AQUACULTURA #136

ÍNDICE Edición 136 - Agosto 2020 INFORMACIÓN DE COYUNTURA

China confirmó la calidad e inocuidad del camarón ecuatoriano

Subsecretaría de Calidad e Inocuidad entidad clave para sostener las exportaciones de camarón

No se tiene evidencia respecto a si el SARS-CoV-2 infecta a los animales acuáticos destinados a la alimentación o contamina sus productos

Seguridad de alimentos, cadena de suministro de alimentos y ambiente durante la pandemia de COVID-19

ARTÍCULOS TÉCNICOS

Detección del Virus iridiscente decápodo 1 con sonda TaqMan con PCR en tiempo real

Mejora de la eficiencia en alimentos iniciadores para camarones

Detección de probióticos intestinales y efectos de la alimentación de probióticos en el crecimiento, actividad enzimática inmune, digestiva y flora intestinal de Litopenaeus vannamei

Manejo sostenible y rentable de hepatopancreatitis necrotizante (NHP) granjas de Litopenaeus vannamei

ESTADÍSTICAS

58 63

Exportaciones de camarón y tilapia Reporte del mercado EE. UU. - Urner Barry

NOTICIAS

Noticias de interés

la en

Presidente Ejecutivo Ing. José Antonio Camposano Editora “AquaCultura” Msc. Shirley Suasnavas ssuasnavas@cna-ecuador.com Consejo Editorial Msc. Yahira Piedrahita Mphil. Leonardo Maridueña Ing. Attilio Cástano Econ. Heinz Grunauer Diseño y diagramación Ing. Orly Saltos osaltos@cna-ecuador.com Orlando Saltos Corrección de estilo Silvia Idrovo Valverde Foto de portada Cortesía: Sustainable Shrimp Partnership

Comercialización Gabriela Nivelo gnivelo@cna-ecuador.com

EDITORIAL José Antonio Camposano Presidente Ejecutivo

Reinventarse para sobrevivir requiere de actuar, no de esperar

n las últimas décadas, nuestra sociedad no había enfrentado una crisis tan profunda como la generada por la pandemia. Decir esto viviendo en Ecuador no es poca cosa, pues nuestro país no se ha caracterizado ni por su estabilidad económica, social o política, aunque hoy se nos quiera vender la idea que un régimen totalitario puede ser equivalente a la paz ciudadana que se necesita para impulsar el desarrollo de nuestra comunidad. Lo cierto es que la pandemia trajo consigo una ola de incertidumbre a todo nivel pues a la crisis sanitaria le siguió una crisis económica de la que demoraremos en salir y la cual, sin duda, derivará en una profunda crisis social. En esta difícil coyuntura los negocios han adoptado diversas estrategias para adecuar sus modelos y eludir problemas, como, por ejemplo, el desplome de la demanda de una amplia variedad de productos y servicios que ha causado despidos masivos en todo el mundo. Sin embargo, no es posible emprender un cambio de visión si no empezamos por reconocer a la tan temida incertidumbre como una variable casi constante en todos los negocios, pues negar la existencia de variables que no podemos controlar o aquellas que ni siquiera identificamos es privarnos nosotros mismos de ver la situación en un espectro total, fijando solamente la mirada en aquello de nuestro interés, es decir en aquello en lo que tenemos control. Reconocer que el ambiente de incertidumbre, amplificado por la pandemia, es una realidad es el primer paso para empezar un proceso de reinvención. Si este proceso requiere de reconocer la existencia de la incertidumbre, no es menos importante, por lo tanto, advertir también que pretender aplazar la toma de decisiones a la llegada de un clima más

favorable y lleno de certezas, es condenarse al fracaso, pues estaríamos inmóviles hasta el arribo del “momento oportuno”, el cual nunca va a llegar. Otro reto que presenta el manejo de la incertidumbre es que tendremos más probabilidades de superarlo si lo abordamos colectivamente, no aislados. En este aspecto, los sectores productivos necesitan del apoyo de instituciones firmes que estén preparadas para lidiar en una coyuntura incierta. Es así como la Cámara Nacional de Acuacultura ha sido, para el sector camaronero, un acompañante que ha brindado un invaluable respaldo a la actividad productiva y exportadora en el tratamiento de la compleja, y de momentos incierta, relación con su principal mercado: China. De igual manera, ante el complicado escenario nacional y las políticas de restricción de movilidad y de reunión, la Cámara emprendió un proceso de reinvención para una de sus principales actividades: la feria comercial y congreso AQUAEXPO, pues desde la edición El Oro 2020, estas vitrinas empresariales y foro de discusión se llevarán a cabo de forma virtual a través de las nuevas tecnologías que nos permitirán llegar con la misma calidad a cientos de camaroneros y colegas del sector para intercambiar criterios sobre las situaciones que más nos interesan. Hoy nos enfrentamos a una realidad incierta a la que tenemos que atender sin mayores demoras. No podemos esperar al momento adecuado que nunca llega, pues las oportunidades se presentan, muchas veces, como amenazas porque adolecemos de una ceguera selectiva influenciada por la cotidianidad a la que hemos estado acostumbrados por mucho tiempo.

DIRECTORIO PRIMER VICEPRESIDENTE Ing. José Antonio Lince

PRESIDENTE DEL DIRECTORIO Econ. Carlos Miranda

SEGUNDO VICEPRESIDENTE Ing. Marcelo Vélez

VOCALES Blgo. Carlos Sánchez Ing. Ricardo Solá Ing. Alex Olsen Ing. Ori Nadan Ing. Attilio Cástano Ing. Luis Francisco Burgos Ing. Jorge Redrovan Sr. Isauro Fajardo Tinoco Ing. Leonardo De Wind Ing. Oswin Crespo Econ. Sandro Coglitore Ing. Rodrigo Laniado Econ. Roberto Coronel

Ing. Diego Illingworth Ing. Alex Elghoul Ing. Rodrigo Vélez Dr. Marco Tello Sr. Luis Alvarado Ing. Paulo Gutiérrez Sr. Luis Aguirre Ing. Fabricio Vargas Ing. Francisco Pons Dr. Alejandro Aguayo Econ. Heinz Grunauer Ing. Víctor Ramos Ing. David Eguiguren

Ing. Marcos Wilches Ing. Álvaro Pino Arroba Sr. Carlos Rosales Sr. Roberto Aguirre Ing. Miguel Uscocovich Ing. Alex De Wind Sra. Verónica Dueñas Ing. Walter Intriago Ing. Danny Vélez Sr. Ufredo Coronel Ing. Luis Gálvez Correa

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- AGOSTO 2020

China confirmó la calidad e inocuidad del camarón ecuatoriano La Aduana del país asiático levantó las restricciones a las tres exportadoras de Ecuador

ndustrial Pesquera Santa Priscila, Empacreci y EDPACIF, reanudaron sus exportaciones a China, luego que la Administración General de Aduanas de China (GACC) levantó la restricción impuesta a las empresas, tras evidenciar en inspecciones virtuales que las plantas procesadoras cumplen con todos los protocolos de bioseguridad para garantizar la calidad e inocuidad del producto ecuatoriano. Las notificaciones fueron recibidas por la Embajada del Ecuador en Beijing; la primera llegó el 10 de agosto pasado a través de un comunicado que explicaba que la empresa Santa Priscila aplicó muy satisfactoriamente la “Guía para empresas alimentarias sobre control de riesgos relacionados al COVID-19” publicada por la FAO y la OMC. En lo que respecta a Empacreci, la notificación llegó el 12 de agosto y según el Ministro de Producción, Iván Ontaneda, se levantó la suspensión al segundo establecimiento exportador de camarón Empacreci luego de que se verificó la adopción de acciones correctivas y el cumplimiento de rigurosos protocolos de inocuidad y bioseguridad; de igual manera ocurrió con EDPACIF el 15 de agosto. Las tres empresas representan más del 25% de las exportaciones de camarón a China. El levantamiento de la medida fue posible gracias al oportuno despliegue de la delegación ecuatoriana, liderada por el Ministerio de Producción, Comercio Exterior Inversiones y Pesca, acompañada por la Cancillería y la Cámara Nacional de Acuacultura. Entidades que se activaron de inmediato luego de conocer el 10 de julio pasado la restricción impuesta por el país asiático.

Exterior, Inversiones y Pesca, Iván Ontaneda, las inspecciones virtuales permitieron que China valide el riguroso cumplimiento de los protocolos de bioseguridad e inocuidad para lograr ratificar la excelencia del sector camaronero ecuatoriano y la calidad mundial de este producto.

José Antonio Camposano, Presidente Ejecutivo de la Cámara Nacional de Acuacultura, indicó que la industria recibió la noticia con satisfacción pues, se ha comprobado que Ecuador cumple con altos estándares de bioseguridad, lo que hace del camarón ecuatoriano un producto sano y seguro para todos los consumidores.

“Se hicieron revisiones virtuales en las plantas; las empacadoras y los puertos de pre y posembarque del camarón, evidenciando que el producto cumple con los protocolos de bioseguridad que el mercado internacional exige”.

“La Cámara Nacional de Acuacultura reconoce la efectiva gestión del Gobierno Ecuatoriano para atender los requerimientos de las autoridades de la Aduana China y levantar las restricciones. La gestión para el cuidado y la apertura de mercados de exportación es una tarea clave que el Gobierno Nacional está impulsando con mucha fuerza desde el Ministerio de Producción, Comercio Exterior, Inversiones y Pesca”.

Iván Ontaneda Ministro de Producción, Comercio Exterior, Inversiones y Pesca

José Antonio Camposano Presidente Ejecutivo de la Cámara Nacional de Acuacultura

Para el Ministro de Producción, Comercio

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- AGOSTO 2020 El Gobierno consciente de la importancia de solucionar el impase abordó con celeridad el tema, así lo dispuso el Presidente Lenín Moreno quien anunció que envió una carta a su homólogo chino, Xi Jinping, para encontrar soluciones conjuntas. Lo dijo el 13 de julio pasado, durante su recorrido por la fábrica Tropack y la planta empacadora de camarón Santa Priscila en Guayaquil empresa líder en exportación de Ecuador que tiene más de 40 años de experiencia y fue restringida temporalmente por China. En la visita el primer mandatario, hizo énfasis en que la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y Agricultura (FAO) han señalado que el COVID-19 no se transmite por medio de los alimentos. Un mes después, La Organización Mundial de la Salud (OMS) aseguró que no hay que temer una transmisión del COVID-19 a través de la comida.

Presidente Lenín Moreno, recorrió la fábrica Tropack y la planta empacadora de camarón Santa Priscila, el 13 de julio de 2020, acompañado de varios ministros de estado

Impacto en las exportaciones La reciente restricción temporal para las tres empresas se registró cuando Ecuador había alcanzado un nuevo récord en la exportación de camarón, entre enero y mayo de este año, en medio de la pandemia, las exportaciones del crustáceo crecieron, alcanzando los $1.663 millones, con un crecimiento del 12%; sin embargo, el desplome empezó a evidenciarse desde junio, cuando se registró una caída en la demanda a China, que constituye el principal destino de las exportaciones del camarón ecuatoriano con el 62% del mercado. En mayo las ventas a ese destino alcanzaron los 159 millones de libras, mientras que, al mes siguiente, fueron 122 millones de libras, pero el decrecimiento fue agravándose en julio, pues las exportaciones cayeron en ese mes con 98 millones de libras y una exportación que alcanzó apenas los 233,30 millones de dólares, el 28% menos frente a lo enviado en el mismo mes del 2019. Según José Antonio Camposano, las exportaciones de camarón a China experimentan una drástica caída porque los envíos en libras bajaron el 76% y los ingresos en dólares cayeron el 79% en comparación con julio del año pasado. Explicó que a esto se suma la contracción del consumo provocado por la crisis mundial

“No creemos que el coronavirus pueda transmitirse a través de alimentos. Si lo hemos entendido bien, China buscó el virus en envoltorios, lo comprobó con centenares de miles y solo lo encontró en muy pocos, menos de diez dieron positivo” Maria Van Kerkhove responsable de la unidad de enfermedades emergentes de la OMS que se vive por la pandemia del COVID-19 y las restricciones impuestas recientemente por china que generó incertidumbre entre exportadores e importadores del producto ecuatoriano. Agosto se proyecta también a la baja y según Camposano, lo que resta del año será a lo mucho se llegaría a entre 90 y 100 millones de libras con dificultad.

Ecuador firmó protocolos bioseguridad con china

Con el propósito de superar los inconvenientes que puedan existir en materia sanitaria con

“No hay ninguna prueba de que los alimentos o las cadenas alimentarias participen en la transmisión del virus”. Michael Ryan Director de situaciones de emergencia sanitaria de la OMS

China, el Ministerio de Producción, Comercio Exterior, Inversiones y Pesca de Ecuador (MPCEIP) y la Administración General de Aduanas de la República Popular China (GACC) suscribieron el acuerdo denominado “Protocolo para la Inspección, Cuarentena y Requisitos Sanitarios Veterinarios para Camarones Blancos Congelados a exportarse desde Ecuador a China”. Entre los puntos más importantes, el protocolo indica que los establecimientos ecuatorianos: plantas de procesamiento, barcos, buques de carga y granjas acuícolas que busquen exportar camarones congelados

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a China, deberán registrarse en la GACC, de lo contrario no podrán exportar el producto a ese destino. Además, deben estar bajo la supervisión efectiva de las autoridades competentes de Ecuador y cumplir con las leyes y regulaciones sanitarias de los dos países. Señala que cada lote de camarón deberá tener al menos una Certificación Sanitaria original, debe cumplir todas las disposiciones y reglamentos pertinentes, así como los requisitos relevantes del protocolo. La Aduana en China por su parte, implementará la inspección y la cuarentena del producto congelado en el puesto fronterizo y solo se permitirá la entrada del camarón que esté en conformidad con los requisitos de las leyes, reglamentos y normas de China. Con la firma de este instrumento bilateral concluyó la intensa ronda de negociaciones diplomáticas y técnicas que estuvieron orientadas a identificar procedimientos más eficientes para mejorar el intercambio de información y fortalecer los procedimientos de inspección, cuarentena y verificación de requisitos sanitarios, con los que se facilitarán las operaciones comerciales de ingreso del camarón ecuatoriano al mercado chino.

Entre tanto, la CNA está efectuando preauditorías en plantas procesadoras de camarón y capacitaciones para fortalecer los planes de acción, destinados a la prevención y el control de riesgos de contagio del COVID-19 en la cadena del camarón.

“La Cámara Nacional de Acuacultura China pide a la contraparte ecuatoriana, en nuestro caso a la Subsecretaría de Calidad e Inocuidad, que mantenga un registro de todo aquel que desee exportar y los requisitos que exige la Dirección General de China son similares a los que exigimos como autoridad competente en materia sanitaria. No hay lote de camarón que parta hacia China que no vaya con un certificado sanitario emitido por la Subsecretaría de Calidad e Inocuidad”. Andrés Arens Viceministro de Acuacultura y Pesca

Luego de la aprobación del protocolo, su aplicación es obligatoria para exportar a China y las entidades encargadas de auditar el cumplimiento del protocolo son la Secretaría de Calidad e Inocuidad y el Ministerio de Salud Pública por abarcar asuntos relativos a la salud de los trabajadores.

De acuerdo a un comunicado oficial, los pasos dados para la solución del problema comercial con el camarón se han enmarcado en el espíritu de la conversación sostenida por el Canciller Luis Gallegos y el ministro de Exteriores chino, Wang Yi, el pasado 23 de julio, en ocasión del encuentro China-CELAC, oportunidad en la que coincidieron en la importancia de una solución urgente con base en el diálogo, la negociación y el mutuo respeto, dentro del marco de la Asociación Estratégica Integral suscrita entre ambos países. El viceministro de Acuacultura y Pesca, Andrés Arens, afirmó que Ecuador cumple con todos los protocolos de seguridad necesarios en sus productos alimenticios, especialmente en el camarón.

Desde su origen hace más de medio siglo, la Industria camaronera ecuatoriana cumple con estrictos protocolos de bioseguridad y sanidad animal establecidos por estándares internacionales como: Codex Alimentarius, INEN, normativas de la DG Santé de la Unión Europea y de la FDA de los Estados Unidos; sin embargo, por la emergencia generada por el COVID-19, ha reforzado sus controles en toda la cadena productiva del camarón y está respondiendo de inmediato a nuevas exigencias. El análisis de PCR al personal de las empacadoras se ha masificado, así como el reforzamiento de medidas de bioseguridad en las zonas de material de empaque y contenedores. De esta manera se contribuye con las autoridades de la Aduana de China al mejoramiento de los procesos de bioseguridad en este nuevo contexto mundial•

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Subsecretaría de Calidad e Inocuidad entidad clave para sostener las exportaciones de camarón

a Subsecretaría de Calidad e Inocuidad SCI, adscrita al Ministerio de Producción, Comercio Exterior, Inversiones y Pesca, es la entidad responsable de ofrecer las garantías sanitarias del producto ecuatoriano que tiene como destino diversos mercados en el mundo; gestiona estratégicamente los procesos de regulación, control y certificación inherentes a la sanidad de los cultivos acuícolas, la calidad e inocuidad de los productos bioacuáticos, a través de los planes de control sanitario. Daniel Pesantes, Subsecretario de Calidad e Inocuidad en entrevista para la Revista Aquacultura explicó el rol que cumple la entidad que preside para garantizar las exportaciones de camarón ecuatoriano a diferentes mercados, sobre todo a China, una vez aprobado el protocolo de bioseguridad entre ambos países para la inspección, cuarentena y requisitos sanitarios veterinarios para el camarón congelado. Explicó que la SCI verificará el cumplimiento de la implementación de los protocolos de bioseguridad destinados a la prevención y control de riesgos relacionados con el contagio del COVID-19 entre los trabajadores de la industria Acuícola y Pesquero. La constatación se realizará durante las verificaciones reagulatorias de acuerdo al cronograma establecido en el Plan Nacional de Control y/o durante verificaciones no anunciadas. Las auditorías pueden ser in situ o virtuales, de acuerdo a la ubicación del establecimiento para prevenir la exposición de los funcionarios que realizan las verificaciones a riesgos graves durante esta pandemia.

¿Qué documentos deben alistar los establecimientos? y ¿Qué aspectos fundamentales van a observar en infraestructura, procesos, protocolos de bioseguridad y manejo? El protocolo de bioseguridad que implementa cada establecimiento se basa en la realidad de cada empresa: infraestructura, sistemas implementados, procesos y procedimientos que son propios de cada una. Los documentos que deben alistar son todos aquellos que se indican en el protocolo, es decir, los procedimientos, instructivos y registros que se desprendan del documento macro que cada planta procesadora ha desarrollado como protocolo de bioseguridad.

fecha de cumplimiento de cada una. La SCI revisa el plan y constata el cumplimiento del mismo. La SCI implementó análisis de Mancha Blanca a todos los lotes exportados a China, cuando en septiembre del año pasado, el país asiático anunció por primera vez la suspensión temporal de empresas exportadoras ecuatorianas. El proceso que inició el 9 de diciembre de 2019, y el total de análisis realizados hasta julio de 2020 superó los 43.000, lo que representa un promedio de 5.000 análisis mensuales.

El establecimiento deberá tener a disposición todos lo documentos que demuestren el correcto cumplimiento de su protocolo. Luego de las inspecciones ¿En qué tiempo se emite el respectivo informe para conocimiento del establecimiento? Se aplica el mismo procedimiento que se realiza en las verificaciones regulatorias, es decir que, durante la reunión de cierre, al concluir la visita, se comunica lo encontrado y se revisa el check list con todas las observaciones. El informe se remite vía correo electrónico en las siguientes 48 horas, una vez que la información se registre en la base de datos interna de la SCI. De existir observaciones para el establecimiento ¿Qué procede? En caso de existir observaciones, el establecimiento deberá presentar el respectivo plan de acciones correctivas que incluirá las actividades a realizar, así como la

Daniel Pesantes, Subsecretario de Calidad e Inocuidad ¿Qué implicó para la SCI testear cada lote de camarón? La SCI fortaleció el Laboratorio de Ensayos de Patología Acuícola, donde se realiza el análisis de los virus que afectan al camarón. Este laboratorio está acreditado por el Servicio Ecuatoriano de Acreditación (SAE) por lo que ofrece garantías a nuestros socios comerciales al momento de recibir los

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- AGOSTO 2020 reportes de análisis y los certificados de calidad y sanitarios. La entidad incrementó el staff de técnicos del Laboratorio de Ensayos de Patología Acuícola de 8 a 19 especialistas, se realizan jornadas extendidas de trabajo; además, se incrementó notablemente la adquisición de kits para análisis, material fungible, reactivos y estamos aún en el proceso de compra de nuevos equipos de PCR y complementarios. Esta optimización se logró en el marco del “Proyecto de Mejora de la Competitividad del Sector Acuícola y Pesquero”, proyecto de inversión del MPCEIP que fue concebido con la finalidad de cumplir con el compromiso adquirido con China (de testear cada lote de camarón) y así mismo realizar las gestiones necesarias para levantar la Tarjeta Amarilla en temas de pesca. ¿Cuál es el trabajo o seguimiento que realizó la SCI con la autoridad china para cumplir todos los requisitos exigidos por ese mercado? Es un trabajo articulado entre todo el equipo del MPCEIP: SCI, Viceministerio de Acuacultura y Pesca, Viceministerio de Comercio Exterior, Viceministerio de Promoción de Exportaciones, la Oficina Comercial de Ecuador en Beijing, además de la Embajada de Ecuador en China - Cancillería y el sector privado. Hemos trabajado de manera conjunta y permanente con la Administración General de Aduanas de China (GACC) mediante llamadas y videoconferencias, entre autoridades y equipo técnico, donde se acordó realizar auditorías virtuales a los establecimientos que estaban en seguimiento para levantar las suspensiones. Estas auditorías virtuales se cumplieron de acuerdo al cronograma pactado, enviamos los planes de acción y toda la información que demuestra el cumplimiento de cada establecimiento, además hemos firmado un Memorando de Entendimiento entre las autoridades de la República Popular de China y del Ecuador para el intercambio de información, procedimientos y legislación relacionada con la inocuidad y sanidad de los productos acuícolas. La Subsecretaría de Calidad e Inocuidad fue creada mediante los Decretos Ejecutivos No. 1311 de 9 de febrero de 2017 y No. 006 de 24 de mayo de 2017, emitidos por la Presidencia de la República del Ecuador que definieron que las atribuciones y competencias oficiales referentes a control sanitario, calidad e inocuidad de los productos pesqueros y acuícolas del Instituto Nacional de Pesca (INP), fueron transferidos a la Subsecretaría de Calidad e Inocuidad del Ministerio de Acuacultura y Pesca del Ecuador, de aquel entonces. Posteriormente, el Decreto Ejecutivo No. 559, del 14 de noviembre del 2018, suscrito por el Presidente Lenín Moreno Garcés, decretó fusionar por absorción al Ministerio de Comercio Exterior e Inversiones, el Ministerio de Industrias y Productividad, el Instituto de Promoción de Exportaciones e Inversiones Extranjeras, y el Ministerio de Acuacultura y Pesca, enmarcado dentro del plan de optimización del Estado. Una vez concluido el proceso de fusión por absorción esta Cartera de Estado, modificó su denominación a Ministerio de Producción, Comercio Exterior, Inversiones y Pesca. Por su parte, la Subsecretaría de Calidad e Inocuidad se mantuvo como la Autoridad Competente en materia sanitaria de los productos pesqueros y acuícolas de exportación y de la sanidad de los cultivos acuícolas. Es importante explicar que la Subsecretaría de Calidad e Inocuidad es la autoridad sanitaria competente para los productos de la pesca y acuacultura, mientras que el Instituto Nacional de Pesca es un organismo especializado dedicado a la investigación biológica, tecnológica y económica, tendientes a la ordenación y desarrollo de las pesquerías, cuya misión es la de brindar servicios y asesoramiento al sector pesquero-acuícola a través de la investigación y evaluación científica-técnica de los recursos hidrobiológicos y sus ecosistemas para su manejo sustentable•

COVID-19

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No se tiene evidencia respecto a si el SARS-CoV-2 infecta a los animales acuáticos destinados a la alimentación o contamina sus productos Autores: Melba G. Bondad-Reantaso1,* Brett Mackinnon1 Hao Bin1,2 Huang Jie3 Kathy Tang-Nelson4 Win Surachetpong5 Victoria Alday-Sanz6 Mo Salman7 Edgar Brun8 Iddya Karunasagar9 Larry Hanson10

Keith Sumption11 Manuel Barange1 Alessandro Lovatelli1 Agus Sunarto12 Nihad Fejzic13 Rohana Subasinghe14 Árni M. Mathiesen15 Mohamed Shariff16

1 Departamento de Pesca y Acuicultura, Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura, Roma, Italia 2 Academia China de Ciencias Pesqueras, Beijing, China 3 Red de Centros de Acuicultura del Asia-Pacífico, Bangkok, Tailandia 4 Instituto de Investigación Pesquera del Mar Amarillo, Academia China de Ciencias Pesqueras, Qingdao, China 5 Departamento de Microbiología e Inmunología Veterinaria, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Kasetsart, Bangkok, Tailandia 6 Bioseguridad y Sanidad Animal, Grupo Nacional se Acuicultura, Al-Lith, Saudi Arabia 7 Instituto de Salud de la Población Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y Ciencias Biomédicas, Universidad Estatal de Colorado, Fort Collins, EE. UU. 8 Instituto Veterinario de Noruega, Oslo, Noruega 9 Universidad Nitte, Mangalore, India 10 Departmento de Ciencias Básicas, Colegio de Medicina Veterinaria, Universidad Estatal de Mississippi, Starkville, EE. UU 11 Servicio de Sanidad Animal, División de Producción y Sanidad Animal, Departamento de Agricultura y Protección del Consumidor, Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura, Roma, Italia 12 CSIRO Salud y Bioseguridad, Centro Australiano para la Preparación Contra Enfermedades, Geelong, Australia 13 Facultad de Veterinaria, Departamento de Epidemiología, Universidad de Sarajevo, Bosnia y Herzegovina 14 FutureFish, Sheffield, Reino Unido 15 Clima y Recursos Naturales, Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura, Roma, Italia 16 Departmento de Estudios Clínicos Veterinarios, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Putra Malaysia, Selangor Darul Ehsan, Malasia

Traducción: Macarena Paz Brayson Parada Editorial: Asian Fisheries Science Melba.Reantaso@fao.org

an surgido inquietudes con relación a los animales acuáticos utilizados como alimento que son transmisores de la enfermedad coronavirus (COVID-19) a los humanos. Entre estos animales se incluyen peces de aleta (por ejemplo, carpa, bagre, mero, salmón, etc.), crustáceos (por ejemplo, cangrejo, langostino de agua dulce, camarón, etc.) y moluscos (por ejemplo, abulón, ostra, etc.) 1; los anfibios (por ejemplo, la rana) también se incluyen en este debate. Los primeros informes indicaban que el COVID-19 se originó en un mercado de animales vivos y de productos del mar en Wuhan, China (Jiang et al., 2020). En algunos países se ha reportado una disminución en el consumo de animales acuáticos destinados a la alimentación, en parte debido a ideas erróneas sobre el riesgo de transmisión viral. El coronavirus tipo 2 del síndrome respiratorio agudo severo (SARSCoV-2) es el agente causante del COVID-19 en los seres humanos (OMS, 2020). En este documento se presentan los resultados de un grupo de especialistas en salud de animales acuáticos, acuicultura, pesca, seguridad alimentaria y veterinarios que participaron en un debate para comprender el riesgo del SARS-CoV-2 sobre la salud de los animales acuáticos destinados a la alimentación y la seguridad de sus productos.

Enfermedades zoonóticas asociadas a animales acuáticos destinados a la alimentación Las enfermedades zoonóticas de los animales acuáticos destinados a la alimentación son causadas por bacterias

o parásitos (Boylan, 2011; Haenen et al., 2013). Las enfermedades en los humanos son principalmente de origen alimentario, como la salmonelosis y la vibriosis, que se producen por la ingestión de tejido de pescado crudo o poco cocido. Sin embargo, algunas bacterias patógenas asociadas al pescado son oportunistas y pueden transmitirse a los seres humanos (especialmente a aquellos con inmunosupresión) a través del contacto con heridas de la piel (ej. Mycobacterium marinum, Vibrio vulnificus) o la ingestión de agua contaminada (ej. Vibrio cholerae). Se ha reportado que más de 50 especies de helmintos zoonóticos en peces infectan a los humanos (Deardorff, 1991; Shamsi, 2019). Hasta ahora, no se ha informado de ningún virus que infecte a los peces que suponga un riesgo para la salud humana (Boylan, 2011; Woolhouse et al., 2012). Los virus son agentes infecciosos submicroscópicos que se replican sólo dentro de las células vivas de su huésped. Cuando no están dentro de una célula infectada ni en el proceso de infección de una célula, los virus existen en forma de partículas independientes, o viriones. Estos viriones, que son formas completas e infecciosas de un virus fuera de una célula huésped, se componen de: 1) material genético moléculas de ADN o ARN que codifican la estructura de las proteínas por las que actúa el virus; y 2) la cápside - proteína vírica de la célula que rodea y protege el material genético. Algunos virus también están cubiertos por una membrana lipídica (envoltura vírica), generalmente derivada de las membranas de la célula huésped.

COVID-19

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SARS-CoV-2 y animales acuáticos destinados a la alimentación El SARS-CoV-2 pertenece a la familia Coronaviridae y al género Betacoronavirus (OMS, 2020). Los cinco géneros de la familia de los coronavirus infectan sólo a aves y mamíferos (Hemida y Ba Abduallah, 2020). Específicamente, se ha reportado que los betacoronavirus sólo infectan a los mamíferos. Los virus que afectan a los principales animales acuáticos destinados a la alimentación son muy diversos y pertenecen a múltiples géneros dentro de más de 20 familias de virus (ver Tabla 1); ninguno de ellos pertenece a la familia Coronaviridae. La Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE) ha estandarizado los criterios para evaluar si una especie de animal acuático es susceptible de ser infectada por un patógeno específico (OIE, 2019a). El SARS-CoV-2 ataca principalmente a las vías respiratorias superiores e inferiores, siendo la patología de mayor consecuencia aquella que afecta al pulmón. Los peces no tienen pulmones, con la excepción de los peces pulmonados2, y por lo tanto no son susceptibles al virus. Los peces respiran por las branquias que extraen el oxígeno disuelto en el agua. La especificidad del huésped del SARS-CoV-2 y de coronavirus similares está determinada en gran medida por el uso de receptores celulares específicos que rigen la entrada a las células. En el ciclo de vida viral, la etapa

más temprana de la infección es la entrada viral, en la que el virus entra en contacto con una célula huésped específica e introduce material viral en la célula. Antes de la entrada, el virus debe adherirse a una célula huésped. La adhesión se logra cuando proteínas específicas de la cápside o la envoltura viral se unen a proteínas específicas llamadas proteínas receptoras en la membrana celular de la célula blanco. La enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2), que se encuentra en las células humanas, es la proteína receptora que sirve como principal punto de entrada para que los coronavirus, incluido el SARS- CoV-2, entren en la célula huésped. La ACE2 se expresa ampliamente en el reino animal y su estructura está muy conservada, es decir, relativamente inalterada en el árbol filogenético. La comparación del receptor humano del ACE2 con el de un pez de aleta, por ejemplo, mostró un alineamiento de secuencia de aminoácidos de sólo el 59% (Chen et al., 2020). Por lo tanto, la muy baja similitud genética de los receptores ACE2 anula la posibilidad de que el virus infecte a los animales acuáticos destinados a la alimentación. El SARS-CoV-2 tendría que sufrir mutaciones para poder adherirse a las células de estos animales. Además, los animales acuáticos destinados a la alimentación no tienen las condiciones de huésped necesarias para apoyar la réplica del SARS-CoV-2. Por ejemplo, suponiendo que el virus se haya adherido a una célula de pez y haya entrado en ella, este virus no está optimizado para utilizar la maquinaria de las células de peces (es decir, las enzimas de transcripción y traducción, los factores, etc.) para replicarse y ensamblarse. Además, el virus ha evolucionado para evadir las defensas innatas de los mamíferos, que son diferentes de las de los peces, y cualquier posible infección sería bloqueada por las defensas de los animales acuáticos. Actualmente, no existen evidencias que sugieran que el nuevo coronavirus SARSCoV-2 pueda infectar a los animales acuáticos destinados a la alimentación. Por lo tanto, los animales acuáticos destinados a la alimentación no desempeñan un papel epidemiológico en la propagación del COVID-19 a los seres humanos.

Contaminación de Superficies con SARS-CoV-2 El SARS-CoV-2 se transmite entre los seres humanos por medio de gotitas infecciosas que contienen el virus (OMS, 2020). El virus se puede propagar a través del contacto con aerosoles virales o superficies contaminadas (fómites), como las perillas de las puertas y los interruptores de la luz. Los animales acuáticos destinados a la alimentación y sus productos pueden, al igual que otras superficies, contaminarse potencialmente con el SARS-CoV-2 cuando son manipulados por personas infectadas y que liberan activamente el virus. Los datos actuales sugieren que el número de partículas virales expuestas a un individuo (dosis viral) o presentes en un individuo (carga viral) puede estar relacionado con la gravedad de la enfermedad (Auwaerter, 2020; Heneghan et al., 2020). La tasa de liberación del SARS-CoV-2 puede variar considerablemente entre los portadores infectados. Por ejemplo, los títulos virales son más altos durante las primeras etapas de la infección. El tiempo de supervivencia de un virus fuera de un huésped vivo puede variar de horas a muchos días dependiendo del tipo de virus, la superficie y las condiciones ambientales. Si bien se publicaron datos en las primeras etapas respecto a la supervivencia del SARSCoV-2 (van Doremalen et al., 2020), estos aún están en proceso de elaboración. No se dispone de datos sobre la supervivencia del virus en las superficies de los mariscos. No obstante, con la manipulación y la sanitización adecuada de los alimentos, la probabilidad de que los animales acuáticos y sus productos se contaminen con el SARSCoV-2 debiese ser insignificante. Incluso si el pescado o los productos de pescado se contaminan con las gotas de un manipulador infectado, los coronavirus son termolábiles y no soportan las temperaturas normales de cocción (>70 °C) (FAO, 2020b). Por lo tanto, estos animales y sus productos son seguros para su consumo siempre que se preparen y sirvan con las medidas de higiene y seguridad alimentaria habituales (Codex Alimentarius, 2020). Las medidas de higiene general que siguen las recomendaciones de

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Tabla 1. Principales virus de importantes animales acuáticos destinados a la alimentación, incluidos los publicados por la OIE (OIE, 2019).

* Las enfermedades causadas por estos virus son consideradas de importancia regional en la Red de Centros de Acuicultura del Asia – Pacífico y se incluyen en el sistema de reporte Trimestral de Enfermedades de Animales Acuáticos.

la Organización Mundial de la Salud (OMS, 2020) incluyen el lavado de manos con agua y jabón después de tocar los animales y sus productos.

Conclusiones

El COVID-19 y Sistemas Alimentarios relacionados con la Pesca y la Acuicultura.

•No se tiene evidencia que el SARS-CoV-2, el cual ocasiona la enfermedad del coronavirus (COVID-19) en los seres humanos, infecte a los animales acuáticos utilizados como alimento ni que contamine sus productos.

La pandemia del COVID-19 puede repercutir indirectamente en los sistemas alimentarios mundiales de la pesca y la acuicultura debido a las variaciones en la demanda de los consumidores, el acceso a los mercados o los problemas logísticos (es decir, transporte, restricciones fronterizas) (FAO, 2020a). Esto puede tener efectos adversos en los medios de vida, la seguridad alimentaria y la nutrición de las poblaciones que dependen del pescado y sus productos como fuente de alimentos o ingresos.

Sobre la base de los conocimientos actuales y la evidencia de apoyo, se puede concluir que:

•Los animales acuáticos destinados a la alimentación no desempeñan un papel epidemiológico en la propagación del COVID-19 a los seres humanos; por lo tanto, su consumo presenta un beneficio adicional, ya que se sabe que son una fuente saludable de proteína animal•

Publicación de Asian Fisheries Science Fecha: 2020-04-22 Volumen: 33 Páginas: 74-78 Link de acceso: https://www.asianfisheriessociety.org/publication/ downloadfile.php?id=1291&file=Y0dSbUx6QTJPRFF5Tnpjd01ERTFPRGMyTkRnM01qY3VjR1Jt&dldname=Viewpoint:%20SARS-CoV20-2inV20(%20SARS-CoV20Cain%20(%20SARS-CoV20Cain%20% 20Not% 20Known% 20to% 20Infect% 20Acuatic% 20Food% 20Animals% 20Nor% 20Contaminate% 20Their% 20Products% 20 (Revisado% 2023% 20Abril% 202020) .pdf

COVID-19

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Seguridad de alimentos, cadena de suministro de alimentos y ambiente durante la pandemia del COVID-19 Autores: Myrto Rizouᵃ Ioannis M. Galanakisᵃ Turki M.S. Aldawoudᵇ Charis M. Galanakis ᵃ,ᵇ,ͨ ,* ᵃ Departamento de Investigación e Innovación, Laboratorios Galanakis, Chania, Grecia ᵇ Escuela de Ciencias, Universidad King Saud, Riyadh, Arabia Saudita ͨ Grupo De Recuperación de Residuos de Alimentos, Asociación de Alimentos de Iseki, Viena, Austria cgalanakis@chemlab.gr

e sabe que el nuevo coronavirus SARSCoV-2 causa COVID-19, que es una enfermedad fácilmente transmisible de persona a persona a través de la tos, el estornudo, gotas respiratorias o la exhalación (ECDC, 2020a). Los síntomas de COVID-19, que aparecen aproximadamente 5 días después de la infección, son similares a la gripe (por ejemplo, fiebre y tos), pero también incluyen otros como dolor de garganta, dolores musculares (CDC, 2020a) y pérdida del gusto u olfato (Bienkov, 2020). Del COVID-19 tiene una presentación clínica y características similares con dos enfermedades bien conocidas del tracto respiratorio inferior como el Síndrome Respiratorio Agudo Severo: “SARS-CoV” y el Síndrome Respiratorio del Medio Oriente: “MERS” (Das, 2020). Los coronavirus circulan entre los animales y, en algunos casos, pueden infectar a los humanos. De hecho, MERS, SARS-CoV y SARS-CoV-2 pueden atribuirse a una transmisión zoonótica (Das, 2020; RodriguezMorales et al., 2020). Sin embargo, el SARS-

CoV-2 es el único con potencial pandémico (Mackenzie & Smith, 2020). El consumo de mamíferos exóticos como los murciélagos, que comprenden un vasto reservorio de virus relacionados con el SARS-CoV, aumenta la posibilidad de que surjan nuevos virus de animales o entornos relevantes (Cheng et al., 2007). Las primeras infecciones de SARS-CoV2 se asociaron con el mercado de mariscos Huanan (Li et al., 2020), donde se venden murciélagos vivos, sacrificados, serpientes, marmotas, faisanes y órganos de conejos y ciervos (Jalava, 2020). Zhou et al. (2020) señalaron a los murciélagos como una posible fuente de SARS-CoV2 ya que este último tiene una similar secuencia de genes (hasta 96.2%) con el coronavirus que existe en los murciélagos. Sin embargo, otros animales también pueden ser huéspedes naturales del SARS-CoV2. Por ejemplo, el MERS-CoV y SARS-CoV pueden transmitirse a humanos desde los camellos y gatos de civeta, respectivamente (ECDC, 2020b). El SARS-CoV-2 se identificó en diciembre de 2019, y aproximadamente 3 meses después, el COVID-19 es declarado por la OMS como una pandemia (OMS, 2020f). El 30 de mayo de 2020, la pandemia del COVID-19 se había extendido a más de 5.9 millones de personas en más de 188 países, provocando más de 365.000 muertes (Dong et al., 2020) y el confinamiento de un tercio de la población mundial (Kaplan et al., 2020). Hasta ahora (30 de mayo de 2020), no se ha desarrollado ningún tratamiento universal, cura, o vacuna para la enfermedad del COVID-19. La comunidad científica, autoridades, inspectores de seguridad alimentaria y los profesionales de la industria alimentaria están buscando información sobre cómo manejar

la pandemia, por ejemplo, comprender las rutas de transmisión y desarrollar tratamientos y vacunas. También es esencial desarrollar diagnósticos innovadores para SARS-CoV-2 no solo para personas infectadas, sino también para alimentos, superficies y ambientes circundantes. Este artículo explora la posibilidad de transmisión del COVID-19 a través de la cadena de suministro de alimentos antes de discutir el desarrollo de herramientas de detección respectivas para aplicaciones de seguridad alimentaria y ambiental.

Seguridad de alimentos y medidas en la cadena de suministro de alimentos La seguridad alimentaria se encuentra entre los cuatro pilares de los sistemas alimenticios afectados en la era de la pandemia de coronavirus (COVID-19) (Galanakis, 2020). La Fig. 1 resume las medidas de seguridad propuestas para el sector de alimentos durante la pandemia (Fig. 1A), enfatizando las precauciones más críticas necesarias para cada etapa de la cadena de suministro de alimentos desde la granja hasta la mesa (Fig. 1B). Las acciones se agrupan en condiciones médicas para los trabajadores (por ejemplo, quedarse en casa si están enfermos), higiene personal (por ejemplo, lavarse las manos), desinfección de superficies, mantener limpios los entornos de trabajo, preparación y entrega de alimentos y, por último, distanciamiento social. Aunque estas medidas se aplican en las cinco etapas de la cadena alimentaria, la mayoría de las precauciones son críticamente necesarias en las últimas etapas (por ejemplo, consumo).

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Fig. 1. Medidas de seguridad para el sector alimentos durante la pandemia (Fig. 1A) y las más críticas para cada etapa de la cadena de suministro de alimentos desde la granja hasta la mesa (Fig. 1B).

Esta observación se genera por el hecho de que cuanto más nos acercamos hacia la etapa final de la cadena de suministro de alimentos, más personas (posibles fuentes de infección) están involucradas. Además, es de suma importancia para el sector de alimentos garantizar que los alimentos que llegan al plato de los consumidores sean seguros y que no pongan en riesgo su salud en ninguna etapa del proceso (por ejemplo, incluso en el momento de la entrega). Además, existen medidas de precaución (por ejemplo, durante la preparación de alimentos) que se aplican principalmente en la etapa de consumo. Por ejemplo, al comienzo de la crisis, muchos restaurantes, cafeterías y autoridades de salud en Europa Central dejaron de servir carnes y filetes poco cocidos como medida de precaución general (Euractiv, 2020) contra virus y patógenos a pesar de que la transmisión de SARS-CoV-2 a través de alimentos no está respaldado por evidencia científica. Además, en los Estados Unidos, algunas de las mayores

empresas de empaque y procesamiento de carne anunciaron cierres de plantas (Reiley, 2020). No obstante, estas plantas cerraron cuando los empleados dieron positivo para COVID-19, no por la transmisión del virus de carne cruda; es por eso que la FDA no se anticipó a que productos alimenticios sean retirados del mercado (FDA, 2020c). Unas semanas más tarde, la mayoría de los restaurantes y cafeterías de todo el mundo cierran y permanecen funcionando solo para servicios de comida para llevar o de entrega. En esta línea, la transmisión del SARS-CoV-2 es monitoreada de cerca por las autoridades de seguridad alimentaria de todo el mundo, como la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA) y la Administración de Medicamentos y Alimentos de los Estados Unidos (FDA). Ambas organizaciones acordaron que hasta ahora (el 30 de mayo de 2020), no hay evidencia de que la comida sea una ruta probable de transmisión; sin embargo, continúan recopilando información

relacionada con la posible persistencia del virus en alimentos. La comida no era una ruta de transmisión en brotes anteriores (MERS y SARS-CoV) (EFSA, 2020; FDA, 2020c), aunque se sabe que las condiciones ácidas del estómago (pH < 3.5) inactivan el virus del SARS-CoV (Darnell et al., 2004). Tanto el MERS como el SARSCoV, que posiblemente se originaron de los murciélagos, cruzaron la barrera de las especies e infectaron a los humanos a través de un huésped intermedio que podría ser un animal doméstico, un animal salvaje o un animal salvaje domesticado, lo que sugiere que la transmisión del SARS-CoV- 2 podría suceder de manera similar (Lu, Wang y Gao, 2015; OMS, 2020d). En base a eso, algunos hábitos alimenticios y de cocina pueden ser un factor de riesgo para el resurgimiento del virus en la población humana (Cheng et al., 2007). El coronavirus puede llegar a productos

COVID-19 alimenticios frescos (por ejemplo, verduras, frutas o panadería) o empaques de alimento a través de una persona infectada que estornuda o tose directamente sobre ellos. La transmisión parece ser posible si el virus se transfiere poco después a través de las manos o al alimento a las membranas mucosas de la boca, la garganta o los ojos (BfR, 2020). Como mostró un estudio, el contacto físico y el compartir comida durante una conferencia resultó en un grupo de pacientes con COVID-19 en Singapur (Pung et al., 2020). De manera similar a los coronavirus SARS-CoV y MERS, los estudios para SARSCoV-2 mostraron que el virus es altamente estable a 4 °C, y se espera que tenga un comportamiento similar a sus predecesores a temperaturas de congelación, lo que significa que podría seguir siendo infeccioso en -20 °C por hasta 2 años (OMS, 2020b). Sin embargo, como se demostró en estudios anteriores, los coronavirus son termolábiles: el SARS-CoV se puede inactivar después de una incubación durante 15 minutos a 75 °C, mientras que el MERS se inactiva después de una incubación durante 1 minuto a 65 °C (Darnell et al., 2004; Leclercq et al., 2014). De manera similar, se encontró que el SARSCoV-2 se inactiva después de 5 minutos de incubación a 70 °C (Chin et al., 2020). Estos resultados sugieren que las temperaturas de cocción normales (70°C) son suficientes para la inactivación viral, pero que la transmisión en alimentos congelados aún puede ser posible; es por esto que el lavado minucioso de las manos después de manipular alimentos crudos es imperativo. Además, la probabilidad es aún menor para alimentos (empacados o no) que se envían durante días a temperatura ambiente, congelados o refrigerados (BfR, 2020). Además, de acuerdo al Centro para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) y a la Agencia de Protección Ambiental (EPA), beber agua como los alimentos, no se considera una forma de propagación del SARS-CoV-2 y los métodos típicos de tratamiento de agua son suficiente contra el virus (CDC, 2020b; EPA, 2020). Para minimizar el riesgo de tocar alimentos potencialmente expuestos a coronavirus, el manejo de empaques y productos debe

- AGOSTO 2020 ser seguido por el lavado de manos o uso de desinfectante de manos (Seymour et al., 2020). La FDA también ha sugerido que las buenas prácticas de higiene, así como la limpieza y desinfección de las superficies de cocinas y restaurantes, son medidas de precaución válidas en comparación con el monitoreo ambiental del SARS-CoV-2 (FDA, 2020a). Los grifos, las manijas de las puertas, las manijas del refrigerador y otras áreas de “alto contacto” deben estar sujetas a una limpieza frecuente y efectiva. Se debe alentar al personal involucrado en la preparación de los alimentos a adoptar prácticas de higiene estándar utilizadas para controlar virus y bacterias transmitidas por los alimentos. Esto incluye el manejo cuidadoso de productos animales crudos para evitar la contaminación cruzada con otros alimentos, lavar las verduras y frutas antes de comer, cocinar bien los huevos o carne y cubrirse la nariz y la boca al estornudar o toser, entre otros (Safefood, 2020). Dado que la evidencia actual muestra que las personas sintomáticas comprenden el riesgo más significativo de transmisión del SARSCoV-2, las empresas de alimentos deben seguir las recomendaciones y políticas del departamento de salud del empleado para mantener a esas personas en casa (Seymour et al., 2020). El uso de guantes y máscaras en la industria alimentaria también puede ser útil para reducir la propagación del COVID-19, pero solo si se usa adecuadamente (OMS, 2020b). La comida para llevar, el “drivethru” y el servicio a domicilio de alimentos también se consideran buenas prácticas de gestión de riesgos, especialmente para las poblaciones de alto riesgo (por ejemplo, adultos mayores), ya que se reduce el número de puntos de contacto (Universidad de Florida, 2020). Los consumidores y las personas también deben lavarse bien las manos antes de comer, así como después de cambiar el pañal de un niño, tocar animales o usar el baño (OMS, 2020e). ¿Serían adecuadas estas medidas en el período posterior al aislamiento? A partir del 21 de abril de 2020, se aplican reglas estrictas sobre la movilidad de las personas para limitar la propagación del COVID-19. Estas restricciones en la libertad de las personas y la interrupción a establecimientos de comida brindan aún más razones para garantizar que todos tengan derecho a

una alimentación adecuada y a la salud. Por otro lado, mientras que las tiendas y supermercados se han convertido en un barómetro de la escala de la pandemia, la compra de alimentos es una de las únicas prácticas que la gente conocía de la vida normal (UNSCN, 2020). Después del aislamiento, las empresas de servicios de alimentos como último actor de la cadena de suministro de alimentos deberán operar nuevamente bajo presión, priorizando la salud de los trabajadores del sector y sus resultados (FAO, 2020). Al mismo tiempo, tendrán que enfrentar la fobia de los consumidores por la transmisión. Las condiciones de seguridad e higiene de las fuentes de alimentos de origen animal durante la venta al por menor y la cocina en los grandes mercados locales, y especialmente en los “mercados húmedos”, serán un desafío para controlar de las autoridades. Sin embargo, las leyes y reglamentos sobre seguridad en los mercados de alimentos deben ser reevaluados ya que las malas prácticas, como el comercio de vida silvestre, continúan practicándose en sitios inadecuadamente regulados en todo el mundo (Galanakis, 2020; Yuan et al., 2020). Teniendo en cuenta el status quo de la seguridad alimentaria dentro de la pandemia del COVID-19 y el próximo período posterior al aislamiento, está surgiendo la necesidad de desarrollar herramientas precisas y rápidas para la detección de SARS-CoV-2 en los alimentos y el entorno laboral.

Seguridad ambiental El papel del ambiente en la pandemia de lCOVID-19 indica las diversas necesidades de investigación aplicada que deben cumplirse para controlar eficazmente los brotes de nuevos virus (Wigginton y Boehm, 2020). Una vez que se propagan en el aire, las partículas de virus están expuestas a diferentes condiciones ambientales (por ejemplo, temperatura del aire y humedad relativa) influyendo en sus tasas de inactivación (Casanova, Jeon, Rutala, Weber y Sobsey, 2010; Casanova, Rutala, Weber y Sobsey , 2010; Kim et al., 2018). Otros factores, como la cepa específica del virus y el tipo de superficie, juegan un papel crucial (OMS, 2020c). Sin embargo, especialmente para ambientes construidos, la desinfección adecuada en áreas de baño, la desinfección de superficies, el espacio abierto y ventanas

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- AGOSTO 2020 los clientes (Fig. 2) (Lu et al., 2020). Aunque no estoy seguro de cuánto tiempo sobrevive el SARS-CoV-2 en el aire y las superficies, parece posible que se comporte como otros coronavirus, por ejemplo, el del SARS-CoV (van Doremalen et al., 2020). Un reciente estudio que discute sobre la supervivencia de los coronavirus humanos en superficies, observó una gran variabilidad de 2 horas a 9 días (Kampf et al., 2020). Además, según un estudio reciente realizado por van Doremalen et al. (2020), el SARS-CoV-2 sigue siendo viable en aerosoles durante 3 horas, pero aún se detecta en superficies incluso después de 72 horas. Sin embargo, después de un tiempo específico, la carga del virus se reduce de manera importante, por ejemplo, la viabilidad del SARS-CoV-2 en acero inoxidable y plástico es de ~5.6 y 6.8 horas, respectivamente. Por el contrario, no se midió el SARS-CoV-2 viable después de 4 y 24 horas de aplicación en cobre y cartón, respectivamente. Se podría lograr una inactivación efectiva del SARS-CoV-2 utilizando desinfectantes comunes (por ejemplo, 62-71% de etanol, 0.5% de peróxido de hidrógeno o 0.1 de hipoclorito de sodio l) (Kampf et al., 2020). El patrón de desprendimiento del ARN del SARS-CoV-2 sugiere que el virus se está replicando en el tracto gastrointestinal (Woelfel et al., 2020) y, por lo tanto, se puede encontrar en muestras de heces similares al SARS-CoV (Leung et al., 2003). Además, recientes hallazgos sugieren que el SARS-CoV-2 es capaz de infectar organoides intestinales de humanos y murciélagos (Zhou et al., 2020). Una vez en aerosol, las aguas residuales contaminadas con el virus podrían exponer a un gran número de personas (NIVA, 2020). El SARS-CoV-2 se detectó recientemente en muestras de aguas residuales de diferentes ciudades de los Países Bajos (Medema et al., 2020) en España (Randazzo et al., 2020) y Australia (Ahmed et al., 2020). En cualquier caso, se necesitan más estudios para explorar la supervivencia del SARSCoV-2 en el agua o alcantarillado. El SARSCoV-2 puede inactivarse significativamente más rápido que los virus entéricos humanos sin envoltura (por ejemplo, rotavirus, hepatitis A, norovirus y adenovirus) que se sabe, son transmitidos por el agua. El pH alto o bajo,

Fig. 2. La disposición de mesas y el flujo del aire acondicionado en un sitio del brote del COVID-19 en un restaurante ubicado en Guangzhou (China). Las sillas rojas indican el asiento de futuros casospacientes, mientras que la silla amarilla indica el caso índice. Adaptado de Lu et al. (2020). (Para la interpretación de las referencias de color en la leyenda de la figura, se remite al lector a la versión web de este artículo).

de ventilación, pueden limitar efectivamente la concentración de SARS-CoV-2 (Dietz et al., 2020; Liu et al., 2020). Esta práctica también está respaldada por un estudio realizado en un restaurante dentro de un edificio sin ventanas en China. En este estudio, 10 de 83 clientes se enfermaron con COVID-19. Al mismo tiempo, las muestras de frotis del aire acondicionado del restaurante que se testearon con

una reacción en cadena de polimerasa cuantitativa en tiempo real para SARS-CoV-2 resultaron ser negativas. La transmisión aérea se consideró como el origen del brote. Sin embargo, como las distancias entre el primer paciente documentado (Paciente A1) y otras personas afectadas fueron mayores de 1 m, se subrayó que la circulación del aire causada por el aire acondicionado podría haber ayudado a la transmisión de gotas y la propagación del COVID-19 entre

COVID-19 la luz solar, el calor y los desinfectantes (por ejemplo, cloro) facilitan su eliminación (OMS, 2020e). Al momento, los entornos más expuestos al coronavirus son los entornos sanitarios. Hay un número creciente de estudios que muestran una contaminación ambiental extensa en las habitaciones de los pacientes con COVID-19 (Guo et al., 2020; Ong et al., 2020; Santarpia et al., 2020; Yung et al., 2020). Dada la persistencia ambiental del virus (van Doremalen et al., 2020), medidas de distanciamiento social y cuarentena de las personas expuestas se consideran imperativas no solo en los hospitales sino también en entornos que no son de atención médica, como los lugares de trabajo y las escuelas. Se ha estudiado la importancia de estas medidas con respecto a la pandemia de gripe (Fong et al., 2020). Con respecto al COVID-19, un estudio reciente demostró a través de modelos matemáticos, la dinámica de transmisión del SARS-CoV-2 en el período post pandemia y sugirió que puede ser necesario un distanciamiento social prolongado o periódico durante los próximos años (Kissler et al., 2020).

Detección del SARS-CoV-2 en alimentos, en superficies y en el ambiente Como el interés global por el coronavirus se centra en la salud humana, aún no se conoce el impacto total de la pandemia en la cadena de suministro de alimentos y las industrias de alimentos. Sin embargo, los efectos adversos en los sistemas alimentarios y las personas a lo largo de la cadena de suministro de alimentos ya son evidentes. Por esta razón, el desarrollo de herramientas de detección de SARS-CoV-2 que se pueden aplicar a los alimentos es esencial para garantizar la seguridad de los alimentos y evitar la ruptura de las cadenas de suministro de alimentos. La detección confiable de virus en los alimentos sigue siendo un desafío debido a la distribución heterogénea de partículas virales, la baja carga viral y el aislamiento tedioso no óptimo (Bosch et al., 2018). Para este propósito, se han sugerido diferentes metodologías, como ensayos de detección molecular basados en RT-qPCR (Bosch et al., 2018), ensayo inmunoabsorbente libre de enzimas (Wu et al., 2016) y nano-ELISA (Wu et al., 2019). Actualmente, los dos métodos de prueba de laboratorio predominantes para la detección

- AGOSTO 2020 Tabla 1. Pruebas que se utilizan para el diagnóstico de SARS-CoV-2

de SARS-CoV-2 son la prueba molecular, que se utiliza para identificar la presencia del virus y las pruebas serológicas, que detectan los anticuerpos contra el virus o los antígenos virales (Tabla 1). Según la OMS, el método recomendado para el diagnóstico de COVID-19 en pacientes es la detección del ARN del virus en muestras del tracto respiratorio mediante pruebas moleculares, como la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativo (RTqPCR) con confirmación con secuenciación cuando sea necesario (OMS, 2020c). Sin embargo, este método es solo sensible al 66–80% y tiene una alta tasa de resultados falsos negativos. Este resultado puede atribuirse a errores de muestreo o pruebas al comienzo de la enfermedad, donde la carga viral está por debajo del nivel de su detección (Kakodkar y Kaka, 2020). Además de las pruebas de diagnóstico molecular, se han desarrollado pruebas serológicas realizadas en muestras de suero sanguíneo para la identificación del SARSCoV-2 a través de la detección de anticuerpos contra el virus. La mayoría de los estudios sugieren que la respuesta inmune al virus se inicia al menos 7 días después del inicio de los síntomas (Chen y Li, 2020; Zhao et al., 2020). Aunque existen pruebas aprobadas para fines de diagnóstico (FDA, 2020b; JHCHS, 2020), la OMS no recomienda el uso de ensayos serológicos para el diagnóstico de

COVID-19. Sin embargo, podría usarse para controlar la inmunidad de la población (OMS, 2020a). Otro tipo de prueba de diagnóstico para COVID-19 es la prueba de antígeno, que detecta las proteínas virales (ECDC, 2020a). De manera similar a una reacción en cadena de la polimerasa (PCR), las pruebas de antígeno generalmente se llevan a cabo en muestras del tracto respiratorio y proporcionan información sobre la presencia del virus; por lo tanto, son apropiados para el diagnóstico de una fase aguda. La eficiencia de este tipo de prueba puede verse afectada por la carga viral durante la infección (Udugama et al., 2020). Muchas pruebas de diagnóstico rápido desarrolladas actualmente para COVID-19 se basan en pruebas de antígeno (JHCHS, 2020). Considerando la detección de SARSCoV-2 en alimentos, superficies y ambientes circundantes, el desafío podría ser aún más significativo. Actualmente, no se han realizado estudios o se han desarrollado pruebas para la detección del virus en alimentos, ya que no hay evidencia de que el coronavirus se transmita a través de alimentos (EFSA, 2020). Sin embargo, como se discutió anteriormente, la transmisión puede ser posible desde los trabajadores infectados a través de las superficies y el entorno circundante de la industria alimentaria y la cadena de suministro de alimentos. Con respecto a la detección de

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SARS-CoV-2 en muestras ambientales, se han realizado varios estudios principalmente en ambientes construidos. En estos estudios, se utilizó el método RT-qPCR para la detección del virus en todos los fómites muestreados (Guo et al., 2020; Li et al., 2020; Yung et al., 2020). Aunque estos son resultados preliminares, algunas compañías ya han desarrollado kits comercialmente disponibles para la detección de SARS-CoV-2 en hisopos ambientales (Chai, 2020; Eurofins, 2020) u ofrecen kits de muestreo para superficies (Hawk Environmental, 2020; Tentamus, 2020). Sin embargo, especialmente los kits de muestreo son bastante caros, lo que dificulta su amplia aplicación en grandes instalaciones del sector de alimentos. Otro enfoque que parece atraer el interés de los investigadores es la epidemiología basada en aguas residuales (WBE). En particular, el monitoreo de virus ha demostrado ser eficiente para propósitos de alerta temprana, por ejemplo, mediante la detección de la presencia de patógenos antes de la expresión de síntomas en la población. El monitoreo cuantitativo de los virus en aguas residuales municipales puede permitir el modelado de la pandemia en tiempo real (NIVA, 2020). Como el SARS-CoV-2 viable ha sido aislado de las heces y la orina de personas infectadas (Holshue et al., 2020; Wang et al., 2020), se cree que las pruebas de las aguas residuales con kits de papel pueden conducir a la detección de posibles portadores de enfermedades, incluso si son asintomáticos. Este método puede proporcionar una detección rápida de áreas específicas y ayudar a las autoridades a tomar las medidas apropiadas (Mao et al., 2020). El desarrollo de metodologías de detección de SARS-CoV-2 en muestras de aguas residuales podría ser útil en el período post aislamiento.

Conclusión La pandemia de COVID-19 generó una nueva era en la cadena de suministro de alimentos y la industria alimentaria. Todavía descubrimos consecuencias a la humanidad, la economía y la seguridad alimentaria (Galanakis, 2020). Los investigadores y profesionales del sector alimentos tienen muchos desafíos por delante, por ejemplo, garantizar la inocuidad de alimentos, detectar el SARS-CoV-2 en entornos donde se producen, procesan y entregan alimentos, desinfectar adecuadamente las superficies y los entornos de trabajo, entre otros. Mientras pasemos a las últimas etapas de la cadena de suministro, se necesitan más medidas ya que hay más personas involucradas en el proceso. En este momento, la posibilidad de transmisión de COVID-19 a través del sector alimentario se considera insignificante, mientras que el rastreo de SARS-CoV-2 en el sector alimentario y entornos circundantes no se considera una prioridad para las autoridades. Sin embargo, pasar a una rutina posterior al aislamiento, la vigilancia sobre la salud pública dependerá cada vez más del desarrollo de herramientas bioanalíticas relevantes. Este enfoque puede no solo referirse a la detección de poblaciones sino también al monitoreo de alimentos, superficies y entornos circundantes•

PATOLOGÍA

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Detección del Virus iridiscente decápodo 1 con sonda TaqMan con PCR en tiempo real Autores: Liang Qiua Xing Chena Xiao-Meng Guoa,b Wen Gaoa,c Ruo-Heng Zhaoa Qing-Li Zhanga Bing Yanga Jie Huanga,b,c,* Laboratorio de Ciencia de la Pesca Marina y Procesos de Producción de Alimentos, Laboratorio Piloto Nacional de Ciencia y Tecnología Marina (Qingdao), Laboratorio de Control de Enfermedades de Organismos para Maricultura, Ministerio de Agricultura y Asuntos Rurales, Laboratorio de Qingdao Epidemiologia y Bioseguridad para la Maricultura, Instituto de Investigación Pesquera Yellow Sea, Academia China de Ciencias Pesqueras, Qingdao 266071, China b Escuela de Ciencias e Ingeniería Marina, Universidad Agrícola de Qingdao, Qingdao 266109, China c UShanghai Ocean University, Shanghai 201306, China a

huangjie@ysfri.ac.cn

na enfermedad emergente ha causado una alta mortalidad y graves pérdidas de camarón, langostino y cangrejo de río cultivados en China. El agente etiológico de la nueva enfermedad es un virus de ADN bicatenario llamado Virus iridiscente decápodo 1 (DIV1) (Chen et al., 2019a; Qiu et al., 2017; Qiu et al., 2019a; Xu et al., 2016). El DIV1 fue descrito por primera vez por Xu et al. (2016) como Cherax quadricarinatus iridovirus (CQIV) y por Qiu et al. (2017) como Virus iridiscente de hemocitos de camarón (SHIV). Los signos clínicos incluyen atrofia del hepatopáncreas con pérdida de color, estómago e intestino vacíos, y un cuerpo de color rojizo (Qiu et al., 2017). El camarón Macrobrachium rosenbergii enfermo

muestra un área blanca típica debajo del exoesqueleto en la base del rostrum llamado enfermedad de “cabeza blanca” o enfermedad de la “mancha blanca” (Qiu, et al., 2019a). Los individuos moribundos se hunden en el fondo de aguas profundas donde se acumulan los individuos muertos; alcanzando una mortalidad acumulada del 80%. El DIV1 ha sido reportado en algunas provincias costeras de China desde 2014, incluyendo las provincias de Zhejiang, Guangdong y Hebei (Qiu et al., 2017). Una vigilancia especializada en China en 2017– 2018 reveló que el DIV1 se detectó en 11 de 16 provincias (Qiu et al., 2018c; Qiu et al., 2019b). El DIV1 es un virus icosaédrico envuelto con un diámetro de aproximadamente 150 nm y un genoma de ADN bicatenario de aproximadamente 166 K pb (Li et al., 2017; Qiu et al., 2018b). Basado en dos aislamientos originales, SHIV 20141215 y CQIV CN01 (ICTV, 2019), el virus fue asignado por el Comité Internacional de Taxonomía de Virus (ICTV) como el único miembro del nuevo género Decapodiridovirus dentro de la Familia Iridoviridae. Las especies susceptibles actualmente conocidas incluyen C. quadricarinatus, Penaeus vannamei, Macrobrachium nipponense, M. rosenbergii, Procambarus clarkii y Exopalaemon carinicauda (Chen et al., 2019a; Qiu et al., 2017; Qiu et al., 2019a; Xu et al., 2016). Dos especies de cangrejo, Eriocheir sinensis y Pachygrapsus crassipes también se infectaron con DIV1 en la prueba experimental por inyección intramuscular (Pan et al., 2017). Vale la pena señalar que los resultados positivos han sido detectados

en muestras de PCR de Penaeus chinensis, Penaeus japonicus, Macrobrachium superbum, Nereis succinea o algunos cladóceros (Qiu et al., 2017; Qiu et al., 2018c; Qiu et al., 2019a; Qiu et al., 2019b). Entre los métodos de detección, la sonda TaqMan empleada en PCR en tiempo real es el método más sensible y específico para detectar y cuantificar virus de camarón. Algunos métodos de PCR en tiempo real pueden detectar una copia de ADN viral o ADNc para varios virus de camarón, como el Parvovirus hepatopancreático (VPH), baculovirus de Penaeus monodon (MBV) y virus de la mionecrosis infecciosa (IMNV) (Yan et al., 2009, 2010; Liu et al., 2013). La prueba de PCR en tiempo real con sonda TaqMan se estableció para detectar el gen ATPasa de DIV1 en nuestra investigación anterior (Qiu et al., 2018a). Este método fue específico, y el límite de detección fue de cuatro copias por reacción. Sin embargo, el fragmento amplificado usando este método se superpuso con el único método de PCR anidada publicado para DIV1 (Qiu et al., 2017), que podría deberse a la contaminación cruzada cuando ambos métodos fueron utilizados en laboratorio. Para evitar este riesgo, detallamos una nueva realidad del tiempo de ensayo de PCR para la detección de la proteína de la cápside principal (MCP) del DIV1.

Materiales y métodos Recolección de muestras y extracción de ADN El camarón P. vannamei se recolectó de granjas en Guangdong y Shandong, Provincia de China, y fueron almacenados a −80°C.

PATOLOGÍA

- AGOSTO 2020 Se extrajo ADN de un total de 30 mg de tejido de cefalotórax de camarones utilizando un kit de ADN de animales marinos TIANamp (TIANGEN Biotech, Beijing, China), según las instrucciones del fabricante. Primers y sonda Se diseñaron primers específicos y una sonda para el gen DIV1 MCP (Número de acceso de GenBank KY681039, MF599468, NC_040612) (Qiu et al., 2017; Qiu et al., 2018b; Li et al., 2017) usando AlleleID versión 5.01 (PREMIER Biosoft). La corriente arriba (142F 5′- AAT CCA TGC AAG GTT CCT CAG G -3’) y corriente abajo (142R 5′- CAA TCA ACA TGT Los cebadores CGC GGT GAA C -3’) produjo un amplicón de PCR de 142 pb. La sonda TaqMan (5’- CCA TAC GTG CTC GCT CGG CTT CGG -3’) fue sintetizada y marcada con 6-carboxifluoresceína (FAM) en el extremo 5’ y con N,N,N’,N′-tetrametil6-carboxirododamina (TAMRA) en el extremo 3’. Ensayo de PCR en tiempo real y procedimiento Las reacciones de PCR en tiempo real se realizaron en un sistema de reacción de 20 μL que consiste en 10 μL 2 × Master Mix, 500 nM de cada primer (142F/142R), 200 nM de sonda TaqMan y 1 μL de plantilla de ADN usando FastStart Essential DNA Probes Master (Roche). Brevemente, después de una desnaturalización inicial a 95 °C durante 10 min, las amplificaciones se llevaron a cabo en 40 ciclos a una temperatura de fusión de 95 °C durante 10 y recocido a una temperatura de 60 °C durante 30 s. La amplificación, detección y análisis de data se realizó usando un instrumento de fluorescencia cuantitativa CFX-96 (Bio-Rad, EE. UU.). Construcción de vectores de control positivo y estándares para la cuantificación El fragmento de ADN de 142pb se clonó en el vector pMD18-T (TaKaRa, Dalian, China). La secuencia del inserto fue confirmada por secuenciación (Sangon Biotech, Shanghai, China). La concentración del plásmido se determinó luego usando un NanoDrop 2000 (Thermo Fisher, América). Se estimó el número de copias del plásmido que contenía el 142bp, y se preparó una serie de diluciones como estándares.

Fig. 1. A: Prueba de especificidad analítica. Se extrajeron plantillas de ADN de camarón infectado con 1. DIV1, 2. WSSV, 3. IHHNV, 4. VAHPND, 5. EHP, 6. Camarones sanos; y 7. Agua (NTC). B: Prueba de sensibilidad analítica. 1–9: 1.2 × 108 a 1.2 copias μl -1 ADN de DIV1; 10: agua (NTC). C: Curva estándar.

Especificidad analítica y sensibilidad analítica Para probar la especificidad analítica, el ADN extraído de camarones infectados con el virus del síndrome de la mancha blanca (WSSV), necrosis infecciosa hipodérmica y virus de necrosis hematopoyética (IHHNV), Vibrio que causa la enfermedad de necrosis hepatopancreática aguda (VAHPND) y Enterocytozoon hepatopenaei (EHP), se utilizaron como plantillas en el ensayo de PCR en tiempo real. El control negativo, positivo y en blanco, fue el ADN de P. vannamei sano, el ADN de P. vannamei infectado con DIV1, y agua; respectivamente. Cada ensayo se realizó por triplicado. La sensibilidad analítica de la PCR en tiempo real se determinó utilizando una serie de diluciones de 10 veces del plásmido purificado pDIV1. La concentración del ADN plasmídico varió de 1.2 × 100 a 1.2 × 108 copias por reacción. Cada ensayo se realizó por triplicado. Prueba de muestra clínica Se extrajo un total de 300 muestras de ADN del cefalotórax de P. vannamei con un estado de infección DIV1 desconocido. El ADN extraído fue probado por la PCR en tiempo real realizada en este estudio y anteriormente (Qiu et al., 2018a). Sensibilidad diagnóstica (DSe) y especificidad diagnóstica (DSp), se

determinaron de acuerdo con el Manual de la Organización Mundial de Salud Animal (OIE) (OIE, 2019).

Resultados y discusión El gráfico de amplificación solo mostró el ADN extraído del cefalotórax de camarones infectados con DIV1 (Fig. 1A, curva 1); no se detectó el ADN a partir de muestras de camarones sanos o camarones infectados con WSSV, IHHNV, VAHPND y EHP (Fig. 1A, curvas 2–6). Por lo tanto, la prueba de especificidad analítica mostró que el ensayo de la PCR en tiempo real desarrollado en este estudio fue específico para DIV1. La prueba de sensibilidad reveló que el ensayo de PCR en tiempo real podría detectar ADN de DIV1 tan bajo como 1.2 copias/reacción (Fig. 1B), más sensible que los métodos de PCR en tiempo real para DIV1 desarrollados previamente (Qiu et al., 2018a) o para WSSV (Durand y Lightner, 2002). La curva estándar mostró un alto coeficiente de correlación (R2 = 0.997) dentro del rango de 1.2 × 101 –1.2 × 108 copias de ADN/ reacción. La ecuación regresiva fue Ct = −3.169 · lg (copias de ADN de DIV1) + 42.524 (Fig. 1C). Por lo tanto, este nuevo ensayo de PCR en tiempo real podría usarse como una

PATOLOGÍA herramienta cuantitativa apropiada dentro del rango de 1.2 × 101 –1.2 × 108 copias de ADN /reacción. Los resultados de dos métodos de PCR en tiempo real para DIV1 acordaron que 141 muestras fueron positivas y 153 muestras negativas, y 6 muestras mostraron resultados diferentes para estos dos métodos de PCR en tiempo real (Tabla 1). En base a los resultados de las pruebas anteriores, el DSe (la proporción de muestras referenciales de animales infectados conocidos, fueron positivas en un ensayo) y el DSp (la proporción de muestras referenciales de animales no infectados conocidos, fueron negativos en un ensayo) del nuevo PCR en tiempo real fueron 97.2% y 98.7%, respectivamente. En este estudio, desarrollamos una metodología TaqMan para DIV1 específica y altamente sensible basada en PCR en tiempo real. Debido a que la carga viral en larvas o juveniles puede ser muy baja, la sensibilidad del método de detección es crucial. Entre los métodos de detección publicados para DIV1, el nuevo de PCR en tiempo real es,

- AGOSTO 2020 Tabla 1.- Resultados de detección de muestras con estado de infección desconocido por dos PCR en tiempo real.

Nota: Subíndice 1 = resultado probado usando PCR en tiempo real desarrollada por Qiu et al., 2018a; Subíndice 2 = resultado probado usando PCR en tiempo real desarrollada en este estudio.

por el momento, el más sensible (Qiu et al., 2017; Qiu et al., 2018a; Chen et al., 2019b). Además, evita el riesgo de contaminación cruzada cuando se utiliza el método de PCR anidado publicado, debido a que se orienta a diferentes genes.

Conflicto de interés y competencia Los autores declaran que no tienen ningún interés financiero o relación personal que podría haber influido el trabajo realizado en este estudio. Este trabajo fue apoyado por el Fondo Marine S&T de la Provincia Shandong para el Laboratorio Nacional Piloto de Ciencias del Mar y Tecnología (Qingdao) (2018SDKJ0502-

3); el Programa clave Nacional de I+D de China (2019YFD0900101); la Fundación de Ciencia Postdoctoral de China (2019M650170); el proyecto de innovación postdoctoral de la Provincia de Shandong (201902043); la Fundación de Investigación Postdoctoral Aplicada de Qingdao (2019); el Sistema de Investigación Agrícola de China (COCHES-47)•

Para más información sobre este artículo escriba a: huangjie@ysfri.ac.cn

NUTRICIÓN

- AGOSTO 2020

Efectos interactivos de una dieta de colesterol y fosfolípidos sobre el rendimiento del crecimiento, la expresión de genes relacionados con el sistema inmune, y la resistencia contra el Vibrio alginolyticus en el camarón blanco (Litopenaeus vannamei) Autores : Minglei Yana,1 Weilong Wanga,c,1 Xuxiong Huanga,b,c, Xinlei Wanga Yi Wanga Centro de Investigación de Ecología y Nutrición de Peces (CREEFN) del Ministerio de Agricultura, Universidad Ocean de Shanghai, Shanghai, China

Centro de Investigación de Ingeniería de Acuicultura, Shanghai, China

Centro de Demostración de Educación Experimental de Ciencias Pesqueras (Universidad Ocean de Shangai), Lingang New City, Shanghai, China

itopenaeus vannamei es una de las tres especies de camarón más cultivadas en el mundo [1]. Dado el deterioro del ambiente acuático acuícola, la degradación de recursos de germoplasma, la frecuente aparición de enfermedades y el abuso de drogas para acuicultura [2], la industria acuícola de L. vannamei se enfrenta a graves desafíos. En particular, enfermedades bacterianas primarias y secundarias han causado la mortalidad a gran escala de L. vannamei de cultivo [3]. Por lo tanto, la capacidad de inmunidad de L. vannamei es una preocupación trascendental cuando están sujetos a estresores ambientales [4].

xxhuang@shou.edu.cn

Invertebrados como los crustáceos, no poseen una respuesta inmunitaria adaptativa basada en la inmunoglobulina [5]. Los mecanismos de defensa de los crustáceos dependen completamente del sistema inmune innato, que se activa una vez que los patrones moleculares asociados al patógeno (PAMPs) son reconocidos por los receptores de reconocimiento de patrones del huésped [6]. El sistema inmunitario innato se basa en mecanismos inmunes celulares o humorales para destruir el patógeno invasivo [6]. La respuesta inmune a patógenos extraños se desencadena por el reconocimiento inmune de sustancias extrañas, conduciendo a la transducción de señales reconocidas y a la activación de una serie de reacciones en cascada [4]. Finalmente, el sistema

inmune innato genera y libera factores de efecto inmunitario (como lisozimas o péptidos antimicrobianos), identificando y eliminando la sustancia invasiva [7]. Las vías de señalización (por ejemplo, las vías Toll e IMD), que regulan la transducción de señales intracelulares y extracelulares, juegan un papel importante en la transducción de señales inmunes [8]. El receptor Toll es una proteína transmembrana, y la proteína de inmunodeficiencia (IMD) es el primer agente en recibir la señal de la proteína de reconocimiento de glucano. Tanto el receptor Toll, como la proteína IMD, transmiten señales para tipos específicos de invasores extraños, desde el exterior al interior de la célula, activando una serie de reacciones en cascada para producir factores de efecto inmunitario [9]. El superóxido dismutasa (SOD) es una enzima antioxidante en los organismos que forma la primera línea de defensa contra los radicales libres [10]. La lisozima actúa como parte del sistema inmunitario no específico al hidrolizar los enlaces glicosídicos β-1, 4 entre el ácido N-acetilmurámico y la N-acetilglucosamina [11]. Por lo tanto, la expresión génica relacionada con las vías de señalización, el SOD y la actividad de la lisozima, se usan comúnmente como un indicador para evaluar la inmunidad y el estado de salud del huésped [10,12].

NUTRICIÓN

- AGOSTO 2020 El ajuste de nutrientes en el alimento puede no solo mejorar el rendimiento del crecimiento, sino también la resistencia del camarón a enfermedades [13-15]. El colesterol (CHO) es un esterol importante que sirve como precursor de muchos compuestos fisiológicamente activos, como las hormonas sexuales y de muda, los corticoides suprarrenales, ácidos biliares y la vitamina D [16]. Se sabe que los fosfolípidos (PL) comprenden un grupo de lípidos polares como fuente de energía añadida a la dieta de los crustáceos y se cree que juegan un papel vital para facilitar el almacenamiento de lípidos en el hepatopáncreas [17,18]. Tanto el CHO como el PL son componentes de biomembranas que se asocian con el mantenimiento de la estructura y función celular [2,19]. Sin embargo, los crustáceos no pueden sintetizar el CHO de nuevo o sintetizar el PL de manera suficiente [18,20]. Además, pocas investigaciones han examinado las funciones inmunes e antioxidantes relacionadas al colesterol y los fosfolípidos en peces y crustáceos [21,22]. Estudios anteriores han demostrado los efectos de una dieta con CHO y PL (como la lecitina de soya) en el rendimiento del crecimiento [23,24], el contenido de lípidos y fracciones en los tejidos del camarón [25,26]. Sin embargo, aún falta información sobre la influencia de una dieta con estos dos componentes en la respuesta inmune, particularmente para L. vannamei cultivado en agua dulce. Por lo tanto, se realizó un experimento de 8 semanas para determinar (1) los efectos de la dieta de CHO y PL en la supervivencia, crecimiento, en la expresión de genes relacionados con el sistema inmune y la resistencia contra el Vibrio alginolyticus de L. vannamei juvenil en agua dulce; (2) las posibles interacciones entre el CHO y PL en la dieta con estos parámetros.

Materiales y métodos Preparación de la dieta Se formularon nueve dietas experimentales isonitrogenadas con tres niveles de CHO (0, 0.2% y 0.4%) y tres niveles de PL (0, 2% y 4%) en un diseño experimental 3 × 3, como se muestra en la Tabla 1. Los diferentes niveles de PL en las dietas se lograron agregando lecitina de soya en diferentes niveles

obtenidos de aceite de soya. Los ingredientes secos de cada dieta se molieron, tamizaron a través de una malla 80 y se mezclaron completamente. Los ingredientes lipídicos se añadieron gota a gota a la mezcla seca mientras se mezclaban. Después de eso, la mezcla se transformó en una masa al agregar agua. Luego, la masa se extruyó a través de un troquel de orificio de 1.5 mm y se secó a 90 °C durante 20 min. Los pellets secos se almacenaron a -20 °C en un refrigerador hasta su uso. Prueba con camarón y protocolo de alimentación Se obtuvo L. vannamei juveniles de un laboratorio local (Shanghai, China), en donde la salinidad se había ya reducido de 20‰ a 2‰ durante la etapa postlarval. Los juveniles se mantuvieron en una piscina interior de cemento alimentada con una dieta comercial durante 14 días. Después de aclimatarse a las condiciones de laboratorio (1‰), se seleccionaron 1800 camarones sanos con un tamaño similar (0.23 ± 0.01 g de peso húmedo promedio inicial) y se asignaron aleatoriamente a 36 jaulas de PVC (1 m × 1 m × 1.2 m) ubicadas en una piscina de cemento (10 m × 20 m × 1.5 m) correspondiente a cuadruplicar las jaulas de los nueve tratamientos de dietas. Los juveniles fueron alimentados cuatro veces al día (5:30, 10:30, 16:30 y 22:00), con una ración diaria de 5-8% del peso corporal. Cada mañana se recogía el alimento sin consumir, mientras que las materias fecales se sifoneaban del fondo. Todo el alimento no consumido se liofilizó para calcular la ingesta de alimento y la relación de eficiencia de alimentación. Durante la prueba de alimentación, el agua experimental fue cambiada un 50% cada tres días con agua de un reservorio cercano. Los parámetros de calidad del agua se analizaron todos los días, incluyendo la temperatura, el pH, oxígeno disuelto y nitrógeno amoniacal, se mantuvieron a 30 – 32 °C, 8.0 – 8.5, > 5 mg L− 1 y < 0.05 mg L− 1, respectivamente. Recolección bioquímico

muestras

análisis

Al final de la prueba de alimentación de 8 semanas, todos los tratamientos fueron suspendidos durante 24 h antes del

muestreo final. La supervivencia y el peso corporal individual de cada jaula se midió usando las siguientes fórmulas: Supervivencia (%) = (número final de camarones/número inicial de camarones) × 100 Tasa de crecimiento específico (SGR, % día − 1) = [(peso final Ln - peso inicial Ln)/ duración] × 100 Factor de conversión alimenticia (FCR) = peso seco del alimento consumido (g)/ ganancia de peso vivo (g) Las composiciones proximales de las dietas experimentales y las muestras de camarón se midieron según los métodos estándar de la Asociación Oficial de Químicos Analíticos [27]. La humedad se determinó mediante secado en horno a 105 °C hasta un peso constante. La ceniza se determinó por incineración en un horno a 550 °C durante 6 h. Los contenidos de proteína cruda de las dietas y las muestras se determinaron por el método Kjeldahl (2300 - Autoanalyzer, Foss Tecator, Suecia). El contenido total de lípidos se extrajo individualmente usando cloroformometanol (2:1, v/v) que contenía 0.01% de hidroxitolueno butilado (BHT) como antioxidante [28]. El lípido total se separó en fracciones de lípido neural y lípido polar mediante un cartucho de sílice Sep-pak (Waters Corporation, Milford, Massachusetts, EE. UU.) como se describe en la Ref. [29] Ambas fracciones se analizaron para cuantificar el contenido de CHO y PL de la clase de lípidos según el método [25]. Se obtuvieron cinco juveniles de cada tanque para el análisis inmunológico. Se recolectó hemolinfa del seno ventral del camarón con una jeringa de 1 mL, y luego se centrifugó a 2500 rpm durante 20 minutos a 4 °C para obtener suero. El suero se usó para medir las actividades de lisozima y superóxido dismutasa (SOD). El SOD se midió utilizando kits de reactivos para diagnóstico (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, China). Se determinó la actividad de la lisozima en el suero a través de un ensayo turbidimétrico [30].

NUTRICIÓN

- AGOSTO 2020

Tabla 1. Composición de las dietas experimentales

Yuehai Feed Group, Zhejiang, China. Vidrio químico Shanghai Gaoxin, ≥ 95%. c Premezcla mineral: Co 100 mg kg− 1; Cu 1400 mg kg − 1; Zn 900 mg kg − 1; Mn 450 mg kg − 1. d Premezcla de vitamina: vitamina A1500000 UI Kg− 1; Vitamina B1 5000 mg kg− 1; Vitamina B2 2500 mg kg− 1; Vitamina D3 190000 UI Kg− 1; Vitamina E 180000000 UI Kg− 1; Vitamina B6 8000 mg kg − 1; Vitamina K3 2000 mg kg − 1; Ácido nicotínico 2600 mg kg − 1; Ácido pantoténico 2000 mg kg − 1; Ácido fólico 250 mg kg − 1 e Angel Yeast Co., Ltd., China a

Susceptibilidad del camarón al Vibrio alginolyticus Las cepas de V. alginolyticus se obtuvieron del Centro Nacional de Colección de Patógenos de Animales Acuáticos (Shanghai Ocean University, Shanghai, China) y se activaron infectando a L. vannamei. Se inocularon muestras de hemolinfa del camarón enfermo en placas de medio de cultivo de agar con sacarosa de citrato de tiosulfato de sacarosa (TCBS) para obtener clones virulentos para la prueba de infección formal. Al final de la prueba de alimentación de ocho semanas, se seleccionó de cada tratamiento, treinta juveniles de tamaño similar para usarlos en el ensayo de susceptibilidad a V. alginolyticus por triplicado. La prueba de ensayo fue realizada inyectando 25 μL de V. alginolyticus activado (6.25 × 107 CFU mL− 1 ). Los camarones control fueron inyectados con 25 μL de solución salina fisiológica de camarón. Todas las 30 jaulas (50 cm × 30 cm × 80 cm) se suspendieron en una piscina de cemento con aireación continua, con temperatura del agua de 29 – 30 °C, una

salinidad de 0 ppt, y oxígeno disuelto > 6 mg L− 1. El agua se renovó diariamente, y el experimento duró cuatro días. Extracción total de ARN, transcripción inversa y PCR en tiempo real cuantitativo Se seleccionaron setenta y cinco juveniles de tamaños similares de cada tratamiento y se inyectó 25 μL de V. alginolyticus inactivo (1.25 × 106 UFC mL − 1) a cada camarón. El grupo control fue inyectado con solución salina fisiológica de camarón. Todas las jaulas se suspendieron en una piscina de cemento como se describió anteriormente para el ensayo con V. alginolyticus activado. Durante las 48 h después de la inyección, se tomaron muestras de tejidos branquiales de tres camarones de cada jaula cada 6 h. Las muestras se colocaron rápidamente en tubos de centrífuga de 1.5 mL que contenían una solución de conservación de ARN preenfriada (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd., China). El ARN total se extrajo de los tejidos branquiales con kits de extracción de ARN total (Tiangen, China), de acuerdo con las

instrucciones del fabricante. La cantidad y calidad de ARN aislado se determinó mediante un espectrofotómetro ultramicro y en una electroforesis en gel de agarosa al 1%, respectivamente. El ADNc para qRT-PCR se sintetizó mediante transcripción inversa usando kits de reactivos RT PrimeScript ™ (Takara, Japón). Las condiciones de reacción fueron las recomendadas por el fabricante. Los primers genéticos específicos se diseñaron usando el software Primer Premier 5.0 basado en las secuencias de ADNc del GenBank [lisozima (GenBank: AY170126.2); receptor tipo Toll (GenBank: DQ923424.1); IMD (GenBank: FJ592176. 1)] (Tabla 2). La qRT-PCR se realizó utilizando el kit SYBR @ Premix ExTaq ™ (Takara, Japón) en el sistema de tiempo real CFX96 ™ (Bio-Rad, Hercules, CA). La amplificación se realizó en un volumen total de 20 μL, que contenía 10 μL SYBR Green Premix ExTaq, 0.8 μL de cada primer, 1.6 μL de ADNc y 6.8 μL DEPC-H2O. La condición de los ciclos fue: 95 °C durante 30 segundos, seguido de 39 ciclos de 95 °C durante 10 segundos, 60 °C durante 30

NUTRICIÓN

- AGOSTO 2020 segundos y 72 °C durante 20 segundos. El gen de limpieza β-actina se amplificó como una referencia interna. El experimento se repitió tres veces. La expresión relativa del ARNm de genes específicos se calculó utilizando el método 2-ΔΔCt [31].

Tabla 2. Primers de PCR cuantitativo en tiempo real para genes inmunes relacionados y β-actina del camarón blanco (Litopenaeus vannamei).

Análisis estadístico Toda la data se presentó como media ± error estándar de la media (S.E.M., n = 3). El análisis estadístico se realizó mediante un análisis de varianza (SPSS 20.0) después de explorar la normalidad y la homogeneidad de la data. Se empleó ANOVA de dos vías para evaluar los efectos de los niveles de CHO y PL en la dieta, así como sus interacciones. Una vez que se encuentra la interacción entre estos dos factores, los seis grupos fueron probados por ANOVA unidireccional para evaluar todos los niveles de los dos factores juntos. Además, la data de cada tratamiento se comparó con el control utilizando la nueva prueba de rango múltiple de Duncan. Las diferencias entre tratamientos se consideraron significativas cuando P < 0.05. Declaración ética Los procedimientos experimentales se llevaron a cabo siguiendo estrictamente las recomendaciones de las directrices éticas de la Directiva de la UE 2010/63/UE para experimentos con animales.

Resultados Rendimiento del crecimiento y supervivencia El rendimiento del crecimiento, la supervivencia y el factor de conversión alimenticia del camarón de prueba alimentado con dietas experimentales durante 56 días, se detalla en la Tabla 3. En el ANOVA de dos vías, no se encontró ningún efecto interactivo en todos los parámetros. La supervivencia no se vio afectada significativamente ni por el CHO ni por PL en la dieta. Mientras tanto, también se pudo encontrar una tendencia similar en el factor de conversión alimenticia (FCR). El CHO en la dieta fue el único factor que afectó significativamente (P < 0.05) al peso corporal final (FBW) y la tasa de crecimiento específica (SGR). El FBW y la SGR mostraron una tendencia creciente con el aumento de CHO en la dieta.

Análisis proximal del músculo del camarón

de L. vannamei se muestran en las Tablas 6 – 8, respectivamente.

El análisis proximal muscular de L. vannamei alimentado con dietas experimentales durante 56 días se muestra en la Tabla 4. Los suplementos dietéticos de CHO y PL, y la interacción entre estos dos aditivos no afectó significativamente (P > 0.05) a la humedad. Aunque no se encontró ningún efecto interactivo, los niveles de CHO y PL afectan significativamente (P < 0.05) la ceniza. El CHO en la dieta y la interacción entre el CHO en la dieta y el PL, fueron el único factor significativo en los lípidos totales y las proteínas crudas, respectivamente.

Para el nivel de expresión del gen del receptor tipo Toll, se observó la interacción entre el CHO y PL en la dieta a las 12 h, 24 h y 36 h. La dieta de CHO afectó significativamente (P < 0.05) la expresión del ARNm a las 24 h y 36 h. Para el nivel de expresión del gen IMD, la dieta de CHO y PL afectó significativamente la expresión del ARNm a las 24 h. Mientras tanto, la interacción entre la dieta de estos dos aditivos no se detectó durante el período de ensayo. Para el gen de la lisozima, se observó la interacción entre el CHO y PL en la dieta durante todo el período de ensayo. Además, la dieta de CHO y PL fueron factores significativos a las 24 h, 36 h y 48 h.

Parámetros inmunes Las actividades en suero del superóxido dismutasa (SOD) y lisozima de L. vannamei alimentado con dietas experimentales durante 56 días se muestra en la Tabla 5. La dieta con CHO y la interacción entre el CHO en la dieta y el PL, afectó significativamente la actividad del SOD. El CHO en la dieta fue el único factor significativo en la actividad de la lisozima. Los tres grupos de dietas bajas en CHO (CHO0-PL0, CHO0-PL2 y CHO0-PL4) mostraron una actividad SOD significativamente menor (P < 0.05) que los dos grupos de dieta de CHO intermedia (CHO0.2-PL0 y CHO0.2-PL2) y los dos grupos de dieta de alto contenido de CHO (CHO0.4-PL2 y CHO0.4-PL4). Además, el CHO0.4-PL4 mostró la mayor actividad del SOD entre todos los grupos. Expresión génica relacionada a la inmunidad Las expresiones de genes relacionados a receptores del tipo Toll, la inmunodeficiencia (IMD) y la lisozima de los tejidos branquiales

Los picos de expresión relativa del ARNm del receptor tipo Toll y los genes de lisozima se detectaron a las 24 h y 36 h, respectivamente. El CHO0.2-PL2 y CHO0.4-PL2 mostraron niveles de expresión significativamente más altos del gen receptor tipo Toll en comparación al grupo control. Y CHO0.2-PL4 y CHO0.4-PL4 mostraron niveles de expresión significativamente más altos del gen de la lisozima, en comparación con el control. Los picos de expresión relativa del ARNm del gen IMD se detectaron todos a las 24 h excepto del grupo control. Mortalidad acumulativa de L. vannamei durante el ensayo con V. alginolyticus El monitoreo de la mortalidad del camarón después del ensayo con el patógeno (Fig. 1) reveló que. La interacción entre la dieta CHO y PL se observó a las 24 h, 48 h, 72 h y 96 h. Además, CHO0.4-PL0 y CHO0.4-PL4 mostraron un rendimiento significativamente mejor en comparación al control (CHO0-PL0) a las 48 h, 72 h y 96 h.

NUTRICIÓN

- AGOSTO 2020

Tabla 3. Parámetros de crecimiento en Litopenaeus vannamei alimentado con dietas experimentales durante 56 díasa

La data se expresó como media ± S.E.M. de los grupos triplicados. FBW, peso corporal final; FCR, factor de conversión alimenticia; SGR, tasa de crecimiento específico. ͨ Efectos significativos determinados por ANOVA de dos vías. Los asteriscos indican la significancia (P < 0.05). NS: no significativo, CHO × PL: interacción

Discusión El CHO es un esterol dietético importante y nutricionalmente superior a otros esteroles para camarón [20]. El requerimiento del CHO en dietas se ha establecido generalmente mediante la observación de una respuesta de crecimiento reducida en crustáceos [32]. Estudios previos reportaron que los requisitos del CHO para camarón comúnmente oscilan entre 0.2 y 1% [26,33,34]. Por otro lado, el exceso de colesterol puede causar algunos efectos adversos [25]. [35] sugirió que la incorporación de PL y CHO podría mejorar la capacidad osmorreguladora en L. vannamei, lo que llevaría a una mejor supervivencia y crecimiento en condiciones de baja salinidad

[36,37]. Por lo tanto, la suplementación dietética del CHO y PL es crucial para cumplir con los requisitos metabólicos durante etapas tempranas y juveniles, especialmente para el cultivo de camarón al interior [38-40]. Esto fue consistente con los resultados de este estudio en el que se mostró que el CHO en la dieta es un factor significativo en el rendimiento del crecimiento. Aunque se ha encontrado que el PL tiene un efecto beneficioso sobre el crecimiento y la supervivencia del camarón marino en varios estudios [19,38,40], el PL no se detectó como el factor significativo en los resultados de supervivencia o crecimiento en este estudio. Esto indicó que la dieta

suplementada sin PL que ya contenía 1% de PL, podría haber satisfecho el requerimiento de L. vannamei en agua dulce. Además, la eficacia del PL en el crecimiento y la supervivencia puede variar según el tipo y fuente de PL utilizado [41]. El principal PL en animales es la fosfatidilcolina (PC), fosfatidiletanolamina (PE), fosfatidilinositol (PI) y la fosfatidilserina (PS) [17]. En la mayoría de las investigaciones, la fuente de PL es proporcionada por la lecitina de soya [25,42]. Se ha demostrado que dietas con PL como la lecitina de soya y la PC son necesarias para el crecimiento y supervivencia de juveniles y larvas de camarón [22]. Dado que la lecitina de soya está disponible en diferente pureza y

Tabla 4. Análisis proximal muscular (% de materia seca, excepto humedad) de Litopenaeus vannamei alimentado con dietas experimentales durante 56 díasa

La data se expresó como media ± S.E.M. de los grupos triplicados. La data con diferentes letras de superíndice en una columna representan una diferencia significativa del grupo control (P < 0.05). b Efectos significativos determinados por ANOVA de dos vías. Los asteriscos indican la significancia (P < 0.05). NS: no significativo, CHO × PL: interacción a

NUTRICIÓN

- AGOSTO 2020 composición de PL, la cantidad cuantitativa y cualitativa requerida de lecitina de soya en la dieta es difícil de establecer. Para los requisitos de PC, una estimación relativamente conservadora basada en resultados previos es entre 0.5 y 1.5% [32]. La interacción entre PL y CHO ha sido de gran interés en la nutrición de crustáceos [40]. El PL era bien conocido por facilitar el transporte del CHO, lo que implicaba una interacción entre ellos. Además [26,43], se había reportado que había un efecto sinérgico entre dieta de PL y CHO en L. vannamei marino y Scylla serrata. Sin embargo, no se detectó interacciones en este estudio. Se observaron resultados similares en Penaeus monodon [44], Macrobrachium rosenbergii [45] y Portunus trituberculatus [41]. Por lo tanto, la interacción entre el CHO y PL en la dieta de crustáceos puede no ser universal para mejorar el rendimiento del crecimiento. Los organismos producen aniones superóxido (O2-) para matar o eliminar sustancias nocivas en respuesta a invasiones bacterianas o estrés [21]. Sin embargo, la acumulación excesiva de O2- también puede representar una amenaza para el organismo mismo. Al catalizar aniones superóxido por medio de reacciones de desproporción, el superóxido dismutasa (SOD) puede reducir la acumulación de O2- [46]. Por lo tanto, los niveles de SOD no solo son un indicador del antioxidante, sino que también ayudan a caracterizar el estado inmune.

Tabla 5. Superóxido dismutasa (SOD) y actividades de lisozima en suero de Litopenaeus vannamei alimentado con dietas experimentales durante 56 díasa

La data se expresó como media ± S.E.M. de los grupos triplicados. La data con diferentes letras de superíndice en una columna representa una diferencia significativa del grupo control (P < 0.05). b Efectos significativos determinados por ANOVA de dos vías. Los asteriscos indican la significancia (P < 0.05). NS: no significativo, CHO × PL: interacción a

En este estudio, la suplementación dietética con CHO tuvo efectos significativos en la actividad del suero de SOD en L. vannamei (P < 0.05), al igual que la interacción entre CHO y PL en la dieta. En los tres grupos con alto contenido de CHO (0.4%), la actividad de SOD aumentó con el incremento de los niveles de PL en la dieta. Además, el nivel más alto de actividad de SOD se observó en el grupo CHO0.4-PL4 [47]. Se esclareció que el cangrejo nadador (Portunus trituberculatus) alimentado con 1.4% de CHO tenía niveles de actividad de SOD significativamente más altos que aquellos alimentados con bajos niveles de CHO (0.2% y 0.6%). Por lo tanto, se podría

concluir que hubo un efecto sinérgico entre la dieta de alto nivel de PL y CHO sobre la actividad antioxidante de L. vannamei cultivado en agua dulce en este estudio. Sin embargo, los mecanismos detallados que subyacen al aumento de la actividad de SOD en respuesta al aumento de los niveles del CHO en la dieta del camarón, sigue sin estar claro. La lisozima es uno de los factores inmunes no específicos más importantes en los organismos [48]. La actividad de la lisozima se ha utilizado con frecuencia como un indicador importante de inmunidad no específica en crustáceos. En este estudio, la actividad de la lisozima en el suero mejoró con el aumento de los niveles del CHO en la

Tabla 6. Efecto del suplemento dietético de colesterol y lecitina de soya en la expresión relativa de ARNm del receptor tipo Toll en Litopenaeus vannamei puesto a prueba con Vibrio alginolyticusa.

a La data se expresó como media ± S.E.M. de los grupos triplicados. La data con diferentes letras minúsculas en superíndice (a, b, c y d) en una columna representan una diferencia significativa del grupo control (P < 0.05). Los valores en la misma línea con diferentes letras mayúsculas en superíndice (A, B, C y D) son significativamente diferentes (P < 0.05). b Efectos significativos determinados por ANOVA de dos vías. Los asteriscos indican la significancia (P < 0.05). NS: no significativo, CHO × PL: interacción.

NUTRICIÓN dieta. Además, los niveles de transcripción de lisozima en las branquias se vieron significativamente afectados no solo por el CHO en la dieta, sino también por el PL y su interacción [49]. Se descubrió que el gen de la lisozima se expresaba en todos los tejidos de camarón sin especificidad de tejido. Por lo tanto, se puede plantear la hipótesis de que el CHO en la dieta alteraría la susceptibilidad de los organismos a la patogenia tanto al nivel de transcripción, como al nivel de proteína.

- AGOSTO 2020 Los mecanismos de defensa en crustáceos dependen completamente del sistema inmune innato para destruir los patógenos invasivos [6]. La señal de invasión del patógeno se transmite desde el exterior al interior de la célula, a través de varias vías de señalización en la membrana celular [10]. Las vías de señalización Toll, IMD y JAK/ STAT regulan la inmunidad no específica del camarón [9]. Un aumento en la transcripción de los efectores inmunes asociados con las vías de señalización de invasión, indica directamente una respuesta inmunitaria

suﬁciente y efectiva ante la invasión de patógenos [50]. Este estudio mostró que la administración del CHO en la dieta afectó significativamente la expresión del receptor tipo Toll y el ARNm de IMD en branquias de camarón experimental 24 h después de la infección por V. alginolyticus. Además, los niveles máximos relativos de expresión del ARNm de IMD aumentaron con el incremento de los niveles de PL en la dieta. Estos resultados implicaron que el PL y CHO de la dieta tuvo diferentes efectos en la expresión del gen del receptor tipo Toll en el camarón, pero los efectos de estos suplementos en

Tabla 7. Efecto del suplemento dietético de colesterol y lecitina de soya en la expresión relativa de ARNm de deficiencia inmunitaria (IMD) en Litopenaeus vannamei puesto a prueba con Vibrio alginolyticusa

a La data se expresó como media ± S.E.M. de los grupos triplicados. Los valores en la misma línea con diferentes letras mayúsculas en superíndice (A, B, C y D) son significativamente diferentes (P < 0.05). b Efectos significativos determinados por ANOVA de dos vías. Los asteriscos indican la significancia (P < 0.05). NS: no significativo, CHO × PL: interacción.

Tabla 8. Efecto del suplemento dietético de colesterol y lecitina de soya en la expresión relativa de ARNm de lisozima en Litopenaeus vannamei puesto a prueba con Vibrio alginolyticusa

Efectos significativos determinados por ANOVA de dos vías. Los asteriscos indican la significancia (P < 0.05). NS: no significativo, CHO × PL: interacción. a La data se expresó como media ± S.E.M. de los grupos triplicados. La data con diferentes letras minúsculas en superíndice (a, b, c y d) en una columna representan una diferencia significativa del grupo control (P < 0.05). Los valores en la misma línea con diferentes mayúsculas en superíndice (A, B, C y D) son significativamente diferentes (P < 0.05). b

NUTRICIÓN

- AGOSTO 2020

Fig. 1. Efectos interactivos de una dieta de colesterol y fosfolípidos sobre la resistencia contra la inyección de Vibrio alginolyticus en camarón blanco cultivado en agua dulce (Litopenaeus vannamei). La data con diferentes letras minúsculas en superíndice (a, b y c) en una columna representan una diferencia significativa del grupo control (P < 0.05).

la expresión del gen IMD y lisozima fueron positivos y relacionados a la dosis. No obstante, el estudio demostró que el CHO y PL en la dieta, y su interacción, contribuyeron a aumentar la respuesta inmune del camarón, lo que a su vez podría dar lugar a una mejor protección contra la infección por patógenos.

Además, los resultados de mortalidad acumulada fueron consistentes con los cambios en la expresión del gen de lisozima y la actividad de la lisozima, respaldando informes previos que indican que la lisozima es un índice importante de resistencia bacteriana en el camarón.

Es bien conocido que el camarón que vive en estanques siempre se ha visto afectado por enfermedades infecciosas, principalmente de etiología bacteriana y viral [51]. V. alginolyticus es un patógeno condicional del camarón [52]: la patogenicidad de esta bacteria está asociada con la presencia de diversos factores de virulencia y la regulación sinérgica de la expresión de estos factores por estímulos ambientales [53].

En conclusión, el CHO y PL en la dieta funcionaron de manera interactiva en el contenido de proteína cruda muscular, SOD, receptor tipo Toll y la expresión de ARNm de lisozima, resistiendo contra la inyección de V. alginolyticus en L. vannamei cultivado en agua dulce. Sin embargo, no se mostró ningún efecto interactivo en los otros parámetros. Además, los niveles mejorados de PL en la dieta no resultaron en un menor gasto de CHO en este estudio.

Este estudio mostró que el camarón alimentado con dietas suplementadas con CHO y PL eran menos susceptibles a la infección por V. alginolyticus. La mayor resistencia del camarón a patógenos está relacionada con su estado inmune [54].

Declaración de disponibilidad de datos Los autores declaran que la data que respalda los resultados de este estudio están disponibles en el artículo.

Contribución de los autores Minglei Yan realizó el experimento de alimentación y determinó la composición corporal, la respuesta inmune y la prueba de resistencia al estrés. Weilong Wang redactó el manuscrito, Xinlei Wang y Yi Wang ayudaron a hacer el análisis e interpretación de la data, Xuxiong Huang diseñó la investigación. Todos los autores leyeron y dieron su aprobación final del manuscrito. Declaración de intereses Los autores no tienen ningún conflicto de intereses que declarar•

Para más información sobre este artículo escriba a: xxhuang@shou.edu.cn

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- AGOSTO 2020

Mejora de la eficiencia en alimentos iniciadores para camarones Autor: César Molina Poveda, Ph.D. y Carlos Mora Pinargote, B.Sc. Investigación y Desarrollo. Skretting Ecuador cesar.molina@skretting.com

l cultivo de camarón Litopenaeus vannamei representa el grupo de crustáceos más grande, con un crecimiento promedio anual del 16.4% durante la última década (FAO, 2019). Este sector en constante crecimiento es actualmente dependiente del suministro de nutrientes a través de alimentos peletizados o extruidos (FAO/NACA, 2012), como muestran las estadísticas para Ecuador en el 2018 se produjo alrededor de 550 mil TM de alimentos para camarón (Gibson, 2019). Según el último informe del Grupo IMARC, titulado “Mercado de alimentos para camarones: tendencias, participación, tamaño, crecimiento, oportunidad y pronóstico de la industria mundial 20202025”, el mercado de alimentos para camarones alcanzó un valor de US $ 5,3 mil millones en 2019. La composición de los alimentos balanceados disponibles para la producción de camarón se clasifica acorde al estadio de desarrollo del animal: (a) Alimentos larvarios, desde larvas hasta un estadio PL14; (b) iniciadores, desde PL15 hasta que alcanzan los 4-5 g; (c) engorde para camarones > 5 g; y (d) alimentos para reproductores. En este artículo, nos concentraremos en los alimentos iniciadores, que tienen como prioridad crítica obtener un rápido crecimiento, alta supervivencia y un normal desarrollo del animal (Glencross y Turchini, 2011). Analizaremos primero la evolución de los métodos de elaboración de los alimentos

balanceados y después los nutrientes necesarios para mejorar el crecimiento del camarón Litopenaeus vannamei. Fabricación de los alimentos balanceados La investigación sobre los requerimientos nutricionales de penaeidos comenzaron desde 1970 y ha sido recopilada extensivamente en revisiones de NRC (2011) y Molina-Poveda (2016). La necesidad de mejores balanceados ha generado una gran cantidad de investigaciones prácticas que cubrieron no solo la nutrición y fisiología del animal, sino también la tecnología de manufactura del alimento. Nuevas tecnologías dieron paso a la extrusión usada en la manufactura de balanceado, que por su versatilidad dio como resultado la producción de dietas extruidas de tamaños uniformes y más pequeños a los obtenidos a través de la peletización y granulación. Si bien es cierto, al inicio de la adopción de esta tecnología para alimentos para camarón, hubo algunos problemas de flotabilidad e incremento de los costos de formulación y fabricación (Hardy y Barrows, 2003). A través de recientes avances en la producción de alimentos extruidos, como los ajustes en el diseño y velocidad de tornillo, los cambios de configuración de la matriz y la ventilación al vacío del cilindro extrusor, ahora es posible producir alimentos para camarones que se hunden al 100% con densidades equivalentes a las de los alimentos peletizados (Delgado y Reyes-

NUTRICIÓN Jaquez, 2018). Los extruidos se procesan a niveles más altos de temperatura, presión y a diferentes niveles de humedad que los pellets comprimidos (Hardy y Barrows, 2003). La manipulación de la condición de procesamiento en la extrusión da como resultado: (a) la gelatinización y expansión del almidón, lo que hace al alimento más estable en el agua y permite regular su densidad, logrando que el producto pueda flotar, hundirse lentamente o hundirse rápidamente en el agua; dependiendo de las condiciones de fabricación; (b) la gelatinización del almidón también aumenta su biodisponibilidad, mejorando con ello su digestibilidad; (c) la integridad física y la composición química de los extrusos se mantienen durante prolongados períodos de almacenamiento, aun después de la manipulación y transporte; (d) por su muy baja presencia de finos, los alimentos extruidos pueden ser igualmente usados en alimentadores automáticos sin causar bloqueos; (e) la alta temperatura y presión del proceso reduce la contaminación microbiana e inactiva enzimas y factores antinutricionales; (f) por su alta de hidroestabilidad reducen la contaminación del agua (Molina y Espinoza 2019, 2020; Bordoloi y Ganguly, 2014; Chinnaswamy y Hanna, 1988; Delgado y Reyes-Jaquez, 2018; Kim et al., 1992; Paton y Spratt, 1984; Singh et al., 2007). En una serie de estudios realizado por Skretting Ecuador, se logró identificar y comprobar los beneficios que otorgaba la alimentación de dietas con la misma formulación, pero diferente manufactura (extruidas y peletizadas); concluyendo que es posible aumentar significativamente la biomasa, peso final, digestibilidad de

- AGOSTO 2020 proteínas y carbohidratos, sin que se afecte significativamente el factor de conversión alimenticio (FCA) y la supervivencia (Tabla 1). Por lo antes mencionado, el proceso de fabricación para la producción de alimentos acuáticos puede tener un impacto directo en las propiedades físico-químicas, lo que a más de beneficiar la durabilidad y estabilidad del alimento en el agua (Hilton et al., 1981; Misra et al., 2002), puede resultar en una alteración de la calidad nutricional de los ingredientes y como consecuencia, influir en el crecimiento del animal (Barrows et al., 2007; Molina y Espinoza 2019,). Nutrientes necesarios en alimentos iniciadores Los alimentos iniciadores son considerados de alto valor nutricional para la fase inicial del cultivo en camaronera, por lo que se apunta a tener alimentos con altos niveles de proteínas de fácil digestión, HUFAs, fosfolípidos y colesterol. Estos, producidos a través de procesos de fabricación que permitan tener el tamaño adecuado para la boca del camarón y por ende, que estén disponibles para el consumo con el menor desperdicio posible. Proteínas El valor nutricional de la proteína es dependiente de la cantidad, digestibilidad y disponibilidad de sus aminoácidos esenciales. Entre estos, la digestibilidad es considerada el determinante más importante y mejor alcanzado en alimentos extruidos, debido a la desnaturalización a altas temperaturas de las proteínas e inactivación de factores antinutricionales que afectan la digestión. Dado que los camarones tienen una capacidad limitada para sintetizar proteínas

a la velocidad que se requiere para promover el máximo crecimiento del esqueleto de carbono, la proteína debe obtenerse a través del alimento que consume. En los crustáceos, el nivel óptimo de proteína se determina en función de los datos de crecimiento con diferentes niveles de proteína en la dieta, que se define como la cantidad mínima de este nutriente necesario para el máximo crecimiento (Cuzon et al., 2004) . Estudios han establecido requisitos proteicos para Litopenaeus vannamei del 40% (Cousin et al., 1994; Pedrazzoli et al., 1998). Recientemente Lee y Lee (2018) condujeron un ensayo en varios rangos de peso de camarones L. vannamei, observándose que en la etapa inicial (de 0.6 a 5g) se consigue el mayor peso final y ganancia en peso los camarones alimentados con la dieta que contenía 40% de proteína. Fuentes de proteína Una de las principales fuentes de proteína usada en la manufactura de dietas para camarón es la harina de pescado. La calidad de la proteína y la composición nutricional de las harinas de pescado varía dependiendo de la frescura, condiciones y tiempo de almacenamiento antes del procesamiento y del tipo de materia prima (subproductos o entero), temperatura y tiempo de secado; así como la reincorporación o no de los solubles que se liberan durante el proceso. Estos factores van a afectar el rendimiento de los camarones menores a 1g, tal como lo ha reportado Cruz-Suárez et al. (2000). Por este motivo y la cada vez menor disponibilidad, otras fuentes de proteínas disponibles han sido estudiadas buscando ser cada vez menos dependientes de la harina de pescado, como ingrediente en los alimentos para camarones L. vannamei

Tabla 1 . Resultados de comparar alimentos producidos con extrusión y peletización (Molina y Espinoza, 2020).

Valores que no comparten similar letra en la misma columna son significativamente diferentes (p < 0.05). DAP: Digestibilidad aparente de proteina. DAC: Digestibilidad aparente de carbohidratos.

NUTRICIÓN

- AGOSTO 2020 (Molina-Poveda et al., 2015). Un número considerable de estudios ha demostrado que el uso de la harina de soya en combinación con otros ingredientes en las dietas para camarón favorecen el crecimiento, supervivencia y factor de conversión alimenticia (Amaya et al., 2007a, 2007b; Samocha et al., 2004; Sookying y Davis, 2011). Estos resultados han llevado a mejorar incluso más este ingrediente, creando productos refinados de soya, como el concentrado proteico de soya (SPC), con un contenido proteico de hasta 65%. Sus beneficios se deben a que presenta un favorable perfil de aminoácidos, digestibilidad proteica y energética, reducida concentración de factores antinutricionales y una mejor palatabilidad (Cruz-Suárez et al., 2009; Gatlin et al., 2007; National Research Council, 2011. El uso de SPC en dietas balanceadas es menos común que la harina de soya, pero existe un interés creciente debido a que algunos estudios han evaluado su uso en camarones (Bauer et al., 2012; Forster et al., 2002; Sá et al., 2013). Se ha llegado a reportar que hasta un 75% de harina de pescado se logra un buen crecimiento en camarones L. vannamei, confirmando así que SPC puede apropiadamente ser usado para el cultivo de juveniles L. vannamei. Todo gracias a que desde su proceso de manufactura, los carbohidratos solubles son removidos y la mayoría de los factores antinutricionales son reducidos (Forster et al., 2002) . El valor nutricional en proteínas vegetales es usualmente mejorado por extrusión, debido a un incremento en la digestibilidad. Hidrolizados de origen marino Se conoce la poca palatabilidad, atractabilidad ( Davis y Arnold, 2000; Li et al., 2007; Molina-Poveda y Morales, 2004; Nunes et al., 2006) y bajo contenido de nucleótidos (Molina-Poveda 2010) en la soya, los cuales limitan su uso como balanceados acuícolas si no se complementan con ingredientes que puedan cubrir estas deficiencias. Los hidrolizados provenientes de fuentes como krill, camarón, calamar y de diferentes especies de peces derivados de diversos subproductos, han sido usados extensamente en balanceados acuícolas

como suplemento proteico, atrayentes o mejoradores de palatabilidad (Aguila et al., 2007; Suresh, et al. 2011), con el fin de incrementar el crecimiento y la utilización de alimentos para camarón (Córdova-Murueta y García-Carreño, 2002; Forster et al., 2004, 2011; Hernández et al., 2011; Nguyen et al., 2012; Herault, et al., 2014). En estos últimos, sugiriendo que la suplementación de 3% y 9% de hidrolizados de pescado tiene efectos positivos en el desempeño del crecimiento. Estos beneficios han sido atribuidos a las fracciones de péptidos de cadena corta derivadas del pescado hidrolizado, el cual tiene un papel fundamental en el desarrollo de postlarvas de camarón (Quinto et al., 2017). Otra alternativa como uso suplementario de proteínas marinas para dietas acuícolas se encuentra en algunos moluscos; especies con gran interés comercial, pero con descarte de muchas partes, a pesar de ser un subproducto rico en proteínas (Lin y Li, 2006).

vannamei. Incorporando una dieta que contenía aceite de pescado de arenque americano, se obtuvo el mejor crecimiento y supervivencia, seguido del aceite de linaza (Lim et al., 1997). Ambos HUFA n-6 y n-3 son esenciales para L. vannamei juveniles. Sin embargo, los ácidos grasos n-3 provocan un mayor crecimiento que los ácidos grasos n-6. Más recientemente, se examinó el valor nutricional del ácido linoleico (LOA) y ácido linolénico (LNA) (González-Félix et al., 2003b). No se demostraron los requerimientos dietéticos para juveniles de L. vannamei. Sin embargo, los resultados mostraron un mayor valor nutricional de los n-3-HUFA (ácido araquidónico, EPA, DHA), produciendo un peso final y una tasa de crecimiento instantánea significativamente mayor. En resumen, los PUFA (LOA + LNA) fueron inferiores a los HUFA y dicha relación está vinculada con una capacidad para alargar y desaturar la cadena de ácidos grasos linolénicos n-3.

Estudios han reportado que los hidrolizados de moluscos pueden ser usados como una fuente de proteína o atrayente en peces (Lian et al., 2008, 2005), demostrando que el uso de esta harina produce un buen crecimiento a un nivel de inclusión del 3%, a pesar de que otros estudios han reportado mejoras en el crecimiento a niveles de inclusión mayores (Cruz-Suárez et al., 1992; Sánchez et al., 2012). En camarón se han registrado diferencias significativas contra el control (Sánchez et al., 2012; Zhou et al., 2016); al igual que estudios llevados a cabo por nuestro equipo, en los que se ha logrado demostrar la mejora de los parámetros zoométricos usando este ingrediente.

Esto se reflejó en la composición de ácidos grasos de los tejidos (González-Félix et al., 2003a), con un perfil de tejidos de camarones que refleja la composición de los lípidos de la dieta, los cuales variarán según la fuente usada y la relación entre las clases de lípidos presentes en dichos compuestos (Cuzon et al., 2004).De acuerdo a diferentes estudios en requerimientos lipídicos en otras especies de camarones penaeidos y en juveniles de L. vannamei, los niveles recomendados para dietas comerciales no deberían ser superiores al 10% (Pedrazzoli et al., 1998) . El ciclo de los crustáceos, incluido el camarón, es influenciado por la interacción de componentes integrales de la membrana celular como los fosfolípidos (PL), ácidos grasos y colesterol; que tienen un efecto en los procesos biológicos de los crustáceos al ser precursores de las principales enzimas necesarias para el crecimiento y la reproducción (D’Abramo, 1989). Los PL son componentes críticos del tejido lipídico, incluso a niveles bajos. Estos son los mayores constituyentes de la membrana celular y sus lipoproteínas, representando más del 50% de los lípidos totales y el segundo mayor de su clase, después de los triglicéridos, en el hepatopáncreas del camarón (Sriket et al., 2007).

Lípidos: ácidos grasos, fosfolípidos y colesterol La mayoría de los estudios dedicados a definir la mejor cantidad y calidad de lípidos han utilizado individuos con pesos iniciales inferiores a 10 g. Los lípidos se otorgan a los camarones principalmente en forma de aceite de pescado, en forma pura o contenido en harina de pescado. Alimentando con varias fuentes de lípidos, se analizó el efecto sobre la ganancia de peso, FCA, supervivencia y composición de ácidos grasos en juveniles de L.

NUTRICIÓN

- AGOSTO 2020

Tabla 2. Resultados zootécnicos de camarones alimentados con diferentes modificaciones al alimento iniciador

Valores numéricos que no comparten similar letra en la misma columna son significativamente diferentes (p < 0.05). Los camarones tienen la habilidad de sintetizar PL, pero esta biosíntesis usualmente no alcanza sus requerimientos metabólicos para la formación de nuevos componentes celulares durante sus estadios larvarios o juveniles tempranos. Así la implementación a la dieta ayuda a mejorar su metabolismo lipídico, incluido la del colesterol (Coutteau et al., 1997; Teshima et al., 1986), resultando en efectos beneficiosos para varios crustáceos (Molina-Poveda, 2016). Estudios en postlarvas de L. vannamei han mostrado que la suplementación del 1.5% fosfatidilcolina de soya purificada (PC) mejora significativamente el crecimiento y reduce la sensibilidad al estrés osmótico, en comparación con el suministro de huevos de peces marinos (Coutteau et al., 2000). El nivel recomendado de la suplementación de PL en dietas para postlarvas de L. vannamei se encuentra entre 1.5-6.5% (Coutteau et al., 1997) y para juveniles alrededor del 3-5%, el cual puede ser suplido con 3 – 5% de lecitina tipo I (98% PL ) o 4 – 7% lecitina tipo II (71% PL ) (Gong et al., 2000). El colesterol es uno de los principales esteroles en crustáceos. Puede ser encontrado en sus células ya sea de forma libre o combinado con ácidos grasos. Sin embargo, los crustáceos no son capaces de sintetizarlos. Es generalmente bien aceptado que la ingesta de colesterol en la dieta es esencial para el mantenimiento, crecimiento adecuado, reproducción (Kanazawa et al., 1971; Kumar et al., 2018; Teshima et al., 1997), y defensa a anomalías ambientales como estrés térmico o por salinidad, debido a que promueve una mayor integridad de las membranas celulares (Yang et al., 2016). Los niveles óptimos de colesterol en la dieta para crustáceos pueden variar enormemente dependiendo del estadio de desarrollo o reproducción de la especie, mientras que deficiencias o niveles excesivos pueden

llevar a un crecimiento comprometido (Rosa y Nunes, 2004); como se ha observado en juveniles de P. monodon (Sheen et al., 1994) y postlarvas de L. vannamei (Niu et al., 2012). Ha sido reportado que existe una interacción entre el colesterol y los PL (Gong et al., 2000) porque los PL dispersan y facilitan el transporte del colesterol a los tejidos. Se ha observado que, sin la suplementación de PL en la dieta, el camarón requiere de 0.35% de colesterol para obtener el máximo crecimiento, pero el requerimiento de colesterol disminuye a medida que se incrementa el nivel de PL en la dieta. Crecimientos óptimos de L. vannamei fueron logrados con 0.35, 0.14, 0.13 y 0.05% de colesterol suplementado en dieta, con niveles de PL de 0, 1.5, 3.0, y 5.0%, respectivamente (Gong et al., 2000). El requerimiento de colesterol de L. vannamei se ve afectado por los PL en dieta. Los requerimientos de PL basados en el crecimiento fueron 5% sin la suplementación del colesterol, y 3 – 5% con la suplementación del colesterol hasta un 0.2% de la dieta basal, y 3% con 0.4% de colesterol incluidos en la dieta (Gong et al., 2000). Por todo lo antes mencionado, una serie de ensayos fueron realizados para mejorar la efectividad de la fórmula estándar de los alimentos iniciadores para camarones juveniles, que finalmente concluyó con una prueba en un sistema de cultivo sin productividad primaria. El ensayo duró 6 semanas para evaluar diversas variantes de la fórmula estándar y con ello determinar el rendimiento del crecimiento y la resistencia al estrés de los juveniles Litopenaeus vannamei, sembrados a una densidad de 38 camarones / m2. Los resultados muestran

un peso y biomasa final significativamente (p < 0.05) mayor y estadísticamente en menor FCA (Tabla 2). No fueron encontradas diferencias (p > 0.05) en las tasas de supervivencia de los camarones. Además, se realizó un experimento para investigar el efecto de las nuevas formulaciones sobre la supervivencia bajo estrés agudo de hipoxia. Después de 44 horas de exposición a una baja concentración de oxígeno disuelto de 0.9 ± 0.2 mg O2 L-1, la supervivencia del camarón no mostró diferencias estadísticas (p > 0.05) en comparación con la dieta original. Por lo que los resultados del experimento de estrés hipóxico, sugieren que el alimento mejorado ofrece la misma resistencia al estrés que el alimento original. Por todo lo descrito en este artículo, la investigación en alimentos iniciadores a través de los años nos ha llevado a mejoras en su composición nutricional y fabricación. Esta área del conocimiento promete una constante mejora en el valor nutricional, la calidad y funcionalidad de los alimentos iniciadores que se reflejará cada vez en un mayor desempeño del camarón•

Para más información sobre este artículo escriba a: cesar.molina@skretting.com

PRODUCCIÓN

- AGOSTO 2020

Detección de probióticos intestinales y efectos de la alimentación de probióticos en el crecimiento, actividad enzimática inmune, digestiva y flora intestinal de Litopenaeus vannamei Autores: Zhi-han Zuo¹ Bi-jiao Shang¹, Ying-chun Shao, Wen-yue Li, Jin-sheng Sun* Tianjin Key Laboratory of Animal and Plant Resistance, Facultad de Ciencias de la Vida, Universidad de Tianjin Normal, 393 West Binshui Road, Xiqing District, Tianjin, 300387, República Popular de China jssun1965@aliyun.com

on el rápido desarrollo del cultivo de camarón, las enfermedades en el cultivo de camarón se han vuelto cada vez más prominentes, y el grave aumento de problemas medioambientales amenazan el cultivo del camarón [1–3]. Varios estudios han demostrado que el uso de una gran cantidad de antibióticos no solo perturba la flora normal del tracto intestinal del camarón y hace que los patógenos sean resistentes a las drogas, sino que también los residuos de medicamentos en el medio ambiente y en el cuerpo del langostino, amenazan en última instancia a la salud y seguridad del ser humano [4,5]. En vista del hecho de que los probióticos no producen residuos o resistencia de drogas en los animales, el uso de probióticos como sustitutos de los antibióticos se ha convertido en un tema tendencia de investigar. Muchos estudios han demostrado que los probióticos complementarios no solo pueden mejorar la supervivencia y la tasa de crecimiento de los animales acuáticos, sino también reducen el brote de enfermedades al mejorar el sistema inmunológico de peces y camarón [6]. Los probióticos han sido ampliamente utilizados en acuicultura como una forma efectiva de controlar enfermedades, mejorar la inmunidad, proporcionar nutrición, promover la digestión y controlar la calidad del agua [7,8].

El aislamiento de cepas con variada actividad enzimática digestiva del tracto intestinal de animales sanos se ha convertido en una forma efectiva de detectar probióticos [9,10]. Se ha demostrado que se deberían usar bacterias beneficiosas seleccionadas en el cuerpo del camarón, que no solo puedan mejorar la tasa de conversión del alimento y favorecer el crecimiento del camarón, algunos probióticos pueden también promover la inmunidad del sistema inmunitario del camarón ante virus y bacterias patógenas y reducir brotes de enfermedades del camarón [11]. En este experimento, los probióticos candidatos fueron detectados del tracto intestinal de camarón sano y el experimento de alimentación fue conducido para intentar evaluar la función biológica de probióticos endógenos del intestino.

Materiales y Métodos Animales experimentales Se obtuvo Litopenaeus vannamei experimental de una granja local en Dagang, Tianjin, China y fue cultivado temporalmente en el laboratorio por dos semanas antes de las pruebas de alimentación. Reactivos y materiales Se adquirió medio MRS, medio YPD, medio TSB, medio LBs, medio 2216E y medio de aislamiento de bacilo de Luqiao Technology Co., Ltd (China). Se compraron varios kits de actividad enzimática de Suzhou Keming

PRODUCCIÓN

- AGOSTO 2020 Biotechnology Co., Ltd (China). Se sintetizaron primers de PCR de Sangon Biological Engineering Co., Ltd (China). Se adquirieron instrumentos de microestaciones biológicas y reactivos para identificación de Guangdong Huayue instruments Co., Ltd (Estados Unidos).

Detección e identificación de probióticos intestinales en L. vannamei sano Detección de cepas con fuerte capacidad de producción de enzimas y actividad antimicrobiana Después de una desinfección de L. vannamei sano con alcohol al 75%, los intestinos fueron molidos en un homogeneizador en condiciones asépticas, y el líquido obtenido se diluyó con NSS [12]. El fluido obtenido de diferentes partes y diferentes diluciones se lo revistió con medio MRS, medio YPD, medio TSB, medio LBs y medio 2216E. El aislamiento de Bacillus necesita un cultivo enriquecido, y luego una recubierta en el medio de aislamiento de Bacillus, que se cultiva a una temperatura constante de 28 °C durante 24-48 h. Las colonias individuales fueron inoculadas y purificadas en el correspondiente medio de cultivo al menos 3 veces. Se detectó actividad de lipasa, amilasa y proteasa y la prueba común de susceptibilidad a antibióticos de las cepas purificadas, y se realizó un experimento antagónico con patógenos comunes de enfermedades del camarón mediante el método de papel de filtro en el medio de cultivo [13]. Identificación de especies de cepas Las cepas se identificaron mediante análisis molecular, se extrajo el ADN genómico y se amplificó el ADNr 16S con los primers 27F (5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ′) y 1492R (5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3 ‘). Las condiciones de reacción de PCR: 94 °C durante 4 min seguido de 30 ciclos de 94 °C por 30 s, 50 °C por 1 min y 72 °C por 2 min, y 72 °C por 10 minutos. Los productos amplificados (aproximadamente 1.5kp) se secuenciaron (a cargo de Beijing Yingweijieji Technology Co.Ltd.) y la secuencia ADNr 16S se comparó e identificó en la base de datos GenBank (http://blast.ncbi.nlm.nih. gov/Blast.cgi). La identificación adicional de especies se llevó a cabo utilizando la

identificación de microorganismos con el método Biolog-System. Características biológicas de las cepas Según los métodos experimentales de Kaynar, la única colonia de probióticos candidatos fue seleccionada para un cultivo nocturno en el medio de cultivo correspondiente, y la solución de suspensión pesada fue cultivada en diferentes condiciones de cultivo [14]. Se investigó las condiciones óptimas de crecimiento de la cepa, incluyendo temperatura, pH, la concentración de NaCl y sal biliar de origen bovina. Experimento de alimentación Método de alimentación El experimento se dividió en tres grupos, de los cuales el grupo E3 agregó Enterobacter hormaechei y el grupo L3 agregó Lactobacillus en el alimento, mientras que el grupo en blanco era el mismo alimento con igual cantidad de PBS, por triplicado (tres cilindros de acuicultura) en cada grupo. Se colocó un total de 250 camarones con una longitud corporal de 4 cm en cada estanque. Los camarones fueron alimentados con el 5% de su peso corporal dos veces al día. La concentración de bacterias en el alimento fue 107 UFC g− 1, se cambió diariamente la mitad del agua y se alimentó 28 días de esta manera [15-17]. La calidad del agua fue estrictamente controlada para eliminar interferencias: amoníaco, 0.03–0.06 mg mL− 1 ; nitrito, 0.013–0.019 mg mL− 1; temperatura, 28–33 °C; pH 8.0–8.5; salinidad, 18–21‰. 2.4.2 Determinación de la enzima inmune y actividad enzimática digestiva relacionada con la sangre El muestreo se realizó cada 7 días durante la alimentación, fueron seleccionados 20 camarones al azar de cada grupo. Se obtuvieron células sanguíneas y suero por centrifugación en condiciones asépticas a 4 °C, 800 g por 10 min. Las células sanguíneas se almacenaron en 1 mL de Trizol a -80 °C, y el suero se preservó a 4 °C. Las actividades del superóxido dismutasa, polifenol oxidasa, fosfatasa ácida, lisozima, peroxidasa y catalasa en la sangre se determinaron de acuerdo con los requisitos del kit. Al mismo tiempo, se molió el tracto intestinal de los camarones con solución tampón del kit para preparar la muestra, y

las actividades de proteasa, amilasa y lipasa en el tracto intestinal se determinaron de acuerdo a los requisitos del kit. Determinación del crecimiento de L. vannamei Antes de que comenzara el experimento, se recolectaron al azar 10 camarones de cada grupo de los estanques, se midió su peso corporal (W0). Durante la alimentación, se seleccionaron al azar 10 camarones de cada grupo para medir su peso corporal (Wt) cada semana. La tasa de aumento de peso de cada grupo se calculó:

FÓRMULA

Determinación de la mortalidad acumulada de L. vannamei después de la infección con WSSV Después de la alimentación, se recolectaron 120 camarones de cada grupo, y cada grupo incluyó tres réplicas. El camarón fue inyectado vía intramuscular con la suspensión de partículas del WSSV preparada y 10 μl fue inyectado en el segundo somita abdominal del camarón. La mortalidad acumulada de los camarones se registró cada 12 h para evaluar el efecto de probióticos sobre la resistencia de los camarones después de la inyección muscular del WSSV. Observación del intestino de L. vannamei con microscopio electrónico Después de la alimentación, se recolectaron 10 camarones al azar de cada grupo, y los intestinos se cortaron con cuchillas afiladas con una solución glutaraldehído al 2.5%, se enjuagó el contenido varias veces con solución de glutaraldehído al 4%. Las muestras se deshidrataron secuencialmente en alcohol al 60%, 80% y 100% durante 15, 30 y 45 minutos, respectivamente. Las muestras obtenidas fueron observadas bajo un microscopio electrónico de barrido (SEM; Hitachi TM- 1000, Japón) a 15 kV y un microscopio de transmisión (TEM; Hitachi TEM-1200, Japón) a 80 kV. Detección de la comunidad microbiana intestinal de camarón por método BiologECO

PRODUCCIÓN Después de la prueba de alimentación de 28 días, se seleccionaron al azar 20 camarones del grupo experimental y el grupo control al día 1, 5, 10 para probar la comunidad microbiana intestinal. Se limpió la superficie para desinfección con alcohol al 75% y solución salina normal al 0.8%, se diseccionó en estado estéril, se removió el tracto intestinal y se homogeneizó con solución salina fisiológica en un baño de hielo homogeneizador. El volumen final del homogenizado fue de 20 mL. Se agitó el homogenizado en una microplaca BiologECO [18], se agregó 150 μL a cada orificio, por triplicado. La microplaca es cultivada en 30 °C durante 4 h y luego se leyó mediante lectura del sistema Biolog cada 24 h hasta 5 días. Análisis estadístico Los resultados de los experimentos triplicados se presentan como medias ± desviación estándar. Se analizó la significación de la data con ANOVA unidireccional seguido de pruebas de comparación múltiple de Duncan utilizando Software SPSS versión 11.0. Se consideró un valor de P menor que 0.05 como estadísticamente significante.

Resultados Probióticos candidatos Se detectó un total de 426 cepas del intestino de L.vannamei en 6 tipos de medios de cultivo, entre los cuales 11 cepas producían enzimas y un efecto bacteriostático (Fig. 1). Luego se realizó la prueba hemolítica y pruebas de susceptibilidad a antibióticos en estas 11 cepas para determinar la seguridad de las cepas. Los resultados mostraron que ninguna de las 11 cepas mostró actividad

- AGOSTO 2020 hemolítica y 3 cepas fueron resistentes a antibióticos comunes, las otras fueron sensibles a muchos tipos de antibióticos (Tabla 1). De acuerdo con los resultados de la prueba de actividad bacteriostática, la prueba de actividad enzimática digestiva y prueba de seguridad, se detectaron 2 cepas probiótico-sensibles que tenían una fuerte producción de enzimas y efecto bacteriostático, identificándose como Enterobacter hormaechei (E3) y Lactobacillus (L3) por identificación molecular de ADNr 16S, el índice de homología fue de 100% y 99.9%, respectivamente en la base de datos de GenBank. Luego se usó el sistema Biolog para identificar de nuevo, y confirmar los resultados de identificación. Características biológicas de los probióticos candidatos Enterobacter hormaechei (E3), bacteria gram-negativas, anaerobia facultativa, de motilidad periflagelada, puede crecer ampliamente. La condición óptima de crecimiento de la cepa E3: temperatura, 30 °C; pH 8.0; NaCl concentración 2.5% y concentración de sal biliar bovina 0.15% (Fig. 2); Lactobacillus (L3), bacteria gram-positiva, anaerobia facultativa, las condiciones óptimas de crecimiento de L3: temperatura, 40 °C; pH 6.0; concentración de NaCl al 0.5% y concentración de sal biliar bovina al 0.0015% (Figura 2). Actividad enzimática inmune relacionada con la sangre y enzima digestiva intestinal Las actividades de PPO, SOD, ACP, POD y CAT en la sangre de L. vannamei alimentado con probiótico E3 aumentaron significativamente (p < 0.05) durante todo el proceso de

alimentación, excepto la actividad de LZM que disminuyó en el día 14. La actividad de las mismas enzimas en la sangre de los probióticos L3 mostró la misma tendencia de E3, excepto un poco más bajo que la del grupo E3. La actividad PPO del grupo L3 disminuyó en los 7 días (Fig. 3). Las actividades de la proteasa neutral y la lipasa en el tracto intestinal de L. vannamei después de la alimentación con bacterias probióticas aumentaron significativament (p < 0.05), pero en general, la actividad en el grupo L3 fue inferior al del grupo E3, y la actividad de la amilasa mostró signos de diferencia significativa después de alimentar con probióticos durante cuatro semanas, en comparación con el grupo en blanco (Fig. 4). Tasa de crecimiento de L. vannamei Durante el período de cultivo y alimentación del camarón, no hubo diferencia significativa (p < 0.05) en la primera semana; en la segunda semana, el grupo L3 (8.95%) fue ligeramente más alto que el grupo E3 (7.05%) y el grupo en blanco (6.98%); en la tercera semana, el grupo L3 (10.94%) y el E3 grupo (10.79%) fueron significativamente más altos que el grupo en blanco (8.25%). Después de terminar la alimentación, los grupos de probióticos fueron significativamente mayor que el grupo control (10.05%), y el efecto del grupo E3 (13.75%) fue más significativo. Tasa de supervivencia acumulada de L. vannamei después de la infección con WSSV Después de una infección con WSSV, la tasa de mortalidad acumulada del grupo control y

Fig. 1. Resultados experimentales positivos de tres enzimas digestivas y manchas antagónicas. (A) proteasa positiva de E3; (B) amilasa positiva; (C) lipasa positiva; (D) mancha antagonista de E3.

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- AGOSTO 2020 Tabla 1.- Susceptibilidad de 11 cepas a antibióticos comunes (Notas: R. resistencia; I. intermedio; S. sensible.).

Fig. 2. Características biológicas de E3 y L3, incluyendo temperatura, pH, concentración de NaCl y concentración de tolerancia a la sal biliar bovina. Los valores se presentan como medias ± desviación estándar (n = 3), y las diferencias significativas (p < 0.05) se indican con letras diferentes (a, b y c).

grupos de probióticos eran casi iguales a las 24 h, con una diferencia menor a las 36 h. La mortalidad acumulada de camarón en el grupo en blanco fue significativamente mayor que el del grupo experimental a diferentes tiempos después de 48 h, entre los cuales, la mortalidad acumulada la tasa en el grupo E3 siempre fue menor que en el grupo L3 (Fig. 5). Observación del intestino medio de L. vannamei en microscopio electrónico Los resultados de la exploración con microscopio electrónico mostraron que había

diferencias significativas en la superficie interna de los tejidos intestinales en muestras diferentes. La densidad y la profundidad de plegado del grupo de probióticos fue más alto que el del grupo control, y hubo una serie de pequeñas protuberancias en la superficie. Además, la densidad de plegado del grupo E3 fue más alta que la del grupo L3, y había agrupaciones en el grupo L3. Los resultados del microscopio electrónico de transmisión mostraron que la integridad de las células epiteliales y la densidad de la capa mucosa en los probióticos fueron mejores que los del grupo control. Y hubo pocas partículas

en células epiteliales en el grupo control, el citoplasma del grupo de probióticos se llenó con gránulos de alta densidad y mostró un estado de secreción activa. Entre los cuales, el efecto reparador de la mucosa intestinal en el grupo E3 fue mejor que en el grupo L3 (Fig. 6). Comunidad microbiana intestinal de L. vannamei El primer día después del finalizar la alimentación de 28 días con probióticos, la AWCD (tasa de cambio promedio de color por hoyo) del grupo E3 y del grupo L3

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Fig. 3. Actividad de enzimas inmunes no específicas relacionadas con la sangre en L. vannamei, incluyendo polifenol oxidasa, superóxido dismutasa, fosfatasa ácida, lisozima, peroxidasa, catalasa. Los valores se presentan como medias ± desviación estándar (n = 3), y las diferencias significativas (p < 0.05) se indican con letras diferentes (a, b y c).

Fig. 4. Actividad de enzimas digestivas en el intestino de L. vannamei, incluyendo proteasa neutra, amilasa, lipasa. Los valores se presentan como medias ± estándar la desviación (n = 3) y las diferencias significativas (p < 0.05) se indican con letras diferentes (a, b y c).

fue significativamente mayor que el grupo control, y la AWCD de microorganismos intestinales en el grupo E3 fue mayor que el del grupo L3. Al quinto día, la AWCD del grupo E3 y el grupo L3 tendieron a ser consistentes, pero aún eran significativamente más altas que los del grupo control, y en el décimo día, la AWCD de microorganismos del camarón en el grupo L3 y E3 y el grupo control eran casi iguales (Fig. 7). Los resultados sugirieron que la capacidad

total de microbios intestinales para utilizar fuentes de carbono de grupos probióticos fue significativamente más alta que el grupo control hasta el décimo día. La tabla del índice de diversidad de la microflora intestinal mostró que, en comparación con el grupo control, el índice de Shannon de la comunidad de microorganismos intestinales del grupo E3 se redujo significativamente en el 1er y 5to día después de la alimentación de 28 días, el índice de Simpson y el índice de Mclntosh aumentaron significativamente

y no hubo diferencias significativas en el muestreo del décimo día del grupo E3; el índice de Simpson y el índice de Mclntosh del grupo L3 aumentó significativamente en comparación con el grupo control en el primer y quinto día, pero no hubo diferencias significativas en el muestreo del décimo día (Tabla 2). Los resultados indicaron que los probióticos solo podrían afectar la diversidad metabólica de las células intestinales de comunidades microbianas de L. vannamei a corto plazo, y que las comunidades

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- AGOSTO 2020 microbianas tenderían a ser consistentes con las del grupo control después de este período, y el experimento mostró que la duración de los probióticos en el intestino de L. vannamei fue de al menos 5 días. Análisis estadístico Los resultados se presentan como medias ± desviación estándar de experimentos triplicados. La data fue analizada por ANOVA unidireccional seguido de pruebas de comparación múltiple de Duncan utilizando el Software SPSS versión 11.0. Un valor de P menor que 0.05 se consideró estadísticamente significante.

Discusión Los agentes microecológicos no solo pueden mejorar la función inmune de animales acuáticos y reducir la incidencia de enfermedades, sino que también purifican el agua del cultivo, promoviendo el desarrollo de la industria acuícola hacia una dirección sostenible, por lo que es cada vez más utilizado [19-21]. Sin embargo, las especies probióticas de algunas materias primas utilizadas en la fabricación de agentes microecológicos son diferentes, lo que resulta en productos complejos y una falta de pertinencia y efectividad en probióticos para animales acuáticos [22]. Por lo tanto, en este experimento, se aisló la microflora intestinal de L. vannamei sano, y además a través de un experimento antagonista, experimento sobre la actividad de la enzima digestiva exocrina y el experimento de seguridad para obtener probióticos candidatos. Los probióticos candidatos con enzimas digestivas antagonistas y exocrinas, se identificaron como Enterobacter hormaechei (E3) y Lactobacillus (L3) respectivamente, luego las características biológicas de E3 y L3 fueron estudiadas para una amplificación mayor para cultivo y aplicación preliminar en experimentos de cultivo. Los probióticos nativos pueden ser direccionados a resolver los problemas de las enfermedades de L. vannamei o para promover el crecimiento del camarón. Se ha reportado que Enterobacter hormaechei puede causar infecciones en animales y humanos bajo ciertas condiciones. Es un patógeno condicional y puede aislarse

Fig. 5. Mortalidad acumulada de L. vannamei a las 24 h, 36 h, 48 h, 60 h, 72 h, 84 h y 96 h después de la infección con WSSV.

de la infección de la herida de animales y humanos. Además, se ha encontrado que las especies de Enterobacter se encuentran entre los cinco bacilos gram-negativos que causan infecciones hospitalarias [23]. Los aislamientos del complejo Enterobacter cloacae inducen apoptosis en células epiteliales intestinales humanas [24]. Sin embargo, el rol del probiótico Enterobacter hormaechei y su aplicación en la preparación de agentes antimicrobianos se ha reportado en la literatura relevante, que puede prevenir y controlar preparaciones de Vibrio alginolyticus o Vibrio parahaemolyticus, y puede usarse como una preparación microbiana beneficiosa para sustituir medicamentos químicos y para promover el desarrollo de cultivos acuícolas [25,26]. En este experimento, Enterobacter hormaechei (E3), que fue detectado en el intestino de L. vannamei, no mostró actividad hemolítica y patogenicidad, es más, jugó un papel superior en el crecimiento, actividad enzimática inmune y digestiva y flora intestinal después de alimentar a L. vannamei. Los probióticos tienen muchos efectos sorprendentes, pero estos efectos diferentes dependen mucho de la especificidad de la cepa. Un gran número de estudios clínicos han demostrado que una cepa probiótica específica tiene alguna función definida pero no significa que diferentes cepas del mismo probiótico deba tener las mismas funciones o funciones similares [27].

Nuestros resultados experimentales parecen confirmar la afirmación anterior. El mecanismo de defensa inmune humoral de L. vannamei maximiza su respuesta inmune no específica, que depende principalmente de enzimas no específicas en la hemolinfa, factores inmunoactivos como el fosfato alcalino fatasa, peroxidasa, etc., en la que la fagocitosis de las células sanguíneas median la aglutinación [28-30]. Solidificación, sustancias bactericidas y otras reacciones en el proceso de apertura del mecanismo de defensa inmune, y luego promover su propio poder de matar virus, mantener el mejor estado de defensa [3134]. En este estudio, la enzima inmune (SOD, PPO, ACP, POD, CAT, LZM) la actividad de dos grupos experimentales alimentados con probióticos Enterobacter hormaechei (E3) y Lactobacillus (L3) fue significativamente más alto que el del grupo control, al mismo tiempo, la tasa de mortalidad acumulada en los grupos de probióticos fue significativamente más baja que la del grupo control después de la infección por WSSV, que fue consistente con los resultados experimentales de que los probióticos podrían mejorar la actividad de factores inmunes inespecíficos y hasta cierto punto la capacidad antiviral en L. vannamei. El crecimiento de los animales acuáticos depende de la digestión, absorción y transformación de diversos nutrientes en el tracto digestivo. Estos procesos complejos y

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Fig. 6. Resultados de secciones intestinales de L. vannamei con microscopio electrónico (A). Grupo control (SEM); (B). Grupo L3 (SEM); (C). Grupo E3 (SEM); (D). Grupo control (TEM); (E). Grupo L3 (TEM); (F). Grupo E3 (TEM).

diversos se llevan a cabo utilizando enzimas digestivas en el intestino [35]. La actividad de la enzima digestiva se puede usar para medir el nivel digestivo de los animales acuáticos, y luego observar si es consistente con el índice de crecimiento de los animales acuáticos. La aplicación de probióticos en lugar de los antibióticos en la acuicultura ha hecho que más y más personas estudien las actividades enzimáticas digestivas en el intestino de animales acuáticos de manera más profunda y clara [36-38]. Los resultados de este experimento demostraron que la actividad de la proteasa, amilasa y lipasa en el intestino de los grupos E3 y L3 aumentó significativamente con el paso del cultivo. Puede ser causada por la secreción de enzimas digestivas de E3 y L3, o por la secreción fortalecida de las células estimuladas por estos dos probióticos, o

por la combinación de los dos factores. Y los resultados del microscopio electrónico mostraron que la capa de la mucosa del intestino estaba tensa y el estado endócrino estaba activo en los grupos de probióticos, que es consistente con los resultados de la enzima digestiva. En este estudio, la tasa de aumento de peso fue significativamente mayor entre los camarones alimentados con dietas suplementadas con 107 UFC g− 1 E3 y L3. Este resultado sugiere que la digestión y absorción de nutrientes fue más efectiva en el grupo E3 y L3 que en el grupo control, lo que fue consistente con el resultado de determinación de la actividad de la enzima digestiva del tracto intestinal y el resultado del microscopio electrónico. Se puede concluir que el tracto intestinal de L. vannamei es un órgano importante para digerir los alimentos y absorber los nutrientes. Hay un complejo sistema microbiano en el tracto intestinal de los animales. Hay

muchos tipos de microbios y comunidades de estructura compleja [39]. Los diversos grupos no solo dependen unos de otros para vivir juntos, sino también se refrenan mutuamente. La diversidad es un indicador importante utilizado para describir comunidades microbianas. La diversidad en este documento se basa en el análisis de la diversidad de fuentes de carbono en el tracto intestinal de L. vannamei basado en el método Biolog-ECO [40-43]. En este estudio, la tasa de cambio promedio de color por hoyo del grupo experimentado suplementado con E3 y L3, se incrementó significativamente comparado con el grupo control, indicando que E3 y L3 mejoraron la actividad microbiana intestinal. La capacidad general de usar carbono en la microflora intestinal de L. vannamei mejoró significativamente, indicando que las enzimas digestivas segregadas por E3 y L3 mejoraron la capacidad de digestión y

PRODUCCIÓN

- AGOSTO 2020 absorción del tracto intestinal del camarón, y por lo tanto, promovió el crecimiento rápido del camarón, este resultado luego demostró que los resultados de la determinación de la actividad enzimática digestiva y las medidas de crecimiento del camarón previas. Hubo diferencias significativas en el índice de diversidad microbiana intestinal (incluido el índice de Shannon, Simpson, e índice de Mclntosh) después de terminar la alimentación de 28 días con E3 y L3, en comparación con el grupo control, hasta el quinto día. Sin embargo, no hubo claras diferencias en el muestreo del décimo día entre los grupos del experimento y el grupo control, sugiriendo que el efecto de los probióticos en la microflora intestinal de L. vannamei fue de al menos 5 días, luego la diferencia de diversidad disminuyó gradualmente y tendió a ser consistente en el décimo día después de alimentarse con probióticos. Los resultados muestran que la suplementación de probióticos E3 y L3 en la alimentación puede mejorar la competitividad de la flora intestinal, cambiar el número y la estructura de la flora original del tracto intestinal, y promueve la interacción compleja entre la comunidad de microorganismos en el intestino del camarón, y luego juegan un papel importante en la protección o promoción de aspectos normales de la constitución del camarón. Pero el efecto de agregar probióticos en la flora intestinal es periódica, y cuando excede este ciclo, la composición de la flora

volverá a su estado original. Esto proporciona una referencia base para la aplicación de probióticos en acuicultura, y el intervalo entre la alimentación con probióticos no puede exceder su período de duración•

Para más información sobre este artículo escriba a: jssun1965@aliyun.com

Fig. 7. Los cambios de AWCD en la comunidad de microorganismos intestinales de L. vannamei se detectaron continuamente en el primer día, el quinto día y el décimo día después del muestreo, al final de la alimentación de 28 días con probióticos.

Tabla 2.- Índice de diversidad funcional de la comunidad microbiana

Nota: *la diferencia entre el grupo experimental y el grupo control fue significativa (p < 0.05), los valores se presentan como medias ± desviación estándar (n = 3).

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Manejo sostenible y rentable de la hepatopancreatitis necrotizante (NHP) en granjas de Litopenaeus vannamei Autores: Gustavo Alvisa Jorge Chávez Rigailb Rui A. Gonçalvesc Area Manager Zootecnia en Lucta Consultor independiente para el cultivo de camarón en Ecuador y México. c Gerente de Innovación Global en Acuicultura.

ruialexandre.goncalves@lucta.com

a hepatopancreatitis necrotizante (NHP) en el camarón blanco del Pacífico (Penaeus vannamei), fue identificada por primera vez hacia 1985, en Texas (USA), por lo que fue denominada inicialmente como el “Mal de Texas”. Las bacterias causantes del NHP, son de dos formas: un organismo en forma de barra, no flagelada, similar a la rickettsia (que es la forma predominante o NHP-B); la otra de forma helicoidal y flagelada, los vibrios sp, esta llamada también Vibriosis sistémica (Necrosis del Hepatopáncreas séptico o NHP-S). Esta enfermedad se encuentra distribuida en las instalaciones de cultivo de todo el mundo; se observa con mayor presencia en los laboratorios de producción de poslarvas y en las granjas camaroneras. Afecta a todas las especies de camarón, criadas en acuicultura, todas las fases de cultivo pueden ser susceptibles a la infección cuando se encuentran en condiciones de estrés. En los laboratorios de producción larvaria, las zoeas, mysis, y hasta las poslarvas que presentan infección bacteriana, con o sin luminiscencia, se observan con intestinos vacíos, nado errático, acumulación de materia orgánica en branquias, con la subsecuente melanización y necrosis de los apéndices, las mortalidades reportadas en estos cultivos pueden variar desde el 20% al 90%

Caracterización de la enfermedad La enfermedad se caracteriza por la atrofia del hepatopáncreas y la formación de

lesiones granulomatosas intratubulares que causan mortalidad, en poslarvas y juveniles tempranos, los camarones moribundos se encuentran nadando en la superficie y cerca de las orillas de los estanques, por lo que son presa fácil de las aves marinas, que se alimentan de ellos; debido a esto en algunas regiones de América se denomina “El síndrome de la gaviota”.

Signos clínicos macroscópicos Cuando la enfermedad se encuentra en fase inicial se observan algunos organismos con opacidad muscular y tracto digestivo vacío, y en la fase aguda es posible observar organismos con expansión de los cromatóforos, hepatopáncreas inflamado y atrofiado. Los por: • • • • • • • •

camarones infectados se caracterizan Letargo Reducción de la ingesta de alimento. Disminución de la tasa de crecimiento. Necrosis branquial. Caparazón blando y hepatopáncreas atrofiado. Intestino medio vacío. Aumento de la suciedad epicommensal superficial cuticular. Presencia de infecciones oportunistas (gregarinas)

Signos clínicos microscópicos El hepatopáncreas es el órgano más importante para el camarón. Histológicamente, las células epiteliales tubulares infectadas se hipertrofiarán, inicialmente, con una granularidad intracitoplasmática basófilada generalizada,

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- AGOSTO 2020 debido a la presencia de numerosos organismos intracitoplasmáticos pleomórficos similares al rickettsial. El examen microscópico de muestras de tejido no manchadas y preparadas a partir de hepatopáncreas sospechosas, puede mostrar una reducción de los lípidos y los túbulos necróticos melanizados oscuros.

Manejo del NHP El uso de poblaciones específicas libres de patógenos (FPS) de L. vannamei en condiciones de cultivo bioseguro es el método recomendado para la prevención de la infección por NHP. ¡Sin embargo, la transmisión de NHP después de la siembra de postlarvas (PL) en los estanques puede ser compleja!

Transmisión de NHP en la granja Los organismos que se encuentran frecuentemente en estanques de camarones (Ejemplo: cangrejos, jaibas, copépodos, y otros.) son especies hospederas para las bacterias del NHP. Ya que estos pueden moverse profundamente en los sedimentos de los estanques, lo que significa que pueden sobrevivir durante el período de secado o desinfección de los estanques. Por lo tanto, mientras que la transmisión vertical NHP puede reducirse utilizando reproductores SPF, la transmisión horizontal en la granja es una realidad. Además, las bacterias del NHP son altamente transmisibles a través del canibalismo, debido a la ingestión de tejido de hepatopáncreas infectado.

Prevención de NHP Se han usado antibióticos para controlar el NHP, ya sea estableciendo lotes libres de NHP a partir de reproductores tratados con antibióticos o utilizándolo como bacteriostático, normalmente administrado como suplemento en el alimento durante 10 días. Sin embargo, la industria camaronera Ecuatoriana se ha comprometido a garantizar la ausencia de antibióticos en toda la cadena de producción de camarón, y el impacto neutro en el agua utilizada son importantes para la producción y la sostenibilidad social y ambiental. ¡Por lo tanto, las soluciones de manejo del NHP, sostenibles y rentables son fundamentales!

Manejo sostenible de NHP Está documentado que el NHP esta asociado a oscilaciones de altas temperaturas y altas salinidades, y donde los productores tratan de minimizar el estrés ambiental, buscando continuamente soluciones sostenibles y rentables. Además de las buenas prácticas de manejo, es decir, una buena preparación del estanque, el mantenimiento de la bioseguridad, la siembra de larvas sanas y libres de enfermedades, el monitoreo regular de la salud de los camarones y la calidad del agua, además del uso de aditivos costoefectivos y alimentos sostenibles, rentables, son factores claves para una cosecha exitosa. Durante los tiempos de control de costos, la reducción de estos, ¡es clave para el éxito!.

sus utilidades y bajar sus costos.

Control de la hepatopancreatitis necrotizante (NHP) en granjas de Litopenaeus vannamei: Un ensayo de campo El objetivo de este estudio fue evaluar y probar la eficacia de una nueva solución rentable para controlar la hepatopancreatitis necrotizante (NHP) y sus efectos negativos en la producción comercial de L vannamei durante las condiciones de la temporada de verano. Fue comparada la eficacia de la “solución propuesta” (una mezcla comercial de ácidos inorgánicos y orgánicos) con otros productos de uso común en el mercado. El protocolo comúnmente utilizado por algunos de los productores, consiste en utilizar una combinación de dos productos disponibles en el mercado (Competidor 1 (C1) y competidor 2 (C2)). El competidor 2 es un producto a base de ácido fosfórico que cuesta un 240% más que la “solución propuesta”. El competidor 1, es un desinfectante de amplio espectro comúnmente utilizado como una solución de emergencia a NHP y que cuesta 760% más que la “solución propuesta”.

Diseño de la prueba Períodos como la actual pandemia COVID-19 destacan la importancia de tener prácticas de manejo de la producción basadas en índices económicos a nivel acuícola, que puedan ayudar a los productores a utilizar menos recursos por tonelada de camarón producido. Entonces es importante el análisis económico en lo relacionado con los aditivos usados en granjas de manera permanente, debido a su volumen e importancia durante el ciclo. La reducción de costos sin afectar el rendimiento de producción, es decir, producir lo mismo o más con menos recursos, es clave para sobrevivir a períodos económicos complejos e inestables. En el presente trabajo, queremos presentar una solución rentable (que en el presente artículo la llamaremos “solución propuesta”) y costo eficiente, que sea tan eficaz o mejor que las soluciones presentes en el mercado, apoyando así a los productores a aumentar

Las postlarvas (pl) de camarón blanco del Pacífico (Litopenaeus vannamei) de 0,18 ± 0,02 g, fueron transferidos de un Hatchery local a la granja donde se realizó el ensayo de campo (ubicada en la Isla Mondragón, Golfo de Guayaquil, Ecuador). Las pl se sembraron a una densidad de 139.500 pl / ha en el grupo “solución propuesta” y a 147.474 pl / ha en el grupo de los competidores (C1+C2). El promedio de salinidad durante el ensayo fue de 28 ppt y el promedio de temperatura estuvo cerca de los 30°C.

Dietas experimentales A través del ensayo se utilizó una dieta comercial con 35% de proteína (AGRIPAC) para ambos tratamientos. El manejo de la alimentación se realizó de acuerdo con el protocolo diario de la granja para garantizar las condiciones normales de cría. Todos los productos fueron adicionados, mezclados y recubiertos en la granja utilizando el protocolo estándar de la granja para el manejo de ácidos.

Muestras recogidas y analizadas Para evaluar la eficacia de los productos

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probados, se analizaron semanalmente órganos y tejidos seleccionados, como: Muestras de hepatopáncreas (10 camarones por tratamiento). Muestras del intestino (10 camarones por tratamiento). Muestras de branquias (10 camarones por tratamiento)

Evaluación de muestras Se evaluaron semanalmente muestras de camarón de los estanques, para identificar daño hepatopancreático causado por Vibrio spp. Se revisó el nivel de lípidos en los túbulos del hepatopáncreas, así como el contenido intestinal como indicativo de la salud intestinal y digestiva. Usando como referencia una escala de daño de hepatopáncreas, adaptada de MoralesCovarrubias 2004, fue utilizada para evaluar el daño tubular. Los parámetros físicoquímicos se midieron a lo largo del ensayo para garantizar la mejor calidad de agua y hacer los respectivos ajustes a lo largo del ciclo.

Figura 1: Protocolo de aplicación para "solución propuesta" (Top) y Competidores del grupo (C1+C2).

Protocolo de aplicación La dosis de aplicación de los productos experimentales se realizó diariamente, acorde con los parámetros de calidad del agua y estado de órganos y tejidos de los camarones muestreados. Las dosis de aplicación tenían como objetivo principal reducir y controlar el daño hepatopancreático y asegurar así el mejor rendimiento para cada uno de los tratamientos. En la Figura 1 se presenta el protocolo de aplicación realizado con la “solución propuesta”. Las dosis de aplicación variaron de 2ppm (aplicada en la semana 4) a 8ppm (aplicada en la semana 6). Los días de aplicación se indican en la representación esquemática (barras interiores amarillas). La aplicación semanal corresponde a una aplicación de 6 días (de lunes a sábado), los días domingo los camarones no eran alimentados. El grupo competidor (C1+C2; abajo) utilizaba el protocolo estándar de la granja, que consistía en el uso de los dos productos para controlar el NHP como lo hacían tradicionalmente y acorde al estado sanitario de los camarones.

Resultados y discusiones Evaluación del hepatopáncreas La escala de daño del hepatopáncreas, adaptada de Morales-Covarrubias 2004, se utilizó para evaluar el daño tubular hepatopancreático considerando, básicamente cinco niveles. Las escalas de daño del hepatopáncreas estaban clasificadas de la siguiente manera: Sin daño (S0), daño tubular hepático bajo (S1; 1-5 túbulos de daño/campo óptico / camarón), daño tubular hepático moderado (S2; 6-10 túbulos de daño/campo óptico/ camarón), daño tubular hepático alto (S3;

11-20 túbulos de daño/campo óptico/ camarón) y daño hepático crítico (S4; > 20 túbulos de daño/campo óptico/camarones; no observado en este estudio). El grupo experimental de la “solución propuesta” presentó mejores resultados generales que el grupo de competidores (Figura 2); excepto por la semana seis, donde la “solución propuesta” presentó un daño tubular hepático alto (S3). Durante las semanas del ciclo restantes, la “solución propuesta” siempre tuvo un mejor desempeño o estuvo al mismo nivel que el grupo experimental de la competencia.

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- AGOSTO 2020 El grupo experimental de la “solución propuesta” obtuvo daños (S0) en la semana 7, 10 y 11. Es muy importante destacar que después de una situación difícil en la semana seis, donde el camarón del grupo de la “solución propuesta” mostró la presencia de túbulos hepatopancreáticos necróticos, vacuolas lipídicas reducidas y formación de nódulos hemocíticos (S3), un refuerzo en el protocolo de aplicación de la “solución propuesta” (Figura 1; semana 6) podría revertir completamente los signos de daño a cero (S0) en la semana siguiente (semana 7; Figura 2). La reversión completa de una gravedad de daño S3 a S0 en el grupo experimental de la “solución propuesta” destaca la eficacia de esta, como una alternativa eficaz y económicamente viable que se podrá utilizar en dosis de aplicación altas (es decir, 8 ppm) para controlar situaciones difíciles de emergencia. Reservas de lípidos Las reservas lipídicas se clasificaron en una escala de 1 a 4. Brevemente explicada así: la escala 1, representa el 25% de la glándula del hepatopáncreas (HP) con lípidos; la escala 2, con 50% del HP con lípidos; la escala 3, con 75% del HPG con lípidos y la escala 4, con (100%) de lípidos, llenos. Ambos tratamientos mostraron resultados similares, teniendo la “solución propuesta” una puntuación de 3.6 y el grupo de competidores una puntuación de 3.5. Incidencia de gregarinas La necrosis hepatopancreática (NHP) en la producción Ecuatoriana de camarón se ha asociado directamente a la creciente prevalencia de cuerpos vermiformes, gregariosos dentro del hepatopáncreas de camarón y la parte media. La presencia de parásitos similares a las gregarinas se revisó semanalmente en el intestino. La Figura 3 ilustra la aparición de gregarinas (%). Tras la transferencia a los estanques de producción, ambos tratamientos tuvieron un pico importante de contaminación de parásitos similares por gregarina. Sin embargo, ambos protocolos de aplicación fueron eficaces en la reducción de las gregarinas. Cabe anotar que la “solución propuesta” reduce con éxito

Figura 2: Severidad de daños alcanzados con la "Solución propuesta" y grupos experimentales de la competencia. El grupo de "solución propuesta" obtuvo cero daños (S0) en las semanas 7, 10 y 14. El grupo de competidores alcanzó S0 solo en la semana 9.

Figura 3: Presencia de parásitos gregarinas en el intestino del camarón en el grupo de la "Solución propuesta" y el grupo experimental de la competencia.

Figura 4: Aumento medio de peso durante el período de cría de la “Solución propuesta” y el grupo de control.

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una contaminación del 100% a un 15% de contaminación en sólo una semana (de la semana 2 a la semana 3). Las gregarinas se mantuvieron generalmente más bajas en el tratamiento de la “solución propuesta” en comparación con el control. A partir de la semana seis, las gregarinas del grupo de la “solución propuesta” se redujeron a niveles mínimos, evitando totalmente su presencia en la semana 7, 8 y 10. Rendimiento de crecimiento El desempeño en el crecimiento, se midió utilizando los índices normalmente usados en granja, como el aumento de peso promedio durante el período de engorde, el factor de conversión alimenticio (FCR), la tasa de crecimiento específica (SGR), la supervivencia y los días de ciclo total a cosecha (producto final de 20 gramos, normalmente). El grupo experimental de la “solución propuesta” alcanzó el tamaño comercial esperado (20 g) en 78 días después de la siembra, mientras que el grupo Control en esta fecha pesaba solo 17,73 g. El grupo de control tardó más de 10 días en alcanzar el mismo peso que en el grupo de la “solución propuesta” (Figura 5). Debido a la menor tasa de crecimiento en esta piscina, la gerencia de producción decidió cosechar este estanque solo después de 106 días de cría con un peso final de 23,50 g. Sin embargo, el retraso en la cosecha aumenta en gran medida la posibilidad de problemas de mortalidad, así como implica un gasto adicional de recursos humanos y costos fijos, principalmente tratamientos de alimentos balanceados y químicos. La sobrevivencia en ambos tratamientos fue buena para la temporada, teniendo el grupo “solución propuesta” el 58% y el control un 57% de sobrevivencia. El mejor desempeño de crecimiento fue el del grupo “solución propuesta” que también se reflejó en el FCR y SGR. El factor de conversión alimenticia (FCR) se redujo de 2,03 en el grupo de los competidores a 1,41 en el grupo de la “solución propuesta”, lo que representa una disminución del 30,5% (Figura 5). La tasa de crecimiento instantánea (SGR) en el grupo de la “solución propuesta” tuvo una impresionante mejora del 103%, pasando del 2,98% día-1 en el

Figura 5 y 6: Factor de conversión alimenticia y tasa de crecimiento instantánea.

Figura 7: Protocolo de aplicación de análisis de costo-beneficio “solución propuesta” en comparación con el grupo experimental de la competencia.

grupo de los competidores a 6,04% día-1 en el grupo de la “Solución propuesta” (Figura 6). Análisis costo-beneficio Uno de los principales objetivos del presente ensayo fue evaluar y comparar la rentabilidad de la “solución propuesta”, con las soluciones más utilizadas en el mercado, y evaluarla como una mejor alternativa económica para controlar la hepatopancreatitis necrosante (NHP). El análisis costo-beneficio se calculó teniendo en cuenta los índices del período de la prueba (precio del camarón* USD 4,00/ kg para la talla de 40-50; Precio del alimento balanceado* USD 1.10 /kg) que puede diferir de los precios a hoy del mercado. Los cálculos se realizaron en USD/ha y se expresaron en el estudio actual como el % del grupo de resultados experimentales competidores. La “solución propuesta” disminuyó el costo

total de la aplicación de aditivos para alimentos balanceados en un 27%, en comparación con el grupo de competidores y aumentó el beneficio global de la granja en un 18% (Figura 7). El retorno de la inversión para el tratamiento de la aplicación “solución propuesta” fue de 85:1 en comparación con 20:1 en el grupo de competidores.

Conclusión El protocolo de aplicación “solución propuesta” demostró ser la solución más rentable (ROI: 85:1, mejor FCR y SGR y días de cultivo más bajos) en comparación con los productos evaluados de la competencia presentes en el mercado Ecuatoriano. Estos buenos indicadores se lograron debido al control eficaz del NHP en el hepatopáncreas, al buen estado de las branquias y en general a la buena salud intestinal presente en el camarón• Para más información sobre este artículo escriba a: ruialexandre.goncalves@lucta.com

ESTADÍSTICAS

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COMERCIO EXTERIOR

EXPORTACIONES DE CAMARÓN ECUATORIANO (TONELADAS MÉTRICAS vs. DÓLARES) 2010 - 2019

Fuente: Banco Central del Ecuador

EXPORTACIONES DE CAMARÓN ECUATORIANO: COMPARATIVO MENSUAL (LIBRAS) Enero 2016 hasta Julio 2020

Fuente: Cámara Nacional de Acuacultura

ESTADÍSTICAS

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COMERCIO EXTERIOR

EVOLUCIÓN DEL PRECIO DEL CAMARÓN ECUATORIANO: PROMEDIO ANUAL (LIBRA) 2013 - 2019

EVOLUCIÓN DEL PRECIO DEL CAMARÓN ECUATORIANO: PROMEDIO MENSUAL (LIBRA) Julio 2018 hasta Julio 2020

PORCENTAJE DE PARTICIPACIÓN DE MERCADO DEL CAMARÓN ECUATORIANO (LIBRAS) Enero a Julio 2019 vs. Enero a Julio 2020

Fuente: Cámara Nacional de Acuacultura

ESTADÍSTICAS

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EXPORTACIONES DE TILAPIA ECUATORIANA A EE. UU. (LIBRAS vs. DÓLARES) JUNIO 2019 - JUNIO 2020

EXPORTACIONES DE TILAPIA ECUATORIANA A EE. UU. EVOLUCIÓN DEL PRECIO PROMEDIO (LIBRA) JUNIO 2019 - JUNIO 2020

ESTADÍSTICAS

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ESTADÍSTICAS

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URNER BARRY

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Importaciones de camarón de Estados Unidos Autores: Lorin Castiglione y Liz Cuozzo Urner Barry

as importaciones de camarón de mayo estuvieron en línea con las expectativas de Urner Barry y mostraron el primer declive interanual. Esa data mostró que las importaciones de mayo alcanzaron los 83.357 millones de libras, un 29.4 por ciento menos que en mayo de 2019. De nuestros cinco principales socios comerciales, se observó un cambio de liderazgo con ganancias solo de Indonesia (+10.5%), lo que llevó a este país al primer lugar. Se envió menos camarón desde India (-57.8%), Ecuador (-25.2%), Vietnam (-8.7%) y Tailandia (-13.5%). Indonesia lideró los envíos mensuales a EE. UU. con casi 29 millones de libras. Las importaciones de India, que se vieron muy afectadas por la pandemia de COVID-19 y tenía estrictas medidas de bloqueo, cayeron a 19 millones de libras desde los 45 millones de libras del año pasado. Estos dos países aún representaban más de la mitad (57%) de todo el camarón importado a los Estados Unidos, pero esto está muy por debajo de los promedios históricos, que se acerca al 70 por ciento la mayor parte del tiempo. A pesar de una tajada más pequeña, los cinco principales socios comerciales aún representaron el 88 por ciento de todas las importaciones de mayo. Por lo general, esto coincide con los meses anteriores. En términos de forma de producto, EE. UU. importó menos camarón con cáscara sin cabeza en mayo, que incluye el pelado fácil (-26.3%), pelado (-40.9%), cocido (-9.0%) y empanizado (-10.7%). Urner

Barry

Consulting,

que

será

considerado una sorpresa para muchos, tiene pronosticadas las importaciones de junio de 2020 en 112.5 millones de libras en comparación con las 115.7 millones de libras de junio de 2019. Esto sería solo un 2 por ciento menos y una disminución mucho menos severa de lo que es ampliamente propuesto. A medida que el modelo se ajusta al comportamiento estacional, las importaciones tienden a subir de mayo a junio, y este año no parece ser diferente.

Ciclos mensuales de importación por país (todos los tipos) India: Las importaciones de camarón de mayo cayeron por primera vez este año, y la caída fue significativa. Con casi 19 millones de libras, estaba un 57.8 por ciento por debajo de las 45 millones de libras del año pasado. Las importaciones de India cayeron por debajo de Indonesia por primera vez desde junio de 2016. Indonesia: Indonesia ocupó el primer lugar entre los socios comerciales por primera vez en cuatro años, ya que envió un 10.5 por ciento más de camarón en mayo de 2020, en comparación con mayo de 2019. Esto ascendió a casi 29 millones de libras. La cifra del año a la fecha, se ha ampliado con un aumento del 24.4 por ciento. Ecuador: Las importaciones de camarón de Ecuador cayeron por segundo mes consecutivo en abril. El recuento final mostró

una disminución del 8.7 por ciento este mes. Tailandia, Vietnam y China: Los países asiáticos volvieron a mostrar una disminución de las exportaciones a Estados Unidos. China (-43.8%), Tailandia (-13.5%) y Vietnam (-8.7%) fueron todos más bajos debido al trasfondo de la pandemia mundial.

Importaciones de camarón con cáscara, cíclicos y por tamaño Las importaciones del camarón con cáscara sin cabeza, incluyendo el de pelado fácil, mostraron otra gran disminución, ya que dos de los países más grandes cayeron significativamente. Las importaciones de mayo cayeron un 26.3 por ciento con pérdidas en todos los tamaños, excepto en el recuento 16-20. Los valores de reemplazo (importación $/ lb.) para camarón HLSO cayeron un poco más en mayo. La demanda de producto en Estados Unidos permaneció inestable dada la incertidumbre generalizada en el mundo. Los valores se descontaron a $3.53 por libra, incluso cuando la oferta de importación cayó significativamente. Esto fue $0.14 por libra más bajo que el mes anterior.

Valor agregado, importación de camarón pelado Ningún sector fue inmune a la reducción de las importaciones. A pesar de seguir siendo uno de los favoritos entre los consumidores estadounidenses, India, el principal

URNER BARRY proveedor de valor agregado con camarón pelado, redujo significativamente los envíos a nuestras costas. Esto provocó una caída del 40.9 por ciento en las importaciones de mayo. Los precios subieron $0.08 por libra a $3.93 por libra debido a que la escasez de suministros presionó el alza. Las importaciones de camarón cocido (agua tibia) en mayo también disminuyeron, pero un nueve por ciento. Las grandes pérdidas de India y Tailandia superaron las ganancias de un dígito de Indonesia y Vietnam. El primero realmente intentó tomar el relevo para India en mayo. Las importaciones de camarón empanizado estuvieron un 10.7 por ciento por debajo de las cifras de mayo de 2019. Era una bolsa mixta, pero Indonesia siguió siendo el principal socio comercial, representando el 28 por ciento de las importaciones mensuales.

Importaciones de camarón cocido, empanizado y otros El precio promedio en mayo fue de $4.50 por libra, ligeramente por debajo del mes pasado y de esta época el año pasado.

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Línea de tiempo del precio del camarón; anuncios minoristas Minorista: Parece que los minoristas no se sintieron obligados a promover el camarón en los meses de abril y mayo, ya que nuestro índice cayó al nivel más bajo en seis años. Las oportunidades de compra cayeron cerca del 50 por ciento en abril y el 34 por ciento en mayo en comparación con los niveles del primer trimestre. Sin embargo, cuando ocurre la presentación, ocurre de manera atractiva. El precio al que se está presentando es un tres por ciento menos que hace un año y un siete por ciento menos que el promedio de cinco años. La situación de COVID-19 brindó oportunidades en el comercio minorista que no existían antes del brote. Las compras en los supermercados crearon escasez en la mayoría de las categorías de proteínas y expandieron el interés de los consumidores por el camarón.

Suministro de camarón a EE. UU. y situación del Golfo El Servicio Nacional de Pesca Marina informó que los desembarques de mayo (todas las especies, sin cabeza) ascendieron a 6.7 millones de libras en comparación con los 8 millones del año pasado. Esta es una preocupación en la región, ya que los

desembarques en el mes suelen oscilar entre 10 y 15 millones de libras. Las preocupaciones por el suministro están creciendo y han prestado apoyo al mercado.

Exportación de camarón ecuatoriano Los valores del mercado del camarón blanco continuaron subiendo durante junio y julio, con pocas excepciones. Los artículos que obtienen el mayor beneficio son los que se utilizan tanto en puntos de venta minoristas, como de servicios de alimentos. La excepción sigue siendo cuando el artículo es exclusivo del servicio de alimentos. La actividad del mercado parecía mejorar de manera constante semana tras semana, culminando con el frenético período previo al fin de semana del 4 de julio. El catalizador pareció ser la "apertura" de Estados Unidos, pero también el impulsar compras conllevó una dificultad de abastecimiento del extranjero. Las restricciones en los países productores reducen la producción y, en última instancia, los envíos a EE. UU. El camarón tigre negro de gran tamaño sigue teniendo descuentos dada su dependencia del comercio a restaurantes. Por el contrario, el camarón de recuento medio y pequeño se han fortalecido junto con al camarón blanco•

URNER BARRY

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NOTICIAS

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NUEVAS AUTORIDADES María Alejandra Muñoz Nueva Vicepresidenta de Ecuador La nueva vicepresidenta fue designada por La Asamblea Nacional y fue la tercera de una terna enviada por el presidente luego de la renuncia de Otto Sonnenholzner. Guayaquileña de 41 años es licenciada en Ciencias Sociales y Políticas (1998). Además, es abogada con especialización en Derecho Empresarial y Tributario de la Universidad de Especialidades Espíritu Santo de Ecuador (2001), También es máster en prevención de violencia contra la mujer y políticas de inclusión en la Universidad de Salamanca, España. Su gestión en el sector público no es reciente, ingresó por primera vez a la Presidencia de la República en el 2002, cuando se desempeñó como asesora jurídica en el gobierno de Gustavo Noboa. Luego, en el 2006, ocupó la Subsecretaría General de Gobierno y Policía, en el mandato de Alfredo Palacio. Sin embargo, su labor se destacó cuando fue nombrada Directora General del Servicio Nacional de Aduana (SENAE), en el 2018.

Juan Xavier Cordovez Nuevo Director de la Junta de Beneficencia de Guayaquil Juan Xavier Cordovez, distinguido empresario de 63 años con amplia experiencia en los sectores productivo, inmobiliario y exportador es el nuevo Director de La Junta de Beneficencia de Guayaquil (JBG) para el periodo 2020 - 2021, fue elegido el 28 de julio pasado. Cordovez fue gerente financiero de Holcim y Vicepresidente Ejecutivo de Expalsa. Además, fue presidente de la Asociación Latina de Acuacultura, y ha presidido organizaciones sin fines de lucro como Fundación Natura. Fue Presidente del Directorio de la Cámara Nacional de Acuacultura, en 1995 - 1996, entre sus principales logros estuvo la consolidación del sector para alcanzar grandes objetivos, como obtener el precio diferenciado del diésel para el sector que estaba deprimido por el efecto del síndrome de Taura. A nivel internacional, fue realizar la primera participación conjunta de todos los exportadores en ferias internacionales y durante su Presidencia se creó el Congreso AQUAEXPO, con el propósito de liderar una innovadora feria comercial acuícola que integró charlas técnicas y fue todo un éxito en su primera edición realizada en Expoplaza en 1996. El 19 de Octubre de 2015, recibió el reconocimiento “camaronero del año” por parte del Comité AQUAEXPO durante el XVII Congreso Ecuatoriano de Acuicultura y AQUAEXPO 2015.

NOTICIAS

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Aprobada norma INEN para alimento de camarones El proyecto de norma NTE técnica INEN 1767 Alimentos zootécnicos y compuestos para camarones. Requisitos, fue aprobada el 27 de mayo pasado en Comité Técnico de Normalización “Alimento para animales”. El 3 de junio se elevó a Consulta Pública por un período de sesenta 60 días, que culminó el 3 de agosto, sin observaciones. Se prevé una reunión final del Comité para conocer una moción en el tiempo ampliado, previo a su publicación en el Registro Oficial. Esta norma establece los requisitos de los alimentos en forma de pellets y extruidos para las especies de camarón cultivados en piscinas y/o estanques, en sistemas de cultivos con aporte de alimento natural (Fito y Zooplancton). Se excluye los alimentos peletizados húmedos o los destinados a las fases de larvicultura a nivel de laboratorio.

Diálogo con José Antonio Camposano La Revista Panorama Acuícola organizó un webinar el 19 de agosto pasado, en el que José Antonio Camposano, Presidente Ejecutivo de la Cámara Nacional de Acuacultura abordó temas de interés para el sector como la situación actual de las exportaciones de camarón ecuatoriano a China, las posibilidades de la negociación de un tratado de comercio exterior entre Ecuador y México y el nuevo formato digital de AQUAEXPO.

Análisis sobre Acuacultura y Pesca La Cámara de Comercio de Quito organizó un webinar el 20 de agosto pasado sobre “Acuacultura y Pesca: sostenibilidad y potencialidad del sector exportador como generador de divisas post COVID-19¨. Los panelistas fueron: Iván Ontaneda, Ministro de Producción, Comercio Exterior, Inversiones y Pesca; Lucía Fernández, Presidenta de la Cámara de Comercio de Manta; Bruno Leone, Presidente de la Cámara Nacional de Pesquería; Patricio Alarcón, Presidente de la FEDEXPOR y José Antonio Camposano, Presidente Ejecutivo de la Cámara Nacional de Acuacultura.

NOTICIAS

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Reunión para conocer protocolos de la Policía en inspecciones a contenedores El 28 de julio pasado, el general Giovanni Ponce, Director de Antinarcóticos de la Policía y miembros de su equipo, presentaron los protocolos de bioseguridad que realiza su institución durante las inspecciones a contenedores de camarón en los puertos del país, previo a su exportación. La reunión se desarrolló en las instalaciones de la Cámara Nacional de Acuacultura con el propósito de fortalecer los procesos de bioseguridad. En la mesa de trabajo, la Policía anunció que trabaja en el desarrollo de una aplicación para optimizar recursos técnicos y logísticos del sector público - privado, con el propósito de evitar que los contenedores sean contaminados por organizaciones delictivas bajo la modalidad de gancho ciego.

AQUACULTURA #136

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Noticias de interés

Reporte del mercado EE. UU. - Urner Barry

Manejo sostenible y rentable de la hepatopancreatitis necrotizante (NHP) en granjas de Litopenaeus vannamei

Detección del Virus iridiscente decápodo 1 con sonda TaqMan con PCR en tiempo real

China confirmó la calidad e inocuidad del camarón ecuatoriano

Mejora de la eficiencia en alimentos iniciadores para camarones

Efectos interactivos de una dieta de colesterol y fosfolípidos sobre el rendimiento del crecimiento, la expresión de genes relacionados con el sistema inmune, y la resistencia contra el Vibrio alginolyticus en el camarón blanco (Litopenaeus vannamei

Detección de probióticos intestinales y efectos de la alimentación de probióticos en el crecimiento, actividad enzimática inmune, digestiva y flora intestinal de Litopenaeus vannamei

Subsecretaría de Calidad e Inocuidad entidad clave para sostener las exportaciones de camarón