34/104) de las muestras fueron positivas a N. caninum en una dilución de 1:50, siendo las provincias del Huaura y Huaral las que tuvieron los mayores niveles de seropositividad (58.8%,10/17). No se hallaron diferencias estadísticas en las variables edad y sexo (Fredes, 2002) 20

De igual manera en lima se desarrolló una investigación para determinar la seroprevalencia de Neospora caninum en perros de establos lecheros de la cuenca izquierda del valle del Mantaro. Se evaluaron 124 sueros de perros, provenientes de 24 establos lecheros de las provincias de Huancayo, Jauja y Concepción. Se halló una prevalencia de anticuerpos contra N. caninum de 19.4 ± 7.0%

(24/124),

una

dilución

1:50,

mediante

prueba

inmunofluorescencia indirecta. El porcentaje de establos que poseían al menos un perro infectado fue de 62.5% (15/24). No se halló asociación entre la tasa de infección y las variables, ubicación geográfica (provincia), edad, sexo y procedencia (en el establo o en los alrededores). Estos resultados demuestran que los caninos del valle del Mantaro presentan una prevalencia moderada de infección con N. caninum; y considerando que dicha infección está presente en la mayoría de los establos de la zona, se recomienda el control del acceso de los canes a los establecimientos lecheros en el valle del Mantaro. (Nathann et al 2004).

Por otra parte en Chile se realizó una investigación en la escuela de medicina veterinaria de la Universidad de chile en el año 2002 sobre Neospora en caninos demostrado la presencia de anticuerpos contra el protozoo en bovinos, por tal motivo se propuso la identificación de la infección mediante la detección de anticuerpos séricos contra N. caninum en perros. Se estudiaron 201 sueros caninos de diferentes edades, genero , raza, ambiente ("rural" vs. "urbano") y tipo de alimentación ("carne cruda" vs. "no cruda") en una dilución 1:50 mediante la técnica de InmunoFluorescencia Indirecta (IFA). Del total de perros estudiados, el 18% presentó anticuerpos contra N. caninum. Además se demostró asociación entre la cantidad de positivos, el ambiente y el tipo de alimentación; no obstante, no hubo relación con el género, raza y edad. Los resultados indican que el pertenecer al ambiente rural y/o consumir carne cruda pueden ser importantes factores de riesgo dentro de la epidemiología de la infección por N.caninum. (Fredes, 2002) 21

En Colombia se reportan estudios en bovinos para determinar la presencia de este protozoo, pero como no existen estudios reportados en caninos; en el municipio de montería, se realizó un estudio descriptivo de corte transversal, en hembras bovinas con antecedentes verificables de abortos, momificaciones y repeticiones de celo y que tuvieran más de cuatro servicios por preñez. Las muestras de suero fueron procesadas por la técnica de ELISA. De los 196 sueros examinados 20 fueron positivos a N. caninum lo que corresponde a 10,2% de positividad. El 12% de las hembras seropositivas encontradas en el estudio, correspondió a vacas repetidoras; 10,75% fueron vacas con reporte de aborto

y 20% tuvieron

antecedentes de momificación fetal (Oviedo et al, 2007)

2.2.

MARCO TEORICO

La Neosporosis, causada por el parásito coccidio Neospora caninum, es reconocida como una de las principales enfermedades de los animales domésticos causando enfermedad clínica en los perros y en los bovinos. Es notable en los neonatos, en donde encontramos parésia, parálisis ascendente de los miembros, hiperreflexia, problemas neuromusculares por destrucción de células musculares y nerviosas como nervios craneales y espinales, provocando encefalitis y polirradiculoneuromiositis,

además

hay

destrucción

células

hepáticas

provocando hepatitis con necrosis, daños renales y problemas a nivel placentario (Dubey, 2003). En los fetos podemos notar autólisis, momificación, acúmulo de fluidos sanguinolentos en cavidades corporales, mortinatos, lesiones en cerebro, médula espinal y corazón; ocasionalmente en pulmones y riñones con miocarditis y encefalitis multifocal no supurativa (Valenzuela, 2005).

En terneros específicamente, se puede observar que es notable la lesión neuromuscular evidenciada en parálisis ascendente, ataxia, exoftalmos y posición asimétrica de los ojos. Además, las vacas afectadas no muestran un signo clínico de enfermedad a excepción del aborto que se da por placentitis y que ocurre 22

comúnmente entre el 4 y 6 meses de gestación, tanto en ganado de carne como de leche.

Los abortos pueden presentarse de forma epidémica o esporádica. Los machos adultos no presentan sintomatología clínica aparente (Lozada, 2004). En las últimas décadas ha sido descrita como una de las principales causas de abortos y de pérdidas económicas de la ganadería bovina (Bos taurus-indicus), (Dubey, 2003).

La N.caninum se encuentra dentro del Phylum Apicomplexa, Clase Sporozoea, Subclase Coccidia, Orden Euciccidiia, familia Sarcocystidae, a la cual pertenecen los géneros de Toxoplasma, Sarcocystis y Hammondia (Dubey, 2003).

Hasta hace poco se habían identificado dos estadíos del parásito, los taquizoitos y los quistes tisulares. En los tejidos, Neospora caninum se asemeja mucho a Toxoplasma gondii al presentar taquizoitos intracelulares de 4-7 micrómetros de largo que se dividen por endodiogenia formando grupos con variable número de organismos. Los quistes en tejido tienen una delgada pared de 1- 4 micrómetros y contienen bradizoitos. El huésped definitivo es el perro y recientemente fue encontrado que también el coyote. El ciclo biológico de Neospora caninum, como el de todos los Apicomplexa, es complejo, por ello no ha sido completamente identificado. Se ha postulado un ciclo de vida similar al de Toxoplasma, permaneciendo desconocido hasta 1988 donde se realizaron estudios más completos (Dubey, 2002).

Una multiplicación asexual del parásito toma lugar en un amplio rango de huéspedes intermediarios, incluyendo vacas y otros animales de granja como ovejas, cabras, cerdas, y existen reportes en caballos, también se ha realizado la infección experimental en ratas, ratones, gatos y primates (Dubey, 2002).

Se ha demostrado que los perros puede eliminar ooquistes de Neospora caninum después de haber ingerido placenta de vacas seropositivas (Trees y Williams, 2005), y que el ganado puede ser infectado oralmente por ooquistes producidos en perros (Schares et al, 2001). Estudios recientes realizados por demostraron que el coyote (Canis latrans) también puede excretar ooquistes de Neospora caninum en sus heces después de haber ingerido quistes tisulares. (Gondim et al, 2004). El ciclo de vida de Neospora caninum (Figura 1) comprendería una fase sexual en el intestino del huésped definitivo, con la formación de ooquistes que al ser eliminados en las heces y posteriormente ingeridos por los bovinos daría el inicio de la fase asexual, en esta segunda fase, se da la formación de quistes tisulares y taquizoitos, que al ser ingeridos por los caninos cerrarían el ciclo epidemiológico (Dubey, 1999).

Figura 1. Ciclo biológico de Neospora caninum. Fuente: Dubey, 1999

Las fases asexuales de Neospora caninum son trasmitidas eficientemente en ganado por varias generaciones (Dubey, 2006). La ruta de transmisión mejor descrita e identificada hasta el momento es la vía transplacentaria (transmisión

madre a feto) y es considerada la forma más importante para mantener la infección en los hatos como se observa en la figura 2. (Trees,& Williams, 2005).

carne

vaca

vacas

inoculadas

por

vía

parenteral

Figura 2. Ruta de transmisión de la Neospora caninum. Fuente Schares, 2001

En caninos la enfermedad puede ser fatal tanto en perros jóvenes como adultos, pero los casos de infección congénita son los más dramáticos (Cuddon et al, 1992). En cachorros la manifestación clínica característica de la neosporosis es la parésia y/o la parálisis ascendente de los miembros posteriores, con contracción espástica de los mismos. Por otro lado, hoy se sabe que el perro es el huésped 25

definitivo de N. caninum, el que excreta los ooquistes al medio ambiente, los que a su vez contaminarían el alimento y el agua de bebida de los animales de producción Poco se sabe sobre el modo de propagación y distribución en los tejidos de N.caninum en animales utilizando las vías naturales de la transmisión. El parásito se puede transmitir en varios huéspedes y la vía vertical es el modo principal de su transmisión en el ganado. Los carnívoros pueden adquirir la infección por la ingestión de tejidos infectados. Los perros pueden desarrollar la enfermedad a cualquier edad, pudiendo además ser localizada o generalizada, afectando a distintos órganos.

mayoría

los

casos

severos

ocurren

cachorros

infectados

congénitamente, los cuales manifiestan parésia que progresa a parálisis en los miembros traseros y los miembros anteriores pueden afectarse con hiperextensión rígida (Dubey, 2003). Los signos neurológicos dependerán del sitio afectado y puede presentarse disfagia, parálisis mandibular, flacidez muscular, atrofia muscular e incluso falla cardiaca (Dubey, 2000). Otra manifestación de la enfermedad, pero menos frecuente, es la dermatitis que se ha manifestado en algunos perros (Dubey, 2003). La transmisión en el perro es por ingestión de tejidos

contaminados

con

bradizoitos

provenientes

algún

hospedero

intermediario, con lo cual se completaría el ciclo biológico de N. caninum. Pero también el perro puede actuar como hospedero intermediario al consumir ooquistes en la comida o el agua (Dubey, 2003). La vía vertical también está presente en esta especie, aunque hay estudios que evidencian que esta vía de transmisión es poco efectiva para mantener la infección en los perros. No se conoce si existe una mayor susceptibilidad por raza o sexo. Sólo se tiene el antecedente de que la mayoría de los casos se han descrito en Labradores, Boxers, Greyhounds, Golden Retriever y Basset Hounds (Dubey, 2003).

La Neosporosis se señala como la mayor causa de aborto en bovinos, sobre todo entre los tres y los seis meses de gestación, los factores que predisponen a la

enfermedad son los relacionados con las altas concentraciones de animales y la intensificación de la producción (Dubey et al, 2000).

La comprobación de parálisis ascendente de miembros en perros jóvenes, sobre todo cuando afecta animales de una misma camada, debe hacer sospechar de Neosporosis. Los hallazgos hematológicos y bioquímicos varían según el sistema orgánico afectado, pero en los perros con parálisis de miembros posteriores, pueden ser normales. Es posible detectar Neospora caninum en líquido cefalorraquídeo y en tejidos de biopsias (Guimarães et al, 2004).

Clínicamente la Neosporosis es similar a la Toxoplasmosis, sin embargo, los parásitos pueden distinguirse estructural e inmunológicamente (Dubey et al, 2003). Cuando exista sospecha de infección por Neospora las muestras enviadas al laboratorio de diagnóstico deberán ser las siguientes: suero de la madre, del feto suero o exudados torácicos, feto entero con su placenta, o en su lugar, muestras de cerebro, médula espinal (a nivel del cuello), corazón, hígado, músculo esquelético y placenta fijada en formol al 10% (Valenzuela, 2005). la principal alteración macroscópica es la autolisis. El cerebro puede presentar autolisis, pero aun así se bebe remitir para estudio junto con el corazón, el hígado y la placenta, siempre que sea posible. las lesiones histológicas son encefalitis multifocal miocarditis y hepatitis periportal, Las lesiones hepáticas pueden ser más prominentes en los abortos epizoóticos.

Se han utilizado técnicas de inmunohistoquimica con suero anti-n caninum para identificar os taquizoitos en los tejidos, y el cerebro es el órgano donde se ha conseguido una mayor tasa de detección, Las lesiones histopatológicas nos ofrecen un diagnóstico presuntivo de la enfermedad (Lasri et al, 2004).

Para el diagnóstico serológico de la Neosporosis se pueden emplear técnicas de inmunoflurescencia indirecta y diversos ELISA, estos métodos van a servir para detectar anticuerpos en los caninos sospechosos (Lasri et al, 2004). 27

La serología resulta de gran ayuda para poder hacer el diagnóstico de esta enfermedad al detectarse títulos altos de anticuerpos en suero de los perros infectados (Moore et al, 2005).

El uso de la prueba de Elisa para detección de anticuerpos de Neospora es utilizado en forma rutinaria, es un diagnóstico rápido y dotado de gran especificidad del 96.5% y sensibilidad del 88.6% (Piergili et al, 2003). Si consideramos que la infección por Neospora caninum es persistente, la detección de anticuerpos es sinónimo de infección y no de convalecencia o inmunidad Es posible además realizar un análisis de bioquímica sanguínea, el cual revelará el aumento de aquellas enzimas séricas asociadas con necrosis de miocitos y daño hepático (Greene, 1990). La pesquiza de anticuerpos séricos anti N. caninum puede ser una buena herramienta diagnóstica, pero esto debe ser asociado al cuadro clínico, pues individuos clínicamente sanos pueden también presentar títulos

anticuerpos

(Dubey

Lindsay,

1993).

empleado

inmunofluorescencia indirecta, como prueba diagnóstica, sin embargo debe ser verificado histológicamente e intentar el aislamiento del parásito.

El hallazgo de anticuerpos específicos frente a Neospora caninum en suero sanguíneo nos confirma la infección (Dubey, 2003).

En cultivos celulares, a partir de tejidos, principalmente de Sistema nervioso central (SNC). Para la identificación del protozoo se pueden realizar las técnicas de Inmunoperoxidasa sobre tejidos con lesiones, Microscopia electrónica e Inmunofluorescencia indirecta (Moore et al, 2005). En la actualidad no hay un tratamiento efectivo para las vacas infectadas que pueda prevenir la transmisión vertical (Dubey, 2003). Sin embargo, experimentos en ratones han evidenciado que el uso de los anticoccidiales derivados de la triazina, como toltrazuril y ponazuril, previenen la formación de lesiones cerebrales y además, disminuye la detección de Acido desoxirribonucleico (DNA) parasitario 28

por medio de la reacción en cadena de polimerasa (PCR) en más de 95% (McAllister, 2005). En caninos para el tratamiento de la neosporosis se han utilizado una serie de medicamentos, entre las que más se mencionan están las sulfonamidas, pirimetamina y clindamicina. Aún no existe información concluyente respecto a la eficacia de la vacuna muerta en reducir la infección fetal o abortos en vacas infectadas o en prevenir la infección post natal en vacas no infectadas. Sin embargo, estudios preliminares indican que la vacuna tiene la capacidad de reducir la incidencia de abortos, pero no genera protección contra la transmisión vertical del parásito (Estill, 2004).

Las prácticas de manejo a nivel de hato para reducir la infección de Neospora caninum pueden incluir la reducción de la contaminación fecal de forrajes o agua por perros u otros potenciales hospedadores definitivos, eliminar rápidamente fetos bovinos abortados, membranas fetales, placentas o terneros muertos.

Existen evidencias de que algunas vacas infectadas por Neospora caninum pueden desarrollar un grado de inmunidad contra el aborto o la transmisión congénita. La Neospora caninum se transmite eficazmente durante varias generaciones, aumentando así la probabilidad de que el grupo de animales infectados tengan un riesgo significativamente mayor de sufrir un aborto en comparación con el ganado no infectado. Por lo tanto, a pesar de que la prevención del aborto podría ser un objetivo más realista para el desarrollo de una vacuna, el objetivo final para el control exitoso de esta enfermedad debe concentrarse en la prevención de la transmisión vertical (de madre a hijo).

El tema de las vacunas, dadas las condiciones inmunológicas de Neospora caninum no ha producido resultados convincentes para la comunidad científica a nivel mundial dado que las mismas han fallado en prevenir la transmisión congénita de este protozoario (Reichel & Ellis, 2006)

2.3.

MARCO LEGAL

LEY 576 DE 2000 (Febrero 15)

Por la cual se expide el Código de Ética para el ejercicio profesional de la medicina veterinaria, la medicina veterinaria y zootecnia y la zootecnia.

El Congreso de Colombia DECRETA:

TÍTULOI DE LAS DISPOSICIONES GENERALES

CAPÍTULO I Declaración de principios

Artículo 1º. La medicina veterinaria y la zootecnia, son profesiones basadas en una formación científica, técnica y humanística que tienen como fin promover una mejor calidad de vida para el hombre mediante la conservación de la salud animal, el incremento de las fuentes de alimento de origen animal, la protección de la salud pública, la protección del medio ambiente, la biodiversidad y el desarrollo de la industria pecuaria del país.

Parágrafo. En el campo de las ciencias animales, existen en Colombia tres profesiones afines, a saber: La medicina veterinaria, la medicina veterinaria y zootecnia y la zootecnia. Para los efectos legales relacionados con esta ley, se hace referencia a las tres profesiones, de acuerdo con lo previsto en la Ley 73 de 1985. 30

Artículo 2º. Los profesionales a quienes se les aplica esta ley, deben tener presente que son principios éticos y morales, rectores indiscutibles ajenos a cualquier claudicación, entre otros, el mutuo respeto, la cooperación colectiva, dignificar la persona, acatar los valores que regulan las relaciones humanas, convivir en comunidad, cumplir voluntariamente los principios que guían, protegen y encauzan la actitud del hombre frente a sus deberes, obligaciones y derechos.

Artículo 3º. Los profesionales objeto de la presente ley, como integrantes de la sociedad, deberán preocuparse por analizar los diferentes problemas de la vida nacional en el campo de su ejercicio profesional, teniendo la responsabilidad social de contribuir eficazmente al desarrollo del sector agropecuario del país.

Artículo 5º. Los médicos veterinarios y los zootecnistas, en su labor diaria, deben hacer uso de todos sus conocimientos y capacidades para cumplir cabalmente la misión profesional.

Es responsabilidad de los citados profesionales mantener un alto nivel de competencia, mostrarse receptivos a los cambios científicos y tecnológicos a través del tiempo. Deben poner todos sus logros a disposición de sus colegas y aprovechar los de éstos en beneficio de un mejor desempeño.

Artículo 6º. Los conocimientos, capacidades y experiencia con que el médico veterinario y el zootecnista sirven al hombre y a la sociedad, constituyen la base de la profesión que ejercen. Por lo tanto, estos profesionales tienen la obligación de mantener actualizados sus conocimientos, los cuales, sumados a los principios éticos en el ejercicio de su profesión, tendrán siempre como objetivo desarrollar una labor de alta eficiencia, demostrando su competencia, capacidad y experiencia.

Parágrafo. Los profesionales deben reconocer los límites de su competencia y las limitaciones de sus conocimientos y solo deben prestar los servicios y usar las técnicas para lo que estén capacitados.

Artículo 7º. Los profesionales sujetos a la presente ley, se vincularán con el desarrollo de estudios relacionados con la conservación de los ecosistemas animales, su entorno de vida y bienestar, sistemas de cofinanciamiento y prácticas de producción animal, frente a los sistemas apropiados de producción y desarrollo tecnológico. Teniendo como objetivo primordial el bienestar del ser humano, dentro de los más altos y sanos principios éticos.

Artículo 8º. El médico veterinario y el zootecnista, deberán ejercer su profesión en un todo de acuerdo con lo establecido en la presente ley y en las demás normas vigentes sobre la materia

3. OBJETIVOS

3.1.

OBJETIVO GENERAL

Identificar la presencia de anticuerpos contra Neospora caninum, mediante Elisa Indirecto en perros de hatos lecheros del municipio de Ventaquemada, Boyacá.

3.2.



OBJETIVOS ESPECIFICOS

Determinar la presencia de Neospora caninum de acuerdo a la edad de los caninos en las fincas incluidas en el estudio



Determinar la presencia de Neospora caninum de acuerdo al género de los caninos de las fincas incluidas en el estudio



Determinar la relación entre los abortos de los bovinos y la presencia de Neospora caninum en perros.

4. DISEÑO METODOLÓGICO

4.1.

ÁREA DE ESTUDIO

4.1.1. Marco geográfico y climático

Descripción Física:

Ventaquemada presenta una topografía de relieve ondulado, quebrado (80%) y plano (20%). Esta característica se presenta puesto que la cordillera oriental atraviesa el municipio de sur a norte.

Límites del municipio:

Al norte con los municipios de Tunja y Samacá; Por el oriente con Boyacá, Jenesano y Nuevo Colón; Por el sur con Turmequé y Villapinzón; y por el occidente con Guachetá, Lenguazaque y Villapinzón (Figura 3).

Figura 3. Mapa de Boyacá. Ubicación Municipio de Ventaquemada. Fuente: POT, 2008.

Extensión total: 159.329 Km2 Extensión área urbana: 0.502 Km2 Extensión área rural: 158.827 Km2 Altitud de la cabecera municipal (metros sobre el nivel del mar): 2.630 m.s.n.m. Temperatura media: la temperatura oscila entre los 8º C y 14º C. Distancia de referencia: 98 Km. de Bogotá D.C

Subsector pecuario:

Bovinos: ventaquemada cuenta con un área total de 16.000 hectáreas de las cuales 10.000 se encuentran en pastos, para alimentar a 16.000 cabezas de ganado bovino, constituyéndose en un factor importante de ingresos económicos para familias de este municipio.

Tradicionalmente se ha encaminado la ganadería hacia el doble propósito (carne y leche) con la excelente adaptabilidad que ha presentado la raza normando a las condiciones climáticas de nuestro municipio; también se han establecido cruces con la raza criolla adoptando características de resistencias a enfermedades, infecciosas, parasitarias, y desequilibrios reproductivos.

Anualmente se producen un promedio de 11.520.000 litros de leche en el municipio, que son comercializados hacia el interior del país para pasteurización y procesamiento, una pequeña cantidad se procesa en el municipio y la otra parte para consumo familiar constituyéndose así en el segundo renglón de importancia económica del sector agropecuario luego del cultivo de la papa (PDM, 2013).

5. HIPร TESIS

H0 = No hay presencia de anticuerpos de Neospora caninum en las fincas de Ventaquemada, Boyacรก.

Ha = Hay presencia de anticuerpos Neospora caninum en las fincas lecheras del municipio de Ventaquemada, Boyacรก.

6. TIPO DE ESTUDIO

El tipo de estudio estadístico que se utilizó en esta investigación es descriptivo de corte transversal ya que identifica y describe el parásito presente en perros de fincas lecheras mediante la prueba de Elisa indirecta en el municipio de Ventaquemada (Boyacá)

El análisis estadístico descriptivo está referido al estudio y análisis de los datos obtenidos en una muestra y como lo indica describe y resume las observaciones obtenidas sobre un hecho o fenómenos, calculando unos parámetros que den información global de toda la población; de corte transversal consiste en la observación de las características de una muestra aleatoria de cierta población por medio de cuestionarios con el fin de buscar información sobre la exposición a factores de riesgo para cierta enfermedad. Se utilizó el test exacto de Fisher como prueba estadística para evaluar la existencia de asociación o dependencia entre las dos variables

6.1.

DISEÑO EXPERIMENTAL

6.1.1. Población y Muestra

Se tomó como población todos los caninos de las fincas de la zona rural del municipio de Ventaquemada, Boyacá. El total, en el censo de caninos del municipio es de 3.100. Para la zona rural, la población canina es de 2.800 perros (PDM, 2013). Para calcular la muestra, se usó la fórmula de población finita, como se observa a continuación: (

)



= 1,962 (ya que la confianza es del 95%)



p = proporción (en este caso 2800/3100 = 90,323%)



2800= corresponden a los perros de la zona rural del municipio de Ventaquemada



3100= corresponden a los perros del municipio de Ventaquemada



q = 1 – p (en este caso 1 – 0,90323 = 9,677%)



E = error (en este caso deseamos un error del 9%)



= Valor que da la tabla de distribución normal



Tamaño de la muestra 42 caninos.

REMPLAZANDO: (

)

La muestra usada fue de 42 individuos, los cuales se eligieron sin tener en cuenta edad, raza o género, además que no presentarán sintomatología compatible con alguna enfermedad.

Dentro de la metodología del estudio, se realizaron encuestas a los trabajadores y propietarios de las fincas para determinar el manejo de los desechos biológicos y lo más importante las condiciones de vida de los caninos.

A los animales muestreados se les efectuó el examen clínico completo previo a la extracción de sangre, cuyo resultado demostró que los animales presentan óptimas condiciones de salud.

Para la toma de muestras se realizó la correcta desinfección de la zona, utilizando alcohol antiséptico, se genera por punción de la vena cefálica antebraquial, con agujas vacutainer número 21. 38

Posteriormente se obtuvo de 3 a 5 ml de sangre y se depositaron en tubos tapa roja, se marcaron con la referencia de cada individuo e inmediatamente se llevaron a la cava de Icopor® con gel refrigerante. Posteriormente, se llevaron las muestras al laboratorio, donde se

centrifugaron a 2.500rpm / 5minutos para

obtener el suero. El suero separado se depositó en viales eppendorf de 1,5 ml y se congeló a -20°C; para realizar la prueba de ELISA indirecta contra Neospora caninum, la cual se manejó con especificidad del 97% y la sensibilidad 99%; esta prueba se realizó en el laboratorio Funcep, en la ciudad de Bogotá.

6.1.2. Prueba ELISA indirecta

El suero sanguíneo es diluido en la solución buffer, la poceta es incubada y lavada; se añade a las pocetas el anticuerpo monoclonal (Ig G1 antibovino) marcado con peroxidasa, que funciona como aglutinado. La poceta es incubada por segunda vez a temperatura ambiente y lavada, añadiendo el sustrato de enzima (peróxido de hidrogeno) y la tetrametilbenzidina cromógena. Si existen dentro del suero inmunoglobulinas específicas para Neospora caninum el conjugado se pega a los microplatos que contienen el protozoo y la enzima cataliza la transformación del cromógeno incoloro a un compuesto pigmentado (Funcep, 2015).

La intensidad del resultante color azul, es proporcional a los títulos del anticuerpo específico en la muestra, se incuba por tercera vez por 10 minutos a temperatura ambiente protegiéndose de la luz, agregándosele luego, una solución preparada a cada poceta, posteriormente se analizan las densidades óptimas con la ayuda del lector de Elisa indirecta (Funcep, 2015).

La seropositividad del kit Aider, incorpora una escala de valores que representan el nivel de positividad. Para la valoración antigénica de las fracciones se empleó la

técnica de Elisa, acorde a las condiciones del experimento; la especificidad de la prueba es de 97%, sensibilidad 99%, como ya se había nombrado (Funcep, 2015)

6.2.

PREVALENCIA

Se obtuvo la prevalencia de Neospora caninum, en los perros muestreados usando la siguiente formula:

*100

En donde: Ct = número de casos de Neospora caninum existentes (prevalentes) en un momento determinados. Nt = número total de individuos en la población, en el momento del estudio.

6.3.

ANÁLISIS DE DATOS

Los datos se analizaron por medio de proporciones según la cantidad de positivos de raza, género y grupo etario. Además, se presenta la prevalencia de positivos (de anticuerpos contra Neospora caninum) por género y grupo etario. Asimismo, para evaluar las posibles asociaciones entre positivos/negativos y género, se usó una Tabla de Contingencia evaluada por medio del Test exacto de Fisher. Además, se usó la prueba de Chi-cuadrado para ver asociaciones entre positivos/negativos y edad; en este caso, no fue posible utilizar la Tabla de Contingencia porque existieron datos en cero que harían modificar los resultados.

7. RESULTADOS

7.1.

CARACTERÍSTICAS DE LA MUESTRA

Se analizaron las muestras de sangre de 42 caninos provenientes de nueve veredas del área rural del municipio de Ventaquemada (anexo 1). Se presentan los valores mínimos y máximos de serpositividad sobre los anticuerpos de Nesopora caninum, mostrando género y razas (Tabla 1). Tabla 1.

La seropositividad, en la prueba de Elisa indirecta, se presume cuando el resultado es mayor al 100%, por debajo de este, los individuos se consideran negativos a anticuerpos contra Neospora caninum. Para el caso de este estudio, los negativos estuvieron por debajo del 50% y los positivos se encontraron desde el 100% hasta 266% (Figura 4).

PROPORCIร N SEROPOSITIVIDAD EN CADA CANINO MUESTREADO

Figura 4. Porcentaje de seropositividad encontrado en los caninos de la zona rural de Ventaquemada. Encerrado en el recuadro aparecen los animales considerados negativos, por encima del 100% estรกn los caninos positivos a anticuerpos de Neospora caninum

7.2.

PRESENCIA Y PREVALENCIA DE Neospora caninum

Se encontró una prevalencia general del 61,9% de anticuerpos contra Neospora

Frecuencia Relativa

caninum, y en todas las veredas hallándose al menos un caso positivo (Figura 5).

35% 30% 25% 20% 15% 10% 5% 0%

FRECUENCIA CASOS POSITIVOS POR VEREDA

Positivo Negativo

Procedencia del Canino

Figura 5. Frecuencia de casos positivos y negativos de anticuerpos contra Neospora caninum en caninos por vereda del municipio de Ventaquemada.

Más del 80% de los caninos de la muestra son mestizos (Figura 6), entre los cuales se encontró una prevalencia del 58,5 % de anticuerpos contra N. caninum; también se encuentran representadas las razas Pitbull terrier con prevalencia de 80% (n=5), Labrador con 100% (n=2) y Rottweiller sin casos positivos (n=1). La mayor parte de la muestra corresponde a caninos machos (76,2%) con edades entre 1 y 5 años de edad, mientras las hembras (23,8%) tienen edades entre los 2 y 6 años (Figura 7). De todos los grupos etarios, no se encontraron casos positivos entre los 5 y 6 años, mientras en los demás grupos más jóvenes se hallaron prevalencias entre el 30 y el 71%.

Frecuencia Absoluta

PRESENCIA DE ANTICUERPOS POR RAZA 40 35 30 25 20 15 10 5 0

Positivo Negativo Labrador Negro

mestizo

pitbull terrier Rottweiler

Raza del Canino

Figura 6. Presencia de anticuerpos de N. caninum en caninos de diferentes razas de Ventaquemada

Núemro de Individuos

PRESENCIA DE ANTICUERPOS POR GRUPO ETARIO 20 15 10

macho

Hembra

0 1 año

2 años

3 años

4 años

5 años

6 años

Edad del canino

Figura 7. Presencia de anticuerpos de N. caninum en caninos de diferente edad y género de la zona rural de Ventaquemada

7.3.

INFLUENCIA DEL GÉNERO EN LA PREVALENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA Neospora caninum

Para identificar la asociación entre el género del canino y la presencia de anticuerpos contra N. caninum se construyó una tabla de contingencia con las frecuencias de casos positivos y negativos obtenidas a partir del análisis de laboratorio (Tabla 2). Al observar la tabla se evidencia que dada la baja

representación de las hembras en la muestra, las frecuencias de casos positivos y negativos son bajas, por tal razón se utilizó el test exacto de Fisher como prueba estadística para evaluar la existencia de asociación o dependencia entre las dos variables. La prueba fue ejecutada usando el programa Past 2.12; el resultado (p=0,4649) indica que la presencia de anticuerpos no depende del género del canino Tabla 2. Tabla de Contingencia con la frecuencia de casos positivos y negativos a anticuerpos contra Neospora caninum por género del canino Anticuerpos contra Neospora caninum

7.4.

Positivo

Negativo

Hembra

Macho

INFLUENCIA DE LA EDAD EN LA PREVALENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA Neospora caninum

Se encontró presencia de anticuerpos contra N. caninum en los caninos con edades entre 1 y 4 años, siendo mayor la prevalencia encontrada en el grupo de 3 años (Tabla 3). Tabla 3. Prevalencia de anticuerpos contra Neospora caninum en caninos de diferentes edades de la zona rural de Ventaquemada

Positivos Neospora caninum por grupo etario 16

Núemro de Individuos

14 12 10 8

Positivo

Negativo

4 2 0 1 año

2 años

3 años

4 años

5 años

6 años

Edad del canino

Figura 8. Frecuencia de casos positivos para anticuerpos contra N. caninum por edad del canino en la zona rural de Ventaquemada

La prueba estadística de asociación entre las variables prevalencia y edad no puede realizarse por la presencia de valores nulos en la tabla de contingencia; al realizarla sólo con las edades entre 1 y 4 años, el valor del estadístico Chi cuadrado indica que la prevalencia es independiente de la edad del canino (X2=2,57 y p=0,556); sin embargo es importante considerar que ésta independencia no se soporta en forma representativa por la muestra, ya que en la misma no se encuentran representados todos los grupos etarios en forma equitativa (Figura 8).

7.5.

ABORTOS Y Neospora caninum

En las veredas donde se encontraron abortos en bovinos, en todas existió seropositividad en los caninos a Neospora caninum. Además, se evidencia que en las veredas que mayor número de caninos con seropositividad presentaron (Figura 5), son las que mayor número de abortos reportan en bovinos (Figura 9). 46

NÚMERO DE ABORTOS EN BOVINOS Y VEREDA DE PRESENTACIÓN

Figura 9. Relación entre los abortos la positividad a la presencia de neospora caninum en las veredas objeto de muestra.

8. DISCUSIÓN

En el estudio realizado para determinar la presencia de Neospora caninum en los perros

fincas

lecheras

del

municipio

Ventaquemada-Boyacá,

Seroprevalencia dio como resultado 61,9% contra Neospora caninum, esto se puede evidenciar porque en todas las veredas se encontró al menos un caso positivo.

Según Anderson et al., (2000), en diferentes países de Latinoamérica se presenta interés en la investigación sobre la presencia de éste parásito, determinando la prevalencia en caninos y bovinos, los cuales presentan la mayor afectación, confirmado por distintos métodos diagnósticos (Dubey, 1999). Además, la Neospora caninum es causal de abortos y grandes pérdidas económicas a los productores en diferentes lugares de explotación (Björkman et al., 2000). Obando et al. (2010) en Maracaibo, Venezuela demostró la presencia de la Neospora caninum en bovinos con una prevalencia de 44%, hallándose tanto en hembras adultas como en novillas.

El presente estudio, confirma la presencia de la Neospora caninum en el municipio de Ventaquemada y sus correspondientes veredas, teniendo como factor de riesgo a los caninos seropositivos (prevalencia del 61,9%), los cuales recorren libremente los terrenos y esto se presta para la contaminación de las pasturas utilizadas por el ganado. La frecuencia de presentación del protozoo en las veredas de Ventaquemada, fueron variadas, esto puede deberse a que el tamaño geográfico de cada vereda difiere (POT, 2008) y por lo tanto, la cantidad de animales, caninos y bovinos, son diferentes, haciendo que no sean comparables por tamaño poblacional.

Moreno (2012), en Ventaquemada (Boyacá), demostró la presencia de Neospora caninum, en 8 fincas; él asoció la presencia del parásito con situaciones de estrés,

favorecidas por falta de buenas prácticas ganaderas y ausencia de bienestar animal: como el hacinamiento se cree que pueden conducir a la propagación del parásito, ya que en las fincas de estudio hay perros en contacto directo con los animales de la especie bovina, este considerando el factor de riesgo.

El reporte de prevalencia del parásito por raza de caninos en el presente estudio, muestra que al parecer no existen razas más susceptibles que otras a presentar el protozoo, esto concuerda con que los hospederos definitivos son los canidos, tanto domésticos como silvestres (los coyotes los más nombrados), siendo el mayor factor de riesgo para la presencia, permanencia e infección de N. caninum para los bovinos (Aguiar et al., 2006; Ahn et al., 2003 & Aktas et al., sf.).

Según, Zambrano (2001), en Colombia se realizó una evaluación serológica de N. caninum en bovinos que presentaron abortos en diferentes fases de la gestación, para este protozoo se encontró un 54% de seropositividad por la técnica de ELISA; además, se incluyeron enfermedades relacionadas con aborto y otras patologías reproductivas, que generalmente se atribuye a entidades como Brucella spp., Leptospira spp. y los virus de la Rinotraqueitis Infecciosa Bovina y Diarrea Viral Bovina, entre otras; así mismo, los trabajos realizados en el interior de Colombia evidenciaron la presencia de N. caninum como agente comprometido en este tipo de alteraciones, como se reporta en el presente estudio.

Tomando en cuenta a Thurmond et al en 1999 donde indica que Neospora caninum es uno de los organismos más eficiente de transmisión transplacentaria en el ganado en algunos rebaños de hasta el 90% del ganado están infectados, y la

mayoría

los

terneros

nacidos

infectados

congénitamente

con-

N. caninum logran mantenerse saludable, Todas las pruebas en el momento actual indican que N. caninum es un patógeno primario. Sin embargo, hay una necesidad de distinguir los síntomas clínicos y no clínicos

Barr et al., (1991) establecieron criterios de lesiones, asociados a N. caninum, en donde los fetos con encefalitis, se encontraban en presencia del parásito. Sobre las lesiones en fetos, Innes et al., (2002), hacen referencia a que los fetos pueden presentar lesiones histológicamente detectables compatibles con N. caninum, sin embargo, existe una proporción importante de fetos con lesiones desconocidas para este protozoo. Por lo tanto, la detección de N. caninum, solo en los fetos abortados, puede no ser suficiente para establecer relación causa-efecto.

De acuerdo con lo reportado por Fredes (2002) no hay diferencias significativas estadísticamente al relacionar la prevalencia de N. caninum y los factores edad y género; esto, concuerda con lo encontrado en el presente estudio, ya que los resultados muestran que la seroprevalencia positiva a anticuerpos del protozoo, no depende de dichos factores.

Wouda et al., (1994) encontraron una correlación positiva entre la seropositividad de perros de granja y el aumento de la seroprevalencia en el ganado, el consumo de fetos bovinos abortados no parece ser una importante fuente de N. caninum; la infección en perros parece ser por el consumo de membranas de la placenta, siendo ésta la fuente de N. caninum en estado de infección. Lo anterior lo soportan los mismo autores, porque el parásito se ha encontrado en las placentas infectadas las cuales contienen y arrojan al medio el parásito en estado de ooquistes.

Nathann et al., (2004) recomiendan el control del acceso de los canes a los establecimientos lecheros, para evitar contagios por parte de éstos y que posteriormente conlleve a infección en los bovinos. En el desarrollo de esta investigación, se pudo observar que en las fincas muestreadas no se lleva a cabo ningún control al acceso de caninos a los potreros destinados para los animales de producción, facilitando así la propagación de este parásito y haciendo más difícil la prevención

9. IMPACTO

Se encontrรณ una alta presencia de Neospora caninum en las veredas de Ventaquemada, Boyacรก, presentรกndose una Seroprevalencia del 61,9% en donde los predios de muestra, reportan abortos en bovinos y la presencia de caninos en las รกreas de pastura que le corresponden al ganado. Esta prevalencia era desconocida para el รกrea, razรณn por la cual, los ganaderos y las autoridades competentes fueron reportadas de dicho hallazgo.

Ademรกs, se logrรณ determinar que el factor de riesgo para la presencia y permanencia del parรกsito en la zona, es el manejo inadecuado de los caninos en las fincas lecheras del municipio; esto conlleva a los problemas reproductivos en bovinos que representa la presencia de este parรกsito en la zona, se plantea una soluciรณn mediante las tรฉcnicas adecuadas, interactuando con la poblaciรณn y mejorando la calidad de vida, tanto de los caninos como de los bovinos, de las fincas afectadas.

10. CONCLUSIONES



Dado los resultados encontrados en el estudio se evidenció una prevalencia mayor al 50% de caninos positivos a N. caninum, siendo esta un reservorio del parásito y un posible foco de contaminación.



La edad no parece ser un factor determinante para la presencia de N. caninum en los caninos. Sin embargo, el estado inmunológico de los animales pueden ser factores que afectan una alta infección dentro de cada individuo.



El género, no es un factor predisponente para el desarrollo de N. caninum, sin embargo, dentro del ciclo biológico del parásito es importante la transmisión vertical de madre a hijo durante la gestación, por tanto las hembras positivas a Neospora caninum, y reproductivamente viables, son un foco importante de perpetuación de este parásito en el municipio.



Se evidencia una alta relación entre la presencia de abortos en las fincas seleccionadas y el número de individuos positivos a Neospora caninum.



Con el resultado se puede determinar que la Seroprevalencia encontrada en el estudio es alta y existen factores determinantes como la convivencia entre el ganado y los caninos, esto evidencia que el parásito es quien puede estar involucrado en la presencia de abortos en las fincas donde se realizó dicho estudio.

11. RECOMENDACIONES

En la visita realizada a las veredas del municipio de Ventaquemada, Boyacá, se comprobó la presencia del parásito, es importante evaluar programas de erradicación del parásito, mediante la eliminación adecuada de desechos biológicos, también informar a los propietarios de las fincas que es prudente evitar el contacto permanente entre estas dos especies.

Se recomienda a los productores hacer un mayor control acerca de la compra y venta de ganado en las plazas, ferias o realizar una buena cuarentena, antes de ingresar nuevos animales a las fincas, ya que pueden representar focos de infección. Además, se recomienda realizar exámenes para descartar cualquier presencia de parásitos en los animales que puedan afectar los índices reproductivos en el ganado.

Los resultados obtenidos, muestran posibles asociaciones entre los abortos y la presencia del protozoo, sin embargo, debe tenerse en cuenta que N. caninum, no es la única causa de abortos en bovinos, por esta razón la valoración del origen de dicha condición requiere ser estudiada a mayor profundidad por medio de otro estudio.

12. LITERATURA CITADA

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.13. ANEXOS

ANEXO 1. Resultados de la Seroprevalencia por canino a N. caninum (<100% negativo, >100% positivo) PACIENTE

GENERO

EDAD

RAZA

Chester

Macho

2años

Mestizo

Monchis

Macho

2años

Mestizo

Natacha

Hembra

5años

Mestizo

Azabache

Macho

2años

Mestizo

Rambo

Macho

3años

Mestizo

Kira

Hembra

2años

Mestizo

Tony

Macho

1año

Mestizo

Rouse

Hembra

Bruno

Macho

Pascual

Macho

Tarzan

Macho

Milo

Macho

Tomas

Macho

Negro

Macho

León

Macho

Zeus

Macho

Barbuchas

Macho

Pinina

Hembra

Guardiana

Hembra

Lassie

Hembra

3 años 5 años 3 años 1 años 3 años 2 años 3 años 2 años 1 año 2 años 6 años 3 años

Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo pitbull terrier pitbull terrier Mestizo Mestizo Mestizo

Macho

Zeus

Macho

Tony

Macho

Casius

Macho

2 años 3 años 3 años 4 años

Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo

Continua…

RESULTADO

El carpí

Positivo 119%

El carpí

Positivo 115%

Valero

Positivo 208%

Valero

Negativo 30%

El Manzano

Positivo 184%

Sector Supata

Negativo 0%

El Manzano

Positivo 205%

El Manzano

Negativo 16%

El Manzano

Positivo 200%

El Manzano

Positivo 188%

Sector Supata

Negativo 15%

Compromiso

Negativo 29%

El Manzano

Positivo 219%

Compromiso

Positivo 188%

Compromiso

Positivo 265%

Compromiso

Negativo 30%

Compromiso

Negativo 23%

Compromiso

Positivo 131%

Compromiso Estancia Grande

Negativo 0% Nega tivo 4%

La Piñuela

Positivo 203%

La Piñuela

Positivo 185%

La Piñuela

Positivo 103%

Compromiso

Positivo 150%

Mestizo 4 años

Ares

PREDIO

PACIENTE

GENERO

Muñeca

Hembra

Carus

Macho

Caiser

Macho

Firulais

Macho

Itan

Macho

Tongo

Macho

Tony

Macho

Bruno

Macho

Chispitas

Hembra

Rambo

Macho

Sombra

Hembra

Jerónimo

Macho

Lucas

Macho

Azabache

Macho

Pulga

Macho

Tango

Macho

Morita

Hembra

Kiko

Macho

EDAD 2 años 2 años 4 años 3 años 4 años 2 años 4 años 3 años 3 años 2 años 2 años 3 años 5 años 2 años 4 años 3 años 2 años 3 años

RAZA Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo Labrador N Mestizo Rottweiler pitbull terrier pitbull terrier pitbull terrier Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo Mestizo

PREDIO

RESULTADO

Estancia Grande

Positivo 266%

Estancia Grande

Negativo 10%

Estancia Grande

Positivo 153%

Compromiso

Positivo 204%

Compromiso

Positivo 263%

Compromiso

Negativo 30%

Sector Supata

Negativo 0%

Estancia Grande

Positivo 230%

Compromiso

Negativo 15%

Compromiso

Negativo 28%

Sector Supata

Positivo 187%

Sector Supata

Positivo 225%

tierra negra

Positivo 196%

tierra negra

Negativo 25%

tierra negra

Negativo 17%

parroquia vieja

Positivo 207%

parroquia vieja

Positivo 146%

parroquia vieja

Positivo 147%

Anexo 2. Encuesta a propietarios

Anexo 3. Figuras en el momento y lugares de toma de muestras

Figura 10. toma de muestras

Figura 11 Ă rea para terneros

Figura 12 Canino en el área de ordeño

Figura 13 Área de ordeño

Figura 14 Bovinos en pastoreo

Figura 15 caninos muestreados