PATOLOGÍA
- AGOSTO 2020
Detección del Virus iridiscente decápodo 1 con sonda TaqMan con PCR en tiempo real Autores: Liang Qiua Xing Chena Xiao-Meng Guoa,b Wen Gaoa,c Ruo-Heng Zhaoa Qing-Li Zhanga Bing Yanga Jie Huanga,b,c,* Laboratorio de Ciencia de la Pesca Marina y Procesos de Producción de Alimentos, Laboratorio Piloto Nacional de Ciencia y Tecnología Marina (Qingdao), Laboratorio de Control de Enfermedades de Organismos para Maricultura, Ministerio de Agricultura y Asuntos Rurales, Laboratorio de Qingdao Epidemiologia y Bioseguridad para la Maricultura, Instituto de Investigación Pesquera Yellow Sea, Academia China de Ciencias Pesqueras, Qingdao 266071, China b Escuela de Ciencias e Ingeniería Marina, Universidad Agrícola de Qingdao, Qingdao 266109, China c UShanghai Ocean University, Shanghai 201306, China a
huangjie@ysfri.ac.cn
U
na enfermedad emergente ha causado una alta mortalidad y graves pérdidas de camarón, langostino y cangrejo de río cultivados en China. El agente etiológico de la nueva enfermedad es un virus de ADN bicatenario llamado Virus iridiscente decápodo 1 (DIV1) (Chen et al., 2019a; Qiu et al., 2017; Qiu et al., 2019a; Xu et al., 2016). El DIV1 fue descrito por primera vez por Xu et al. (2016) como Cherax quadricarinatus iridovirus (CQIV) y por Qiu et al. (2017) como Virus iridiscente de hemocitos de camarón (SHIV). Los signos clínicos incluyen atrofia del hepatopáncreas con pérdida de color, estómago e intestino vacíos, y un cuerpo de color rojizo (Qiu et al., 2017). El camarón Macrobrachium rosenbergii enfermo
muestra un área blanca típica debajo del exoesqueleto en la base del rostrum llamado enfermedad de “cabeza blanca” o enfermedad de la “mancha blanca” (Qiu, et al., 2019a). Los individuos moribundos se hunden en el fondo de aguas profundas donde se acumulan los individuos muertos; alcanzando una mortalidad acumulada del 80%. El DIV1 ha sido reportado en algunas provincias costeras de China desde 2014, incluyendo las provincias de Zhejiang, Guangdong y Hebei (Qiu et al., 2017). Una vigilancia especializada en China en 2017– 2018 reveló que el DIV1 se detectó en 11 de 16 provincias (Qiu et al., 2018c; Qiu et al., 2019b). El DIV1 es un virus icosaédrico envuelto con un diámetro de aproximadamente 150 nm y un genoma de ADN bicatenario de aproximadamente 166 K pb (Li et al., 2017; Qiu et al., 2018b). Basado en dos aislamientos originales, SHIV 20141215 y CQIV CN01 (ICTV, 2019), el virus fue asignado por el Comité Internacional de Taxonomía de Virus (ICTV) como el único miembro del nuevo género Decapodiridovirus dentro de la Familia Iridoviridae. Las especies susceptibles actualmente conocidas incluyen C. quadricarinatus, Penaeus vannamei, Macrobrachium nipponense, M. rosenbergii, Procambarus clarkii y Exopalaemon carinicauda (Chen et al., 2019a; Qiu et al., 2017; Qiu et al., 2019a; Xu et al., 2016). Dos especies de cangrejo, Eriocheir sinensis y Pachygrapsus crassipes también se infectaron con DIV1 en la prueba experimental por inyección intramuscular (Pan et al., 2017). Vale la pena señalar que los resultados positivos han sido detectados
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en muestras de PCR de Penaeus chinensis, Penaeus japonicus, Macrobrachium superbum, Nereis succinea o algunos cladóceros (Qiu et al., 2017; Qiu et al., 2018c; Qiu et al., 2019a; Qiu et al., 2019b). Entre los métodos de detección, la sonda TaqMan empleada en PCR en tiempo real es el método más sensible y específico para detectar y cuantificar virus de camarón. Algunos métodos de PCR en tiempo real pueden detectar una copia de ADN viral o ADNc para varios virus de camarón, como el Parvovirus hepatopancreático (VPH), baculovirus de Penaeus monodon (MBV) y virus de la mionecrosis infecciosa (IMNV) (Yan et al., 2009, 2010; Liu et al., 2013). La prueba de PCR en tiempo real con sonda TaqMan se estableció para detectar el gen ATPasa de DIV1 en nuestra investigación anterior (Qiu et al., 2018a). Este método fue específico, y el límite de detección fue de cuatro copias por reacción. Sin embargo, el fragmento amplificado usando este método se superpuso con el único método de PCR anidada publicado para DIV1 (Qiu et al., 2017), que podría deberse a la contaminación cruzada cuando ambos métodos fueron utilizados en laboratorio. Para evitar este riesgo, detallamos una nueva realidad del tiempo de ensayo de PCR para la detección de la proteína de la cápside principal (MCP) del DIV1.
Materiales y métodos Recolección de muestras y extracción de ADN El camarón P. vannamei se recolectó de granjas en Guangdong y Shandong, Provincia de China, y fueron almacenados a −80°C.
