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CULTIVO AVANZADO
OBSERVA CÓMO CRECEN LAS PLANTAS DURANTE MESES SIN NINGÚN CUIDADO
Mantén tu cultivo in vitro sin esfuerzo Una vez se ha empezado con el cultivo in vitro, los mantenimientos y cuidados que necesitarán las plantas serán mínimos. En este artículo veremos cómo se trabaja en condiciones de esterilidad para garantizar el correcto desarrollo de nuestras genéticas, así como la evolución que tienen dentro de los botes de cultivo. No hay que desesperarse por el lento crecimiento de las plantas, ya que garantizará su juventud durante más tiempo y nos permitirá tener madres durante muchos años. En el artículo del número anterior se trató de hacer una introducción rápida al concepto de cultivo in vitro, a cómo preparar los medios de cultivo necesarios para que crezcan las plantas
mantener nuestras genéticas, ya que al cabo de varios años la planta seguirá siendo joven. En este momento, las plantas solo tienen los cotiledones, y sus primeras hojas no empezarán a cre-
Es la mejor técnica para conservar y mantener nuestras genéticas, ya que al cabo de varios años la planta seguirá siendo joven y la esterilización de todo el material necesario (incluyendo las semillas y los esquejes). Cuando todos estos procesos se han realizado correctamente, y no han aparecido contaminaciones de hongos ni bacterias, solo nos queda ver cómo empiezan a germinar y enraizar. Dado que los esquejes no necesitan ningún mantenimiento (puesto que irán enraizando y creciendo posteriormente), nos centraremos en las semillas para favorecer su óptimo desarrollo. Para estudiar el cultivo in vitro se partió de nueve semillas, tres de ellas no germinaron y las otras seis empezaron a abrirse a los diez días. El periodo de germinación puede variar en tanta medida que las últimas en abrirse lo hicieron veinte días después. Cuando se abren, se empieza a ver el crecimiento de la raíz principal, al estar tan hidratadas por la humedad que existe dentro de los botes, la testa o cubierta de la semilla se suele des-
Plántulas con cinco días después de germinar. prender pasados unos días, dejando la plántula tumbada en el medio de cultivo. Todos aquellos que se inicien en estas técnicas notarán que el crecimiento de las plantas es sorprendentemente lento; no hay que preocuparse, es lo normal. Precisamente por eso, esta es la mejor técnica para conservar y
cer hasta pasado mucho tiempo. Están totalmente blancas porque no son capaces de hacer la fotosíntesis bajo estas condiciones de elevada humedad, se alimentarán exclusivamente de los nutrientes que existan en el medio de cultivo.
Para estar más seguro de la esterilización, antes de meter las pinzas en el interior, me gusta bañarlas en alcohol y quemarlas. Nada más apagarse la llama, las introduzco en la fiambrera y procedo como se ha descrito anteriormente. Hay que tener en cuenta que vamos a introducir las pinzas con todos los botes, así que cualquier contaminación aquí supondría estropear todo el trabajo realizado hasta la fecha. En los laboratorios se trabaja en cámaras con corrientes de aire para evitar que entren esporas de cualquier tipo, y las pinzas están siempre sumergidas en alcohol; antes de usarlas, se exponen a una llama para quemarlas y tenerlas siempre limpias. Esto no se puede hacer en nuestro caso, ya que pulverizar con alcohol en un lugar cerrado implica que no se evaporará con facilidad, y podremos incendiar toda la fiambrera con nuestras manos dentro, por lo que es crucial no tener ninguna llama. Cabe destacar que el alcohol adecuado para todo este proce-
Mr. Sandman
so es al 70%, ya que esteriliza mejor que el de 96%. Por lo tanto, tendremos que rebajarlo siempre con agua destilada. Ahora ya tenemos, en teoría, todo el material esterilizado y podemos continuar. Cogemos el primer bote, lo abrimos y dejamos la tapa apoyada boca arriba encima de otro bote para que no se quede en el suelo. La dejaremos boca arriba porque así no exponemos la cara interna a lugares que puedan tener alguna contaminación. El paso siguiente será introducir con cuidado las pinzas, coger la planta y clavarla literalmente en el medio de cultivo; hay que tener mucho cuidado porque los cotiledones y el tallo se pueden romper con facilidad. Al terminar, se cierra el bote cogiendo la tapa por los laterales, evitando tocar la cara interna. Procederemos de la misma forma para el resto de los botes. En algunas ocasiones, la cubierta de la semilla no se desprende de la planta al germinar, así que se la quitaremos ayudándonos de las pinzas. Se puede hacer antes o después de poner la planta en el medio de cultivo; aquí es importante tener cuidado de no introducir los dedos en el bote, ni rozar los bordes del mismo, para evitar contaminaciones. Parece un procedimiento simple, pero requiere cierta práctica, por lo que se
Trabajando en nuestra cámara estéril Como su evolución va muy despacio, es conveniente ayudarlas un poco. Puede pasar mucho tiempo hasta que la raíz tenga el tamaño adecuado para poder doblarse e introducirse por sí misma en el medio de cultivo, así que nosotros realizaremos este paso. Como tendremos que abrir los botes, habrá que llevar a cabo el proceso en el interior de la fiambrera creada en el artículo anterior, es decir, en condiciones de esterilidad. El procedimiento es muy sencillo y nos permitirá seguir practicando esta metodología para que las contaminaciones se reduzcan casi a cero. Lo que nos hace falta son nuestros botes, papel de cocina, unas pinzas largas que nos permitan coger las plantas y manejarlas con facilidad y un pulverizador con alcohol al 70%. Se introduce todo en la fiambrera, la cerramos y nos ponemos los guantes. Ahora hay que pulverizar toda la fiambrera (y los guantes) con el alcohol, y limpiarlo con papel de cocina para que no se acumule en el suelo del recipiente. De hecho, con este papel, empapado ahora en alcohol, se limpiarán tanto la superficie de los botes como las pinzas. Antes de empezar con el siguiente paso, dejamos que transcurran 5-10 minutos.
Antes de empezar hay que pulverizar con alcohol al 70%.
Se tiene que trabajar con cuidado para no dañar a las plantas.
