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CULTIVO IN VITRO
comenzar. Además intentaremos trabajar en un ambiente lo más limpio posible, como una cocina, ya que su suelo y pareces son fáciles de limpiar y no contiene alfombras u otros objetos de materiales porosos que retienen el polvo y la suciedad. También tendremos cuidado de no utilizar una concentración de peroxido tan alta que ponga en peligro la supervivencia de nuestro material vegetal.
EXPERIMENTO CON AGUA OXIGENADA
Cultivo in Vitro sin condiciones estériles Debido a que el principal problema del cultivo in Vitro es la contaminación por hongos y bacterias, profesionalmente se utilizan métodos para conseguir la asepsia tanto del material vegetal como de el medio de cultivo y recipientes. Estos métodos requieren una inversión inicial relativamente grande por lo que, antes de introducirnos en sistemas más profesionales, realizaremos un experimento que, si da resultado, puede ser un método muy interesante para su utilización en el ámbito casero debido a su reducido coste ya que evitaría en cierta medida el uso de condiciones Bud Spencer estériles para su ejecución. Un medio de cultivo de base acuosa como el utilizado en el cultivo de plantas in Vitro, rico en carbohidratos procedentes de la sacarosa (azúcar común) y del agar (cuando éste es utilizado para solidificar
varios componentes orgánicos, como pueden ser el material genético y las membranas celulares, dañándolos por oxidación. Gracias a esto, en una concentración suficiente, es capaz de de matar
Material necesario para la preparación del medio.
dañinas, por lo que si la concentración del mismo no es tan alta como para desbordar la capacidad de producción de estas enzimas, sus células no se verán afectadas. Esta propiedad nos es de gran utilidad ya que, añadiendo agua oxigenada al medio de cultivo, podemos evitar parte del material que se utiliza habitualmente para asegurar la asepsia (cámaras estériles, cámaras de flujo laminar equipadas con costosos filtros HEPA, equipos de microfiltración o equipos de luz ultravioleta). No obstante, existen algunas bacterias resistentes capaces de producir peroxidasas, por lo que si hay una concentración muy elevada de las mismas o de células de moho (recordemos que los hongos son resistentes) serán capaces
Preparación del medio de cultivo Para la preparación del medio de cultivo utilizaremos los siguientes elementos: - Un matraz Erlenmeyer de boca ancha. - Dos vasos de precipitados. - 6 tarros de conserva. - Agua desmineralizada. - 10 g de azúcar. - 2,1 g de agar. - Agua oxigenada. - Fertilizante de crecimiento (Sensi Grow de Advanced Nutrients). - Extracto de levadura (Organic-B de Advanced Nutrients). - Sosa cáustica (NaOH) y ácido (pHDown). - Una jeringuilla de insulina sin aguja. - Un medidor de pH. - Una báscula de precisión.
Material necesario para la preparación del medio.
el medio), aminoácidos, vitaminas y que además contiene minerales esenciales, es un medio perfecto para la proliferación de microorganismos. El aire que respiramos está cargado de esporas de estos microorganismos, e incluso de microorganismos adheridos a las partículas sólidas en suspensión como el polvo o en partículas líquidas como las producidas por los estornudos. Si dejamos medio de cultivo en una placa de Petri abierta al aire libre, en pocos días observaremos como las colonias de bacterias y mohos afloran en la superficie del mismo, aumentando su tamaño con el tiempo, mientras consumen los nutrientes de los que está compuesto. Por lo tanto, a la hora de iniciar un cultivo con esta técnica, es obligatorio tomar medidas para Medio repartido entre los recipientes de cultivo. que las contaminaciones no arruinen todo nuestro trabajo y esfuerzo. bacterias, endosporas bacterianas, leva- de colonizar nuestro medio, aunque sea El agua oxigenada o peróxido de hidró- duras y esporas de hongos. a una velocidad muy reducida, compigeno (H2O2) es un producto conocido tiendo por los recursos e incluso infecdesde hace tiempo por su poder des- Sin embargo, los hongos, los animales tando el material vegetal introducido infectante. Este poder es debido a que y las plantas son capaces de produ- en el mismo. Es por ello que no debeen disolución libera el radical peróxido, cir peroxidasas, unas enzimas que des- mos abandonar la asepsia totalmente una forma reactiva de oxígeno que ataca componen este radical en formas no y desinfectar todo el material antes de
En lugar de un matraz se puede utilizar cualquier otro recipiente de vidrio lo suficientemente grande. Igualmente podemos sustituir los vasos de precipitados por vasos corrientes (siempre que tengamos algún instrumento para medir el volumen, como una jarra medidora o una probeta). Tanto el agua desmineralizada como la sosa son fáciles de encontrar en cualquier supermercado. El agar, que es un polisacárido extraído de la pared celular de algunas algas, suele encontrarse en herbolarios, tiendas de dietética o tiendas especializadas en productos químicos. Una vez hayamos conseguido el material necesario, procederemos a llenar el matraz con agua desmineralizada hasta aproximadamente la mitad del volumen final que vayamos a utilizar, es decir, unos 150 ml, ya que prepararemos 300 ml de medio. Luego introducimos el azúcar y agitamos el recipiente con movimientos circulares hasta su completa disolución. A continuación, añadimos 0,1 ml de cada
