Seroprevalencia de neospora caninum by Medicina Veterinaria JDC

SEROPREVALENCIA DE Neospora caninum EN PERROS DE HATOS LECHEROS MEDIANTE LA PRUEBA DE ELISA EN LA VEREDA DE FAITOQUE DEL MUNICIPIO DE SORACÁ (BOYACÁ)

CÉSAR ORLANDO GONZÁLEZ BERNAL

FUNDACIÓN UNIVERSITARIA JUAN DE CASTELLANOS FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS PROGRAMA MEDICINA VETERINARIA TUNJA 2011 1

SEROPREVALENCIA DE Neospora caninum EN PERROS DE HATOS LECHEROS MEDIANTE LA PRUEBA DE ELISA EN LA VEREDA DE FAITOQUE DEL MUNICIPIO DE SORACÁ (BOYACÁ)

CÉSAR ORLANDO GONZÁLEZ BERNAL COD: 1101061025

Trabajo de grado para optar el título de MÉDICO VETERINARIO

Asesor ANA CONSUELO GONZÁLEZ PATIÑO Médico Veterinario, Especialista en pequeñas especies

FUNDACIÓN UNIVERSITARIA JUAN DE CASTELLANOS FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS PROGRAMA MEDICINA VETERINARIA TUNJA 2011 2

TABLA DE CONTENIDO

Pág. RESUMEN INTRODUCCIÓN......................................................................................................... 12 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA....................... …………………………….…….. 14 OBJETIVOS................................................................................................................. 15 OBJETIVO GENERAL................................................................................................. 15 OBJETIVOS ESPECÍFICOS........................................................................................15 1. MARCO REFERENCIAL........................................................................................ 16 1.1 ESTADO DEL ARTE..............................................................................................16 1.2 MARCO TEÓRICO. ...............................................................................................19 1.2.1 Reseña De La Enfermedad................................................................................ 19 1.2.2 Agente Etiológico................................................................................................ 20 1.2.3 Ciclo Biológico………......................................................................................... 21 1.3 PATOGENIA………………………………….. ........................................................ 22 1.3.1. Diagnóstico Clínico………….............................................................................. 24 1.3.2 Diagnóstico De Laboratorio................................................................................ 24

1.3.3 Diagnóstico Histológico e Inmunohistoquímico…......................................... 24 1.4 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO....................................................................... 25 1.4.1 Aislamiento ...…………..…………….................................................................. .25 1.4.2 Identificación…………….…................................................................................ 26 1.4.3 Tratamiento………………................................................................................... 26

1.5 Recomendaciones para el control y prevención.............................................. 26 1.6 MARCO GEOGRÁFICO Y CLIMÁTICO…....................................................... 28 1.7. MARCO LEGAL…………................................................................................ 30 2. METODOLOGÍA……...…………………..………..……………………………..…. 34 2.1 TIPO DE ESTUDIO………...………………………………………..………….…. 34 3

2.1.1 DISEÑO EXPERIMENTAL…………...…………………...………………….… 34 2.1.2 UNIVERSO, POBLACIÓN, MUESTRA…………………….………………..... 34 2.1.3 DISEÑO METODOLOGICO……………………………………………………. 35 2.2 DISEÑO ESTADÍSTICO ………..……..…………..…………………….……….. 37 3. RESULTADOS …………………………………………………………………...…. 38 4. HIPOTESIS...……………………………………………………..…………………. 54 5. ANALISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS ………….……………………….. 56 6. CONCLUSIONES…………………………………………………………………… 58 7. IMPACTO…………………………………………………………………………….. 59 8. RECOMENDACIONES…………………………………………………...………… 60 9. BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………. 61 10. ANEXOS…………..………………………………………………………………… 68

LISTA DE TABLAS

Pág. Tabla 1………………………………………………………………………………….. 38 Tabla 2………………………………………………………………………………….. 39 Tabla 3………………………………………………………………………………….. 41 Tabla 4…………………………………………………………………………………... 42 Tabla 5…………………………………………………………………………………... 43 Tabla 6………………………………………………………………………………….. 44 Tabla 7…………………………………………………………………………………... 45 Tabla 8…………………………………………………………………………………... 45 Tabla 9…………………………………………………………………………………... 47 Tabla 10…………………………………………………………………………………. 49 Tabla 11…………………………………………………………………………………. 50 Tabla 12…………………………………………………………………………………. 50

LISTA DE GRÁFICAS

Pág. Gráfica 1………………………………………………………………………………… 40 Gráfica 2………………………………………………………………………………… 42 Gráfica 3………………………………………………………………………………… 43 Gráfica 4………………………………………………………………………………… 44 Gráfica 5………………………………………………………………………………… 47 Gráfica 6………………………………………………………………………………… 47 Gráfica 7………………………………………………………………………………… 49 Gráfica 8………………………………………………………………………………… 54

LISTA DE ANEXOS

Pág. Anexo 1…………………………………………………………………………………. 68 Anexo 2…………………………………………………………………………………. 69 Anexo 3……………………………………………………………………………….… 69 Anexo 4……………………………………………………………………………….… 70 Anexo 5……………………………………………………………………………….… 70 Anexo 6……………………………………………………………………………….… 71 Anexo 7.………………………………………………………………………………… 71

GLOSARIO

Aborto Esporádico: Interrupción de la gestación que se presenta en forma aislada. Ataxia: Incoordinación de los movimientos voluntarios, con conservación muscular. Autolisis: Rotura total o parcial de una célula por enzimas que ella misma ha producido. Bradizoíto: Es la forma lenta de replicación del parásito. Disfagia: Dificultad para deglutir. Elisa: Prueba diagnóstica utilizada para determinar si un paciente tiene una infección o una enfermedad autoinmune. Etiología: Causa de una enfermedad. Encefalitis: inflamación de la masa encefálica. Endemia: Proceso patológico que se mantiene a lo largo de mucho tiempo en una población o zona geográfica determinada. Endodiogenia: Tipo de reproducción asexual en la cual se forman dos células en el interior de una célula madre dando origen a dos células hijas desapareciendo la célula madre. Exoftalmo: Protrusión de uno o ambos ojos a consecuencia de inflamación, edema, tumor o traumatismos de la órbita. Feto Momificado: Feto sin desarrollo y deshidratado, con aspecto de momia. Hepatitis: Inflamación que afecta al hígado, por causas diversas. Hiperreflexia: Aumento o exaltación de los reflejos. Huésped Definitivo: Es aquél que aloja la forma adulta de ciertos parásitos que necesitan más de un huésped para cumplir su ciclo biológico. Inmunosupresión: Disminución o caída de la inmunidad provocada por enfermedades o fármacos. Miocarditis: Inflamación del miocardio.

Mortinato: Se presenta cuando un feto que se esperaba que sobreviviera, muere durante el nacimiento. Necrosis: Mortificación o gangrena de los tejidos del organismo. Nefritis: Inflamación del riñón. Ooquistes: Formas transmisibles de los protozoarios. Parasitemia: Presencia de parásitos en la sangre. Paresia: Ausencia parcial de movimiento voluntario. Prevalencia: Medida de la proporción de enfermos o de reaccionantes positivos en una población. Propiocepción: Hace referencia a la capacidad del cuerpo de detectar el movimiento y posición de las articulaciones. Protozoo: Son organismos microscópicos, unicelulares que viven en ambientes húmedos. Puerperio: Periodo que va desde la finalización del parto hasta que el útero vuelve a su tamaño previo a la gestación. Síntoma clínico: Síntoma que se aprecia al ver o examinar al animal. Taquizoíto: Forma activa de replicación, responsable de la diseminación de la infección y de la destrucción tisular. Transmisión Horizontal: Cuando el hospedador susceptible, contrae la infección mediante contacto físico con un hospedador infectado. Transmisión Vertical: Ocurre durante la gestación, el parto o la lactancia de una madre infectada a su producto.

RESUMEN

El descubrimiento del protozoario llamado Neospora caninum ha despertado un gran interés dentro de la comunidad científica, puesto que es el causante actual de grandes pérdidas económicas dentro de las producciones lecheras del mundo. Por tal razón, el propósito de este trabajo es determinar la existencia de este protozoo en 11 fincas de la vereda Faitoque del municipio de Soracá (Boyacá). Se planeo realizar el estudio en perros pertenecientes a varios hatos localizados en la vereda de Faitoque con los siguientes objetivos: determinar la prevalencia del parásito en los perros proporcionó un gran indicio acerca de la presencia de este mismo en el ganado de estos hatos y segundo: con los resultados obtenidos se plantearan soluciones, capacitando a los productores mediante charlas y entrega de folletos. De los 32 caninos muestreados en este proyecto, se detecto presencia de Neospora caninum, representando el 50% positivo de las muestras procesadas y el restante entre sospechoso y negativo. Este trabajo confirma la presencia de Neospora caninum en caninos de hatos lecheros de la vereda de Faitoque del municipio de Soracá (Boyacá). Palabras Clave: Neospora caninum, ganado lechero, abortos, protozoo, infertilidad, sistemas de producción.

ABSTRACT

Discovery of protozoan called Neospora caninum has aroused great interest within the scientific community, since it is the actual cause great economic losses in dairy productions of the world. For this reason, the purpose of this study is to determine the existence of this protozoan in 11 farms in the village Faitoque Soracรก Township (Boyacรก). They plan to conduct the study in dogs belonging to several herds located in the village of Faitoque with the following objectives: to determine the prevalence of the parasite in dogs provided a big clue about the presence of the same in cattle herds and second of these: with the results obtained are proposing solutions, empowering

farmers

through

lectures

and

handing

out

leaflets.

Of the 32 dogs sampled in this project, we detected the presence of Neospora caninum, representing 50% positive samples processed and the remaining between

suspicious

and

negative.

This work confirms the presence of Neospora caninum in dogs from dairy herds Faitoque

the

path

the

municipality

Soracรก

(Boyacรก).

Keywords: Neospora caninum, dairy cattle, abortions, protozoa, infertility, production systems.

INTRODUCCIÓN

Neospora caninum constituye una enfermedad causada por un parásito de tipo protozoo (Phylum Apicomplexa), que puede provocar abortos entre el tercero y noveno meses de gestación, aunque es más común que suceda entre el quinto y sexto mes (Bjorkman, 2003).

Afecta principalmente al ganado lechero y se considera importante causa de aborto en Europa, Sudáfrica, Japón, Australia, Nueva Zelanda y diferentes países de América, incluyendo México (Dubey et al 2007) y Colombia (López et al, 2007).

Después de su reconocimiento como agente etiológico de enfermedad en perros, se identificó en fetos bovinos abortados y momificados y en terneros con síndrome neurológico como parálisis neonatal (Valenzuela P, 2005). Por tal razón, se han incrementado los estudios de este parásito, siendo reconocido en muchos lugares del mundo, demostrando que Neospora caninum, en forma similar al Toxoplasma es un protozoario que puede afectar a una gran cantidad de mamíferos (Prélaud, P. 2008).

Su presencia en este momento tiene gran relevancia, debido a que en los hatos de muchos países industrializados se ha establecido un protocolo de vacunación que idealmente no permite la prevalencia infectiva de microorganismos como Brucella spp, Virus de la diarrea viral bovina, Virus de la parainfluenza , Leptospira spp, entre otros, limitando la presencia de problemas reproductivos como abortos a factores circunscritos como mal manejo o enfermedades como Neosporosis o Toxoplasmosis (Palazuelos F, 2008).

Mediante este trabajo se probaron los niveles de positividad a prueba específica de Elisa (especificidad 97%, sensibilidad 99%) contra Neospora caninum en perros de hatos de la vereda de Faitoque en el municipio de Soracá. Por otro lado, se pretendía saber que tanta incidencia tenia Neospora caninum dentro de la población canina, para lograr deducir que tan grande es su impacto dentro de esta especie.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Uno de los principales problemas que más aqueja a los productores lecheros del municipio son las pérdidas económicas, debido a los abortos que se han presentado sin saber su causa. Por falta de conocimiento de los poductores, en las principales fincas de la vereda de Faitoque se presentan malas prácticas de manejo afectando así a los pilares más importantes en la producción ganadera que es la reproducción.

Esta deducción plantea que se está manifestando la existencia del parásito Neospora caninum, la cual, según diversos investigadores es la causa de un alto porcentaje de las pérdidas económicas en los diferentes hatos del mundo (Dubey JP, 2003), llegando a demostrar su prevalencia en muchos países del planeta.

Según el marco de referencia que se presentara adelante encontraremos que el animal diseminador de esta enfermedad dentro de los hatos es el perro, siendo el huésped definitivo, provocando aborto al ganado (Lozada E, 2004). La patología se presenta en su totalidad por la presencia de los caninos en las fincas; cuando el ganado se encuentra en proceso de parto, los caninos por instinto llegan al lugar para ingerir la placenta así continuando con el ciclo biológico del parásito (Dubey JP, 2003), razón por la cual se plantea establecer títulos de seropositividad de estos animales, esperando poder correlacionar estos datos con la presencia de abortos dentro de las producciones bovinas y, eventualmente, la incidencia de esta enfermedad en los caninos.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL Determinar la seroprevalencia de Neospora caninum en perros de hatos lecheros mediante la prueba de Elisa en la vereda de Faitoque del municipio de soracá (Boyacá).

OBJETIVOS ESPECÍFICOS 

Identificar la seroprevalencia de Neospora caninum por sexo en las muestras tomadas.



Determinar la seroprevalencia de Neospora caninum más importante en las fincas muestreadas para identificar su posible causa de prevalencia.



Plantear soluciones de la presentación de este parasito en los animales de la zona analizada, capacitando a los productores mediante charlas y entrega de folletos.

1. MARCO REFERENCIAL

1.1 ESTADO DEL ARTE

Con este problema que ha presentado la presencia de este parásito, se han realizado varias investigaciones en muchas partes del mundo, por ejemplo en el Laboratorio de Virología del departamento de Sanidad Animal, Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias del Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas en Maracaibo (Venezuela), realizaron la revista científica llamada “Neospora caninum en un rebaño lechero y su asociación con el aborto” el cual su objetivo fue realizar una evaluación para determinar su responsabilidad en la ocurrencia de abortos, para lo cual se seleccionó un rebaño con abortos endémicos, 11% en vacas y 20% en novillas, con edad promedio de 4.5 meses de gestación, fueron analizadas para la detección de anticuerpos específicos contra Neospora Caninum mediante la prueba de ELISA. En el cual se encontró una prevalencia del 44% confirmando la infección por el parasito, indicando que Neospora caninum tuvo elevada implicación en la etiología de los mismos (Obando et al, 2010). Este mismo trabajo fue realizado en Chile en un rebaño lechero, con el fin de determinar serología positiva para neospora caninum, demostrando que el 50% de las muestras tomadas resultaron positivo para Neospora caninum lo cual indica que el parasito está presente en Chile (Meléndez et al, 2010).

También se han realizado estudios en el sur de Perú con el objetivo de ver la prevalencia de la enfermedad en 122 perros pastores procedentes de cinco zonas de producción ganadera, la cual su resultado fue del 6.3% positivo para Neospora caninum esto demuestra que los perros de la empresa Rural Alianza tuvieron

contacto con Neospora caninum. Además, al comparar los valores hallados con estudios paralelos realizados en camélidos sudamericanos y bovinos de Puno, se evidenció una similitud en los valores de prevalencia entre los hospedadores intermediarios y definitivo (Vega et al, 2010).

Así mismo, en julio de 2010 en Argentina, realizaron un trabajo para detectar Neospora caninum en fetos bovinos abortados espontáneamente en el cual el objetivo era detectar Neospora caninum en neonatos y fetos bovinos de abortos espontáneos. Sobre un total de 26 fetos bovinos abortados espontáneamente, se detectaron lesiones histopatológicas con neosporosis en 4 de ellos. La presencia de Neospora caninum fue confirmada mediante inmunohistoquimica en el encéfalo de 3 de 4 fetos con lesiones microscópicas compatibles con neosporosis. Este trabajo confirma la presencia de Neospora caninum en fetos abortados espontáneamente en bovinos de fincas del nordeste argentino (Lertora et al, 2010). El instituto Tecnológico “El Llano” Aguascalientes (México) realizó un trabajo muy interesante y diferente el cual fue detectar ADN en sangre durante la primera gestación de vaquillas infectadas naturalmente con el objetivo de detectar la presencia de ADN de Neospora caninum en animales infectados naturalmente, en dos tiempos; su primera gestación y al parto, así, como registrar la presentación de abortos. Se seleccionó, en un establo, con presencia de parasitosis, un lote de 20 hembras entre 12 y 14 meses de edad, seropositivas con ELISA, las hembras fueron inseminadas artificialmente y se tomaron muestras de sangre en el primero y segundo tercios de gestación y al parto; se aisló ADN y se sometió a PCR anidado en un solo tubo con iniciadores específicos. En el muestreo correspondiente al primer tercio de la gestación, se observó el 35% positivo, en el segundo 75% y al parto 50% casos positivos. De los animales incluidos en el estudio, tres se mantuvieron negativos a la prueba en los tres muestreos (15%), cuatro fueron siempre positivos (20%), ocho fueron positivos en el segundo

muestreo pero negativos en el primero (40%) y cinco fueron positivos en el segundo y negativos en el primero y tercero muestreos (25%). No se presentó seroconversión en ningún animal durante el estudio; cuatro de ellos presentaron aborto en el último tercio de gestación. Todas las crías nacidas vivas resultaron seropositivas a Neospora caninum (Santana et al, 2010).

1.2 MARCO TEÓRICO

1.2.1 Reseña De La Enfermedad

La Neosporosis, causada por el parásito coccidio Neospora caninum, es reconocida como una de las principales enfermedades de los animales domésticos causando enfermedad clínica en los perros y en los bovinos. Es notable en los neonatos, en donde encontramos paresia, parálisis ascendente de los miembros, hiperreflexia, problemas neuromusculares por destrucción de células musculares y nerviosas como nervios craneales y espinales, provocando encefalitis y polirradiculoneuromiositis,

además

hay

destrucción

células

hepáticas

provocando hepatitis con necrosis, daños renales y problemas a nivel placentario (Dubey, 2003). En los fetos podemos notar autólisis, momificación, acúmulo de fluidos sanguinolentos en cavidades corporales, mortinatos, lesiones en cerebro, médula espinal y corazón; ocasionalmente en pulmones y riñones con miocarditis y encefalitis multifocal no supurativa (Valenzuela P, 2005).

En terneros específicamente, podemos observar que es notable la lesión neuromuscular evidenciada en parálisis ascendente, ataxia, exoftalmos y posición asimétrica de los ojos. Además, las vacas afectadas no muestran un signo clínico de enfermedad a excepción del aborto que se da por placentitis y que ocurre comúnmente entre el 4 y 6 meses de gestación, tanto en ganado de carne como de leche.

Los abortos pueden presentarse de forma epidémica o esporádica. Los machos adultos no presentan sintomatología clínica aparente (Lozada, 2004).

Recientemente, la transmisión de Neospora caninum se ha confirmado en coyotes y venados cola blanca. Razón por la cual las medidas de control para neosporosis ahora podría llegar a ser más complicado, ya que los animales salvajes están probablemente involucrados en el ciclo selvático del parásito (Gondim et al, 2004).

Esta enfermedad ha sido reportada en países desarrollados, así como en países latinoamericanos, tales como: México (Salinas, J, Mora et al 2005), Colombia, Brasil, Perú, Chile, Paraguay y Argentina (Lozada, E, 2004). En las últimas décadas ha sido descrita como una de las principales causas de abortos y de pérdidas económicas de la ganadería bovina (Bos taurus-indicus), (Dubey, JP 2003).

1.2.2 Agente Etiológico

La Neospora caninum se encuentra dentro del Phylum Apicomplexa, Clase Sporozoea, Subclase Coccidia, Orden Euciccidiia, familia Sarcocystidae, a la cual pertenecen los géneros de Toxoplasma, Sarcocystis y Hammondia (Dubey, J.P, Schares, 2007).

Hasta hace poco se habían identificado dos estadíos del parásito, los taquizoitos y los quistes tisulares. En los tejidos, Neospora caninum se asemeja mucho a Toxoplasma gondii al presentar taquizoitos intracelulares de 4-7 micrometros de largo que se dividen por endodiogenia formando grupos con variable número de organismos (Dubey y Lappin, 2006). Los quistes en tejido tienen una delgada pared de 1-4 micrómetros y contienen bradizoitos. El huésped definitivo es el perro y recientemente fue encontrado que también el coyote (Gondim et al, 2004).

1.2.3 Ciclo Biológico

El ciclo biológico de Neospora caninum, como el de todos los Apicomplexa, es complejo, por ello no ha sido completamente identificado. Se ha postulado un ciclo de vida similar al de Toxoplasma, permaneciendo desconocido hasta 1988 donde se realizaron estudios más completos (Dubey y Schares, 2006).

Una multiplicación asexual del parásito toma lugar en un amplio rango de huéspedes intermediarios, incluyendo vacas y otros animales de granja como ovejas, cabras, cerdas, y existen reportes en caballos, también se ha realizado la infección experimental en ratas, ratones, gatos y primates (Dubey JP, 2005).

Se ha demostrado que los perros puede eliminar ooquistes de Neospora caninum después de haber ingerido placenta de vacas seropositivas (Trees y Williams, 2005), y que el ganado puede ser infectado oralmente por ooquistes producidos en perros (Dubey JP, Schares G et al, 2007). Estudios recientes realizados por (Gondim et al, 2004) demostraron que el coyote (Canis latrans) también puede excretar ooquistes de Neospora caninum en sus heces después de haber ingerido quistes tisulares.

El ciclo de vida de Neospora caninum (Figura 1) comprendería una fase sexual en el intestino del huésped definitivo, con la formación de ooquistes que al ser eliminados en las heces y posteriormente ingeridos por los bovinos daría el inicio de la fase asexual, en esta segunda fase, se da la formación de quistes tisulares y taquizoitos, que al ser ingeridos por los caninos cerrarían el ciclo epidemiológico (Dubey JP, 2003).

Las fases asexuales de Neospora caninum son trasmitidas eficientemente en ganado por varias generaciones (Dubey y Lappin, 2006). La ruta de transmisión mejor descrita e identificada hasta el momento es la vía transplacentaria

(transmisión madre a feto) y es considerada la forma más importante para mantener la infección en los hatos (Trees y Williams, 2005).

Figura 1: Ciclo de vida de Neospora caninum

Fuente: Dubey, 2003.

1.3 PATOGENIA

En caninos la enfermedad puede ser fatal tanto en perros jóvenes como adultos, pero los casos de infección congénita son los más dramáticos. En cachorros la manifestación clínica característica de la Neosporosis es la paresia y/o la parálisis ascendente de los miembros posteriores, con contracción espástica de los mismos. El perro sería, como ocurre en el caso del gato infectado por

Toxoplasma, susceptible de albergar en su organismo las fases de reproducción sexual y asexual del parásito, por tanto se puede considerar hospedador definitivo e intermediario del parásito (Dubey et al, 2007).

La Neospora caninum puede transmitirse verticalmente durante la gestación en vacas y perros. La transmisión horizontal, en el caso de ganado bovino, tiene lugar por la ingestión de alimentos contaminados con ooquistes eliminados por perros infectados. El perro se infecta al ingerir quistes con bradizoitos, presentes en el tejido nervioso de fetos abortados; los animales permanecen infectados de por vida y pueden transmitir la infección a su descendencia (Aguado-Martínez et al, 2005). Experimentalmente, se ha demostrado la transmisión vertical vía calostral de la enfermedad. La Neosporosis no causa signos clínicos aparentes en ganado excepto por muerte fetal temprana, momificaciones

y abortos. Las vacas

infectadas que abortan no muestran signos de la enfermedad en tanto que los fetos abortados presentan lesiones microscópicas en corazón, riñón, cerebro, hígado y músculo (Valenzuela, P, 2005).

Las vacas lactantes pueden tener un incremento en la

producción de leche

después del aborto, al igual pueden abortar en cualquier momento desde los tres meses de gestación hasta el término (Dubey, JP 2005).

Cuando la gestación se lleva a término, tanto en caninos como bovinos, en los neonatos predominan, tanto en los cachorros como en terneros los signos neuromusculares progresivos multifocales como resultado de encefalomielitis no supurativa, polirradiculoneuritis y polimiositis fibrosante. Estos signos incluyen parálisis ascendente, atrofia, contracturas musculares y disfagia (Gondim et al, 2004).

La Neosporosis se señala como la mayor causa de aborto en bovinos, sobre todo entre los tres y los seis meses de gestación, los factores que predisponen a la

enfermedad son los relacionados con las altas concentraciones de animales y la intensificación de la producción (Dubey et al, 2007).

1.3.1 Diagnóstico Clínico

La comprobación de parálisis ascendente de miembros en perros jóvenes, sobre todo cuando afecta animales de una misma camada, debe hacer sospechar de Neosporosis. Los hallazgos hematológicos y bioquímicos varían según el sistema orgánico afectado, pero en los perros con parálisis de miembros posteriores, pueden ser normales. Es posible detectar Neospora caninum en líquido cefalorraquídeo y en tejidos de biopsias (Guimarães et al, 2004). Clínicamente la Neosporosis es similar a la Toxoplasmosis, sin embargo, los parásitos pueden distinguirse estructural e inmunológicamente (Dubey et al, 2003).

1.3.2 Diagnóstico De Laboratorio Cuando exista sospecha de infección por Neospora las muestras enviadas al laboratorio de diagnóstico deberán ser las siguientes: 

Suero de la madre



Suero o exudados torácicos del feto



Feto entero con su placenta, o en su lugar, muestras de cerebro, médula espinal (a nivel del cuello), corazón, hígado, músculo esquelético y placenta fijada en formol al 10% (Valenzuela, P, 2005).

1.3.3 Diagnóstico Histológico e Inmunohistoquímico

Las lesiones más características las encontramos en el tronco del encéfalo y pedúnculos cerebelosos y consisten en focos de encefalitis multifocal no purulenta. Estos focos inflamatorios suelen presentar áreas centrales de necrosis y en algunas ocasiones se observan fenómenos de calcificación (Hall et al, 2005).

Las lesiones en corazón, hígado y músculo esquelético, caracterizadas por inflamación no purulenta, multifocal o difusa suelen ser difíciles de valorar debido a la autólisis. Las lesiones histopatológicas nos ofrecen un diagnóstico presuntivo de la enfermedad (Valenzuela, P, 2005).

1.4 Diagnóstico Serológico

Para el diagnóstico serológico de la Neosporosis se pueden emplear técnicas de inmunoflurescencia indirecta y diversos ELISA, estos métodos van a servir para detectar anticuerpos en los caninos sospechosos (Lasri et al, 2004). La serología resulta de gran ayuda para poder hacer el diagnóstico de esta enfermedad al detectarse títulos altos de anticuerpos en suero de los perros infectados (Moore et al, 2005).

El uso de la prueba de Elisa para detección de anticuerpos de Neospora es utilizado en forma rutinaria, es un diagnóstico rápido y dotado de gran especificidad del 96.5% y sensibilidad del 88.6% (Piergili et al, 2003). Se han marcado valores a partir de los cuales puede definirse que hay infección, esto puede utilizarse para conocer la prevalencia al realizar el chequeo de perros (Piergili et al, 2003). Si consideramos que la infección por Neospora caninum es persistente, la detección de anticuerpos es sinónimo de infección y no de convalecencia o inmunidad (Kashiwazaki et al, 2004). El hallazgo de anticuerpos específicos frente a Neospora caninum en suero sanguíneo nos confirma la infección (Dubey y Lappin, 2006).

1.4.1 Aislamiento

En cultivos celulares, a partir de tejidos, principalmente de Sistema nervioso central (SNC).

1.4.2 Identificación

Para la identificación del protozoo se pueden realizar las técnicas de Inmunoperoxidasa sobre tejidos con lesiones, Microscopia electrónica e Inmunofluorescencia indirecta (Moore et al, 2005).

1.4.3 Tratamiento

En la actualidad no hay un tratamiento efectivo para las vacas infectadas que pueda prevenir la transmisión vertical (McAllister y Latham, 2002; Dubey, 2003). Sin embargo, experimentos en ratones han evidenciado que el uso de los anticoccidiales derivados de la triazina, como toltrazuril y ponazuril, previenen la formación de lesiones cerebrales y además, disminuye la detección de Acido desoxirribonucleico (DNA) parasitario por medio de la reacción en cadena de polimerasa (PCR) en más de 95% (McAllister y Latham, 2002). Aún no existe información concluyente respecto a la eficacia de la vacuna muerta en reducir la infección fetal o abortos en vacas infectadas o en prevenir la infección post natal en vacas no infectadas. Sin embargo, estudios preliminares indican que la vacuna tiene la capacidad de reducir la incidencia de abortos, pero no genera protección contra la transmisión vertical del parásito (Estill, 2004).

1.5 Recomendaciones para el control y prevención

Las prácticas de manejo a nivel de hato para reducir la infección de Neospora caninum pueden incluir: 1. Reducir al mínimo la contaminación fecal de forrajes o agua por perros u otros potenciales hospedadores definitivos. 2. Eliminar rápidamente fetos bovinos abortados, membranas fetales, placentas o terneros muertos. 3. Limitar la introducción de animales infectados al hato.

4. El sacrificio de animales infectados. Es de anotar que algunos de estos métodos de control no son económica o prácticamente posibles de aplicar en explotaciones ganaderas. Diversos agentes antimicrobianos han sido probados en vitro o en vivo en ratones (Kim et al. 2002). Sin embargo, no existe hasta la fecha ningún fármaco conocido que pueda utilizarse para controlar infección por Neospora caninum en el ganado.

Por otra parte, el desarrollo de resistencia a los medicamentos, las exigencias del consumidor de que los productos lácteos y cárnicos estén libres de productos químicos y las preocupaciones de los efectos ambientales de los productos químicos, podría limitar la quimioterapia como una medida de control (Dalton y Mulcahy, G. 2001)). La transferencia de embriones ha demostrado ser eficaz en la prevención de la transmisión vertical del Neospora caninum en el ganado vacuno (Baillargeon et al. 2001).

Existen evidencias de que algunas vacas infectadas por Neospora caninum pueden desarrollar un grado de inmunidad contra el aborto o la transmisión congénita. La neospora caninum se transmite eficazmente durante varias generaciones, aumentando así la probabilidad de que el grupo de animales infectados tengan un riesgo significativamente mayor de sufrir un aborto en comparación con el ganado no infectado. Por lo tanto, a pesar de que la prevención del aborto podría ser un objetivo más realista para el desarrollo de una vacuna, el objetivo final para el control exitoso de esta enfermedad debe concentrarse en la prevención de la transmisión vertical (de madre a hija).

El tema de las vacunas, dadas las condiciones inmunológicas de Neospora caninum no ha producido resultados convincentes para la comunidad científica a nivel mundial dado que las mismas han fallado en prevenir la transmisión congénita de este protozoario (Reichel y Ellis, 2009).

1.6 MARCO GEOGRÁFICO Y CLIMÁTICO

Soracá es un municipio que pertenece a la cordillera central de los andes y se encuentra en las estribaciones de la meseta cundiboyacense; la zona urbana se esconde en una meseta entre los cerros Arzobispo, los chorros y Tibará en donde contrastan tierras erosionadas, frías y de barrancos amarillos. Soracá es una región apta para la producción de papa, trigo, frutales y pastos para la ganadería. En cuanto a la localización departamental, está localizado en la zona centro del departamento de Boyacá a 5º 30´ de latitud Norte y 73º de longitud Oeste de Grenwich.

Cuenta con un área total de extensión de 57 Km², a una distancia de Tunja de 7 Km. por la carretera del progreso y a 4.5 Km. por la avenida de los patriotas. Se encuentra entre los pisos térmicos frío y páramo, cuya temperatura oscila entre 3 y 14°C. Su temperatura promedio es de trece (13) grados centígrados, tiene pisos térmicos de frío 55 Km² y páramo 3 Km², está ubicado a 2.942 m.s.n.m.

El municipio de Soracá cuenta con un gran número de nacederos principalmente en las veredas de El Rosal, Faitoque, Chaine, Quebrada Vieja y Quebrada Grande los cuales forman las Micro cuencas de las Quebradas El Muerto, El Arzobispo, Puente Hamaca y Quebrada Vieja.

Figura 2. Ubicación Geográfica de Soracá

Fuente: Gobernación de Boyacá/ Soracá, 2011

1.7 MARCO LEGAL

LEY 576 DE 2000 (Febrero 15) Por la cual se expide el Código de Ética para el ejercicio profesional de la medicina veterinaria, la medicina veterinaria y zootecnia y la zootecnia.

El Congreso de Colombia

DECRETA:

TÍTULOI DE LAS DISPOSICIONES GENERALES

CAPÍTULO I Declaración de principios

Artículo 1º. La medicina veterinaria, la medicina veterinaria y zootecnia y la zootecnia, son profesiones basadas en una formación científica, técnica y humanística que tienen como fin promover una mejor calidad de vida para el hombre mediante la conservación de la salud animal, el incremento de las fuentes de alimento de origen animal, la protección de la salud pública, la protección del medio ambiente, la biodiversidad y el desarrollo de la industria pecuaria del país. Parágrafo. En el campo de las ciencias animales, existen en Colombia tres profesiones afines, a saber: La medicina veterinaria, la medicina veterinaria y zootecnia y la zootecnia. Para los efectos legales relacionados con esta ley, se hace referencia a las tres profesiones, de acuerdo con lo previsto en la Ley 73 de 1985, las cuales se tratarán en conjunto o independientemente, según sea el caso.

Artículo 2º. Los profesionales a quienes se les aplica esta ley, deben tener presente que son principios éticos y morales, rectores indiscutibles ajenos a cualquier claudicación, entre otros, el mutuo respeto, la cooperación colectiva, dignificar la persona, acatar los valores que regulan las relaciones humanas, convivir en comunidad, cumplir voluntariamente los principios que guían, protegen y encauzan la actitud del hombre frente a sus deberes, obligaciones y derechos.

Artículo 3º. Los profesionales objeto de la presente ley, como integrantes de la sociedad, deberán preocuparse por analizar los diferentes problemas de la vida nacional en el campo de su ejercicio profesional, teniendo la responsabilidad social de contribuir eficazmente al desarrollo del sector agropecuario del país.

Artículo 5º. Los médicos veterinarios, los médicos veterinarios y zootecnistas y los zootecnistas, en su labor diaria, deben hacer uso de todos sus conocimientos y capacidades para cumplir cabalmente la misión profesional. Es responsabilidad de los citados profesionales mantener un alto nivel de competencia, mostrarse receptivos a los cambios científicos y tecnológicos a través del tiempo. Deben poner todos sus logros a disposición de sus colegas y aprovechar los de éstos en beneficio de un mejor desempeño.

Artículo 6º. Los conocimientos, capacidades y experiencia con que el médico veterinario, el médico veterinario y zootecnista y el zootecnista sirven al hombre y a la sociedad, constituyen la base de la profesión que ejercen. Por lo tanto, estos profesionales tienen la obligación de mantener actualizados sus conocimientos, los cuales, sumados a los principios éticos en el ejercicio de su profesión, tendrán siempre como objetivo desarrollar una labor de alta eficiencia, demostrando su competencia, capacidad y experiencia.

Parágrafo. Los profesionales deben reconocer los límites de su competencia y las limitaciones de sus conocimientos y solo deben prestar los servicios y usar las técnicas para lo que estén capacitados.

Artículo 7º. Los profesionales sujetos a la presente ley, se vincularán con el desarrollo de estudios relacionados con la conservación de los ecosistemas animales, su entorno de vida y bienestar, sistemas de cofinanciamiento y prácticas de producción animal, frente a los sistemas apropiados de producción y desarrollo tecnológico. Teniendo como objetivo primordial el bienestar del ser humano, dentro de los más altos y sanos principios éticos.

Artículo 8º. El médico veterinario, el médico veterinario y zootecnista y el zootecnista, deberán ejercer su profesión en un todo de acuerdo con lo establecido en la presente ley y en las demás normas vigentes sobre la materia.

CAPÍTULO 5

De la investigación científica, publicación de trabajos y propiedad intelectual

Artículo 76. Los profesionales sujetos a esta norma dedicados a la investigación, son responsables de los temas de estudio del método y los materiales empleados en la misma; del análisis de sus conclusiones y resultados, así como de su divulgación y prevención para su correcta utilización.

Artículo 77. Los profesionales que adelanten investigaciones de carácter científico deberán abstenerse de aceptar presiones o condiciones que limiten la objetividad de su criterio y obedezcan a intereses que ocasionen distorsiones o pretendan dar uso indebido a los hallazgos.

Artículo 78. Los trabajos de investigación podrán ser divulgados o publicados con la debida autorización de sus autores, de conformidad con las normas sobre Derechos de Autor.

Artículo 79. Los profesionales no auspiciarán publicación de artículos que no se ajusten estrictamente a los hechos científicos debidamente comprobados, o los presentados en forma que induzcan a error bien sea por su contenido o por el título de los mismos.

Artículo 80. En la publicación de trabajos científicos, el profesional no cebe valerse de su posición jerárquica para hacer suyos los trabajos de sus subalternos.

Artículo 81. Cuando los trabajos de tesis sean dirigidos y orientados por un profesional de las ciencias animales, éste respetará las normas sobre Derechos de Autor para su creador.

Artículo 82. Todo profesional de las ciencias animales tiene derechos de propiedad intelectual sobre los trabajos que elabore en forma individual o en equipo, en un todo de acuerdo con lo prescrito por las disposiciones sobre Derechos de Autor.

2. METODOLOGÍA

2.1 TIPO DE ESTUDIO Se utilizó para determinar la seroprevalencia Neospora caninum en perros de hatos lecheros mediante la prueba de Elisa indirecta en la vereda de Faitoque del municipio de soracá (Boyacá). Es un análisis estadístico descriptivo y corte transversal.

2.1.1 DISEÑO EXPERIMENTAL 2.1.2 UNIVERSO, POBLACION, MUESTRA

UNIVERSO Se trabajó en las distintas fincas de la vereda de Faitoque del municipio de Soracá para realizar la toma de muestras, ya que esta representa el mayor índice de producción lechera del municipio (Alcaldía Soracá).

POBLACIÓN El total de animales en el municipio es de 1940 animales.

MUESTRA Tamaño de muestra

Para calcular el tamaño de muestra se utilizó la siguiente formula

Zα/2 = 1.962 (ya que la confianza es del 95%) • p = proporción (en este caso 150/1940 =7,73%) 150= corresponden a los perros de la vereda 1940= corresponden a los perros del municipio de Soracá • q = 1 – p (en este caso 1 – 0.773 = 92,26%) • E = error (en este caso deseamos un error del 9%) Zα/2 = Valor que da la tabla de distribución normal n = 32 perros

REMPLAZAMOS:

Descripción general de la población estudiada Se tomó para el estudio una “muestra representativa de la población” de perros, de la vereda Faitoque del municipio de Soracá. Existen de 2 a 3 perros por finca total la muestra fue de 32 animales de 11 fincas, de un aproximado de 150 perros que existen en la vereda de Faitoque para garantizar normalidad de la muestra tomada en el estudio.

2.1.3 DISEÑO METODOLÓGICO

Los animales muestreados se les efectúo examen clínico completo previo a la extracción de sangre, cuyo resultado demostró que los animales se presentaban en buenas condiciones de salud.

Para la toma de muestras se realizó la correcta desinfección de la zona, utilizando alcohol antiséptico, se generó por punción de la vena cefálica antibraquial, con

agujas vacutainer numero 16 y se depositan en tubos tapa roja (sin anticoagulante).

Posteriormente se extrae la sangre y se marcan con la referencia del animal e inmediatamente se depositan los tubos en caja de icopor con gel refrigerante y en seguida llevar el total de las muestras a la centrifuga para obtener el suero, posteriormente sacar este de los tubos utilizando jeringa para depositarlos en viales eppendorf de 1.5 mL y congelar a - 20

grados centígrados, para su

posterior lectura.

El suero sanguíneo es diluido en la solución buffer, la poceta es incubada y lavada, entonces el aglutinado, que es un anticuerpo monoclonal (Ig G1 antibovino) marcado con peroxidasa, es añadido a las pocetas. La poceta es incubada por segunda vez a temperatura ambiente y lavado, añadiendo el sustrato de enzima (peroxido de hidrogeno) y la tetrametilbenzidina cromógena. Si existen dentro del suero inmunoglobulinas específicas para Neospora caninum el conjugado se pega a los microplatos que contienen el protozoo y la enzima cataliza la transformación del cromógeno incoloro a un compuesto pigmentado (FUNCEP, 2011).

La intensidad del resultante color azul es proporcional a los títulos del anticuerpo específico en la muestra, se incuba por 10 minutos a temperatura ambiente protegiéndose de la luz, agregándosele luego una solución preparada a cada poceta y es aquí cuando se leen las densidades óptimas con la ayuda del lector de ELISA indirecta.

Para demostrar la seropositividad el kit Aider incorpora una escala de valores que representan el nivel de positividad (FUNCEP, 2011).

Para la valoración antigénica de las fracciones se empleara la técnica de Elisa estandarizada previamente en micro placas de poliestireno para ELISA, acorde a las condiciones del experimento (FUNCEP, 2011). La especificidad de la prueba es de 96.5 y su sensibilidad es de 88.6 2.2 DISEÑO ESTADÍSTICO El estudio es de tipo trasversal; es diseñado para medir la prevalencia de un resultado en este caso la seroprevalencia de Neospora Caninum en los 32 perros de las 11 Fincas de la Vereda de Faitoque del municipio de Soracá y en un punto específico de tiempo.

Este tipo de estudio no se involucra seguimiento, simplemente se describe la frecuencia de los resultados en los 32 perros muestreados.

Con las medidas de localización se obtuvieron valores que cuantifican

las

propiedades de la frecuencia de Neospora Caninum en los perros y las medidas de dispersión señalan la variabilidad del conjunto de las 32 muestras.

3. RESULTADOS

Tabla 1. Existencia Serológica De Neospora Caninum en la vereda Faitoque.

EXISTENCIA SEROLÓGICA DE Neospora caninum EN LA VEREDA FAITOQUE Id

Finca

Nombre

Raza

Sexo

Color

Propietario

Resultado

Niveles de Neospora

F1 Sacha

Criollo

hembra

blanco

José Benítez

Positivo

275

F1 Tarzan

Labrador

macho

negro

José Benítez

Positivo

229

F1 Lula

Criollo

hembra

dorado

José Benítez

Positivo

225

F1 Rocky

Criollo

macho

dorado

José Benítez

sospechoso

F2 Lucas

Criollo

macho

café

Augusto Murcia

sospechoso

F2 Junior

Criollo

macho

blanco

Augusto Murcia

sospechoso

F2 Lucky

Criollo

macho

negro

Augusto Murcia

Positivo

130

8 9

F3 Mateo F3 Ozzy

Criollo Criollo

macho macho

negro negro -café

Samuel Acevedo Samuel Acevedo

Negativo Negativo

39 46

F3 Dolores

Criollo

hembra

negro

Samuel Acevedo

sospechoso

F3 Sansón

Criollo

macho

negro

Samuel Acevedo

sospechoso

F4 Laica

Criollo

hembra

negro

Alejandro Ortegón

Positivo

260

F4 Mateo

Criollo

macho

blanco

Alejandro Ortegón

Positivo

183

F5 Tayson

Criollo

macho

blanco

Hernando Bernal

Negativo

F5 Nerón

Criollo

macho

negro

Hernando Bernal

Positivo

140

F5 Princesa

Criollo

hembra

negro -café

Hernando Bernal

Positivo

236

F6 Tayson

Criollo

macho

café

Froilán Campos

Negativo

F6 Roco

Criollo

macho

negro

Froilán Campos

Positivo

378

F6 Pepo

Criollo

macho

café

Froilán Campos

Negativo

F6 Dona

Criollo

hembra

negro

Froilán Campos

Positivo

109

F7 Rufo

Criollo

macho

café

Pedro Guevara

sospechoso

F7 Samanta

Criollo

hembra

negro

Pedro Guevara

Positivo

F7 Peter

Criollo

macho

gris

Pedro Guevara

Negativo

F8 Rocky

Criollo

macho

negro

Rafael sarmiento

Negativo

F8 Dona

Criollo

hembra

negro

Rafael sarmiento

sospechoso

F8 Lucas

Criollo

macho

negro

Rafael sarmiento

Positivo

136

F8 Mateo

Criollo

macho

dorado

Rafael sarmiento

Positivo

281

F9 Sansón

Criollo

macho

dorado

Pedro Bernal

Positivo

204

F9 Nina

Criollo

hembra

negro

Pedro Bernal

sospechoso

66 157

F10 Tati

Criollo

hembra

blanco

Emma Bernal

Positivo

134

F10 Lucas

Criollo

macho

negro

Emma Bernal

Negativo

F11 Tarzan

Criollo

macho

negro

Jaime Funeme

Positivo

175

FUENTE: Autor

La tabla 1 muestra los resultados de la prueba diagnóstica ELISA indirecta de 32 perros de la vereda de Faitoque determinando origen, nombre, raza, color, resultado serológico y los niveles de Neospora caninum encontrados con dicha prueba, la cual muestra que animal presenta niveles de positividad más altos en la muestra. Estos datos fueron analizados en Microsoft Excel 2010.

Tabla 2. Tabla de seroprevalencia Neospora caninum.

TABLA DE SEROPREVALENCIA Neospora caninum Intervalo Niveles de Neospora Caninum 0 A 75,6 75,7 A 151,2 151,3 A 226,8 226,9 A 302,4 302,5 A 378 TOTAL

Número de Acumulado Caninos por % de Caninos % Número Intervalo Por Intervalo de Caninos 11 34,375 34,375 10 31,25 65,625 5 15,625 81,25 5 15,625 96,875 1 3,125 100 32 100

FUENTE: Autor

En la tabla 2 se clasificaron los niveles de neospora caninum en 5 grupos de los cuales se contó cuantos perros están en cada uno.

En el nivel de 0 a 75,6 se encuentra un 34,3% de los perros muestreados, seguido de un 31,25% que está en el

intervalo de 75,7 a 151,2 niveles de

neospora caninum.

El 15,62% representa los perros que se encuentran en el intervalos 151,3 a 226,8 y con igual porcentaje los perros que están en un intervalo de 226,9 hasta 302,4. En el intervalo de 302,5 a 378 se encuentra el 3,1% de los perros.

Grafico 1 Niveles de Neospora caninum por perro

Gráfico 1 NIVELES DE Neospora caninum POR PERRO 378

275 229225

niveles de neospora 281

260

236 204

183 130 87 82 93

39 46

157

140 81 72 23

136

109 66

91 0

175 134

73 30

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Caninos (Id)

FUENTE: Autor

El gráfico 1 muestra los niveles de Neospora caninum encontrados por cada perro identificados en la tabla 1 con la abreviatura Id que denota el número del perro.

Como se puede observar en el gráfico los niveles más altos se encuentran en los perros 18, 27, 12 y 16; mientras los más bajos en los perros 23, 24, 19, 14 y 31.

Con la presentación de los altos niveles de Neospora caninum en estos caninos analizados, puede deberse al número de bovinos que se presentan en esas fincas que es mayor al de las demás fincas y por que los caninos recorren libremente las fincas sin atención alguna.

Tabla 3. Estadística descriptiva niveles de Neospora caninum.

Estadística descriptiva niveles de Neospora caninum Media

128,6

Moda

Desviación estándar

93,3

Varianza de la muestra

8713,4

Mínimo

Máximo

378

Suma

4114

Muestra

FUENTE: Autor

Se observa la media o promedio de los niveles de neospora caninum es de 128,6 con una desviación estándar ±93,2 esto quiere decir que los datos están muy alejados de la media, y una varianza de 8713,4; luego los datos tiene una alta variabilidad; el registro más bajo encontrado de niveles de neospora caninum fue de 0 y el más alto es de 378.

TABLA 4 CANINOS POR RAZA

RAZA

NÚMERO DE CANINOS

Criollo Labrador TOTAL

% NUMERO DE CANINOS 31

96,875

3,125

100

FUENTE: Autor

La tabla 4 muestra las dos razas, Criolla la cual representa el 97% de las muestras y la raza Labrador con un solo animal (3%) que representa el 100% positivo de raza encontrados en la muestra y el número de perros por cada una.

Gráfico 2 PORCENTAJE DE CANINOS POR RAZA 3%

Criollo Labrador

97%

FUENTE: Autor

El gráfico 2 representa el porcentaje de perros de la muestra por raza, el porcentaje de perros de la raza criolla es del 97%, mientras de la raza Labrador solo es de un 3% que resulto ser positivo para Neospora caninum.

Tabla 5 y Grafico 3. Numero de caninos por sexo y resultado serologico

NUMERO DE CANINOS POR SEXO Y PRESENCIA SEROLOGICA

RAZA

% NUMERO DE CANINOS POSITIVO

NÚMERO DE CANINOS

NEGATIVO

SOSPECHOSO

hembra

31,25

macho

68,75

TOTAL

100

FUENTE: Autor

La tabla 5 y el grafio 3 muestran que existen 22 perros machos y 10 hembras del total de la muestra, el resultado serológico correspondiente y el porcentaje que representan por sexo.

Número de Caninos

Gráfico 4 DIAGRAMA DE BARRAS DE LA PRESENCIA DE Neospora caninum POR SEXO 10 8 6 4 2 0

HEMBRA MACHO POSITIVO

SOSPECHOSO

NEGATIVO

Resultado Pueba Elisa

FUENTE: Autor

En el gráfico 4 se evidencia que hay un total de 10 hembras de las cuales 7 son positivo, 3 sospechoso y ninguna negativo. De los 22 machos, 9 dan positivo, 5 sospechoso y 8 negativo.

Tabla 6. Prevalencia por columna la presencia serológica neospora caninum por sexo. PREVALENCIA POR COLUMNA LA PRESENCIA SEROLÓGICA Neospora caninum POR SEXO POSITIVO SOSPECHOSO NEGATIVO HEMBRA

43,75%

37,5%

MACHO

56,25%

62,5%

100%

100

TOTAL FUENTE: Autor

La tabla 6 muestra el 56,25% de los caninos que dio positivo son machos seguido de un 43,75% que son hembras. El 62,5% de los caninos que dio sospechoso son machos y un 37,5% son hembras. 44

Solo los machos arrojaron resultados negativos y ninguna hembra dio negativo.

Tabla 7. Prevalencia por fila de la presencia serológica neospora caninum por sexo. PREVALENCIA POR FILA DE LA PRESENCIA SEROLÓGICA Neospora caninum POR SEXO POSITIVO HEMBRA

SOSPECHOSO

70%

MACHO

40,9%

30%

NEGATIVO

TOTAL

100%

22,72727273% 36,36363636%

100%

FUENTE: Autor

En la tabla 7 se evidencia que del total de hembras un 70% dio positivo, seguido de un 30% que dio sospechoso y ninguna hembra dio negativo. Del total de los machos el 40,9% dio positivo, seguido de un 22,72% sospechoso y un 36,36% negativo.

Tabla 8. Prevalencia del total de la presencia serológica neospora caninum por sexo.

PREVALENCIA DEL TOTAL DE LA PRESENCIA SEROLÓGICA NEOSPORA CANINUM POR SEXO POSITIVO

SOSPECHOSO

NEGATIVO

TOTAL

HEMBRA

21,875%

9,375%

31,25%

MACHO

28,125%

15,625%

25%

68,75%

50%

25%

100%

TOTAL

La tabla 8muestra la prevalencia del total de la muestra; es decir que el 28,125% de la muestra representa los machos que dieron como resultado positivo, seguido de un 21,87% de las hembras que dieron positivo.

Aparecen con resultado sospechoso los machos con un 15,62% y la hembras con un 9,3%. El 25% de los machos da negativo y ninguna hembra da negativo. En conclusiĂłn el 75% esta entre positivo y sospechoso en la prueba Elisa, esto indica que los perros estuvieron expuestos al parasito en algĂşn momento de su vida.

FUENTE: Autor El grĂĄfico 5 muestra los resultados de prevalencia en los 32 perros muestreados Un 50% de la muestra dio como resultado positivo y con igual porcentaje del 25% dio como resultado sospechoso y negativo.

Número de caninos

Gráfico 6 HISTOGRAMA DE LOS NIVELES DE LA PRESENCIA SEROLÓGICA DE NEOSPORA CANINUM 15 10 5 0 0 A 75,6

75,7 A 151,2

151,3 A 226,8

226,9 A 302,4

302,5 A 378

Intervalos Niveles de Neospora Caninum

FUENTE: Autor El gráfico 6 muestra los 5 niveles en los que se clasifico la existencia de neospora caninum.

En el nivel de 0 a 75,6 se encuentran 11perros, seguido del nivel de 75,6 a 151,2 en el que hay 10 perros.

En los niveles de 151,3 a 226,8 y 226,9 a 302,4 se encuentra en igual número 5 perros y en el nivel más alto se encuentra un solo perro. Tabla 9. Vereda Faitoque número de caninos con neospora caninum por finca.

presencia serológica

VEREDA FAITOQUE NÚMERO DE CANINOS CON PRESENCIA SEROLÓGICA NEOSPORA CANINUM POR FINCA FINCAS TOTAL F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11 CANINOS POSITIVO 3 1 0 2 2 2 1 2 1 1 1 16 SOSPECHOSO 1 2 2 0 0 0 1 1 1 0 0 8 NEGATIVO 0 0 2 0 1 2 1 1 0 1 0 8 TOTAL CANINOS 4 3 4 2 3 4 3 4 2 2 1 32

FUENTE: Autor

En la tabla 9 se encuentra la cantidad de perros muestreados por finca y los resultados serológicos por finca. En promedio hay 3 perros por finca, con un mínimo de un perro en la finca 11 y con máximo 4 perros en las fincas 1, 3, 6 y 8 para un total de 11 fincas muestreadas.

Gráfico 7 DIAGRAMA DE BARRAS DE LA EXISTENCIA SEROLÓGICA NEOSPORA CANINUM POR FINCA

Número de Caninos

3,5 3 2,5 2 1,5

POSITIVO

SOSPECHOSO

0,5

NEGATIVO

0 F1

F9 F10 F11

Fincas

FUENTE: Autor

El gráfico 7 muestra el número de perros que existen en cada finca y su resultado serológico para la finca uno (F1) se encuentran 3 perros que arrojan positivo y uno de los 4 sospechoso. En las fincas 4, 5 y 8 se encuentran por cada una dos perros con resultados serológicos positivos. En las fincas 2, 7, 9, 10 y 11 se encuentra un perro con resultado positivo respectivamente. En la finca número 3 (F3) no se encontró ningún perro con resultado positivo; pero si dos de los 4 perros que existen tiene resultado serológico sospechoso.

Tabla 10. Prevalencia por columna de la existencia serológica neospora caninum por finca. PREVALENCIA POR FINCA DE LA EXISTENCIA SEROLÓGICA NEOSPORA CANINUM FINCAS F1

POSITIVO

75%

33%

SOSPECHOSO

25%

67%

50%

NEGATIVO TOTAL

0% 100%

F10

F11

67%

50%

33%

50%

33%

25%

50%

33%

50%

33%

25%

50%

100% 100% 100% 100% 100%

50% 100%

100% 100% 100% 100% 100% 100%

FUENTE: Autor

La tabla 10 muestra el porcentaje por finca de los resultados serológicos de los perros muestreados. En la F4 y F11 el 100% de los perros es positivo, seguido de la F1 donde el 75% de los perros dio positivo, las fincas F6, F8, F9 yF10 tiene un 50% de sus perros con resultado positivo.

En las fincas 2, 9 y 3 el porcentaje de resultados sospechoso es del 67% y 50% respectivamente. La fincas 1 y 5 tiene igual porcentaje de sospechoso con un 25%.

Para el resultado serológico de negativo las fincas 1, 2, 4, 9 y 10 tiene 0%; es decir el total de los perros para estas fincas arrojan resultados ente positivo y sospechoso.

En las fincas 6 y 10 el 50% de los perros da negativo y el otro 50% positivo La finca 8 muestra igual porcentaje para los resultados de positivo, sospechoso y negativo con un 33%.

Tabla 11. Prevalencia por fila de la existencia serológica neospora caninum por finca. PREVALENCIA POR RESULTADO DE LA EXISTENCIA SEROLÓGICA NEOSPORA CANINUM POR FINCA FINCAS F1 POSITIVO

19% 6,3%

SOSPECHOSO 13% NEGATIVO

F10

F11

0% 13% 13% 13% 6,3% 13% 6,3% 6,3% 6,3%

25% 25% 0% 25%

0% 13% 13% 13%

0% 13% 25%

13% 13%

TOTAL 100%

100%

0% 13%

100%

FUENTE: Autor

La tabla 11 muestra el porcentaje por resultado entre las 11 fincas. El mayor porcentaje de positivo lo arroja la finca F1 con un 19% seguido de la F4, F5, F6 y F8 con un 13%. Entre las fincas F2 y F3 se encuentra el 50% de los perros que arrojan resultado sospechoso. Las fincas F3, y F6 representan el 50% de los resultados negativos.

Tabla 12 Prevalencia total de la existencia serológica neospora caninum por finca PREVALENCIA TOTAL DE LA EXISTENCIA SEROLÓGICA NEOSPORA CANINUM POR FINCA FINCAS F1

POSITIVO

9,3% 3,1%

SOSPECHOSO

3,1% 6,2%

NEGATIVO TOTAL

F10

F11

0% 6,2% 6,2% 6,3% 3,1% 6,3% 3,1% 3,1% 3,1% 6,2%

0% 3,1% 3,1% 3,1%

6,2%

0% 3,1% 6,3% 3,1% 3,1%

12,5% 9,3% 12,5% 6,2% 9,3% 13% 9,4%

FUENTE: Autor

TOTAL 50%

25%

0% 3,1%

25%

13% 6,3% 6,3% 3,1%

100%

De las 11 fincas muestreadas el 50% de los perros dio positivo, el 50% restante está entre los perros con resultados sospechoso y negativos cada uno con un 25%. Del 50% que dio como resultado positivo el mayor porcentaje se encontró en la F1 con un 9,3%. A excepción de la F3, las demás fincas presentan un porcentaje de perros que arrojan un resultado serológico positivo en la prueba Elisa. Es decir que el 75% de los resultados de las 11 fincas están entre positivo y sospechoso.

Capacitación a productores y entrega de folleto informativo sobre Neospora caninum

4. HIPÓTESIS

Se aplica una prueba de hipótesis para la proporción poblacional que en este caso son los perros de la vereda Faitoque.

Tomamos como proporción muestral los resultados de los niveles que dan positivo encontrados en los 32 perros.

Ho: hipótesis nula (lo que se desea probar) Ha: hipótesis alternativa (la contraria a Ho) Po: proporción poblacional (la que suponemos) P: proporción muestral (la que conocemos)

Ho: la proporción de perros de la vereda Faitoque del municipio de soracá que tengan niveles positivos de neospora caninum sea mayor o igual al

60%

(proporción poblacional)

Ha: la proporción de perros de la vereda Faitoque del municipio de soracá que tengan niveles de neospora caninum sea menor al 60% (proporción poblacional).

Po: 0,6 (60%) P: 0,5 (50%) n: 32(muestra) Ho: Po ≥ 0,6 Ha: Po < 0,6 (Estadístico de prueba)

=-1,13

Es decir que con una confianza del 95% y un margen de error del 5% la proporción de perros de la vereda Faitoque del municipio de soracá que tienen niveles de neospora caninum positivos es igual o mayor al 60%.

Gráfico 8 CURVA NORMAL

Como se observa en el gráfico 8 el estadístico de prueba cae en la zona de aceptación es decir se acepta la hipótesis nula; es decir que la proporción de perros de la vereda de Faitoque del municipio de soracá que tiene niveles positivos de neospora caninum es mayor o igual al 60%.

5. ANALISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

La seroprevalencia para Neospora caninum en los perros de hatos lecheros de la vereda de Faitoque del municipio de Soracá (Boyacá) fue del 75% positivo o sospechoso, esto indica que los perros estuvieron expuestos al parasito en algún momento de su vida. Con este resultado se puede decir que la seroprevalencia encontrada en este estudio es alta y que existen factores como la convivencia estrecha de los perros con el ganado y el número de perros por finca, que estarían involucrados para que subsista la infección en las 11 fincas de la vereda Faitoque en el municipio de Soracá. Si se compara con los resultados de los estudios realizados a 122 perros en el sur de Perú donde la prevalencia encontrada fue del 6% (Vega et al, 2010). En diferentes países de Latinoamérica se han interesado por investigar sobre este parasito, determinado la prevalencia en caninos y bovinos los cuales son los mayor afectados con este parasito, manejando diferentes variables para poder determinar la presencia del parasito y utilizando diversidad de métodos diagnósticos ya que este parasito ha causado muchos abortos en los diferentes países del mundo afectando la economía de los productores, Obando et al, realizó un estudio que vale la pena resaltar ya que encontró el 44% de las muestras tomadas positivas para Neospora caninum en vacas y en novillas.

Con los resultados obtenidos en este estudio, se puede apuntar que en la totalidad de la vereda de Faitoque, está presente el parasito, ya que en todas las fincas, los perros recorren libremente todos los terrenos, contaminado todas las pasturas utilizadas por el ganado, resaltando la finca 1 que presento el porcentaje más alto de positividad (9.3%), esta alta prevalencia puede deberse a que la finca presenta

gran numero de caninos y que estos están permanentemente en contacto con las vacas.

Generalmente, la alta prevalencia de Neospora caninum en el área analizada se debe a que todos los perros de las fincas analizadas no tienen ningún control por los propietarios, andando así estos perros libremente por toda la finca, lo cual indica que en el trabajo de parto por las vacas, los perros están presentes para consumirse la placenta. Se encuestó a los productores sobre el destino de estas membranas, lo cual respondieron que la dejaban donde la vaca votó.

Otro punto que cabe resaltar es la alta positividad en las hembras, de los resultados obtenidos 7 hembras de las 10 analizadas resultaron positivo, lo que representa el 43.75% del total de la muestra y 3 sospechoso que representa el 37.5% del total de la muestra véase tabla 7.

Según los estudios realizados por Aguado-Martínez et al, 2005 indica que Neospora caninum no tiene preferencia por sexo, raza o edad como también se puede ver en el resultado de la tabla 5 que muestra la positividad entre macho y hembra.

La causa de la alta positividad en las hembras es porque en la mayoría de las fincas existe la relación de una hembra por tres machos y en todas las fincas analizadas algún animal es positivo o sospechoso, razón por la cual todos los animales están propensos a contagiarse con el parasito. Este

trabajo aporta datos no existentes en el municipio de Soracá, como la

relación de la neosporosis canina con el ganado de la zona, lo que va permitir poder establecer medidas de control para evitar su transmisión.

6. CONCLUSIONES



El presente trabajo estableció la presencia de Neospora caninum mediante el método de ELISA indirecta en las 11 fincas muestreadas en la vereda de Faitoque del municipio de Soracá.



De las 11 fincas muestreadas el 50% de los perros presento positividad, el 50% restante está entre los perros con resultados sospechoso y negativos cada uno con un 25%.



Del 50% que dio como resultado positivo el mayor porcentaje se encontró en la finca 1 con un 9,3%. A excepción de la finca 3, las demás fincas presentan un porcentaje de perros que arrojan un resultado serológico positivo en la prueba Elisa.



Con una confianza del 95% y un margen de error del 5% la proporción de perros de la vereda Faitoque del municipio de soracá que tienen niveles de neospora caninum positivos es igual o mayor al 60%.



El sexo en los perros no constituyó un factor influyente en la frecuencia del parásito.



Con la capacitación y la entrega de folletos informativos sobre el parasito entregados a los productores, se espera disminuir la tasa de positividad en la vereda de Faitoque en el municipio de Soracá.

7. IMPACTO

Es una enfermedad que ha causado grandes pérdidas económicas a los productores de muchos países del mundo, incluyendo Colombia; siendo los caninos los huéspedes definitivos de esta enfermedad transmitiendo así este protozoo a los bovinos quedando estos como huéspedes intermediarios (Dubey y Lappin, 2006).

Con la presencia de Neospora caninum en la vereda de Faitoque, las pérdidas económicas van a seguir estando presentes en la zona, si los productores no se concientizan de esta problemática, los abortos en las vacas van a ser cada día superiores y como mayor consecuencia va a ser la pérdida de la cría al nacer, la cual es el pilar de ganancia del productor.

8. RECOMENDACIONES

En razón a que en la actualidad no existen vacunas o fármacos de comprobada eficiencia que garanticen el control de esta parasitosis, es importante evaluar programas de erradicación del parásito, mediante la eliminación progresiva de las hembras infectadas y, con particular énfasis, de las becerras nacidas infectadas (transmisión vertical), como medida para luchar contra esta enfermedad.

Con la visita realizada a la vereda de Faitoque se obtuvo, que el contacto permanente de estas dos especies es el principal problema que presentan todas las fincas analizadas. Lo conveniente sería realizar una reunión

a todos los

ganaderos de la vereda Faitoque del municipio de Soracá, informándolos sobre la enfermedad y proponerles controles de infestación del parasito; como mantener a una distancia prudente a los perros de las vacas, cuando realicen la compra de animales en las plazas o ferias que primero les realicen una serología para estar seguros de que no entre este parasito en las fincas y eliminar a los animales que abortan por segunda vez. Con esta serie de recomendaciones tan simples se podría tener controlado al parasito y con el tiempo la total eliminación la vereda y porque no del municipio.

Con este trabajo se pretende incentivar a los estudiantes de la Fundación Universitaria Juan de Castellanos del programa de Medicina Veterinaria para que indaguen más a fondo sobre este parasito y realicen más investigaciones de este protozoo y así en un futuro poder terminar con este parasito en el país.

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10. ANEXOS

Anexo 1. Causa principal de prevalencia de Neospora Caninum en la vereda de Faitoque

Anexo 2. Toma de muestras

Anexo 3. Recolecci贸n de muestras

Anexo 4. Centrifugaci贸n de muestras

Anexo 5. Extracci贸n de sueros

Anexo 6. Almacenamiento de sueros en viales Eppendorf